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Volume 1 - Mdulos 1 e 2
4a edio
Apoio:
Mrcia Attias
Narcisa Cunha e Silva
Material Didtico
Departamento de Produo
ELABORAO DE CONTEDO
Mrcia Attias
Narcisa Cunha e Silva
EDITORA
COORDENAO DE DESENVOLVIMENTO
INSTRUCIONAL
COORDENAO EDITORIAL
Tereza Queiroz
Jane Castellani
DESENVOLVIMENTO INSTRUCIONAL E
REVISO
REVISO TIPOGRFICA
Eduardo Bordoni
ILUSTRAO
Equipe CEDERJ
CAPA
COORDENAO DE
PRODUO
PRODUO GRFICA
COORDENAO DE LINGUAGEM
Jorge Moura
Cyana Leahy-Dios
PROGRAMAO VISUAL
REVISO TCNICA
COORDENAO DE
ILUSTRAO
David Amiel
Patricia Seabra
A885b
Attias, Mrcia
Biologia Celular I. v.1. 4.ed / Mrcia Attias.Rio de Janeiro: Fundao CECIERJ, 2010.
166p.; 19 x 26,5 cm.
ISBN: 85-7648-148-0
1. Membrana celular. 2. Microscopia ptica. 3.
Criofratura.
4. Cultura celular. I. Silva, Narcisa Cunha e. II. Ttulo.
2010/1
CDD: 571.6
Referncias Bibliogrficas e catalogao na fonte, de acordo com as normas da ABNT.
Governador
Srgio Cabral Filho
Universidades Consorciadas
UENF - UNIVERSIDADE ESTADUAL DO
NORTE FLUMINENSE DARCY RIBEIRO
Reitor: Almy Junior Cordeiro de Carvalho
Biologia Celular I
SUMRIO
Volume 1
Mdulo 1
Aula 1 Microscopia ptica ___________________________________ 7
Mrcia Attias / Narcisa Cunha e Silva
Mdulo 2
Aula 7 Estrutura da membrana plasmtica ____________________ 87
Mrcia Attias / Narcisa Cunha e Silva
objetivos
AULA
Microscopia ptica
INTRODUO
Figura 1.1: (a) Insetos como o mosquito Aedes so visveis a olho nu, mas para vermos
detalhes como o olho composto (b), necessitamos utilizar equipamentos especiais
(Fotos: Mrcia Attias).
HISTRICO
No sculo XVII, foram construdos os primeiros microscpios. Com
um deles, Robert Hooke (veja o boxe explicativo) observou lminas de
cortia, chamando clulas aos pequenos espaos regulares da sua estrutura
(Figura 1.2). Mais tarde, tanto Hooke quanto outros pesquisadores da
poca observaram que as clulas vivas no eram ocas como a cortia, mas
o nome original permanece at hoje. No seria injusto ou incorreto dizer
que o estudo da Biologia Celular comeou nessa poca.
CEDERJ
MDULO 1
1
a
Amostra
Parafuso de
focalizao
CEDERJ
AULA
Lente ocular
Foco macromtrico
Foco micromtrico
Figura 1.4: Principais componentes de um microscpio
ptico simples.
Objetiva
Platina
Lente condensadora
Fonte de iluminao
CEDERJ
MDULO 1
1
AULA
O LIMITE DE RESOLUO
Se dependssemos apenas de nossos olhos, no conseguiramos
enxergar nada que medisse menos de 0,2mm. Este o limite de resoluo
de nossos olhos (se enxergarmos muito bem, diga-se de passagem). Graas
aos microscpios pticos, pudemos distinguir objetos que medem at
1 milsimo desse valor, isto , o limite de resoluo dos microscpios
pticos de 0,2m. Naturalmente, isso depende da qualidade das lentes,
mas, principalmente, do comprimento de onda da luz utilizada. Para
saber como esse valor foi calculado, consulte o boxe a seguir.
CEDERJ
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O limite de resoluo
O ponto-chave da Microscopia, seja ela ptica ou eletrnica, o limite de resoluo de
um microscpio. Este conceito bastante simples: trata-se da menor distncia entre dois
pontos em que eles podem ser vistos como objetos distintos.
Complicado? Nem tanto, observe a seguir:
Os objetos A e B esto a uma distncia que nos permite separ-los como distintos, mas se
eles estiverem muito prximos, no podem ser nitidamente separados, ou seja, o poder de
resoluo dos nossos olhos no suficiente para determinar os limites de cada objeto.
A B
Esse conceito universalmente expresso na seguinte frmula:
d = 0,61
em que:
d= limite de resoluo.
Lente objetiva
Cone de luz
Figura 1.6
Feitas as contas, d= 0,2m no microscpio ptico e, como voc deve saber, 1m = 10-6m.
12
CEDERJ
MDULO 1
As clulas e as
estruturas que
as compem so
muito pequenas
para serem medidas
em centmetros ou
milmetros, como
os objetos do nosso
cotidiano. Portanto,
para elas usamos as
AULA
UNIDADES DE MEDIDA
dos micrmetros
(smbolo m)
e nanmetros
(smbolo nm).
O micrmetro vale 1
milsimo do milmetro
e o nanmetro
vale 1 milsimo do
micrmetro.
1m= 103mm
ou 106mm
ou 109nm
Observao: 103 a
maneira simplificada
com que os
matemticos escrevem
as potncias de 10,
isto , igual a 1.000;
da mesma forma 106
1.000.000, e assim
por diante.
CEDERJ
13
D uma paradinha!
Imagine-se andando de bicicleta numa ciclovia. Voc segue em linha reta velocidade da
luz. Voc um raio de luz! Pedrinhas, formigas e outros pequenos objetos no impedem
que voc continue deslizando suavemente, sem interferncias.
J uma chapinha de refrigerante ou um pedregulho podem fazer sua bicicleta se desviar
do trajeto e, no caso de obstculos maiores, podem impedir sua passagem. Assim se
comporta a luz ao atravessar as amostras observadas ao microscpio ptico. Agora,
chega de passear: de volta ao estudo!
14
CEDERJ
MDULO 1
1
AULA
Condensador
Fonte de iluminao
a
15
Figura 1.10: A luz, ao interagir com um slido (= clula), tem sua trajetria atrasada, criando um contraste em
relao luz que no encontrou nenhum obstculo (a) (esquema esquerda). Esse o princpio do microscpio
de contraste de fase. direita (b), voc v as mesmas clulas epiteliais (retiradas da mucosa bucal) j observadas
em campo claro tal como aparecem nesse microscpio. H um halo em torno da clula e de algumas de suas
estruturas internas.
16
CEDERJ
MDULO 1
AULA
Figura 1.12: (a) Microscpio confocal de varredura a laser do Laboratrio de Ultraestrutura Celular do Instituto de Biofsica da Universidade Federal do Rio de Janeiro
(UFRJ). (b) Distribuio de microtbulos em uma clula de mamfero (Foto: Tecia
Ulisses de Carvalho).
CEDERJ
17
CEDERJ
MDULO 1
1
AULA
RESUMO
Os microscpios pticos comearam a ser construdos no sculo XVII, e com
eles foram observadas e batizadas as primeiras clulas. O aperfeioamento na
construo de lentes, filtros e sistemas de iluminao deu origem a uma grande
variedade de microscpios pticos. Alm dos de campo claro, que requerem que
o material seja corado, existem microscpios de contraste de fase e de contraste
interferencial, onde as clulas podem ser observadas vivas e sem colorao
especial. Os microscpios de fluorescncia permitem ver estruturas normalmente
muito finas para serem observadas com os comprimentos de onda da luz visvel.
O microscpio confocal a laser inaugurou uma nova era na microscopia ptica,
mas a observao da maior parte das estruturas que compem a clula s
possvel com um instrumento de maior poder de resoluo: o microscpio
eletrnico, tema da prxima aula.
EXERCCIOS
1. Com base no que foi estudado, calcule o aumento final de um microscpio
ptico que utilize as seguintes combinaes de lentes oculares e objetivas:
Ocular
Objetiva
5x
10x
20x
40x
20x
10x
10x
100x
Aumento final
19
5. Em que tipo(s) de sistema ptico podemos observar clulas vivas e sem a adio
de corantes?
6. O que voc entende por microscopia de fluorescncia?
7. O que limite de resoluo? Qual o limite de resoluo do microscpio ptico?
8. Uma hemcia mede 8mm(oito milmetros ). Quando observada sob um aumento
total de 1000 vezes, quanto medir?
9. Por que, em geral, o ncleo a nica estrutura claramente visvel dentro de
uma clula observada ao microscpio ptico?
10. Converta para as unidades correspondentes:
5m =...nm
0,5mm= .. m
100m = ..nm
1000m= .mm
60nm=...m
11. Uma clula foi fotografada com 2000x de aumento no microscpio ptico. Uma
estrutura que tenha na realidade 2m aparecer com que comprimento na foto?
12. Procure determinar em que tipo de microscpio ptico foram obtidas as imagens
que esto na ltima pgina deste livro. Se conseguir identificar as amostras, melhor
ainda; caso contrrio, consulte o gabarito desta aula no final do livro.
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CEDERJ
objetivos
AULA
Princpios de funcionamento
dos microscpios eletrnicos
HISTRICO
O sculo XX conheceu uma verdadeira "febre" a partir da
descoberta dos eltrons, feita por Thompson, em 1897. Tanto os clculos
feitos pelos fsicos tericos, quanto os experimentos feitos nos "tubos de
raios catdicos" vieram a provar a natureza ondulatria dos eltrons.
Esses pioneiros provavelmente no faziam a menor idia aonde aquelas
observaes iriam levar, mas o estudo do comportamento ondulatrio dos
eltrons resultou tanto na inveno dos aparelhos de televiso quanto na
ERNST RUSKA
(1906-1988)
espcime
tela de observao
espcime
(1)
(2)
MDULO 1
Resposta:
Porque so pequenas,
transparentes, de
forma e tamanho
varivel
filamento aquecido
(fonte de eltrons)
lente condensadora
Figura 2.2: C o m p a r a o e n t r e
o m i c r o s c p i o ptico (1) e o
microscpio eltrnico de transmisso
(2) mostrando a posio relativa e a
equivalncia de seus componentes.
espcime
lente objetiva
lente
ocular
imagem observada
diretamente
lente
projetora
imagem em tela
fluorescente
CEDERJ 23
AULA
24 CEDERJ
MDULO 1
2
AULA
filamento
posio das
lentes magnticas
local onde
colocada a
amostra
Lupa
para observao
da imagem na tela
fluorescente
CEDERJ 25
espcime
eltrons barrados
abertura da objetiva
eltrons transmitidos
tela
fluorescente
Figura 2.5: Formao da imagem no microscpio eletrnico de transmisso.
