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CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QUIMICO
MICROBIOLOGIA GENERAL
FARMACEUTIC 2009-2009
TITULAR :Q.B. EDILBERTA GARCIA SANTOS
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
ESTERILIZACION DE MATERIAL Y
1 PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
2 OBJETIVOS
3 FUNDAMENTO
Por su pequeño tamaño los Microorganismo no pueden estudiarse como individuos sino, que es
necesario manejarlos como poblaciones. Para ello es necesario cultivarlos e decir, favorecer su
multiplicación in Vitro.
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
1. Lavar toda la cristalería con jabón (de preferencia usar Dextran) para eliminar materia
orgánica. Y Secarlo a temperatura amiente o en una estufa.
2. Envolver con papel las cajas de petri como indique el profesor, anotar en el papel el numero
de caja , la fecha de preparación y el nombre de operario
3. Poner en la boquilla de las pipetas un filtro de algodón, de tal manera que el aire pase
libremente a través de cada pipeta.
4. Envolver con papel cada pipeta y marcar en la envoltura el volumen de cada una de ellas.
5. Cada equipo preparara el volumen del medio de cultivo indicado (caldo nutritivo, agar
nutritivo, gelatina nutritiva, agar EMB, agar sal y manito, agar Mac Conkey).
6. Colocar la mitad del volumen total de agua destilada en el recipiente en donde se va a
preparar el medio de cultivo
7. Pesar en papel cada uno de los componentes del medio.
8. Adicionar la otra mitad de agua y homogenizar el contenido.
9. Los medios líquidos no se calientan en tanto que los medios fluidos y sólidos que llevan agar,
es necesario calentarlos. tapar el recipiente con una torunda de algodón para evitar la perdida
de agua y concentrar el calor, agitar constantemente para evitar que se queme.
10. Colocar los tubos en una gradilla o en un bote y cubrirlos con papel, marcar sobre el
papel el número y el tamaño de los tubos.
11. Meter el material al autoclave dejarla calentar y esperar a que la presión suba hasta
1.1kg/cm2 o 15 lb. /in2 y una temperatura alrededor de 120 'C, mantener en estas condiciones
durante 20minutos.
12. Al termino del ciclo de esterilización, apagar el autoclave esperar a que la presión del
autoclave baje a CERO y sacar el material.
13. Los medios cuya esterilidad haya sido comprobada, podrán ser utilizados en la siguiente
práctica.
14. Los medios en que se haya registrado crecimiento microbiano (contaminados) deben ser
desechados, para ello es necesario primero esterilizarlos.
6 ANEXOS
CUESTIONARIO
1. ¿Que es un autoclave? Hacer un esquema ilustrando las partes operativas
7 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
ATLAS R. M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
EDITORIAL CECSA
INGRHAM J. L. Y G. A. INGRHAM
INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y II
EDITORIAL REVERTE S.A.
PRESCOTT- HARLEY-KLEIN
MICROBIOLOGIA
EDITORIAL Mc GRAW HIL
8 MECANISMO DE EVALUACIÓN
• Puntualidad y asistencia 20%%
• Conducta 10%
• Reportes 50%
• Aprovechamiento 20%
CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2000-2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
TECNICAS BASICAS PARAEL CULTIVO DE
2
MICROORGANISMOS 2 sesiones
SIEMBRA Y ESTUDIO DE BACTERIAS
(SIEMBRA DE PLACAS POR ESTRÍAS)
1 INTRODUCCIÓN
Para impedir la contaminación de los cultivos, es necesario que el alumno tenga plena
conciencia de la ubicuidad de los microorganismos, lo que determina que el airea todas las
superficies estén densamente pobladas por microorganismos, de este modo en la transferencia de
una muestra microbiológica a otro recipiente, se deben tener una serie que eliminen los riesgos
de contaminación. Estos incluyen la desinfección del área de trabajo, el lavado de las manos, la
esterilización de todos los utensilios y medios de cultivo a emplear y realizar la transferencia del
microorganismo en una zona estéril ,la que se obtiene trabajando cerca de la flama del mechero.
Al conjunto de procedimientos realizados para prevenir o evitar la contaminación se le llama
técnica aséptica; en el laboratorio de microbiología, la técnica aséptica, constituye la” regla de
oro" dado que el seguimiento cuidadoso y detallado de la misma evita accidentes tales como:
3 FUNDAMENTO
Para efectuar el estudio de los microorganismo se han diseñado diversasos métodos que
permiten cultivarlos bajo condiciones artificiales. Una de las técnicas mas usadas en el
laboratorio consiste n transferir una muestra microbiológica de un ambiente determinado aun
medio de cultivo lo que nos permite obtener cultivos microbianos.
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
• Asas de platino
• Agua destilada Refrigerador
• Mechero Incubadora
• Cajas de petri Esterilizador
• Medio de cultivo (agar y caldo nutritivo) Balanzas granatarias
• Cepas microbiológicas
• Matraz Erlenmeyer
• Tubos de ensaye
• Frasco de alcohol
B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
A) Siembra de placas por estrías
1. Utilizando el agar nutritivo suministrado, preparar cinco cajas de petri de acuerdo a las
instrucciones de la practica anterior
2. Dejar enfriar y solidificar.
3. Mediante el asa de inoculación, siembre cuidadosamente por estría un cultivo problema
co0nla técnica de estría abierta.
