Mtodos de esterilizacin.

La esterilizacin es un proceso a travs del que se logra la destruccin total de los

microorganismos viables presentes en un determinado material, este procedimiento es de
gran utilidad en la microbiologa, ya que existen muchos procesos que requieren la
utilizacin de materiales estriles. Existen diversos mtodos de esterilizacin y la
seleccin del mtodo a aplicar en cada caso est determinada por el tipo de producto a
esterilizar.

Agentes fsicos.
El calor se puede aplicar como agente esterilizante de dos formas: el calor hmedo el
cual destruye a los microorganismos por desnaturalizacin de las protenas y el calor seco
que destruye a los microorganismos por oxidacin de sus componentes celulares. El calor
es considerado como el mtodo de esterilizacin por excelencia siempre y cuando el
material a esterilizar soporte altas temperaturas sin sufrir ningn tipo de dao. Los
principales mtodos que entran en esta clasificacin son los siguientes:
1. Vapor saturado a presin: Autoclave
Es el mtodo ms efectivo y de menor costo para esterilizar la mayora de la
indumentaria.
La autoclave tiene la ventaja de producir un elevamiento de la temperatura en forma
rpida, con cortos tiempos de esterilizacin y no dejar residuos txicos en el material.
La presencia de materia orgnica o suciedad en el material interfiere con la accin del
vapor caliente por lo que, si el material est sucio, despus del proceso, no se puede
garantizar su esterilidad. Los microorganismos son eliminados por desnaturalizacin de
las protenas, proceso que es acelerado por la presencia de agua como en la mayora de
las reacciones qumicas. Se logran temperaturas de 134C.
2. Calor seco: Pupinel
Este sistema elimina microorganismos por coagulacin de las protenas de stos. Su
efectividad depende de la difusin del calor, la cantidad de calor disponible, y los niveles
de prdida de calor. La buena accin microbicida del calor seco depende de que los
elementos a esterilizar estn limpios, en presencia de materia orgnica, por ejemplo:
aceite o grasa, el microorganismo es protegido de la accin del calor.
Su uso se debe limitar a materiales no esterilizables en autoclave. Penetra lentamente en
los materiales por lo cual se requiere largos perodos de exposicin. Debido a las altas
temperaturas para destruir microorganismos, es inapropiado para algunos materiales
como lquidos, gomas y gneros. Por otra parte daa el material porque reduce el temple
de acero. Se utiliza para aceites, vaselina, petrleos y polvos.

Agentes qumicos.
Algunas sustancias qumicas pueden ser usadas como agentes esterilizantes porque
tienen la capacidad de promover una o ms reacciones qumicas capaces de daar los
componentes celulares de los microorganismos (protenas, membranas, etc.). Los
principales esterilizadores qumicos son los que a continuacin se nombran.
1. xido de etileno (ETO)
Este es un producto qumico con alto poder desinfectante, su presencia es en forma
lquida y se volatiliza formando un compuesto gaseoso que elimina microorganismos por
alquilacin de la pared celular del microorganismo. El ETO puro es inflamable y explosivo.
Al usarlo de esta forma debe mezclarse con un gas inerte como fren.
La ventaja del ETO es su capacidad de esterilizar a baja temperatura y no daar los
artculos termolbiles, es necesario conocer la compatibilidad del material ya que con el
ETO existen materiales como los acrlicos, algunos lentes, artculos elctricos y otros que
son afectados por el gas produciendo alteraciones o inactivacin.
El ETO puede absorberse por materiales porosos, por lo que requiere de aireacin para
eliminar el gas residual antes de su uso clnico o de laboratorio. Este punto es muy
importante, ya que, puede producir daos a la salud. Los perodos de aireacin son
variables dependiendo del tipo de material y de los equipos.
Los artculos no se pueden ventilar a temperatura ambiente, porque se requieren largos
perodos para lograrlo, esto aumenta el xido de etileno ambiental.
El fren es un producto qumico que destruye la capa de ozono. En 1987 entre 122 pases
del mundo a travs de un programa de las Naciones Unidas se firma un tratado, donde se
comprometen a cesar la produccin de sustancias que afectan la capa de ozono. Por esto
Chile debe suspender el uso del fren al ao 2006.
El ETO representa un riesgo potencial para el personal, se le considera un producto txico
para la piel, mucosas y aparato respiratorio.
Etapas en la esterilizacin por ETO son cinco:
Acondicionamiento y humidificacin.
Ingreso del gas.
Exposicin al gas.
Evacuacin.
Aireacin.

2. Perxido de Hidrogeno
El perxido de hidrogeno es un agente qumico que se ha utilizado como
desinfectante de alto nivel y esterilizante qumico por inmersin.
Recientemente, se ha desarrollado tecnologa que utiliza este agente para
esterilizar a baja temperatura, esta tecnologa consiste en un equipo que
esteriliza por medio de plasma de perxido de hidrgeno.
3. cido Per-actico
Este cido es conocido desde hace aos como agente desinfectante de alto
nivel. Es esporicida por lo tanto esterilizante en tiempos menores al
glutaraldehido. Hay dos formas de esterilizacin por este agente: lquido y
plasma.
4. Radiaciones ionizantes
La esterilizacin se obtiene sometiendo los materiales a dosis predeterminadas
de radiaciones, puede utilizarse rayos gamma o cobalto.
Este proceso es de alta complejidad y debe realizarse bajo estrictas
condiciones de seguridad, adems requiere infraestructura especializada que
en general no se justifica ni es posible en algunas instalaciones.