26 CEDERJ
MDULO 1
AULA
Cortesia de www.rockfeller.edu/rucal/journey/journey.html
CEDERJ 27
28 CEDERJ
MDULO 1
2
AULA
planta
animal
fragmento
de amostra
lavagem
lavagem
lavagem
1 fixao: ps-fixao:
OsO4
glutaraldedo
centrifugao
clulas isoladas,
bactrias, etc.
incluso
polimerizao
(a 60C a resina endurece)
As sees ultrafinas
so coletadas da superfcie
da gua com telas de cobre.
ultramicrotomia
(O tecido cortado
em fatias ultrafinas)
contrastao
Antes de ser levada ao microscpio
eletrnico a amostra, j sobre a grade,
passada por solues de acetato de uranila
e citrato de chumbo, que aumentam
o contraste das clulas.
CEDERJ 29
MDULO 1
AULA
Figura 2.8: Filamento aquecido (fonte de eltrons) do MET, apontar a lente objetiva do MEV.
Figura 2.9: Imagens de microscopia de varredura: A: Clulas na fase final da diviso. B: Detalhe da
regio anterior do inseto Oncopeltus fasciatus. A sensao de profundidade e relevo so as
principais caractersticas dessa modalidade de microscopia eletrnica.
CEDERJ 31
32 CEDERJ
MDULO 1
2
AULA
4
CEDERJ 33
34 CEDERJ
MDULO 1
MICROANLISE
AULA
CEDERJ 35
Links de interesse:
http://www.mos.org/sln/SEM/works/slideshow/semmov.html
- animao sobre o funcionamento do MEV.
http://www.denniskunkel.com/ - imagens de microscopia ptica
e eletrnica artificialmente coloridas. Muito bonito!
http://www.molbio.princeton.edu/confocal/510image2/
Zeisslist2.html - Maravilhosas imagens de fluorescncia obtidas em
microscpio de fluorescncia confocal.
http://mgasun.bch.umontreal.ca/protists/gallery.html - imagens de
protistas em microscopia ptica de contraste interferencial e de fase. Links
para imagens desses mesmos organismos em microscopia eletrnica,
mostrando como vrios mtodos de observao deve ser conjugados na
anlise de um organismo.
http://www.msa.microscopy.com/ProjectMicro/Books4.html
- coleo de CD-roms selecionados com comentrios.
36 CEDERJ
MDULO 1
AULA
EXERCCIOS
CEDERJ 37
objetivos
AULA
Criofratura
Figura 3.2: Cortes em srie podem dar uma noo da forma tridimensional
de uma estrutura.
FUNDAMENTOS DA TCNICA
A tcnica da criofratura surgiu no sculo XX e comeou a ser
desenvolvida na dcada de 60 e a idia inicial foi reduzir ao mximo
os artefatos decorrentes da fixao qumica por aldedos. O objetivo
era parar instantaneamente a atividade celular, provocando a fixao
das clulas sem que nenhum processo de decomposio celular tivesse
tempo de acontecer.
O procedimento bsico para criofratura consiste em quatro etapas
(Figura 3.4):
1. Congelamento das clulas em nitrognio lquido;
2. Fratura das clulas;
3. Evaporao da superfcie fraturada com carbono e platina
formando um molde (chamado rplica) da superfcie fraturada;
4. Digesto dos restos celulares, de modo que apenas a rplica
metlica observada ao microscpio eletrnico de transmisso.
CEDERJ 41
MDULO 1
3
AULA
amostra
lmina
criofratura.
A A amostra congelada sobre um suporte.
B Uma lmina passa sobre a amostra conge-
suporte
a
C A superfcie exposta pela fratura evaporada com platina (em ngulo de 45).
carbono
platina
D Em seguida, a superfcie recebe uma camada de carbono, que forma um filme suporte
para a rplica.
MDULO 1
AULA
Figura 3.7: Esquema de uma hemcia sendo fraturada. Conforme o plano de fratura
pode ser exposta a face P, cncava, ou a face E, convexa.
44 CEDERJ
MDULO 1
3
AULA
CONCLUSO
A criofratura continua sendo uma tcnica importante no estudo
das clulas. Atualmente, muitas variaes foram introduzidas, permitindo
a observao no apenas do miolo da membrana, mas tambm das
faces voltadas para o citoplasma ou para o meio extracelular e tambm
de estruturas citoplasmticas, como o citoesqueleto.
RESUMO
A tcnica de criofratura consiste em fraturar clulas ou tecidos depois de
congelados.
A fratura tem grande probabilidade de ocorrer entre as duas camadas de
fosfolipdeos que formam as membranas, expondo uma matriz homognea (os
lipdeos) com partculas de diversos tamanhos nela inseridas. Essas partculas
intramembranosas correspondem a protenas que atravessam a bicamada
lipdica.
A rplica pode expor tanto a face da membrana em contato com o meio
extracelular face E como a face em contato com o protoplasma face P.
Para que a face fraturada possa ser observada ao microscpio eletrnico de
transmisso feita uma rplica em carbono e platina da mesma.
Esta metodologia foi importante para a construo do modelo do mosaico
fluido da membrana.
CEDERJ 45
EXERCCIOS
1. Liste as etapas do procedimento para criofratura, explicando os objetivos de
cada uma.
2. Qual a parte da membrana que exposta a fratura?
___________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
3. A que correspondem as partculas intramembranosas observadas nas rplicas?
___________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
4. Qual a contribuio da criofratura na elaborao do modelo do mosaico fluido?
___________________________________________________________________________
____________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________
46 CEDERJ
objetivos
AULA
Cultura de clulas
MDULO 1
AULA
C entre ns...
Que bela sopa esse tal
meio de cultura, no?
!
Se voc no lembra o que
osmolaridade ou pH,
consulte o material da
disciplina Bioqumica I.
MDULO 1
AULA
Origem
HeLa
Epitlio humano
3T3
Fibroblasto de camundongo
Ovrio de hamster
CEDERJ 51
Fibroblasto
humano
Tumor de
camundongo
!
O que so linfcitos B?
So um tipo de glbulo branco do sangue que
produz e secreta anticorpos que aderem aos
organismos invasores (bactrias, vrus etc.) .
Qualquer molcula ou organismo estranho
denominado antgeno. Veja o esquema ao lado.
52 CEDERJ
Heterocrion
MDULO 1
O QUE SO CLULAS-TRONCO?
AULA
!
A cultura de clulas j est entre ns.
Ao contrrio do que voc possa pensar, a cultura de clulas j faz parte do
nosso dia-a-dia. Quer ver?
1- Os chamados bebs de proveta resultam da fecundao in vitro de um
vulo por um espermatozide. Essa clula-ovo mantida em condies
controladas de cultivo durante as primeiras divises, quando ento
implantada no tero materno para prosseguir seu desenvolvimento.
2- No tratamento de queimados tm sido utilizados fibroblastos que, em
meio de cultura definido, so estimulados a se multiplicar e diferenciar-se
em clulas epiteliais. Essa pele artificial usada em implantes na superfcie
destruda pela queimadura.
CEDERJ 53
RESUMO
Clulas retiradas de organismos, em geral embries ou recm-nascidos,
podem ser cultivadas em frascos ou placas de vidro ou plstico. Essas
clulas precisam ser mantidas em meio que contenha nutrientes e fatores
de crescimento, alm de temperatura, pH e osmolaridade adequados.
Embora a maioria das clulas s possa ser mantida por um nmero
de geraes limitado, existem linhagens de clulas transformadas que
podem ser multiplicadas indefinidamente. Clones de uma nica clula
com caractersticas especficas podem ser produzidos a partir de uma
cultura, assim como dois tipos celulares podem ter suas caractersticas
combinadas num heterocrion, ou hibridoma. O cultivo de clulastronco, clulas pluripotentes que do origem a todos os tipos celulares
durante o desenvolvimento do embrio, so uma esperana da Cincia na
regenerao de rgos e cura de vrios tipos de leucemia.
54 CEDERJ
MDULO 1
AULA
EXERCCIOS
CEDERJ 55
objetivos
AULA
Mtodos bioqumicos
para o estudo da clula
I) FRACIONAMENTO CELULAR
HISTRICO
Nas primeiras dcadas do sculo XX, j havia muita informao
sobre as reaes qumicas ligadas ao metabolismo celular. Nessa poca
tambm os primeiros microscpios pticos j tinham sido criados,
levando ao conhecimento de que uma clula no parecia ter s um ncleo
em seu interior, mas tambm outros componentes menores, cujo tamanho
estava quase fora da capacidade de observao daqueles microscpios.
A questo era como correlacionar esses conhecimentos anteriormente
acumulados usando diferentes abordagens.
Um bioqumico no era capaz de responder em que local da
clula se passava determinada reao enzimtica que ele conseguia
medir no espectrofotmetro. Algumas vezes, era mesmo necessrio
romper as clulas da preparao, fazendo um extrato para que certas
reaes pudessem ocorrer in vitro e serem medidas. Isso mostrava que as
enzimas que se queriam medir nesse ensaio estavam confinadas em algum
compartimento intracelular, a que os reagentes adicionados externamente
no tinham acesso.
De modo recproco, um morfologista no era capaz de responder
que etapas do metabolismo celular ocorriam nas vrias partes da clula
que ele podia ver, especialmente ao se aproximar a metade do sculo, em
que os microscpios eletrnicos comeavam a ser usados para observar
material biolgico.
Nessa poca, dois grupos trabalhavam intensamente para conhecer
melhor o contedo das clulas: o do Dr. Keith Porter, no Instituto
Rockefeller, em Nova York, Estados Unidos, e o grupo da Universidade
de Louvain, Blgica, formado por Albert Claude, George Hogeboom e,
pouco depois, Christian De Duve.