4. Siembra otra placa en estría continua cerrada.
5. Tomar la siguiente placa y sembrar cuidadosamente por estría en cuadrantes.
6. Sembrar la siguiente placa por estría cruzada tomando una pequeña muestra del cultivo
proporcionado siguiendo las indicaciones.
7. La última placa reutiliza como control.
8. Se incuba a 37 'C por 24 horas.
6 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
ATLAS R. M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
EDITORIAL CECSA
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INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y II
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MICROBIOLOGIA
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7 MECANISMO DE EVALUACIÓN
CLAVE DE LA
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FARMACEUTIC 2009-2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
2B
TECNICA DE VACIADO EN PLACA 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
Para realizar diluciones de diez en diez, se añade 1 ml de la suspensión bacteriana a 9 ml (le medio
estéril o solución salina, igualmente estéril. Se agita vigorosamente para diluir las células y el proceso se
repite cuantas veces sea necesario. A continuación, se puede proceder de dos maneras diferentes.
En el método de vertido en placa, las muestras diluidas se mezclan con agar fundido y se vierten
en placa. Algunas colonias quedarán embebidas en el agar y otras creceran en la superficie. Las
colonias superficiales se extenderán y serán más grandes
2 OBJETIVOS
3 FUNDAMENTO
En la primera parte de esta practica se realizan una serie de actividades que permitan lograr la
transferencia séptica de M.O utilizando técnicas de siembra diversas y en esta segunda parte
incluye métodos específicos que permitan realizar el cultivo.
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
.MATERIAL Y EQUIPO
Refrigerador
cantidad descripción características
Incubadora
1 mechero bunsen normal Esterilizador
5 cajas de Petri estándar Balanzas granatarias
2 asas bacteriológicas de estándar
10 platino 15 ml
1 tubos de ensaye estándar
1 medio de cultivo( agar diferentes géneros
nutritivo)
cepa bacteriológica
B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
PROCEDIMIENTO
1. fundan tres tubos de agar nutritivo (12 15 ml) y enfríelos hasta 45 'C
2. Transfiera asépticamente un asa de cultivo microbiano mixto al primer tubo de agar fundido.
Mezcle bien el inoculo.
3. Transfiera dos asas de inoculo mezclado con el agar, del primer tubo al segundo de agar
fundido y mezcle bien.
4. Transfiera tres asas del segundo al tercer tubo de agar fundido y , mezcle perfectamente,
estos pasos deben de realizarse con rapidez para evitar la solidificación del agar.
5. Vierta cada uno de los tubos de agar en una placa de petri diferente, girándola para distribuir
el agar perfectamente y déjalas solidificar.
Incube las placas a 30'C hasta el próximo periodo de laboratorio
Se examinan los tamaños relativos de las colonias en placas con muchas y en placas con pocas
colonias, estas tienden a ser muy pequeñas y a extenderse conjuntamente, de forma que el
crecimiento aparece como una mancha continua.
Las colonias bien separadas son más grandes, con forma, aspecto, color y consistencia diferente
y característica.
Obsérvese también que las colonias que por distribución al azar han crecido sobre la superficie
de la placa, se desarrolla grande y probablemente circular. en contraste, las colonias que se han
desarrollado dentro del agar son relativamente pequeños y presientan generalmente una sección
transversal lenticular, que refleja la limitación física del crecimiento en el interior del agar.
5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
6 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
ATLAS R. M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
EDITORIAL CECSA
INGRHAM J. L. Y G. A. INGRHAM
INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y II
EDITORIAL REVERTE S.A.
PRESCOTT- HARLEY-KLEIN
MICROBIOLOGIA
EDITORIAL Mc GRAW HIL
7 MECANISMO DE EVALUACIÓN
• Puntualidad y asistencia 20%%
• Conducta 10%
• Reportes 50%
• Aprovechamiento 20%
CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2009-2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
2C SIEMBRA EN MEDIO LÍQUIDO 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
2 OBJETIVOS
3 FUNDAMENTO
Un cultivo liquido puede ser transferido a través de distinto dispositivos, el inoculo se deposita
dentro del caldo o medio liquido presentado un desarrollo microbiano particular que se manifiste
en la superficie o a través de todo el liquido.
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
• Asas de platino
• Agua destilada Refrigerador
• Mechero Incubadora
• Medio de cultivo (agar y caldo nutritivo) Esterilizador
• Cepas microbiológicas Balanzas granatarias
• Matraz Erlenmeyer
• Tubos de ensaye
• Frasco de alcohol
B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
6 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
ATLAS R. M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
EDITORIAL CECSA
INGRHAM J. L. Y G. A. INGRHAM
INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y II
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MICROBIOLOGIA
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7 MECANISMO DE EVALUACIÓN
• Puntualidad y asistencia 20%%
• Conducta 10%
• Reportes 50%
• Aprovechamiento 20%
8 MEDIDAS DE SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL
1. limpiar perfectamente la superficie de su mesa con una solución de germicida, al
principio y al final de cada sesión de laboratorio
2. Lleve puesta una bata para protección de su ropa
3. Mantenga su mesa libre de todo lo que no sea esencial.
4. Evite el contacto de la boca con las manos y las operaciones como: fumar, comer, o
humedecer las etiquetas con la lengua.
