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Princpios bsicos
Cromatografia
Princpios bsicos
Sumrio
CAPTULO 1 - Princpios bsicos de cromatografia
Ldia Manfrin Dias
CAPTULO 2 - Cromatografia planar
Ldia Manfrin Dias
CAPTULO 3 - Cromatografia em papel
Ldia Manfrin Dias
CAPTULO 4 - Cromatografia em camada delgada
Ldia Manfrin Dias
CAPTULO 5 - Cromatografia em coluna
Ldia Manfrin Dias
CAPTULO 6 - Cromatografia lquida em coluna aberta
Thales Augusto Garcia Pelizaro
CAPTULO 7 - Cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE)
Thales Augusto Garcia Pelizaro
CAPTULO 8 - Cromatografia gasosa
Thales Augusto Garcia Pelizaro
CAPTULO 9 - Cromatografia em fluido supercrtico (CFSC)
Thales Augusto Garcia Pelizaro
CAPTULO 10 - Algumas aplicaes da cromatografia
Thales Augusto Garcia Pelizaro
Introduo
1.2.
Classificao
Tcnica
Fase mvel
Cromatogrfica
Planar
Em coluna
Em coluna
Em coluna
Fase
estacionria
Tipo de cromatografia
Lquido
Lquido
Cromatografia em papel
(CP)
Lquido
Slido
Cromatografia em camada
delgada (CCD)
Lquido
Fase ligada
Cromatografia em camada
delgada (CDD)
Gs
Lquido
Cromatografia gasosa
lquida (CGL)
Gs
Slido
Cromatografia gasosa
slida (CGS)
Gs
Fase ligada
Cromatografia gasosa de
fase ligada (CGFL)
Fluido
supercrtico
Slido
Cromatografia supercrtica
slida (CSS)
Fluido
supercrtico
Fase ligada
Cromatografia supercrtica
de fase ligada (CSFL)
Lquido
Lquido
Cromatografia lquida
lquida (CLL)
Slido
Cromatografia lquida
slida (CLS)
Cromatografia de
excluso (CE)
Fase ligada
Cromatografia lquida de
fase ligada (CLFL)
Cromatografia de troca
inica (CTI)
Cromatografia de
bioafinidade (CB)
Lquido
Lquido
cE
cM
( )
1.1
1.2
( )
v=
1.3
L
tM
( )
1.4
( )
1.7
( )
Rf =
2.1
Introduo
Aplicao da amostra
3.5.
Tipos de desenvolvimentos
3.6.
Introduo
de hidrognio e dipolo-dipolo.
4.2.
Fase mvel
1,2 dicloetano
0,44
Nitrometano
0,64
2-nitropropano
0,53
Acetonitrila
0,65
Trietilamina
0,54
Piridina
0,71
Acetona
0,56
2-metoxietanol
0,74
1,4-dioxano
0,56
Dimetilsulfxido
0,75
Tetrahidrofurano
0,57
2-propanol
0,82
Acetato de metila
0,60
Etanol
0,88
1-pentanol
0,61
Metanol
0,95
Anilina
0,62
1,2 etanodiol
1,1
Fase mvel
4.3.
Aplicao da amostra
Tipos de desenvolvimentos
Referncias
GIBBONS, S. An Introduction to Planar Chromatography. In:
SARKER, S. D.; LATIF, Z; GREY, A. I. (ed). Methods in
Biotechnology, Vol. 20, Natural Products Isolation. 2 ed. New
Jersey: Humana Press Inc, 2006.
NETO, F. R. A.; NUNES, D. S. S. Cromatografia Princpios
bsicos e tcnicas afins. 1 ed. Rio de Janeiro: Intercincia, 2003.
SRIVASTAVA, MM. (ed.). High-Performance Thin-Layer
Chromatography (HPTLC). 1 ed. New York: Springer, 2011.
STRIEGEL, M. F.; HILL, J. Thin-Layer Chromatography for
Binding Media Analysis. 1 ed. Los Angeles: The Getty Conservation
Institute, 1996.
WALL, P. E. Thin-layer Chromatography - A Modern Practical
Approach. 1 ed. Cambridge: The Royal Society of Chemistry, 2005.
( )
( )
5.1
L
N
5.2
Introduo
Figura 6.1 - Pela maior polaridade e geometria mais prxima do stio ativo
(azul claro) presente na fase estacionria (amarelo) o soluto presente na
fase mvel (verde) desloca a molcula ligada anteriormente (azul escuro) e
permanece por mais tempo.
6.2.3. Partio
Em cromatografia por partio, o processo decorrente de um
arranjo dos solutos pela fase mvel e fase estacionria. Algo diferente
do que acontece na adsoro em que necessria uma interao entre
a parte do adsorvente, composto analisado e o solvente.
A solubilidade do composto de interesse nas duas fases influncia o
funcionamento do processo de partio. Um processo muito sensvel
as diferentes quantidades de massa molecular dos solutos. Com isso,
componentes homlogos so separados com maior eficincia
utilizando-se o mecanismo de partio.
Dentre as dificuldades do processo, se destaca a fixao da fase
estacionria ao suporte slido. Ao longo da operao de separao
ocorre uma solubilizao do filme pela fase mvel, sendo removido da
coluna. Uma alternativa vivel para isso fazer uma dissoluo da
amostra num solvente saturado, ou seja, realizar uma pr-saturao da
fase mvel com a estacionria.