O grupo do Dr. Porter estava criando, com sucesso, mtodos
adequados ao preparo de material biolgico para observao de
amostras biolgicas ao microscpio eletrnico, mtodos que, alis, so
usados at hoje (veja Aula 2). A nova metodologia mostrou, no interior
de clulas eucariticas, muitos compartimentos internos envolvidos por
membrana, muitos grnulos e muitos filamentos. O grupo da Blgica
estava, desde meados da dcada de 30, realizando experimentos em que
clulas de fgado de rato eram rompidas e seu contedo assim liberado
era separado por centrifugao em vrias fraes, ditas subcelulares.
58 CEDERJ
MDULO 1
AULA
Preparando a amostra
Para obter preparaes de organelas isoladas e purificadas
preciso evidentemente romper as clulas. No entanto, se nossa amostra
formada por clulas de diferentes tipos, devemos pensar que depois de
rompermos as clulas no temos mais condies de identificar de que tipo
celular veio uma mitocndria, por exemplo. Por isso, antes de comear
a pensar em como romper as clulas, temos de pensar em como tornar
a amostra uma preparao homognea, ou seja, formada por apenas
um tipo celular. Essa tarefa vai ser diferente para cada tipo de material.
Vamos considerar alguns exemplos:
Exemplo 1 Amostra de exsudato peritonial. Para obter
amostras de clulas do sistema imune que residem aderidas na parede
interna do peritnio, injetamos pequena quantidade de lquido nessa
cavidade de um animal anestesiado (geralmente um camundongo) e
massageamos levemente para que as clulas se soltem da parede. Em
seguida, retiramos o lquido que vem com uma mistura de clulas.
esse lquido que chamamos de exsudato ou lavado peritoneal. A mistura
CEDERJ 59
!
Ateno! No confunda com o processo de coagulao! Faz parte do plasma
sangneo uma srie de protenas da coagulao: quando retiramos sangue
de um vaso, ou lesamos um vaso, forma-se uma rede protica cujo principal
componente a fibrina, que retm todas as clulas e deixa escapar o lquido. A
rede protica contendo as clulas chamada de cogulo e o lquido chamado
de soro. Assim, a diferena entre plasma e soro que o primeiro ainda contm
as protenas da coagulao e o segundo no. Esse processo fisiolgico e pode
ser inibido in vitro por algumas substncias como heparina e citrato de sdio,
entre outras. Quando retiramos sangue para exame, por exemplo, o processo
de coagulao inibido para que, alm do plasma, as clulas tambm possam
ser examinadas.
60 CEDERJ
MDULO 1
AULA
mais densas; sobre elas se forma uma fina camada esbranquiada (buffy coat)
que contm os leuccitos e, no sobrenadante, o plasma sem clulas.
Que fique clara ento a definio dos termos: precipitado o
material que se depositou no fundo no tubo que foi centrifugado e
sobrenadante o material que no se depositou. Na linguagem de
laboratrio, ns nos referimos ao precipitado de uma centrifugao pelo
nome em ingls, pellet, talvez para no confundir com o precipitado
resultante de uma reao qumica. Esse mtodo bom para separar
as hemcias das outras clulas do sangue, porque a densidade dela
muito diferente. Mas como fazer para separar clulas de densidade
muito prxima?
Exemplo 3 Nos ltimos anos, tem sido necessrio separar as
diferentes classes de linfcito para realizar estudos de interao com o
vrus HIV ou mesmo procedimentos clnicos em que apenas a classe de
linfcito que o vrus infecta tratada e depois devolvida circulao
sangnea do paciente.
Apesar de exercerem funes bastante diversas na defesa de um
organismo (voc vai aprender mais adiante no curso), as diferenas entre
as classes de linfcitos que nos permitem separ-los so principalmente
molculas de sua membrana plasmtica expostas ao meio extracelular.
Quando essas molculas foram descritas e foram produzidos anticorpos
contra elas, uma importante ferramenta ficou disponvel. Assim, podemos
incubar a mistura de linfcitos com anticorpos que s reconhecem uma
das classes. Se esses anticorpos estiverem conjugados com fluorocromos,
podemos separar os linfcitos em um aparelho que reconhea molculas
fluorescentes. Veja na Figura 5.1 um esquema deste aparelho, o citmetro
de fluxo, ou FACS (fluorescence activated cell sorter).
Colocamos a mistura de linfcitos que j foram incubados com
anticorpos fluorescentes numa entrada do aparelho que parece um funil.
A ponta do funil muito fina e est submetida a uma vibrao que faz
com que pinguem gotculas regulares e de tamanho to pequeno que
s comportam uma clula (ou nenhuma). As gotculas passam em fila
indiana entre um laser (que vai excitar o fluorocromo) e um detector
(que vai ler se aquela gota tem clula, de que volume, se ela fluorescente
ou no, e qual a intensidade da fluorescncia). Associado ao detector h
um sistema que coloca carga negativa nas gotas que contm uma clula
CEDERJ 61
62 CEDERJ
MDULO 1
Rompimento celular
AULA
CEDERJ 63
vesculas inside-in
vesculas inside-out
Figura 5.2: Esquema da produo de vesculas de membrana.
Centrifugao diferencial
A maneira de separar o contedo celular em vrias fraes
explorar as diferenas de densidade (relao massa/volume) entre os
componentes celulares, usando uma ultracentrfuga.
Centrifugando o homogeneizado a baixa velocidade (cerca de
1.000g, 10 min), conseguiremos colocar no pellet os componentes mais
densos da mistura, que so as clulas no rompidas e os ncleos. Se
vertermos o sobrenadante em um novo tubo de centrfuga, podemos
centrifug-lo a uma velocidade maior (cerca de 10.000g, 10 min) e assim
colocar no pellet mitocndrias, peroxissomos, lisossomos (e cloroplastos,
se estivermos trabalhando com vegetais). Se mais uma vez passarmos
o sobrenadante para um novo tubo e centrifugarmos em velocidade
64 CEDERJ
MDULO 1
AULA
!
Uma centrfuga um aparelho em que um motor faz um eixo girar em grande velocidade (como numa mquina de
furar). Essa velocidade medida em rpm (rotaes por minuto). Ao eixo que gira se adapta uma pea, o rotor, onde
colocaremos tubos com o material a ser centrifugado. Durante a centrifugao, forma-se um campo gravitacional
cuja intensidade (medida em gravidades - g) proporcional velocidade da centrifugao. Assim, a fora centrfuga
empurra o material para o fundo do tubo numa velocidade que depende da centrifugao, da densidade do
material e do meio em que ele se encontra.
Veja se voc entendeu: a medida rpm se refere
velocidade com que o rotor gira. A medida g
Material em
se refere intensidade do campo gravitacional
Cmara blindada
Sedimentao
formado durante a centrifugao.
Dentre os diferentes componentes de uma
amostra submetidos s mesmas condies
de centrifugao, os mais densos vo para o
fundo primeiro, os de densidade intermediria
depois, e por fim os de menor densidade.
Claro que a prpria densidade do lquido em
que os componentes celulares esto suspensos
tambm influencia. As primeiras centrfugas
tinham eixo horizontal e foi um grande
avano quando foram construdas centrfugas
cujo eixo girava na vertical.
As mais simples so ditas centrfugas clnicas, por
serem muito usadas em laboratrios de anlises
clnicas (existe uma no laboratrio de aulas
prticas no plo; observe-a melhor) para separar
os componentes do sangue (veja exemplo 2,
anteriormente). Essas centrfugas atingem
velocidades de at 3.000 rpm. No entanto,
para separar componentes de densidade
menor, como organelas, necessrio um campo
gravitacional mais intenso, que s conseguido
Vcuo
em centrifugaes de velocidade muito maior.
Isso s foi possvel quando se construram as
Refrigerao
primeiras ultracentrfugas, na dcada de 30.
Nesses equipamentos, o rotor gira numa cmara
blindada, refrigerada e sem ar (no vcuo),
diminuindo assim as foras de atrito.
CEDERJ 65
Figura 5.4
66 CEDERJ
MDULO 1
AULA
CEDERJ 67
II) CROMATOGRAFIA
a) Cromatografia de partio
A cromatografia de partio adequada para separao de molculas
pequenas, como lipdeos e aminocidos. Pode ser feita em papel ou numa fina
camada de material inerte, como celulose ou slica, aplicada sobre uma superfcie
de vidro. Nesses suportes possvel conseguir particionar a amostra entre duas
fases lquidas, uma mvel e outra estacionria. Veja como funciona: colocamos
um papel ligeiramente umedecido em gua num recipiente, em contato com
um solvente orgnico (veja a Figura 5.5); o solvente subir pelo papel por
capilaridade, enquanto a gua continuar imvel.
Quando o solvente chegar perto da borda superior do papel,
retiramos do recipiente, deixamos o papel secar e borrifamos com corante
adequado para o que desejamos: para fosfolipdeos ou para aminocidos,
por exemplo. Logo veremos que os componentes da amostra foram
separados. Essa separao ocorreu porque cada componente da amostra
tem afinidade diferente, pelo solvente ou pela gua. Assim, quem tiver
mais afinidade com o solvente vai se deslocar mais e quem tiver mais
afinidade pela gua, que est imobilizada no papel, vai se deslocar mais
devagar ou mesmo ficar parado. Dizemos que os componentes da amostra
particionaram entre a agua e o solvente.
papel
direo do
solvente
componentes
separados
aplicao da
amostra
!
Voc pode fazer essa cromatografia em casa: use um pedao de papel daqueles de coar caf
e pingue tinta de caneta-tinteiro azul ou preta perto de uma das bordas do papel. Mergulhe
essa borda em um pouco de acetona e veja que, medida que a acetona sobe pelo papel,
ela arrasta os componentes da tinta, uns mais e outros menos, separando uma mancha
vermelha, uma amarela e outra esverdeada.