5. De cuenta inmediata al instructor de cualquier accidente tales como: cortaduras,
quemaduras o derramamiento de cultivo
CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2009-2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
2D SIEMBRA POR PICADURA 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
Los medios semisólido se preparan en tubos se inoculan con aguja de siembra (asa recta) o con
pipeta pasteur En este último caso es necesario calentar e medio y cuando se encuentra en
estado liquido a una temperatura aproximada de 42ºC se agrega el inoculo se homogeniza y se
deja solidificar . A eta técnica se le conoce como puntura o picadura.
2 OBJETIVOS
3 FUNDAMENTO
Estos medio se emplean para estudiar la movilidad de los microorganismos y para favorecer la su
separación con diferentes requerimientos de oxigeno.
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
• mechero bunsen
Refrigerador
• asas bacteriológicas rectas
Incubadora
• tubos de ensaye Esterilizador
• medio de cultivo( agar nutritivo) Balanzas granatarias
• cepa bacteriológica
B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Siguiendo las instrucciones anteriores y con el asa recta, introducirla en la parte central, hasta el
fondo o apenas picando, para inocular los mismos microorganismos en 4 tubos que contengan 6
ml de galosa y 4 tubos que contengan gelatina y estén en posición vertical. el 5º tubo de los dos
medios de cultivo se emplea para control.
5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
6 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
ATLAS R. M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
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INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y II
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7 MECANISMO DE EVALUACIÓN
• Puntualidad y asistencia 20%%
• Conducta 10%
• Reportes 50%
• Aprovechamiento 20%
CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2009-2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
2E SIEMBRA EN MEDIO INCLINADO 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
o .El agar inclinado se utiliza para pruebas de mantenimiento de un cultivo por estría para
caracterización por estría recta se utiliza para pruebas bioquímicas, puede sen en pico
de flauta o mas inclinado.
o Agar vertical El agar vertical se siembra por picadura con agujas o asa de punta, se
hace de dos terceras partes del medio hasta el fondo. Se utiliza para pruebas
bioquímicas, motilidad y caracterización.
2 OBJETIVOS
Mediante esta práctica el alumno lograra.
• Compara el desarrollo microbiano de cultivos puros
• Aplicar la técnica adecuada para preparar el área de trabajo y evitar contaminaciones.
• Manipular adecuadamente los cultivos puros.
Organizar e interpretar los resultados del estudio microscópico y microscópico de bacterias
3 FUNDAMENTO
Un cultivo microbiano en agar inclinado se utiliza fundamentalmente para conservar cultivos
bacterianos puros .
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
• mechero bunsen
• asas bacteriológicas de platino Refrigerador
• tubos de ensaye Incubadora
• medio de cultivo( agar nutritivo) Esterilizador
• cepa bacteriológica Balanzas granatarias
B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
1. Esterilizar el asa a la flama
2. Con la mano izquierda tomar el tubo que contiene el cultivo por su extremo inferior
3. Introducir el asa y enfriarla apoyándola en la pared interna del tubo.
4. Tomar una asada del cultivo de Escherichia coli y sacar el asa del tubo manteniéndola
cerca de la flama.
5. Flamear el algodón, la boca del tubo y taparlo.
6. Colocar el tubo en la gradilla y tomar el tubo que va a sembrar
7. Destapar, flamear y mantener el tubo en la forma indicada.
8. Introducir el asa y depositar el inoculo dentro del medio con estría recta
9. Sacar el asa y flamearla
10. Flamear el algodón, la boca del tubo y taparlo
11. Repetir el procedimiento inoculando los otros tubos .
• filiforme,
• equinulada,
• perlada,
• risoide
• difusa
• arborescente
5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
ANEXOS
CUESTIONARIO
1. Por que no crecen las bacterias (especialmente las formas móviles) por todo el medio de agar
que contiene el 97% de agua?
2. Cuando se utilizan cultivos inclinados para estudiar las características del cultivo, es mejor
inocular con aguja que con asa?¿por que?
3. Cual es la utilidad de cada una de las técnicas utilizadas?
4. Que son las bacterias y como se encuentran distribuidas en la naturaleza?
5. Cuales son los criterios empleados para caracterizar bacterias?
6. por que es importante esterilizar el asa a la flama?
7. Por que el crecimiento de algunos microorganismos origina la formación de un velo o
película?
8. Como se les clasifica a las bacterias de acuerdo a las temperatura de desarrollo?
9. Como se clasifican a las bacterias de acuerdo a sus exigencias de Oxigeno?
6 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
ATLAS R. M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
EDITORIAL CECSA
INGRHAM J. L. Y G. A. INGRHAM
INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y II
EDITORIAL REVERTE S.A.