Control del proceso de esterilizacin.

Todos los procesos de esterilizacin se deben controlar para poder asegurar que han sido
efectivos. Para ello se pueden utilizar indicadores fsicos, qumicos y/o biolgicos, los
cuales deben ser colocados en cada carga de esterilizacin.
Indicadores fsicos.
Entre los principales indicadores fsicos se encuentran los medidores de presin y los
termmetros los cuales permiten constatar las condiciones fsicas dentro de la cmara de
esterilizacin. Tambin existen los termgrafos los cuales, adems de registrar la
temperatura alcanzada en el proceso, permiten conocer durante cunto tiempo sta se
mantuvo.
Indicadores qumicos.
La mayora de estos indicadores son cintas adhesivas que se adhieren al material a
esterilizar. Estas cintas estn impregnadas con una sustancia qumica que cambia de
color cuando el material ha sido sometido al proceso de esterilizacin. Este tipo de cintas
no son completamente confiables debido a que muchas veces slo indican que se lleg a
la temperatura deseada, pero no indican por cuanto tiempo sta se mantuvo. Tambin
existen cintas diseadas de manera que el cambio de color es progresivo, estas cintas
son un poco ms seguras porque permiten estimar si el tiempo de esterilizacin fue el
adecuado.

Indicadores biolgicos.
Son preparaciones de una poblacin especfica de esporas de microorganismos, las
cuales son altamente resistentes a un proceso de esterilizacin en particular. Estos
indicadores se deben colocar junto con la carga de esterilizacin, en el sitio que se
considera que es ms difcil que llegue el vapor y despus del proceso, se deben incubar
durante 24 horas en condiciones adecuadas. Si despus de este periodo hay evidencia de
crecimiento microbiano (por ejemplo cambio de color del medio de cultivo), el proceso de
esterilizacin no fue satisfactorio.
Cuando se utilizan indicadores biolgicos se debe verificar:
Tipo de microorganismo
Tipo de proceso de esterilizacin
Nmero de lote Fecha de expiracin
Medio de cultivo utilizado
Condiciones de incubacin del indicador despus de aplicado el proceso de
esterilizacin
Mtodos de descontaminacin para evitar la diseminacin de esporas en el medio
ambiente
Con este tipo de indicadores se controlan la esterilizacin por vapor a presin, por calor
seco y la esterilizacin con xido de etileno.

Tipos de medio de cultivo.

Medios lquidos.
Son los que se presentan en este estado, denominndose por esta razn caldos. El
medio lquido ms utilizado es el llamado caldo nutritivo, compuesto principalmente de
extracto de carne, peptona y agua. Se utiliza fundamentalmente cuando se pretende la
obtencin de una suspensin bacteriana de una determinada concentracin.
Medios slidos.
Se preparan a partir de los medios lquidos, agregndoles un agente gelificante. Los ms
utilizados son la gelatina y el agar.
Gelatina: Es una protena animal obtenida de los huesos. Tiene el inconveniente de que
es hidrolizada por muchas bacterias, y adems su uso est muy limitado porque su punto
de fusin es bajo (lica a temperatura ambiente) razn por la que no puede utilizarse para
cultivos a 37C, que es la tempera ptima de crecimiento para muchos microorganismos.

Agar-agar: Es un polmero de azcares obtenido de algas marinas. Se trata de una

molcula insoluble enagua pero soluble en agua caliente; una solucin al 1,5% p/v forma
un gel firme entre 32 y 39C y no se funde por debajo de 85C. Funde a 90C y solidifica
una vez fundido alrededor de los 45C. Tiene el inconveniente de que introduce
compuestos orgnicos indefinidos que pueden falsear los resultados de las necesidades
nutritivas de un microorganismo. Aunque el agar es una mezcla de polisacridos, Araki, en
1937, los dividi en dos grupos:- agarosa, con poco sulfato, libre de cido pirvico, yagaropectina, con mucho sulfato y gran cantidad de cenizas. La proporcin de agarosa a
agaropectina en el agar vara segn el alga de origen. El agar puede utilizarse para
diferentes fines, aunque los ms importantes son: agar comercial para la industria
alimenticia, agar bacteriolgico, agares purificados y agarosa, utilizada para electroforesis
en gel. Aproximadamente la mitad de todo el agar que se produce, se utiliza en trabajo
microbiolgico, por lo que es importante la ausencia de metales txicos.
3) Medios semislidos: Se preparan a partir de los medios lquidos, agregando a stos un
agente solidificante en una proporcin menor que para preparar medios slidos. Uno de
sus usos es la investigacin de la movilidad de las bacterias

Referencias.
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_M
%C3%A9todos_de_esterilizaci%C3%B3n.pdf
http://escuela.med.puc.cl/paginas/publicaciones/patolquir/patolquir_004.html
http://perso.wanadoo.es/sergioram1/medios_de_cultivo.htm