68 CEDERJ
MDULO 1
b) Cromatografias em coluna
AULA
CEDERJ 69
esfera de
resina
componentes menor da
amostra
componentes maior da
amostra
resina carregada
positivamente
componentes negativos
da amostra ficam presos
componentes positivos
da amostra passam direto
direo de eluio
resina acoplada
ao anticorpo
70 CEDERJ
o componente no reconhecido
pelo anticorpo passa direto
anticorpo fica preso
MDULO 1
filtrao em gel ou a de troca inica, acertou. Mas para que ela funcione
AULA
III) ELETROFORESE
A tcnica bioqumica mais usada em Biologia Celular certamente
a eletroforese. Ela se baseia no estudo do comportamento de uma molcula
num campo eltrico. As macromolculas so geralmente carregadas (reveja,
em Bioqumica I): os cidos nuclicos so negativos e as protenas podem
ser negativas ou positivas, dependendo do pH em que se encontram. Por
isso, quando colocados num campo eltrico, os cidos nuclicos sempre vo
para o plo positivo e as protenas, para o positivo ou negativo, dependendo
do pH. Mas a eletroforese no feita com as molculas soltas no lquido
(apesar de ter sido inventada assim, h muitos anos). Usamos um suporte
slido, que geralmente um gel poroso.
Para cidos nuclicos, que so muito grandes, usamos amido (isso
mesmo, um mingau!) ou agarose (parece uma gelatina), que formam gis
de poro grande; e para protenas, que no so to grandes, usamos um gel
prprio para eletroforese, a poliacrilamida. Todos esses materiais permitem
que, ao prepar-los, possamos escolher o tamanho do poro do gel por onde
passaro as molculas, a caminho do plo que tem carga oposta sua.
A carga dos cidos nuclicos proporcional ao seu tamanho; quanto
maior a molcula, mais negativa. J as protenas no, existem protenas
grandes e muito carregadas, grandes e pouco carregadas, pequenas e muito
carregadas e pequenas e pouco carregadas, dificultando bastante a anlise
do resultado. Alm disso, como percorrem os poros de um gel, a forma da
molcula vai fazer diferena: uma protena em forma de basto vai passar
pelos poros com mais dificuldade se estiver de lado. Por isso, as protenas
so desnaturadas antes de serem aplicadas ao gel (Figura 5.11). Assim, as
diferenas de forma no influenciam mais a corrida eletrofortica, apenas
a carga e o tamanho da molcula contam.
CEDERJ 71
!
Para desnaturar uma protena, podemos ferv-la e, alm disso, so
usados dois reagentes: a) o dodecil sulfato de sdio (SDS), um detergente
inico que, alm de desnaturar, adiciona cargas negativas s ligaes
peptdicas, tornando a carga da protena sempre negativa e proporcional
ao seu tamanho (claro, porque quanto maior a protena, mais ligaes
peptdicas ela tem!); b) o 2-mercaptoetanol, poderoso agente redutor que
adiciona hidrognios s pontes dissulfeto, desfazendo-as (Figura 5.11).
S S
Reveja, em Bioqumica I:
uma
protena
desnaturada aquela que
perdeu suas estruturas
terciria e secundria,
ficando s com a primria,
ou seja, os aminocidos
ligados covalentemente
e enovelados ao acaso, o
que faz com que todas as
protenas desnaturadas
sejam aproximadamente
globulares.
SH
SH
C
A
ELETROFORESE
B
sentido da corrida
C
A
Figura 5.11: Preparao das
protenas para ele-troforese.
72 CEDERJ
MDULO 1
AULA
molecular
weight
100,000
40,000
15,000
qualquer ensaio.
sentido da corrente
eltrica
gel
nitrocelulose
Figura 5.13: Eletrotransferncia.
gel
nitrocelulose
CEDERJ 73
QUESTIONRIO
1. Por que preciso uma preparao homognea para comear um
fracionamento celular?
2. Quais so os mtodos mais usados para romper clulas?
3. Como se separam organelas de um homogeneizado?
4. O que centrifugao em gradiente de densidade?
5. Qual o princpio de separao da cromatografia de partio?
6. Qual o princpio de separao da cromatografia de filtrao em gel?
7. Qual o princpio de separao da cromatografia de troca inica?
8. Qual o princpio de separao da cromatografia de afinidade?
9. Quais as aplicaes da tcnica de eletroforese?
10. Quais as aplicaes da tcnica de eletrotransferncia ou Western blot.?
74 CEDERJ
objetivos
AULA
O uso de anticorpos na
pesquisa
INTRODUO
76 CEDERJ
Estrutura
Enzima caracterstica
Complexo de Golgi
Nucleosdeo difosfatase
Complexo de Golgi
Tiamino-pirofosfatase
Lisossoma, retculo
endoplasmtico
Fosfatase cida
Membrana plasmtica
Fosfatase alcalina
Membrana plasmtica
5nucleotidase
Mitocndria
Citocromo oxidase
Peroxissomos
Peroxidase
Peroxissomos
Catalase
Retculo endoplasmtico
Glicose-6-fosfatase
MDULO 1
6
AULA
O QUE SO ANTICORPOS
Anticorpos, tambm chamados imunoglobulinas, so uma classe
de protenas produzida pelo sistema imune em resposta presena de
uma molcula estranha ao organismo. As molculas capazes de estimular
a produo de anticorpos so chamadas antgenos. A Figura 6.1 resume
a estrutura de uma imunoglobulina.
brao
cauda
5nm
Sistema imune
Todos os animais, mesmo os mais simples, possuem
clulas especializadas na defesa do organismo contra vrus,
bactrias ou mesmo molculas estranhas. No caso dos
mamferos o sistema imune constitudo pelos chamados
glbulos brancos que, na verdade, incluem vrios tipos
celulares. Destes, os linfcitos B so responsveis pela
produo de anticorpos. Os linfcitos podem ser do tipo
T ou do tipo B, de acordo com sua origem. Os do tipo T
passam pelo timo, uma glndula localizada sobre o osso esterno.
Nas aves os linfcitos B se originam da bursa de Fabricius, da
seu nome. Nos mamferos, eles se formam e amadurecem na
medula ssea. Os linfcitos B sintetizam anticorpos que tanto
so expostos em sua superfcie, quanto secretados para o meio
extracelular (no caso, o sangue). Os anticorpos utilizados como
marcadores celulares so provenientes de linfcitos B.
anticorpos
secretados
anticorpos expostos
na superfcie
CEDERJ 77
Fagocitose
Figura 6.2: Uma bactria com
vrios anticorpos aderidos
sua superfcie reconhecida
e ingerida (fagocitada), sendo
assim destruda.
78 CEDERJ
MDULO 1
6
AULA
B1
B2
a
b
c
OS ANTICORPOS MONOCLONAIS
A produo contnua de anticorpos de um nico tipo e com
especificidade para uma determinada regio da molcula possvel a
partir do cultivo de hibridomas, culturas celulares resultantes da fuso de
dois tipos celulares distintos que conjugam, caractersticas interessantes
das duas linhagens originais (veja Aula 4). Como esses anticorpos so
originados de um clone celular, so chamados monoclonais. Alm da
especificidade, outra vantagem dos anticorpos monoclonais que, como
provm de linhagens celulares que podem ser mantidas permanentemente
em cultivo, sua produo mantida por tempo indeterminado. Como
desvantagem, h o fato de que nem todos os hibridomas secretam
anticorpos interessantes e a seleo das linhagens teis bastante
trabalhosa (Figura 6.5). Tambm pode acontecer de um hibridoma se
perder por problemas durante o cultivo, como contaminao ou falha
humana. As principais etapas do processo de produo de anticorpos
monoclonais esto esquematizadas na Figura 6.5.
CEDERJ 79
Linfcitos
Linhagem tumoral
de linfcitos B
Clulas
que produzem anticorpo
anti-X (vivem poucos dias)
Fuso
Produtos plaqueados em muitos pocinhos
Clulas
que se multiplicam
indefinidamente
Formao de heterocrions
e hibridomas
Secreo de anti-X
MDULO 1
6
AULA
eletrnico de transmisso.
CEDERJ 81
MARCADORES FLUORESCENTES
Tambm chamados fluorocromos, so corantes especficos para
microscopia de fluorescncia, pois tm a capacidade de absorver um
comprimento de onda da luz e emitir em outro, mais longo. Se for
utilizado um filtro que permita a passagem apenas do comprimento de
onda emitido, esse ser visto brilhando contra um fundo escuro, permitindo
que quantidades muito pequenas dessas molculas sejam detectadas. Na
microscopia de fluorescncia, esse princpio utilizado para detectar
componentes celulares especficos, como protenas ou acares. Nesses
casos, os marcadores fluorescentes so acoplados a molculas que se
ligam de modo especfico aos componentes celulares, como anticorpos
ou lectinas. Os marcadores mais utilizados so a rodamina, que emite em
vermelho, e a fluorescena, que emite em verde (Figura 6.9 e 6.10).
fluorescena
rodamina
MDULO 1
6
AULA
Incubao
com anticorpos
acoplados a
enzimas
Nitrocelulose
com as protenas
separadas
Incubao
com substrato
da enzima
Produto de
reao colorido
fcil saber se uma pessoa teve contato com algum agente causador
de doena incubando uma nitrocelulose contendo as protenas do provvel
parasito, separadas por eletroforese, com o soro da pessoa. Se houver
anticorpos no soro, eles se ligaro s bandas do parasito. Em seguida,
incubamos a nitrocelulose com anticorpos secundrios acoplados enzima
e revelamos em que banda ela se ligou usando seu substrato. Assim feita
obrigatoriamente a segunda testagem para HIV, o vrus que causa AIDS. A
primeira testagem (chamada ELISA, de enzyme linked immunoadsorbent
assay) feita com extratos do vrus no separados por eletroforese; todas
as protenas juntas so incubadas com o soro do paciente e depois com
anticorpos secundrios acoplados enzima. A resposta do ELISA sim ou
no, isto , tem ou no tem anticorpos. Os pacientes com resposta positiva
sero chamados a fornecer outra amostra de sangue para confirmar o teste.
Nesse segundo teste, usa-se o Western blot, para saber quais so as protenas
do vrus reconhecidas pelo soro do paciente. Assim possvel identificar qual
variante do vrus infectou aquela pessoa, dado importante para encaminhar
o tratamento daquele paciente e tambm para estudos epidemiolgicos.
84 CEDERJ
Espcie
Nome vulgar
Canavalia ensiformis
Feijo-cavalo
Triticum vulgaris
Trigo
Helix pomatia
Caracol
Limulus polyphemus
Lmulo ou caranguejo-ferradura
Arachis hypogaea
Amendoim
Ricinus comunis
Mamona
MDULO 1
6
AULA
RESUMO
Anticorpos so protenas secretadas pelos linfcitos em resposta a uma molcula
ou um organismo estranho.