PRESCOTT- HARLEY-KLEIN
MICROBIOLOGIA
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7 MECANISMO DE EVALUACIÓN
• Puntualidad y asistencia 20%%
• Conducta 10%
• Reportes 50%
• Aprovechamiento 20%
CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2009-2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
3
(PRUEBAS DE PUREZA) 2 sesiones
AISLAMIENTO POR MÉTODOS FÍSICOS
1 INTRODUCCIÓN
La elección de la técnica y del medio de cultivo depende del origen de la muestra y de las
características del microorganismo que se desea aislar. Por ejemplo, para muestras con
poblaciones muestras con poblaciones muy grandes siempre se recomiendan hacer diluciones, en
tanto que para muestras en donde los microorganismos se han sometido a condiciones adversas,
como desecación, congelación o falta de nutrientes, conviene hacer un enriquecimiento antes de
aislar.
2 OBJETIVOS
3 FUNDAMENTO
Al someter una mezcla de M.O. a un método de aislamiento no garantiza que este se logre . es
necesario verificar cuidadosamente si se ha obtenido un cultivo puro antes de conservarlo como
tal, para ello es necesario realizar pruebas de pureza después del aislamiento
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
• baño a temperatura 45 º C
B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
Por agotamiento
1- Con el lápiz graso, marcar cuadrantes en la base de las dos cajas que contienen agar nutritivo
2.-Tomar una asada de la muestra y sembrar, en el primer cuadrante de la caja, mediante una
estría muy cerrada, del perímetro hacia el centro.
3.-Manteniendo el asa dentro de la zona aséptica, cerrar la caja y girarla para colocar el siguiente
cuadrante en posición adecuada, sembrar en igual forma.
3.- Con la misma asada repetir la operación para inocular los otros dos cuadrantes y los cuatro de
la otra caja.
4.- Incubar las placas invertidas durante 24 a 48 horas, a la temperatura optima del
microorganismo que se desea aislar.
Por diluciones
1.-Marcar los dos tubos con el medio fundido y mantenido a 45 º C, con los números 1 y 2;
Marcar de igual forma las cajas de petri estériles.
2.- Tomar una asada de la muestra y sembrar en el tubo 1 , transferir al tubo 2 y mezclar el
contenido.
3.-En la zona aséptica, vaciar el contenido de los tubos 1 y 2 en las respectivas cajas de petri
estériles, homogeneizar y dejar solidificar
nota: esterilizar los tubos vacíos antes de lavarlos.
4.- Incubar las placas invertidas durante 24 a 48 horas, a la temperatura optima del
macroorganismo que se quiera aislar
5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
6 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
ATLAS R. M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
EDITORIAL CECSA
INGRHAM J. L. Y G. A. INGRHAM
INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y II
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PRESCOTT- HARLEY-KLEIN
MICROBIOLOGIA
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7 MECANISMO DE EVALUACIÓN
CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2009-2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
3b
AISLAMIENTO EN MEDIOS SELECTIVOS Indefinido
1 INTRODUCCIÓN
Medios selectivos. Son aquellos que favorecen por su diseño el crecimiento específico de un
microorganismo particular (o grupo de microorganismos). Es de gran utilidad para el aislamiento de
microorganismos a partir de una población microbiana mixta. Ejemplo: CO2 como fuente de carbono
es selectivo para autotrofos; adiccionando cristal violeta se inhibe el crecimiento de los Gram (+);
utilizando maltosa como única fuente de carbono sólo crecerán los que usen maltosa. Un medio
selectivo favorece el crecímiento de ciertos microorganismos, mientras suprime el crecimiento de
otros. Los medios selectivos se utilizan para aislar especies particulares a partir de una mezcla
compleja. Por ejemplo, se utiliza un medio selectivo, para aislar Salmonella typhi, agente causal de
la fiebre tifoidea, a partir de heces donde existen cientos de microorganismos diferentes. Algunos
medios son selectivos porque contienen un producto químico, como la azida sódíca, el telurito
potásico o el cristal violeta, que inhiben el desarrollo de algunos microorganismos pero no de otros.
El agar SPS (denominado de esta forma porque contiene sulfadiacina y sulfato de polimixina) se
utiliza para identificar Clostridium botulinum, agente causal de una grave intoxicación alimentaria. El
medio SPS permite el crecimiento de esta bacteria, pero inhibe el de otras especies de Clostridium.
otros medios de cultivo selectivos utilizan un valor extremo de pH o una fuente de carbono poco
comun.
2 OBJETIVOS
3 FUNDAMENTO
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
• muestra con población mixta
• mechero Refrigerador
• asa y porta asa Incubadora
• gradilla Esterilizador
• tubos de ensayode22x 175 con 18 ml de agar nutritivo, Balanzas granatarias
fundido y mantenido
• portaobjetos
• cajas de petri
• baño a temperatura 45 º
B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
METODO
5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
• Con base a los resultados obtenido indicar cual de los métodos fiscos resulto mas
eficiente para lograr el aislamiento de microorganismos
• .Describir las características de las bacterias que aisló en los diferentes medio selectivos
y con base en estas y en las del medio empleado indicar que tipo de bacterias aisló.
