Anlisis

La fotosntesis es la conversin de materia inorgnica en materia orgnica gracias a la energa que

aporta la luz. En este proceso la energa lumnica se transforma en energa qumica estable, siendo
el adenosn trifosfato (ATP) la primera molcula en la que queda almacenada esta energa qumica.
Los orgnulos citoplasmticos encargados de la realizacin de la fotosntesis son los cloroplastos,
unas estructuras polimorfas y de color verde (esta coloracin es debida a la presencia del
pigmento clorofila) propias de las clulas vegetales.
para la practica 8 cloroplastos vimos la capacidad reductora de los cloroplastos de espinacas
sometidos a distintos tipos de sistemas para ver sus distintos efectos, para empezar realizamos un
homogenizado con las hojas de espinaca en un mortero agregando buffer de fosfatos 0.02 M PH 8
con NaCl 0.35 M en un mezcla (2:1) estos reactivos se utilizaron para en el caso del buffer de
fosfatos, amortiguar los cambios bruscos que ocurren en el medio extra e intra celular esto lo hace
cediendo o recibiendo electrones rpidamente lo cual ayuda a evitar cambios bruscos de pH, y en
el caso de la solucin salina su funcin fue la de estabilizador, despus del homogenizado
pasamos a un fraccionamiento celular para aislar los cloroplastos en dos centrifugaciones la
primera centrifugacin fue a 1500 rpm por 2 minutos esta primera centrifugacin es para romper la
clula, la fuerza de centrifugacin relativa fue de 402.48 g para segunda centrifugacin fue a 4000
rpm por unos 10 minutos esta centrifugacin es para reunir cloroplastos para el experimento ya que
estos estn suspendidos en la pastilla en el fondo del tubo la fuerza de centrifugacin relativa fue
de 2862.08g despus a la pastilla que se obtuvo se le agrego 7 ml de solucin NaCl 0.35 M y como
lo indicamos al principio esto funciona para la estabilizar. Ahora para ver la capacidad reductora de
los cloroplastos se utilizaron 6 tubos contenidos en ellos 5 ml de 2,6-diclorofenolindolfenol y se
rotularon como A1, A2, B1, B2, C1, Y C3 y solo a tres de ellos se les agrego agua destilada estos
son A1,B1 Y C1 estos tubos sern los blancos tubos sin muestra alguna, para los tubos que
quedan son A2, B2 Y C2 estas muestras se les agregara 1 ml de la suspensin de cloroplastos
para la experimentacin son los tubos problemas despus a cada tubo se le agrego 0.5 ml de
aceite, Las capas de aceite fueron usadas para aislar los cloroplastos del O2 presente en la
atmosfera. Despus de agregar a los tubos sus respectivos soluciones se les someti a una
condicin para ser observados despus de un lapso de 20 minutos a los tubos A1 y A2 se
sometieron a una condicin de oscuridad, a los tubos B1 y B2 se sometieron a luz artificial y por
ultimo a los tubos C1 y C2 se sometieron a luz solar.
para entender los resultados que nos dio tenemos que entender para qu sirve el colorante 2,6Diclorofenolindolfenol este tipo de colorante es fotosensible y sirve para sustituir los principales
aceptores naturales de electrones estos son la ferredoxina ( estas son unas protenas hierro-

azufre que intervienen en el transporte de electrones en algunas reacciones del metabolismo.

Interviene en la fotofosforilacin cclica y acclica durante la fotosntesis) y el otro es el NADP
(La nicotinamida adenina dinucletido fosfato abreviada NADP+ es una coenzima que
interviene en numerosas vas anablicas.) y estos principales aceptores naturales se
pierden durante el proceso de aislamiento de los cloroplastos, el 2,6-Diclorofenolindolfenol
(DCPIP) es un compuesto de color azul en forma oxidada y este se decolora lentamente
cuando se reduce.
bien para los tubos sometidos en condiciones en oscuridad , el tubo A1 este tena el colorante
DCPIP y agua destila antes de someterlo tena una tonalidad azul fuerte y despus de salir de las
condiciones el tubo no sufrio cambio ya que es un tubo blanco y los blancos son tubos testigos
para el tubo problema que fue A 2 al antes de someterlo a las condiciones oscuras este tiene una
tonalidad entre azul (del DCPIP) y verde ( de la clorofila de la espinaca) al salir del sistema oscuro
no tubo ningn cambio segua con la misma tonalidad.

para el segundo sistema este fue a luz artificial estos tubos fueron B1 y B2 el tubo B1 antes de
meterlo al sistema fue de color azul y despus del sistema este quedo igual sin ningn cambio en
tonalidad en el tubo B2 antes del sistema este tena una coloracin entre azul y verde pero al final
del sistema de luz artificial su tonalidad ya era un poco verde en la parte inferior del tubo y azul en
la parte superior del tubo.
y para el ultimo sistema al que fueron sometidos los tubos C1 y C2 fue la luz solar para este
sistema el tubo C1 antes de la luz solar era de color azul y al final del sistema tomo un azul claro
para el tubo C2 este tubo al principio de sistema fue de color entre azul y verde pero despus de
ser sometido a la luz solar este tubo cambio totalmente, tomando una tonalidad casi en su totalidad
verde y en la parte superior con una minora de color azul de DCPIP esto se debe a la funcin que
tiene los cloroplastos en la fase luminosa, ya que esta funcin Se realiza en la membrana de

los tilacoides, donde se halla la cadena de transporte de electrones y la ATP sintetasa

responsables de la conversin de la energa lumnica en energa qumica (ATP) y de la
generacin poder reductor (NADPH+). Y al no tener NADP para reducirlo en NADPH ya que estos
se perdieron en el proceso de aislamiento de los cloroplastos se sustituye por el 2,6Diclorofenolindolfenol para hacer esa reduccin haciendo que el color que produce DCPIP
disminuya en el tubo y haciendo que se pueda observar el color verde que produce la clorofila y
poder ver el proceso de la fase luminosa de la fotosntesis. Y este proceso es mas reproducible
con luz solar que con luz artificial, ya que con la luz solar en un tipo igual pudo reducir mejor a
DCPIP pero al estar en luz artificial lo pudo reducir en poca cantidad para mejorar este proceso
podramos poner la luz artificial ms cerca de nuestro tubo para tener el mismo resultado como se
present en la luz solar. Asi que demostramos la actividad fotosinttica de los cloroplastos

mediante la reduccin del DCPIP.

Objetivos
Determinar colorimtricamente la actividad fotosinttica de los cloroplastos en
diferentes condiciones mediante la reduccin del DCPIP.

Barcelo, CJ, Sabater GB, Nicols RG, Snchez TR (2007) Cloroplastos. En:
Barcel Coll J (Ed) Fisiologa vegetal, pp. 155-156. Pirmide. Madrid
Busogoro, JP, Etame JJ, Harelimana G, Lognay G, Messiaen J, Lepoivre P, Van
Cutsem P (2004) Experimental evidence for the action of M. fijiensis toxins on
banana photosynthetic apparatus. En: Mohan SJ y Swennen R (Ed) Banana
improvement:
cellular, molecular biology, and induced mutations, pp.161-170. Enfield.
Science Publishers