Um organismo produz vrios anticorpos diferentes, capazes de reconhecer
diferentes pores de uma mesma molcula estranha. O soro contendo essa
mistura de anticorpos chamado policlonal.
Quando se produz um clone a partir da fuso de um linfcito e de uma clula
tumoral, essa linhagem pode ser mantida indefinidamente em cultura e secretar
anticorpos monoclonais.
Os anticorpos servem para identificar a presena de molculas na superfcie de
clulas por provocarem aglutinao quando presentes.
Os anticorpos tambm podem ser associados a molculas visveis ao microscpio
ptico de fluorescncia (fluorocromos) ou a partculas de ouro coloidal, permitindo
localizar molculas especficas em microscopia eletrnica.
Os anticorpos tambm podem ser utilizados para reter molculas numa coluna de
cromatografia e permitir sua purificao e para demonstrar a presena de uma
protena entre as bandas de um gel.
As lectinas so protenas extradas de plantas e animais que se ligam de forma
especfica a determinadas seqncias de acares presentes na superfcie celular,
permitindo sua identificao.
CEDERJ 85
EXERCCIOS
1. O que so anticorpos?
2. Por que os anticorpos podem causar aglutinao de clulas?
3. Defina:
anticorpos policlonais
anticorpo monoclonal
soro imune
hibridoma
4. A que tipo de molcula os anticorpos so associados para observao em:
Microscopia ptica
Microscopia eletrnica
5. O que so lectinas?
86 CEDERJ
objetivos
AULA
Estrutura da membrana
plasmtica
INTRODUO
Limite
Meio
intracelular
Meio
extracelular
D uma paradinha
Responda a este questionrio de pr-avaliao de seus
conhecimentos anteriores sobre membrana. Vale a pena
respond-lo antes de continuar. Veja o gabarito no final
desta aula.
1. A membrana celular uma estrutura que limita as clulas
e _____________________________________________.
2. A composio qumica da membrana de ___________
____________, _________________ e __________________ .
88
CEDERJ
MDULO 1
7
AULA
!
Nos cadernos didticos de Bioqumica I esto
minuciosamente descritos os conceitos aqui
rapidamente revistos e os experimentos que
levaram a eles. Vale a pena dar uma conferida
antes de prosseguir no texto.
Meio intracelular
Meio extracelular
89
Resumindo:
Foto: Mrcia Attias e Marco Antnio
Vasconcelos Santos
BSICO
DADOS HISTRICOS
A estrutura e a composio qumica das membranas celulares
comearam a ser esclarecidas no sculo XIX.
O primeiro a propor uma natureza lipdica para as membranas
celulares foi Overton, ao observar que as clulas podiam inchar ou murchar,
de acordo com a composio do meio em que se encontravam.
Mais adiante, em 1917, Langmuir demonstrou que no apenas as
membranas eram formadas por lipdeos como estes eram de natureza anfiptica,
isto , uma regio da molcula era hidroflica e a outra era hidrofbica.
90
CEDERJ
MDULO 1
AULA
Bicamada lipdica
OS LIPDEOS DA MEMBRANA
Os lipdeos correspondem a cerca de 50% da massa
Foto cedida pela Dra. Ana Maria B. Martinez
91
Cabea polar
Anis
esterides
rgidos
Cabea apolar
Cabea
apolar
a Micela
92
CEDERJ
Lipossoma
MDULO 1
AULA
OS FOSFOLIPDEOS
Os fosfolipdeos so formados por um grupo hidroflico, composto
por um esqueleto de glicerol com um radical fosfatado e uma cauda
hidrofbica, composta por duas cadeias de cidos graxos de comprimento
varivel (14 a 24 carbonos). Uma dessas cadeias geralmente saturada,
isto , no h duplas ligaes entre os tomos de carbono, e a outra pode
ser saturada ou insaturada (Figura 7.8).
Figura 7.8: Os fosfolipdeos so formados por uma cabea polar onde a um esqueleto
de glicerol ligam-se um fosfato e um radical orgnico. A cauda apolar formada
por duas cadeias longas de cidos graxos. Uma dessas pode ser insaturada.
CEDERJ
93
OS FOSFOLIPDEOS
Quatro tipos de fosfolipdeos predominam nas membranas
celulares dos mamferos: fosfatidilcolina, fosfatidilserina, esfingomielina
e fosfatidiletanolamina.
Sobre as particularidades de cada um, podemos dizer que:
Apenas a fosfatidilserina carregada negativamente em pH
fisiolgico.
O fosfatidilinositol um lipdeo minoritrio, mas o nico que
serve de ncora a protenas, num arranjo descrito mais recentemente e de
grande importncia em vrios processos celulares (veja aula de protenas
de membrana).
Os fosfolipdeos no se distribuem simetricamente nas duas
metades da membrana. Em eritrcitos humanos, por exemplo, a
fosfatidilcolina e a esfingomielina se distribuem apenas na camada voltada
para o meio externo, enquanto a fosfatidilserina e a fosfatidiletanolamina
se localizam apenas na camada interna. Isso causa diferena de cargas entre
a face interna e a face externa da membrana. Essa distribuio diferenciada
dos fosfolipdeos uma das causas da assimetria da membrana (Figura
7.10), uma caracterstica que discutiremos mais adiante.
94
CEDERJ
MDULO 1
Fernanda de Abreu / cedrj
AULA
Meio extracelular
Citoplasma
Figura 7.11: Os lipdios da membrana realizam movimentos de translocao e de rotao constantemente. O flip-flop, entretanto,
s ocorre em situaes especficas.
Flip-flop
Rotao
CEDERJ
95
b
Figura 7.12: (a) Cadeias insa-turadas,
membranas mais fluida; (b) cadeias
saturadas, membrana menos fluida.
ESTERIS
O colesterol o esterol mais importante nas membranas
biolgicas. Na maioria das membranas dos eucariontes, h
praticamente uma molcula de colesterol para cada molcula
de fosfolipdeo. As molculas de colesterol so pequenas, e sua
estrutura, contendo anis, bastante rgida (Figura 7.13).
Figura 7.13: A estrutura do colesterol, com anis aromticos, torna a molcula bastante rgida. (a) frmula plana,
(b) frmula esquemtica, apontando em cinza mdio a parte hidroflica da molcula, em cinza claro os anis
carbnicos e em preto a cauda de hidrocarbonetos, (c) frmula tridimensional onde o oxignio da hidroxila
aparece em cinza, os carbonos em preto e os hidrognios em branco.
96
CEDERJ
MDULO 1
AULA
OS GLICOLIPDEOS
Os glicolipdeos, como o prprio nome
indica, resultam da associao (por meio de
uma molcula de glicerol) entre um glicdio, que
CEDERJ
97
DOMNIOS LIPDICOS
Que em vrios tipos celulares cada regio da membrana poderia ter
composio, forma e funo diferentes, j era sabido h muito tempo. Esse ,
em essncia, o conceito de domnio de membrana, uma regio da membrana
diferente das demais, com caractersticas prprias. Por exemplo, por que
a regio apical das clulas do epitlio intestinal possui microvilosidades
e a superfcie basal e lateral destas clulas lisa (Figura 7.4)? Por que os
neurnios recebem estmulos pela regio do corpo celular e os transmitem
apenas na extremidade do axnio?
Inicialmente, verificou-se que cada domnio poderia conter
protenas de membrana diferentes, mas no se sabia o que mantinha
essas protenas restritas a essas regies. A resposta foi obtida h alguns
98
CEDERJ
MDULO 1
AULA
Plataforma lipdica
CEDERJ
99
100
CEDERJ
MDULO 1
7
AULA
EXERCCIOS
1. Descreva de modo sucinto o modelo do mosaico fluido da membrana.
2. Defina e diferencie meio intracelular e meio extracelular.
3. O que voc entende por compartimento celular?
4. Como se organizam os lipdeos nas membranas?
5. O que voc entende por fluidez dos lipdeos da membrana?
6. Que tipos de movimento realizam os lipdeos na membrana?
7. O que flip-flop? Quando ocorre?
8. Como atuam os seguintes fatores sobre a fluidez da membrana:
a) comprimento das cadeias de cidos graxos dos fosfolipdeos?
b) duplas ligaes nas cadeias de cidos graxos dos fosfolipdeos?
9. Por que o colesterol diminui a fluidez da membrana?
10. Descreva a assimetria da bicamada lipdica.
11. Como podem os lipdeos formar domnios na membrana?
12. O que so as plataformas lipdicas?
CEDERJ
101
objetivos
AULA
Protenas de membrana
Pr-requisitos
Aulas de 11 a 16 de Protenas (Bioqumica I).
INTRODUO
b
Figura 8.1: Principais funes das protenas de membrana.
A transporte; B adeso; C reconhecimento.
104 CEDERJ
MDULO 2
8
A protena que
transporta glicose
para dentro das
clulas do tipo
multipasso, assim
como a bomba de
sdio/potssio.
Meio
Extracelular
Bicamada
lipdica
b
a
Meio
Intracelular
a
Figura 8.4: As ncoras que prendem
as protenas pelo lado citoplasmtico
(b) so diferentes daquelas do lado
extracelular (a).
CEDERJ 105
AULA
!
As ncoras de membrana podem ser de vrios tipos, especficos para o lado
citoplasmtico ou para o lado extracelular da membrana. Protenas ligadas
covalentemente a lipdeos podem ser encontradas no folheto citoplasmtico.
Protenas ancoradas via glicosil-fosfatidil-inositol (GPI), s existem na face
da membrana voltada para o meio extracelular. A protena ancorada por
GPI se prende sempre ao fosfolipdeo fosfatidilinositol, tendo como ponte
entre a protena e o fosfolipdeo uma seqncia de acares, que sempre
a mesma, uma etanolamina. interessante como uma mesma estrutura est
presente na ligao de protenas to diferentes membrana.
106 CEDERJ
MDULO 2
8
AULA
Figura 8.6: Protenas que se ligam por carga a outros componentes da membrana
podem se soltar da mesma, se a fora inica da soluo onde se encontram for
drasticamente alterada.
!