• Reportar en una tabla las características coloniales observadas en cada medio (anexos)
6 ANEXOS
Consistencia
Viscosa, Mantecosa, Friable (se disgrega al tocarla)
Elevación
Margen
7 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
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MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
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8 MECANISMO DE EVALUACIÓN
CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2009-2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
3D
PREPARACIONES FIJAS Y TEÑIDAS 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
TINCIONES:
Son procedimientos par teñir las bacterias; permitiendo observar coloreadas las bacterias que
normalmente no serían visibles al microscopio óptico, por ser transparentes.
Las tinciones se efectúan generalmente sobre bacterias desecadas y calentadas para coagular
sus proteínas (fijación).
Es la más importante y la que más se emplea para observar a las bacterias; utiliza un colorante
(violeta), un mordente ó fijador de colorante (yodo), un decolorante (alcohol) y otro colorante para
teñir de diferente color a las bacterias que se decoloran en la primer fase de la tinción con el
alcohol (normalmente un colorante rojo).
2 OBJETIVOS
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
• mechero
Refrigerador
• asa y portasa
Incubadora
• portaobjetos Esterilizador
• cultivo de microorganismos. Balanzas granatarias
• Equipo de Tincian de Gram
B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
METODO
1. Colocar las gradillas, tubos cajas portaobjetos y todo lo necesario, sin movimientos bruscos a
fin de evitar accidentes contaminación de los cultivos.
2. Lavar los portaobjetos meticulosamente con agua y jabón, enjuagar varias veces con alcohol al
95%, ponerlos a secar y flamearlos 2 o 3 veces.
3. En los portaobjetos limpios y desengrasados colocar la muestra del microorganismo a estudiar,
para ello.
4. Esterilizar el asa en la flama del mechero, tomar el tubo de la muestra por su extremo inferior
con la mano izquierda para destaparlo, sujetar la torunda de algodón entre el meñique y la palma
de la mano derecha y girar el tubo hasta que salga la torunda, flamear la boca del tubo
manteniéndola cerca de la flama del mechero.
5. Introducir el asa en el tubo, apoyarla en la pared del tubo hasta que se enfrié proceder a tomar
una asada del cultivo y sacarla del tubo
6. Flamear la boca del tubo, taparlo y colocarlo en la gradilla.
7. Aplicar el asa al portaobjetos marcado y extenderla muestra en la zona centra, si el cultivo esta
en medio sólido, colocar antes una gota de agua destilada en el centro del portaobjetos y
suspender en ella la asada del cultivo.
8. Esterilizar el asa.
9. Dejar secar al aire el frote y fijarlo a la flama, pasándolo 4 o 5 veces a ella. el frote esta listo
para teñir.
1. hacer un frote de cada uno de los microorganismos en estudio marcando con su nombre.
2. Cubrir la preparación fija con cristal violeta de Gram. y dejarlo actuar durante un minuto,
moviendo suavemente el portaobjetos para favorecer el contacto del colorante con las células.
3. Cubrir la preparación con lugol de Gram. y dejarlo actuar durante un minuto escurrir el exceso
de reactivo y lavar.
4. Decolorar agregando mezcla de alcohol- acetona a la preparación, mientras se sostienen
ligeramente inclinada para que el colorante resbale lentamente por ellos.
5. Cubrir la preparación con safranina y dejarlo actuar durante un minuto escurrir el exceso de
reactivo y lavar.
1. Observar con objetivo de 1,000 X y describir los resultados.
2. Describir las características de las bacterias que aisló en los diferentes medios selectivos e
indicar que tipo de bacterias aisló.
3. Cual de los métodos empleados para el aislamiento resulta ser más eficiente.
5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
6 ANEXOS
CUESTIONARIO.
1. ¿Cuáles son las técnicas de aislamiento más comunes?
5. ¿Qué diferencia existe entre un medio de cultivo selectivo y un medio de cultivo diferencial
7 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
ATLAS R. M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
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• Puntualidad y asistencia 20%%
• Conducta 10%
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CLAVE DE LA
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PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
SIEMBRA Y ESTUDIO DE HONGOS
4 MICROSCOPICOS 2 seiones
(Microcultivo)
1 INTRODUCCIÓN
. Los hongos son células eucariota, carecen de clorofila y tienen una pared celular rígida; pueden
ser unicelulares o multicelulares, microscópicos o microscópicos. Se reproducen sexual o
asexualmente. Presentando cuerpos fructíferos distintos, asi como estructuras fácilmente
observables al microscopio como hifas y esporas.
Los hongos tienen hábitat muy diversos, algunos son acuáticos viviendo principalmente
en agua dulce, pero también se conocen algunos cuantos marinos, la mayoría son terrestres y
habitan en el suelo, sobre materia orgánica muerta (saprofito), otros muchos son parásitos,
algunos son parásitos de animales incluyendo el hombre.
