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COLORACIN DE GRAM

COLORACIONES DIFERENCIALES
Los procedimientos de coloracin que ponen de manifiesto diferencias entre las clulas o
sus componentes se conocen con tcnicas de coloracin diferencial. En estas se utilizan
siempre dos colorantes: uno conocido como primario y otro conocido como secundario o
contracolorante. La coloracin de Gram es uno de estos mtodos.

COLORACION DE GRAM:
En 1884, el bacterilogo dans Christian Gram desarroll una tcnica de coloracin, con
la cual pudo separar las bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram negativas. El
procedimiento se basa en la habilidad de los microorganismos de retener el colorante
cristal violeta durante su decoloracin con alcohol. Las bacterias Gram negativas se
decoloran con alcohol, las bacterias Gram positiva no se decoloran, despus de la
decoloracin con alcohol se una Safranina. Un contracolorante o (colorante de contraste)
de color rojo, el cual imparte color rosado a los organismos Gram negativos.
En este proceso se aplica un mordiente (la solucin de lugol o yodo) durante un minuto,
antes de decolorar con alcohol. El yodo se combina con el cristal violeta formando el
complejo yodo-cristal violeta, fcilmente removible con etanol, de las bacterias Gram
negativas pero no de las Gram positivas.
De todas las tcnicas, la de mayor uso en el diagnstico bacteriolgico es la coloracin
de Gram. la identificacin de una bacteria desconocida se inicia con la tincin de un
montaje mediante este procedimiento.
Prepare extendidos o frotis con cada una de las bacterias que desea examinar, en placas
portaobjetos, fje los frotis pasando la placa por la llama del mechero, cuidando de no
quemarse.
Realice la coloracin de Gram en cada uno de los extendidos de la siguiente manera:

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COLORACIN DE GRAM

1. Cubra el frotis con gotas de CRISTAL VIOLETA durante 20 segundos

2.

Lave brevemente (2 seg) con Agua. Escurra el exceso

3. Agregue gotas de SOLUCION DE YODO y deje actuar por 60 seg.

4. Escurra la solucin de yodo y lave con ETANOL de 95%, durante 10-20 seg.
Este paso es crtico. Los extendidos gruesos requieren ms tiempo que los delgados.
Considere terminada la decoloracin cuando el solvente fluya incoloro del
portaobjetos
5. Lave con agua (2 seg) y escurra
6. Agregue gotas de SAFRANINA durante 20 seg.
7. Lave suavemente con agua durante 2 seg. escurra y deje secar a temperatura
ambiente.
Deje secar las placas al aire y luego con la ayuda si es necesario de aceite de inmersin
observe en el microscopio.
Resumen de operacin:
REACTIVO
Colorante primario
Mordiente
Agente decolorante
Contracolorante

Cristal violeta
Solucin de yodo
Etanol 95%
Safranina

T, seg.
20
60
10 - 20
20

RESULTADOS
GRAM + GRAM Prpura
Prpura
Prpura
Prpura

Prpura
Prpura
Incolora
Rosado

Organismos Gram +: B. subtilis, S. aureus, Levadura (S. cervisae)

Organismos Gram -: E. coli,, Pseudomonas Sp. Salmonella spp.

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COLORACIN DE GRAM

Elaborada por:

Luddy Esperanza Torres

Fecha

07

07

2009

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