AO De la integracin nacional del

reconocimiento de nuestra diversidad

EAP:
INGENIERA AMBIENTAL

tema:
CULTIVO DE MICROORGANISMO
Catedra:
MICROBIOLOGIA GENERAL

Catedratico:
Bglo. Mg CORDERO AZABECHE, Jorge

Integrantes:

AGUSTN BALDEON GABY

HUISA ALTAMIRANO DEISY
MOLINA VILCAS IMELDA
ORELLANA CERRN PAMELA
SEZ LANASCA RUTH
SALAZAR HUNUCO JOEL.
CAMARGO COLQUE CHAGUA .NEHEMAS

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

CULTIVO DE

Este
presente trabajo est
dedicado a nuestros padres por la
abnegada labor que desarrollan en
bien de sus hijos y a nuestro
docente
por brindarnos sus
conocimientos.

Indice:
1. Introduccin
..02

MICROBIOLOGA GENERAL

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

1.1.

CULTIVO DE

Objetivos

generales.02.
1.2.
Objetivos
especificos..02
2. Marco teorico / estrillado/
..02
2.1.
Materiales
.02
2.2.
Procedimiento
02
2.3.
Resultado
..02
2.4.
Resultado de
discusiones02
2.5.
Conclusiones
02
3. Marco teorico / diseminacion/
..02
3.1.
Materiales
.02
3.2.
Procedimiento
02
3.3.
Resultado
02
3.4.
Resultado de
discusiones02
3.5.
Conclusiones
.02
4. Marco teorico / estrillado/
.02
4.1.
Materiales
02
4.2.
Procedimiento
..02
4.3.
Resultado
.02
4.4.
Resultado de
discusiones.02
4.5.
Conclusiones
.02
BIOGRAFIAS
.02

MICROBIOLOGA GENERAL

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
CULTIVO DE

MICROORGANISMOS

ANEXOS
.02

CULTIVO DE MICROORGANISMOS

INTRODUCCIN:
El crecimiento de los microorganismos no se puede estudiar
individualmente debido a su tamao tan pequeo, por lo que
es necesario recurrir a medios nutritivos artificiales, donde se
puedan

desarrollar

rpidamente

producir

grandes

poblaciones. En estas condiciones se pueden manipular

efectuar las investigaciones sedeadas.

Muchas

especies

bacterianas

son

tan

parecidas

morfolgicamente que es imposible diferenciarlas solo con el

uso de microscopio; en este caso, para identificar cada tipo
de bacteria, se estudiaran sus caractersticas bioqumicas
sembrndolas en medios de cultivos especiales. Algunos
medios contienen un producto que inhibe el crecimiento de
la mayora de las especies.
Los medios nutritivos donde se desarrollan y multiplican los
microorganismo contienen

nutrientes necesarios para su

crecimiento, y se denominan medios de cultivo, cuyos

componentes son muy variados.

MICROBIOLOGA GENERAL

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
CULTIVO DE

MICROORGANISMOS

En general los medios son ricos en protenas no especficas,

con

el

fin

de

estimular

el

crecimiento

de

los

microorganismos.

OBJETIVO GENERAL:
Aislar bacterias por el mtodo de estriado, diseminacin y difusin.
OBJETIVO ESPECIFICO:

Emplear la metodologa adecuada para cada tipo de muestra.

Diferenciar bacterias Gram (+) y Gram (-).

MARCO TEORICO
I.

CULTIVO DE MICROORGANISMOS

El cultivo de microorganismo consiste en proporcionarles las condiciones fsicas

qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma
controlada. En general podemos distinguir cultivos lquidos y slidos en funcin a
las caractersticas del medio y cultivos discontinuos y continuos en funcin a su
disponibilidad de nutrientes.
1.-SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS
Gracias a la aplicacin de los medios de cultivo, se ha llegado a conocer
ampliamente el comportamiento cultural y fisiolgico de la variada flora
microbiana que pulula en los ambientes, permitindose la identificacin especfica.
a.- Siembra y Aislamiento de Microorganismos.
Concepto de Siembra: acondicionamiento de un microorganismo en un medio de
cultivo
Aislamiento: permite la separacin de microorganismos al estado de pureza a
partir de una MUESTRA PROBLEMA.

MICROBIOLOGA GENERAL

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

CULTIVO DE

Trasplante: la separacin primaria de !a cepa a un medio de cultivo apropiado en

tubo, que puede ser lquido o slido. Se conserva la cepa pura y por tanto
trasplantes en medios especiales, se logran conocer las propiedades culturales y
bioqumicas y como resultado, la identificacin especfica.
Los trasplantes pueden ser:

De lquido a lquido
De lquido a slido
De slido a lquido
De slido a slido

Referencias bibliogrficas manual de microbiologa Cultivos de

Micro organismo

Cultivo microbiano Un cultivo es el crecimiento de poblaciones

microbianas de forma controlada en un medio artificial.
Medio de cultivo Soporte que va a contener los nutrientes
necesarios, as como unas condiciones ptimas de pH y humedad que
permite el desarrollo y crecimiento de microorganismos.
Clasificacin de los medios de cultivos
En funcin de su consistencia

Slidos: al medio de cultivo slido se le aade un agente gelificant o

solidificante. Se preparan en Erlenmeyer, se dejan enfriar y luego se
pueden pasar o bien a una placa o bien a un tubo.