Al cuerpo de los hongos se le denomina talo y este puede ser unicelular, de forma ameboidea u
ovoide; ejemplo: ejemplo las levaduras; o bien puede ser pluricelular con aspecto filamentoso,
esponjoso o carnoso; a los filamentos se les conoce como mohos.
2 OBJETIVOS
Mediante esta práctica el alumno lograra
:
⇒ Manejar las técnicas básicas para el cultivo e identificación de hongos
Aplicar las técnicas de preparación y tinción adecuadas para el estudio microscópico, así como
reconocer y describir las características morfológicas y estructurales de hongo
3 FUNDAMENTO
Los microcultivos permiten hacer el seguimiento del desarrollo de hongos en estudio.
Los cultivos en placa se obtienen sembrando por picadura el centro de las cajas que contienen
diferentes medios.
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
METODO
1. En una zona aséptica, con el bisturí estéril costar el Agar Sabouraud en cuadros de
aproximadamente de 1 cm.
2. Colocar en el centro de uno de los portaobjetos contenidos en la caja de Petri, un cuadro de
Agar Sabouraud.
3. Con el asa sicológica(o con el asa bacteriológica recta), inocular cada uno de los lados del
cuadro.
4. Con ayuda de unas pinzas flameadas, colocar sobre esta preparación el segundo portaobjetos
estéril.
5. Para mantener la humedad, agregare aproximadamente 10 ml de agua glicerinada, teniendo
cuidado de saturar el papel, evitando la inundación para que el liquido no inunde el cultivo.
6. Incubar durante 7 días.
7. En condiciones de asepsia, sacar los portaobjetos de la caja.
5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
6 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
ATLAS R. M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
EDITORIAL CECSA
INGRHAM J. L. Y G. A. INGRHAM
INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y II
EDITORIAL REVERTE S.A.
PRESCOTT- HARLEY-KLEIN
MICROBIOLOGIA
EDITORIAL Mc GRAW HIL
7 MECANISMO DE EVALUACIÓN
• Puntualidad y asistencia 20%%
• Conducta 10%
• Reportes 50%
• Aprovechamiento 20%
CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2009-2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
4B SIEMBRA DE HONGOS EN PLACAS 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
2 OBJETIVOS
Mediante esta práctica el alumno lograra
:
• Manejar las técnicas básicas para el cultivo e identificación de hongos
Aplicar las técnicas de preparación y tinción adecuadas para el estudio microscópico, así como
reconocer y describir las características morfológicas y estructurales de hongo
3 FUNDAMENTO
Para estudiar a los hongos se dispone de dos tipos especiales de cultivos; el cultivo en
portaobjetos o micro cultivo y el cultivo en las cajas de petri.
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
MATERIAL
• 2 cajas de pedir conteniendo: un disco de papel filtro,
una varilla de vidrio en forma de V, debe quedar Refrigerador
ajustada a los bordes de la caja y dos Incubadora
portaobjetos(esterilizar) Esterilizador
• Agua glicerinada Balanzas granatarias
• 1 caja de petri con agar Sabouraud.
• Asa mitológica
• Bisturí estéril
• Pinzas
• 1 frasco de alcohol
• Cubreobjetos
• Solución de formol al 10%
• Azul de algodón.
• 3 cajas de koplin
• Xilol, alcohol, acetona
• Microscopio
1. con el asa mitológica y en condiciones de asepsia, tomar una muestra del cultivo de
Aspergillus Níger, procurando tomar únicamente esporas, transferirlas a un tubo con agua
estéril y agitar paras homogeneizar la muestra.
2. Con el asa en ángulo recto, tomar una muestra de la suspensión de esporas e inocular por
picadura en el centro de las placas que contienen Sabouraudy y Czapek
3. Invertir las cajas e incubar a 28 ºC durante 5 – 7 días.
4. Observar las características de las colonias de los diferentes hongos desarrollados, consultar
la guía de observación y describir sus resultados.
5. A partir de los cultivos de levaduras, preparar Frotes fijos y teñirlos con azul de metileno.
6. En un portaobjetos, colocar una gota de lactofenol azul de algodón.
7. Colocar en el ultimo tercio del asa mitológica un pedacito de diurex de 1.5 cm. de largo.
Enrollado ligeramente.
8. En condiciones de asepsia destapar la caja que contiene el cultivo de Aspergillus Níger,
introducir el asa con el diurex y presionar ligeramente sobre una fracción de la colonia.
9. Depositar la muestra en el portaobjetos con el colorante, extender el diurex y colocar encima
de un cubreobjetos.