Protozorios parasitas como o Trypanosoma brucei (agente
da doena do sono) e o Plasmodium (causador da malria)
periodicamente secretam a enzima fosfolipase-c especfica
para fosfatidil inositol. Dessa forma, todas as protenas ancoradas
por GPI na superfcie deles so rapidamente eliminadas e
os protozorios se tornam invisveis para os anticorpos j
produzidos pelo hospedeiro.
CEDERJ 107
MDULO 2
8
AULA
110 CEDERJ
MDULO 2
8
AULA
(A)
(A)b
(B)
(C)
(C)
(A)
(B)
(C)
(D)
(C)
(D)
CEDERJ 111
FORMAO DE BARREIRAS
Alguns domnios so conseqncia da existncia de barreiras.
As barreiras so formadas por arranjos de protenas que impedem a
livre difuso de outras protenas ou lipdeos entre elas. As protenas se
difundem livremente dentro de um determinado domnio; entretanto,
no passam aos domnios vizinhos por no serem capazes de cruzar as
barreiras. As junes entre clulas que formam epitlios (Figura 8.12)
constituem barreiras. As protenas existentes no corpo celular do
espermatozide tambm no so encontradas no flagelo deste pela
existncia de uma barreira que restringe sua mobilidade e divide esses
dois domnios (Figura 8.13).
Protena A
112 CEDERJ
Domnios da cabea
MDULO 2
8
AULA
OS CARBOIDRATOS DE MEMBRANA
Correspondem aos acares. Grande parte dos lipdeos e das
protenas de membrana voltados para o meio extracelular apresenta-se
ligado a carboidratos, formando glicoprotenas ou glicolipdeos. H ainda
um terceiro tipo de carboidratos: so as proteoglicanas, que geralmente
so encontradas na matriz extracelular (sero abordadas em maior detalhe
em Biologia Celular 2), mas algumas se inserem na bicamada lipdica por
parte de sua poro protica ou por meio de uma ncora do tipo GPI.
O conjunto de carboidratos da membrana forma o chamado
glicoclix ou cell-coat. Quanto mais carboidratos contiver uma
membrana, mais espesso ser o glicoclix (Figura 8.14).
Alm de estarem sempre ligados a uma protena ou a um lipdio
na membrana plasmtica, os acares esto sempre voltados para o meio
extracelular (Figura 8.15).
DE: ALBERTS, Bruce et al. Molecular Biology of the Cell. 4.ed. Nova York: Garland Science Publishing, 2002.
CEDERJ 113
Citossol
Membrana plasmtica
114 CEDERJ
MDULO 2
8
Proteoglicana
RESUMO
As membranas celulares formam barreiras que confinam molculas e atividades
com lipdeos da membrana. Outras ainda formam ligaes fracas (no covalentes)
com outras protenas da membrana.
A maior parte das protenas e alguns dos lipdeos voltados para o lado externo
CEDERJ 115
AULA
EXERCCIOS
1. Por que a criofratura foi fundamental para se saber como as protenas se inserem
na bicamada lipdica.
2. Defina os seguintes conceitos:
protena transmembrana
protena perifrica
protena ancorada
-hlice proteica e fita -pregueada
protena unipasso
protena multipasso
porinas
complexo proteico
3. Quais os tipos de movimento que as protenas podem fazer na membrana?
4. O que um heterocrion?
5. O que so domnios de membrana?
6. O que so barreiras de membrana?
7. Como os acares se ligam s membranas?
8. O que glicoclix?
9. Diferencie glicoprotenas de proteoglicanas.
10. Por que todos os carboidratos de membrana se localizam na face extracelular
da mesma?
116 CEDERJ
objetivos
AULA
Permeabilidade da membrana
Pr-requisito
Estrutura de protenas (Bioqumica I)
INTRODUO
Recordando:
As membranas celulares so compostas por uma bicamada
de lipdeos, onde esto inseridas protenas. Enquanto
as protenas variam muito de acordo com as atividades
especficas dos diferentes tipos celulares, os lipdeos so,
alm de majoritrios, praticamente os mesmos nas
membranas plasmticas das diferentes clulas. Os lipdeos
podem ser definidos como molculas hidrofbicas no
carregadas, embora os fosfolipdeos e mesmo o colesterol
nas membranas possuam uma extremidade hidroflica em
suas molculas.
118 CEDERJ
MDULO 2
9
AULA
Molcula A
(atravessa
a bicamada
lipdica)
Molcula B
(no atravessa
a bicamada
lipdica)
Clula
D uma paradinha. V at a cozinha, prepare uma limonada, pegue umas batatinhas fritas
e, na volta, reveja estes conceitos de Bioqumica I:
Molcula polar X molcula apolar
Molcula hidroflica X molcula hidrofbica
on
Camada de solvatao
Ah, no tem nada a ver!
Como no? J imaginou tomar limonada se o acar no dissolver na gua? E a batata?
Fica horrvel, encharcada de leo de fritura!
Repare que esses conceitos fazem parte do nosso dia-a-dia.
Figura 9.2: A troca de gases entre os seres vivos e o meio ambiente feita sempre
por difuso simples, obedecendo diferena de concentrao. Como a planta
est produzindo O2, ele lanado ao meio ambiente. J o animal consome
continuamente O2 e expira CO2, que lanado ao meio ambiente e absorvido pela
planta, em cujas clulas a concentrao mais baixa.
120 CEDERJ
MDULO 2
9
AULA
DIFUSO SIMPLES
o processo que acabamos de descrever: a passagem de substncias
atravs da bicamada lipdica chamada difuso simples. Observe o
esquema no boxe para entender melhor como funciona.
No caso de a molcula transportada ser a gua, recebe o nome
de osmose.
OSMOSE
Na osmose, a gua, que o solvente universal tanto do meio
intracelular quanto do meio extracelular, se comporta como soluto.
A osmose pode ser observada em dois experimentos muito simples, que
voc pode executar no plo.
Experimento 1:
Material:
Luvas de ltex descartveis
Hemcias (sangue de camundongo ou outra cobaia)
Soro fisiolgico
Sal de cozinha (NaCl)
Tubo de ensaio
Pipetas e bulbos
Lminas e lamnulas
Microscpio ptico
Procedimento:
1. Sempre usando as luvas, recolha uma amostra (1 ml) do
sangue do animal num tubo contendo soro fisiolgico (1 ml). Este
ser o tubo 1. Misture, colha com a pipeta uma gota da mistura,
monte entre lmina e lamnula e observe ao microscpio ptico. Qual
o formato das hemcias?
CEDERJ 121
122 CEDERJ
MDULO 2
9
AULA
Figura 9.3: Variaes na forma e no volume de clulas submetidas a solues de diferentes tonicidades.
EXPERIMENTO 2:
Material:
Uma cebola sem casca
gua destilada
Acar (sacarose)
Tubo de ensaio
Pipetas e bulbos
Lminas e lamnulas
Microscpio ptico
Procedimento:
1. Puxe cuidadosamente uma pelcula da superfcie da
cebola. Estenda essa pelcula sobre uma gota dgua colocada numa
lmina e monte com uma lamnula. Observe e descreva o formato
das clulas ao microscpio.
2. Puxe uma outra pelcula semelhante primeira mas
monte sobre uma gota de uma soluo saturada de acar em
gua. Observe ao microscpio e descreva as alteraes.
CEDERJ 123
parede
celular
ncleo
membrana
plasmtica
hipertnico
isotnico
hipotnico
BSICO
objetivos
10
AULA
As protenas transportadoras
PROTENAS TRANSPORTADORAS
Dentre as protenas presentes na membrana celular de todas
as clulas, destacam-se aquelas cuja principal funo permitir a
passagem das molculas que no so capazes de atravessar a bicamada
lipdica. Todas as protenas transportadoras possuem as seguintes
caractersticas:
1. Atravessam a bicamada lipdica de um lado ao outro, isto ,
so protenas transmembrana.
2. So do tipo multipasso, isto , sua seqncia de aminocidos
atravessa muitas vezes a bicamada. Muitas protenas transportadoras
so, na verdade, complexos de duas ou mais protenas que terminam
por formar uma regio hidroflica na membrana, permitindo assim a
passagem de molculas hidroflicas.
D uma paradinha:
Se voc acha que protena multipasso isso,
d uma espreguiada, endireite as costas
e volte aula de protenas de membrana (nmero 8)
para refrescar sua memria.
126 CEDERJ
MDULO 2
10
AULA
AS AQUAPORINAS
A passagem de gua atravs da membrana das hemcias muito
rpida (podendo mesmo levar ao seu rompimento), enquanto outros tipos
celulares, como os ovcitos de peixes e anfbios, permanecem na gua dos
rios e lagos sem absorver ou perder quantidades significativas de gua.
A constatao e a pesquisa em torno desses fatos levou descoberta de
um novo tipo de protena transportadora: as aquaporinas.
Naturalmente, as protenas dessa famlia esto ausentes da
membrana dos ovcitos desses animais, para evitar que eles arrebentem
quando lanados em gua doce ou desidratem quando os ovos so postos
em gua salgada.
As aquaporinas formam uma famlia de protenas de membrana
especficas para a passagem de molculas de gua e j foram identificadas
na membrana de muitos tipos celulares, alm das hemcias. Na membrana
dos tbulos coletores dos glomrulos renais (Figura 10.3), por exemplo,
ajudam a captar a maior parte da gua perdida durante o processo de
filtragem do sangue, o que diminui o volume final de urina produzido.
Ao contrrio dos canais inicos, as aquaporinas permanecem abertas
o tempo todo, permitindo a passagem da gua do meio mais diludo
(geralmente o extracelular) para o mais concentrado (o citoplasma).
128 CEDERJ
MDULO 2
10
AULA
Tbulo renal
Sangue
Cincia vida!
Os portadores do diabetes do tipo 2 produzem grande quantidade de
urina, sempre muito diluda. Nesses indivduos, a reabsoro de gua
nos tbulos renais deficiente justamente pela falta de aquaporinas
na sua membrana. Diversas outras doenas tambm esto associadas
ao mau funcionamento dessas protenas.
!
Tudo relativo Talvez voc esteja se perguntando: sero as
aquaporinas carreadores ou canais? Pense no assunto; voltaremos
a ele na seo de exerccios.
CEDERJ 129
objetivos
11
AULA
Transporte passivo
!