Figura 6.3 - A barra azul o suporte com a fase estacionria (verde) que
ir interagir com uma frao da molcula (preto) e uma outra parte da
molcula est em contato com a fase lquida.
Figura 6.4 - Amostra presente na fase lquida com carga negativa desloca o
contra-on de carga negativa que inicialmente estava ligado a carga fixa
presente na fase estacionria.
Referncias
COLLINS, C. H. e BRAGA, G. L. Introduo a mtodos
cromatogrficos. 2 ed. Campinas: Editora da Unicamp, 1987.
LANAS, F. M. Cromatografia lquida moderna: HPLC/CLAE.
Campinas, SP: Editora tomos, 2009.
NETO, F. R. A.; NUNES, D. S. S. Cromatografia Princpios
bsicos e tcnicas afins. 1 ed. Rio de Janeiro: Intercincia, 2003.
Introduo
destilao.
comprimento da coluna.
Porm, a teoria dos pratos no ideal para aplicar-se a
cromatografia, justamente por no ter de fato pratos na coluna.
Entretanto, foi um passo importante criar-se a teoria de cromatografia
em meados de 1940, e persiste ainda hoje.
7.2.2. Definindo a velocidade em cromatografia lquida
O pesquisador van Deemter em associao com outros
pesquisadores, desenvolveram um trabalho e definiram uma equao
de velocidade para a cromatografia gasosa (GC) mais simples, que
assim descrita:
H=
A+B
+C 7.1
Nos quais:
= velocidade linear mdia da fase mvel;
A = termo para difuso turbulenta;
B = termo para difuso molecular;
C = termo de transferncia de massa.
Entretanto, para a cromatografia lquida no se aplicaria a equao
7.1 com apenas 3 termos. Devido as diferenas entre a LC e a GC,
destacando o fato de que os termos relacionados a difuso em fase
mvel e transferncia de massa influenciarem mais em cromatografia
lquida do que em cromatografia gasosa. Assim, Knox e demais
pesquisadores desenvolveram uma ampliao da equao de Deemter
et. al, ampliando para 4 termos ao fracionar o valor de C para dois:
H=
A+B
=(C fe + Cfm ) 7.2
Sendo:
= velocidade linear mdia da fase mvel;
A = termo para difuso turbulenta;
B = termo para difuso molecular;
Cfe = termo de transferncia de massa na fase estacionria;
Cfm = termo de transferncia de massa na fase mvel.
Referncias
HORNE, D. S.; KNOX, J. H.; MCLAREN, L. In: KELLER, R. A.
(Ed). Separation Techniques in Chemistry and Biochemistry. New
York: Dekker, 1967.
LANAS, F. M. Cromatografia lquida moderna: HPLC/CLAE.
Campinas, SP: Editora tomos, 2009.
Introduo
8.4.
Os registradores
Referncias
CECCHI. H. M. Fundamentos tericos e prticos em anlise de
alimentos. 2 ed. rev. Campinas: Editora da Unicamp, 2003.
CIOLA, R. Fundamentos da cromatografia a gs. 2 ed. So Paulo:
Editora Edgard Blcher LTDA, 1985.
COLLINS, C. H. e BRAGA, G. L. Introduo a mtodos
cromatogrficos. 2 ed. Campinas: Editora da Unicamp, 1987.
NETO, F. R. A.; NUNES, D. S. S. Cromatografia Princpios
bsicos e tcnicas afins. 1 ed. Rio de Janeiro: Intercincia, 2003.
Introduo
9.2.
9.3.
[( ) (
)]
9 RT c 16 T C
P 9.4
128 Pc
T
9.4.1. Seletividade
Este o parmetro com maior maleabilidade no quesito de
alteraes com o objetivo de separao dos compostos em anlises. As
mudanas de seletividade podem ser realizadas alterando-se a fase
mvel, fase estacionria, temperatura, adicionando modificadores e
outras opes.
9.4.2. Temperatura
A influncia da temperatura pode ser visualizada em duas ticas
diferentes, considerando uma presso constante ou densidade
constante. Se for utilizada a densidade constante, a equao de Van't
Hoff deve ser utilizada:
H T
d ln k
=
9.5
1
R
d
T p
( )
Onde,
Ht0 = entalpia necessria para transio do soluto entre as duas
fases
R = uma constante dos gases
k = o fator de reteno
Em caso de presso constante, um pouco mais complexo sobre a
variao de temperatura. Depende muito das condies. Grande parte
dos solventes quando sujeitos ao aumento de temperatura, tendo a
Referncias
CARRILHO, Emanuel; TAVARES, Maria Ceclia H.; LANCAS,
Fernando M. Fluidos supercrticos em qumica analtica. III.:
aplicaes. Qumica Nova, v. 29 (4), 2006.
CECCHI. H. M. Fundamentos tericos e prticos em anlise de
alimentos. 2 ed. rev. Campinas: Editora da Unicamp, 2003.
COLLINS, C. H. e BRAGA, G. L. Introduo a mtodos
cromatogrficos. 2 ed. Campinas: Editora da Unicamp, 1987.