10. Observar en un microscopio con los objetivos de 10X y 40X.
11. Repetir el procedimiento de tinción húmeda con los hongos y hacer las observaciones
correspondiente
RESULTADOS
5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
6 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
ATLAS R. M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
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INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y II
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MICROBIOLOGIA
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7 MECANISMO DE EVALUACIÓN
• Puntualidad y asistencia 20%%
• Conducta 10%
• Reportes 50%
• Aprovechamiento 20%
CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2009-2009 MICROBIOLOGIA GENERALL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
OBTENCION DE COLONIAS Y OBSERVACION
5 MICROSCOPICA DE LEVADURAS 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
Las levaduras han servido al hombre durante muchos siglos para fermentar jugos de frutas, pan
o elaborar muchos y nutritivos alimentos su importancia es aun mayor en la actualidad, porque
se les utiliza en muchos proceso fermentadito y por sintetizar algunas vitaminas grasa y propinas
partir de azucares simples y amoniaco
n
2 OBJETIVOS
.
Diferenciar morfológicamente ala levaduras
Cultivar adecuadamente algunas levaduras de importancia industrial y clínica
3 FUNDAMENTO
En las levaduras el talo unicelular desempeña las funciones vegetativas y reproductivas estas se
reproducen asexualmente por bipartición o por gemación y en la reproducción sexual 2 células
levaduriformes se unen y como resultado formas ascosporas. En algunas levaduras la gema o
brote formado queda como adherido a la célula madre
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
Refrigerador
MATERIAL Incubadora
Esterilizador
Balanzas granatarias
• 9 Cajas de Petri con Agar Sabouraud y 9 de Agar
Czapek
• Mechero, Asa mitológica, Gradilla
• 9 Tubos de 16 X 150 con 5ml de agua esterilizada
• Cultivos de los siguientes hongos, Saccharomyces
cereviciae,
• Microscopio
• Portaobjetos y cubreobjetos
METODO
A) Características microscópicas
Levaduriformes Filamentosas
Desarrollo: 1.-homogéneo
2.-por zonas (anillos concéntricos de diferente color y estructura)
3.-sectorial (colonia gigante con un sector circular diferente al . .
resto de la colonia)
Color: pardo, amarillo.
B) Característica microscópicas
RESULTADOS
2. Hacer esquemas de cada uno de los hongos en estudio, consultar su guía y localizar en sus
preparaciones estructuras características de cada uno, señalar las estructuras identificadas
5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
6 ANEXOS
CUESTIONARIO
7 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
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MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
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INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y II
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MICROBIOLOGIA
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8 MECANISMO DE EVALUACIÓN
• Puntualidad y asistencia 20%%
• Conducta 10%
• Reportes 50%
• Aprovechamiento 20%
CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2009 – 2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
6
EFECTO DE LAS RADIACIONES 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
Muchas formas de radiación electromagnética son muy perjudiciales para los microorganismos
en el caso de la radiación ionizante puede provocar que los átomos pierdan electrones.
Niveles bajos de radiación ionizante producirán mutaciones que pueden causar directamente la
muerte de los microorganismos mientras que niveles superiores son letales.
La radiación UV puede destruir la mayor parte a los microorganismos debido a su longitud de
onda corta aunque llega muy poca radiación de UV por debajo de los 2090-300 nm a la
superficie terrestre, la radiación cercana del UV entre 325-400 nm también puede dañar a los
macroorganismos. Aunque la luz visible es beneficiosa ya que es la fuente de energía de la
fotosíntesis a una intensidad suficiente puede dañar o destruir células microbianas. Todos los
microorganismos celulares poseen pigmentos como la clorofila, bacterioclorofila, citocromos y
flavinas que pueden absorber energía lumínica, pueden excitarse o activarse y actúa como
fotosensibilizadora.
2 OBJETIVOS
3 FUNDAMENTO
La luz UV cubre un espectro de 100-4000 A las longitudes menores a 3100 A tienen un alto poder
mutagénico y germicida, se ha determinado que la de 2650 A es particularmente absorbida por el
ADN y algunos ácidos aromáticos como el triptofano, tisosina y fenilalanina. En donde la
activación de las moléculas origina reacciones químicas.
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
MATERIAL
• Mechero
• Lápiz graso o marcador Refrigerador
• Círculos de cartón negro cuyo diámetro sea ligeramente Incubadora
mayor que el de una caja de petri y a la que se le debe Esterilizador
cortar la cuarta parte de su superficie Balanzas granatarias
• Papel aluminio
• Una pipeta de 1.0 ml estéril
• Una varilla doblada en ángulo recto y un vaso de
precipitado con 100 ml de alcohol
• 2 cajas de petri con gelosa simple
• Lámpara con longitud de onda de 2,650 Aº ( luz UV)
• Cultivos
B DESARROLLO DE LA PRÁCTICA
METODO
1. Divida la parte externa de las dos cajas de petri en cuatro partes iguales. Marque los
cuadrantes con T (testigo), 10, 30 y 60 segundos.
2. Con una pipeta estéril y en condiciones de asepsia, inocular las dos cajas, colocando en el
centro de cada una 0.1 ml de cultivo del microorganismo.
3. Con una varilla de vidrio, previamente flameada, distribuir el cultivo en forma homogénea en
las superficies de las cajas (10.4.a)
4. Dejar que el cultivo se absorba en el agar y cuando se observe la superficie seca proceder a :
5. Colocar las cajas bajo las lámparas de luz ultravioleta, a 15 cm. de la fuente de luz (nota:
proteger los ojos con los lentes durante la irradiación).