Assim como nos canais inicos, as
pessoas espremidas numa saleta
tambm tendem a se espalhar,
quando uma porta para um
compartimento mais espaoso
aberto.
132 CEDERJ
11 MDULO 2
AULA
MEIO EXTRACELULAR
MEIO INTRACELULAR
CEDERJ 133
!
J na atividade cerebral
participam muitos canais
dependentes de voltagem.
134 CEDERJ
11 MDULO 2
AULA
Voc j deve ter notado que grande parte dos exemplos que temos
utilizado nesta aula se refere aos tecidos chamados excitveis, isto , msculos
e nervos. Os tipos celulares desses tecidos necessitam responder rapidamente a
estmulos. Isso conseguido quando, em reposta a um estmulo, abrem-se canais e
por eles passam grandes quantidades de ons em pequeno intervalo de tempo.
No estado de repouso, a membrana dessas clulas se encontra polarizada.
Isto , h um acmulo de ctions (especialmente Na+ e K+) no meio extracelular.
Em conseqncia, o meio intracelular negativo em relao ao extracelular.
Essa diferena de cargas (chamada potencial de membrana) mantida pelo
transporte ativo desses ctions, a ser estudado na Aula 12.
Meio extracelular
Meio intracelular
Membrana em repouso
Meio extracelular
Meio intracelular
Membrana despolarizada
CEDERJ 135
++
inativo
++
aberto
136 CEDERJ
CEDERJ 137
11 MDULO 2
Figura11.5: A propagao
de um estmulo nervoso
percorre a membrana
do neurnio (a). As
figuras B e C mostram
o percuso do estmulo
ao longo de um trecho
da membrana, onde se
abrem sucessivamente
canais inicos ativados
por voltagem (b). Os
canais abertos criam
uma rea de inverso
da voltagem que induz
abertura dos canais
vizinhos. Enquanto os
canais recm-ativados
se encontram no estado
inativo (rea sombreada),
impedindo
que
o
estmulo d "marcha
r", os canais frente
abrem-se, permitindo a
propagao do estmulo
no sentido correto.
AULA
A glicose o principal combustvel utilizado pelas clulas para produo de energia (a). Alm de sua quebra
constante no meio intracelular criar um gradiente de concentrao em que sua absoro pela clula favorecida,
a clula tambm capaz de transformar a glicose que no ser utilizada imediatamente em glicognio (no caso
de clulas animais) ou amido
(nas clulas vegetais) . Essas
estratgias favorecem a formao
de um gradiente de entrada
de glicose nas clulas. Se no
houver glicose disponvel para
entrar na clula, os
estoques
CONCLUSO
Podemos comparar o transporte passivo a um caminho sendo
esvaziado. No caso dos canais inicos, seria um caminho basculante,
que descarrega toda a areia de uma vez. J no caso dos carreadores, os
trabalhadores precisam descarregar saco por saco. O que h de comum
nos dois processos que ele feito do compartimento onde h areia
(o caminho), para onde h menos (fora do caminho). J para encher
o caminho, a histria ser outra...
objetivos
12
AULA
Transporte ativo
!
A harmonia do desequilbrio:
Assim como uma bicicleta s se mantm equilibrada nas duas rodas se estiver
em movimento, a vida celular tambm requer atividade constante. Por
exemplo, no caso dos neurnios, o que indica se seu estado de repouso ou
atividade a diferena de cargas nos lados interno e externo na membrana
celular. Quando a clula est em repouso, o exterior positivo em relao ao
meio interno. Em atividade, essa polaridade se inverte momentaneamente e o
interior se torna positivo. Essa mudana de carga se faz pela passagem de ons
(principalmente Na+ e K+). Se a distribuio de ons fosse igual nos dois lados
da membrana, a clula no saberia em que estado se encontra.
140 CEDERJ
12 MDULO 2
AULA
Figura 12.2: No transporte ativo, a substncia transportada por um carreador contra o seu gradiente
eletroqumico, ou seja, do compartimento onde
est em menor concentrao para onde j existe
em maior quantidade.
CEDERJ 141
142 CEDERJ
Meio intracelular
12 MDULO 2
AULA
D uma paradinha:
O transporte ativo, energeticamente falando, sempre
feito ladeira acima. Isto , enquanto para descarregar um
caminho de areia basta erguer a caamba e despejar o
contedo, para ench-lo sero necessrios vrios operrios
com ps.
CEDERJ 143
A BOMBA DE SDIO/POTSSIO
A bomba de Na+/K+ um dos sistemas de transporte ativo mais
estudados e mais bem conhecidos. A Figura 12.6 resume suas principais
caractersticas funcionais.
Meio Intracelular
144 CEDERJ
12 MDULO 2
AULA
CEDERJ 145
146 CEDERJ
12 MDULO 2
AULA
CEDERJ 147
Cotransporte
!
A receita de soro caseiro
(1 colher de ch de sal e 1
colher de sopa de acar em
1 litro de gua), utilizada para
reidratao oral de pessoas
com diarria, se baseia no
simporte de Na+ e glicose
que ocorre no intestino. A
absoro do Na+ (do cloreto de
sdio) e da glicose derivada do
acar aumenta a tonicidade
do citoplasma das clulas
intestinais, fazendo com que
a gua seja absorvida por
osmose.
148 CEDERJ
12 MDULO 2
AULA
forma ele mais solvel no sangue que o CO2 e trocado por Cl pelo
antitransportador aninico presente na membrana das hemcias,
chamado de banda 3. Assim, uma quantidade muito maior de CO2
pode ser transportada livre no sangue (na forma de bicarbonato) e no
apenas no interior das hemcias (Figura 12.10).
CEDERJ 149
RESUMO
A bicamada lipdica das membranas celulares altamente impermevel
maioria das molculas hidrossolveis e a todos os ons. A transferncia de
nutrientes, metablitos e ons atravs da membrana plasmtica e membranas
intracelulares feita atravs de protenas transportadoras.
As membranas celulares contm vrias protenas transportadoras, cada uma das
quais responsvel pela transferncia de um soluto especfico atravs da membrana.
Existem duas classes de protenas transportadoras: carreadoras e canais.
O gradiente eletroqumico representa a fora direcional de um on resultante
de seu gradiente de concentrao e do campo eltrico.
No transporte passivo, um soluto no carregado move-se a favor do gradiente
de concentrao, do lado em que est mais concentrado para o lado em que
est menos concentrado, enquanto um soluto carregado move-se a favor de seu
gradiente eletroqumico.
No transporte ativo, um soluto no carregado move-se contra o gradiente de
concentrao; um soluto carregado move-se contra o gradiente eletroqumico;
esse processo requer energia.
As protenas carreadoras ligam-se a solutos especficos (ons inorgnicos,
pequenas molculas orgnicas ou ambos), fazendo com que atravessem a
membrana atravs de mudanas em sua conformao que expem o stio de
ligao do soluto a um lado da membrana e a seguir ao outro.
As protenas carreadoras podem agir como bombas para transportar o soluto
ladeira acima, contra o gradiente eletroqumico, utilizando energia derivada
da hidrlise de ATP, pelo fluxo de ons como Na+ e H+, ou pela luz.
A bomba de Na+/K+ da membrana de clulas animais uma ATPase que
transporta ativamente Na+ para fora da clula e K+ para dentro, mantendo
um gradiente de Na+ atravs da membrana que utilizado para promover o
transporte de outras molculas e para transmitir sinais eltricos.
150 CEDERJ
pode ser ativo ou passivo, o transporte atravs dos canais sempre passivo.
A maior parte das protenas do tipo canal de canais inicos seletivos que
permitem a passagem de ons inorgnicos especficos de acordo com seu tamanho
e carga. O transporte atravs desses canais pelo menos 1.000 vezes mais veloz
que o transporte atravs de qualquer carreador conhecido.
A maior parte dos canais inicos s se abre sob determinados estmulos, como
a alterao do potencial de membrana (ativados por voltagem) ou a ligao de
uma molcula especfica (ativados por ligante).
EXERCCIOS
1. Marque certo ou errado e justifique:
a) A membrana plasmtica impermevel a molculas carregadas. ( )
b) Protenas canal ligam-se aos solutos que vo transportar. ( )
c) Apenas o transporte passivo capaz de manter o equilbrio celular. ( )
d) O transporte atravs de carreadores mais rpido que atravs de canais ( )
e) Simporte e antiporte so a mesma coisa. ( )
2. Comente a frase a seguir: Podemos comparar o transporte atravs de um canal
ao de um carreador a encher uma garrafa com gros de feijo usando um funil
ou uma colher.
3. Por que alguns autores chamam o simporte de Na+ e glicose atravs da membrana
de transporte ativo secundrio se no h consumo de ATP no processo?
4. O que so aquaporinas? Qual sua importncia nos dutos coletores das clulas
renais?
5. Releia o texto. Enumere os tipos de transportadores de Na+ citados e o sentido de
sua atividade.
6. Comente a frase: Dizer que a membrana dotada de permeabilidade seletiva
dizer que atravs dela s passam as molculas de que a clula necessita.
CEDERJ 151
12 MDULO 2
AULA
As protenas do tipo canal formam poros aquosos atravs da bicamada lipdica, por
Gabarito
Biologia Celular I
Mdulo 1 - Aula 1
1.
ocular
objetiva
aumento final
5x
40x
200X
10x
20x
200X
20x
10x
200X
10x
100x
1000X
2. As clulas recebem este nome porque o que Hooke descreveu foram as paredes
celulares remanescentes onde antes haviam estado clulas que morreram, deixando
lacunas semelhantes s celas dos monges.
3. Comparao do microscpio de Hooke (Figura 1.1) com o modelo atual (Figura 1.4),
identificando as partes anlogas.
ocular
macromtrico
micromtrico
revlver
objetivas
amostra
platina
condensadora
fonte de luz
5 m = 5.000.nm
0,5 mm= 500 m
100m = 100.000 nm
1.000m= 1 mm
60 nm= 0,06 m
11. Uma clula foi fotografada com 2.000x de aumento no microscpio ptico.
Uma estrutura que tenha na realidade 2 m aparecer na foto com 4.000 m =
4 mm = 0,4 cm.
12.
CEDERJ 155
Mdulo 1 - Aula 2
1. a menor distncia em que dois pontos podem ser definidos como distintos.