6. Cambiar las tapas de la caja de petri por los círculos de cartulina que deberán cubrir las ¾
partes de la caja, permitiendo incidir la luz en la parte restante, durante 10 segundos.
7. Girar el circulo 45º, permitiendo que el segundo cuadrante quede expuesto a la luz durante 30
segundos
8. Repita el giro del circulo 45º, e irradiar el tercer cuadrante durante 60 segundos. El cuadrante
T no debe ser expuesta a la luz UV
9. Tapar las cajas con sus cajas correspondientes, envolver inmediatamente en papel aluminio
una de las cajas.
10. Exponer la segunda caja irradiada a la luz solar durante 40 minuto después envolver también
en papel aluminio.
11. Incube las cajas en posición invertida a la temperatura de 28 o 37 º C de acuerdo al tipo de
microorganismos en estudio.
12. Registre sus resultados en la tabla correspondiente.
5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
6 ANEXOS
CUESTIONARIO
7 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
ATLAS R. M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
EDITORIAL CECSA
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INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y II
EDITORIAL REVERTE S.A.
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MICROBIOLOGIA
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8 MECANISMO DE EVALUACIÓN
• Puntualidad y asistencia 20%%
• Conducta 10%
• Reportes 50%
• Aprovechamiento 20%
CLAVE DE LA
CARRERA PLAN DE ESTUDIOS NOMBRE DE LA ASIGNATURA
ASIGNATURA
QUIMICO
FARMACEUTIC 2009 – 2009 MICROBIOLOGIA GENERAL
O BIOLOGO
PRÁCTICA FECHA Y
NOMBRE DE LA PRÁCTICA
NÚMERO DURACIÓN
EFECTO DE FACTORES QUIMICOS
7
EFECTO DE LOS ANTIBIÓTICOS 2 sesiones
1 INTRODUCCIÓN
GENERALIDADES
1.- dosis terapéutica o nivel de fármaco necesario para el tratamiento clínico de una
infección determinada.
2.- la dosis toxica o nivel de fármaco al que el agente se vuelve excesivamente toxico
para el huésped.
Los fármacos pueden clasificarse basándose en el grupo general de microorganismos contra el
que actúan.
1.- antibacterianos
2.- antimicóticos
3.- antiprotozoarios
4.- antivirales
Algunos agentes pueden emplearse contra mas de un gripo, ejemplo: las sulfonamidas,
antimicrobianos, bacteriostáticos y bactericidas.
La concentración mínima inhibidora (CMI) proporciona cierta concentración mas baja de un
fármaco que impide el crecimiento de un determinado patógeno.
Propiedades de un antibiótico útil
Para que un antibiótico sea útil como agente quimiotarapeutico debe reunir las siguientes
cualidades:
1. Ser capaz de destruir inhibir muchas especies de microorganismos patógenos.
2. debe impedir la aparición de formas resistentes del parásito.
3. No debe producir efectos colaterales indeseables en el huésped, como reacciones de
insensibilidad o alergia.
4. no debe eliminar la flora normal del huésped.
Tipos de antibióticos
Pruebas de susceptibilidad
2 OBJETIVOS
4 PROCEDIMIENTO
A EQUIPO, MATERIAL Y REACTIVOS NECESARIOS MATERIAL DE APOYO
MATERIAL
Refrigerador
• Mechero Incubadora
• Gradilla Esterilizador
• Pinzas de disección de punta roma Balanzas granatarias
• Marcador
• Varilla acodada
• 1 pipetas de 1.0 ml estéril
• 6 cajas petri con discos de papel filtro estériles
• 6 tubos de 22 x 175 con 20 ml de gelosa
• 6 cajas petri con discos de papel filtro estériles.
5 INTERPRETACIÓN Y CONCLUSIONES
6 REFERENCIAS
BIBLIOGRAFÍA BASICA:
ATLAS R. M.
MICROBIOLOGIA FUNDAMENTOS Y APLICACIONES
EDITORIAL CECSA
INGRHAM J. L. Y G. A. INGRHAM
INTRODUCCION A LA MICROBIOLOGIA I y II
EDITORIAL REVERTE S.A.
PRESCOTT- HARLEY-KLEIN
MICROBIOLOGIA
EDITORIAL Mc GRAW HIL
BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA
BROCK, SMITH
MICROBIOLOGIA
EDITORIAL P. H. HISPANOAMERICANA
DULVECCO DAVIS
TRATADO DE MICROBIOLOGIA
EDITORIAL SALVAT
MAC FADDIN, J. F.
PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACIÓN DE BACTERIAS DE IMPORTANCIA CLÍNICA
EDICIÓN MEDICA PANAMERICANA, S. A. DE C. V. MEXICO
PELCZAR Y COL.
MICROBIOLOGIA GENERAL
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7 MECANISMO DE EVALUACIÓN
• Puntualidad y asistencia 20%%
• Conducta 10%
• Reportes 50%
• Aprovechamiento 20%