2. 104 x 102 x 109 m= 104+2-9m= 10-3 m = 1 mm
10.000 = 104
Resposta: 1 milmetro
3- 30 m = 30 x 10 4 cm
9/30 x 10 4= 3 x 103= 3.000
Resposta: 3000 vezes. Obs.: em geral esse o aumento inicial para observao
ao microscpio de transmisso. Uma vez localizada a rea de interesse usamos
aumentos bem maiores.
4.
Microscpio ptico
Microscpio eletrnico
Poder de resoluo
2 m
2 nm
Lentes
De vidro
Eletromagnticas
Emisso do filamento
Luz visvel
156 CEDERJ
Mdulo 1 - Aula 3
1.
Fixao: manter a estrutura geral da clula
Infiltrao com glicerol: o glicerol impede a formao de cristais de gelo durante
o congelamento. Os cristais perfurariam e destruiriam a clula
Fratura: feita a baixa temperatura e sob vcuo, expe as superfcie das membranas
plasmtica e das organelas intracelulares.
Evaporao com platina: feita em ngulo de 45o visa criar reas sombreadas
segundo o relevo das protenas de membrana e estruturas celulares.
Evaporao com carbono: feita homogeneamente por toda a rplica, cria uma
base, sendo o carbono transparente ao feixe de eltrons.
Limpeza da rplica: feita com cidos ou bases fortes. Remove restos celulares
que estejam grudados na rplica.
Lavagem: feita com gua. Depois dela a rplica recolhida sobre uma grade e
levada ao microscpio eletrnico de transmisso.
CEDERJ 157
Mdulo 1 - Aula 4
1. As clulas, para serem mantidas em cultura, devem estar em ambiente estril, a
temperatura, presso e pH dentro de uma faixa que permita sua sobrevivncia e
multiplicao. O meio de cultura deve conter ainda todos os nutrientes necessrios
(protenas, acares, lipdeos, sais minerais) e fatores de crescimento, como
vitaminas e hormnios.
2. Cultivar in vitro consiste em retirar clulas de um organismo e faz-las sobreviver
em um recipiente como uma placa de Petri, tubo de ensaio ou outros. Algumas
clulas se multiplicam in vitro, outras apenas sobrevivem e se diferenciam,
geralmente aderindo s paredes do vidro ou plstico do recipiente. In vivo
consiste em manter clulas dentro de um organismo, que ser seu hospedeiro.
Alguns protozorios parasitas, como o Toxoplasma gondii, so normalmente
mantidos em camundongos, j que morrem rapidamente se no penetrarem em
outras clulas. Alguns heterocrions formam tumores que secretam anticorpos
de interesse para os pesquisadores. Esses tumores tambm so mantidos por
passagem entre animais.
3. uma cultura inicial, obtida a partir de clulas extradas de um animal.
4. Tanto a clula tumoral quanto a transformada podem se multiplicar indefinidamente;
entretanto, a clula transformada guarda as caractersticas do tipo celular que lhe deu
origem (e.g., a cultura de clulas epiteliais transformadas forma uma camada com as
clulas unindo-se entre si, como num epitlio normal), enquanto a clula cancerosa
cresce desorganizadamente, formando grumos ou massas.
5. uma clula formada pela fuso de dois tipos celulares diferentes. Seu
ncleo rene o DNA das duas clulas originais e ela se comporta combinando
caractersticas das duas clulas originais.
158 CEDERJ
6. C, pois com a alta taxa de multiplicao ser mais rpida a obteno de grandes
quantidades da protena secretada.
7. So clulas pluripotentes, que ao se multiplicar podem dar origem a todos os
tipos celulares que constituem um organismo.
Mdulo 1 - Aula 5
1. Porque depois de rompidas as clulas impossvel saber de que tipo celular
vieram as organelas.
2. Choque osmtico, choque trmico, macerao, sonicao e tratamento com
detergente no inico.
3. Por centrifugao diferencial, que consiste em centrifugar o homogeneizado
usando velocidades e tempos de centrifugao progressivamente maiores para
colocar no pellet organelas cada vez menos densas.
4. a centrifugao de uma amostra sobre vrias camadas de solues de uma
substncia inerte (geralmente sacarose) que tenham concentraes e, portanto,
densidades cada vez maiores. Assim a amostra que est sendo centrifugada vai
encontrar cada vez mais resistncia at que a soluo numa certa regio do tubo
tem densidade igual da amostra, que pra de migrar para o fundo, formando
uma banda que pode ser recolhida.
5. Na cromatografia de partio pequenas molculas como fosfolipdeos, lipdeos
neutros ou aminocidos livres so separados conforme seu grau de polaridade
ou apolaridade.
6. Na cromatografia de filtrao em gel ou peneira molecular, protenas e
glicoprotenas podem separadas conforme sua massa molecular.
7. Na cromatografia de troca inica as molculas so separadas conforme sua carga.
8. Na cromatografia de afinidade uma molcula pode ser separada de uma mistura
por sua ligao especfica com outra molcula, geralmente um anticorpo, que foi
acoplado resina.
CEDERJ 159
Mdulo 1 - Aula 6
1. So protenas sintetizadas pelos linfcitos B que se ligam a molculas ou
organismos estranhos a um dado indivduo.
2. Como cada molcula de anticorpo possui dois stios de ligao para cada
antgeno, possvel a formao de ligaes cruzadas, ou seja, um dos braos da
molcula de anticorpo se liga a um antgeno e o outro a outro antgeno (veja
esquema).
3. Defina:
Anticorpos policlonais Reconhecem vrias pores diferentes de um antgeno e
resultam da produo de vrias linhagens de linfcitos B. Pode-se dizer que so
uma mistura de anticorpos diferentes que reconhecem molculas de um mesmo
organismo. (veja Figura 6.4).
Anticorpo monoclonal- Reconhece uma determinada seqncia antignica e deriva
de uma nica linhagem clonal de um linfcito B.
Soro imune o soro extrado um animal previamente inoculado com determinados
antgenos, por exemplo, o soro antiofdico e o soro anti-rbico.
Hibridoma o resultado da fuso de uma clula tumoral (da o sufixo oma) com
um linfcito B. O resultado uma clula que se multiplica indefinidamente, como
a clula tumoral, e que secreta continuamente anticorpos, como o linfcito B.
160 CEDERJ
Mdulo 2 - Aula 7
Exerccio inicial
1. [as estruturas intracelulares como ncleo, mitocndrias, retculo endoplasmtico,
complexo de Golgi e vacolos].
2. [protenas] [lipdeos] e [carboidratos ou glicdeos].
3. [fosfolipdeo] [bicamada].
4. [hidroflica] [hidrofbica] [anfipticas].
5. [fora] [dentro]. [entre as molculas de lipdeos] [se ligam a protenas ou lipdeos
da membrana apenas no lado extracelular dela]
Exerccio final
1. A membrana formada por uma bicamada lipdica onde se inserem mais ou
menos profundamente as protenas. Os lipdeos da bicamada so anfipticos e
as cabeas polares ficam voltadas para o exterior, enquanto as caudas apolares
ficam voltadas para o interior da bicamada.
2. Meio intracelular tudo que fica da membrana plasmtica para dentro da
clula. Meio extracelular o que fica da membrana plasmtica para fora. Os
compartimentos delimitados por retculo endoplasmtico, complexo de Golgi e
o interior de organelas e
vacolos tambm so considerados como meio extracelular, j que tambm ficam
separados do citoplasma por uma membrana.
CEDERJ 161
162 CEDERJ
Mdulo 2 - Aula 8
1. Porque a tcnica separa os dois folhetos da bicamada lipdica, expondo
protuberncias que correspondem s protenas transmembrana.
2.
protena transmembrana: aquela que atravessa a bicamada lipdica.
protena perifrica: aquela que se liga de modo no covalente a lipdeos ou
a protenas transmembrana.
protena ancorada: um tipo de protena integral que se insere na bicamada
por uma poro lipdica qual se liga por uma seqncia de acares.
alfa-hlice protica e fita beta-pregueada. Os aminocidos da cadeia polipeptdica
podem atravessar a bicamada lipdica (hidrofbica), enrolando-se numa hlice
onde os aminocidos hidroflicos fiquem voltados para o interior da hlice e os
hidrofbicos para o exterior. Esse o caso da alfa-hlice. Na fita beta-pregueada, os
aminocidos formam arranjos mais lineares e rgidos, que atravessam a bicamada
lipdica, formando um barril.
protena unipasso: so aquelas cuja cadeia polipeptdica atravessa a bicamada
apenas uma vez.
protena multipasso: so aquelas cuja cadeia polipeptdica vai e vem atravs da
membrana vrias vezes.
Porinas - so protenas do tipo barril, que formam poros aquosos em algumas
membranas, como a membrana externa das mitocndrias.
complexo protico: quando dois ou mais polipeptdeos de membrana, iguais
ou diferentes, se associam para constituir um complexo funcional.
3. Podem se deslocar lateralmente na bicamada lipdica e rodar em torno de seu eixo.
4. uma clula formada pela fuso do citoplasma e dos ncleos de duas outras,
diferentes entre si.
5. So reas da membrana onde se concentram protenas e, conseqentemente,
funes especficas.
CEDERJ 163
Mdulo 2 - Aula 12
1.
a) Correto, molculas com carga (ons) formam em volta de si uma camada de
solvatao de molculas de gua incompatvel com o carter hidrofbico da
bicamada lipdica da membrana.
b) Errado, apenas carreadores ligam-se temporariamente aos solutos que
transportam. Por isso mesmo, poucas molculas so transportadas por vez.
c) Errado, a clula depende de uma instabilidade dinmica que sinalize estados
de atividade e repouso.
d) Errado, os solutos passam em grande quantidade e velocidade atravs dos canais
numa velocidade 1.000 vezes superior ao transporte atravs de carreadores.
e) Errado, alm de o antiporte ser uma troca de molculas entre dois compartimentos,
o simporte o transporte necessariamente conjunto de um on e uma segunda
espcie molecular, por exemplo a glicose, sempre no mesmo sentido.
164 CEDERJ
CEDERJ 165
Servio grfico realizado em parceria com a Fundao Santa Cabrini por intermdio do gerenciamento
laborativo e educacional da mo-de-obra de apenados do sistema prisional do Estado do Rio de Janeiro.
9 788576 481485