Los gelificants ms habituales son:

Agar Agar: es un alga que se caracteriza por ser inerte frente a los

microorganismos y porque es lquido a la temperatura de ebullicin y

solidifica entre los 45-50C.
Lquidos o caldos: contiene los nutrientes y, en lugar de aadir el

agar, tienen el agua que se utiliza para diluir el medio de cultivo. Se

preparan en tubo.
Semislidos: contienen agar (<5-10%). Se utilizan cuando

queremos observar movilidad bacteriana. Se hace en tubo y se utiliza

la siembra en picadura con asa recta.
Caldo nutritivo: extracto de carne + peptona + agua
Agar nutritivo: extracto de carne + peptona + agua + agar.

MICROBIOLOGA GENERAL

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

CULTIVO DE

En funcin del uso que se le da

Enriquecidos: son aquellos medios en los cuales a un medio base se

le aaden determinadas sustancias nutritivas que son necesarias

para el crecimiento de un microorganismo exigente. Ejemplo: agarsangre.
De enriquecimiento: se utilizan solamente cuando se sospecha que

el microorganismo de la muestra se encuentra en un nmero muy

pequeo. Se le aporta los nutrientes y se espera que crezcan de 6 a 8
horas. Esto se utiliza, por ejemplo, cuando se sospecha la
contaminacin en alimentos por Salmonella.
Diferenciales: incorpora determinadas sustancias que nos permiten

diferenciar entre dos tipos de microorganismos. Ej. El agar de sal y

manitol: nos permite diferenciar en el caso de los staphylococos, los
que utilizan el manitol en su metabolismo de los que no. Si lo utilizan
originan cidos, con lo que el pH disminuye y el indicador cambia de
color.
Selectivos: llevan incorporadas determinadas sustancias que

inhiben el crecimiento de un microorganismo y facilita el crecimiento

del microorganismo que nos interesa. Ej. Agar de sal y manitol: el
NaCl (5%) inhibe el crecimiento de ciertos m.o y facilita el desarrollo
de otros que crecen mejor en ese medio.
Transporte y mantenimiento: se utilizan cuando la muestra no se

puede procesar inmediatamente despus de haberla tomado.

Condiciones de almacenamiento de los medios de cultivo
La mayora de los medios de cultivo se encuentran deshidratados y
stos se deben conservar de la siguiente forma:
http://Informe-3-Bioquimica-Medios-de-Cultivo

Mtodo de estriado:
Es el mtodo ms fcil y la ms usada pata obtener cultivos. Para ello, con
una aza de siembra se toma una muestra de la poblacin mixta y a
continuacin se hacen estras sobre la superficie de un medio solido
preparado en placa Petri. Conforme se van haciendo zigzag con el asa, debe
tener una separacin unas de otras de 1-3 mm para que cada vez se
deposite en la superficie del medio menos microorganismo. La distribucin
puede ser por estras simples/ un solo plano por todo el medio/ el nmero
de estras depende la cantidad de inoculo.
Estriado simple: esteriliza el filamento del aza de siembra y toma la parte de
la caja de Petri que contiene el medio de cultivo sembrando. Cercas del
mechero espera que se enfri el aza y toma una colonia de la placa.
Regresa la caja a su tapadera, ahora, toma un placa con agar estril y con
cuidado de no romper el gar, inocula la muestra en un extremo de la

MICROBIOLOGA GENERAL

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

CULTIVO DE

placa y con el aza en posicin ligeramente horizontal realiza las estras

muy juntas.

SIEMBRA DE MICROORGANISMOS

Para la siembra de estos microorganismos utilizamos la

tcnica del ISO PAGO, BUCAL los materiales que
utilizamos son un Isopo esterilizado, una placa Petri y
nuestra muestra a sembrar bacterias que se encuentra
en la zona bucal

MICROBIOLOGA GENERAL

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

CULTIVO DE

Tcnica de la siembre la bacterias bucales, realizamos el

paso del Isopo en forma de sic sac en tres partes de la
placa Petri 1 junto 2 semi junto y el 3 de manera separada

Muestra de bacterias bucales, rotuladas y debidamente

aislada para su respectivo crecimiento

MATERIALES
Hisopos

Placas
agar

petri

con

MICROBIOLOGA GENERAL

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
CULTIVO DE

MICROORGANISMOS

Lpiz
plumn

graso

MATERIALES PARA REALIZAR EL AISLAMIENTO POR EL

METODO DE ESTRIADO

PROCEDIMIENTO (AISLAMIENTO POR EL METODO DE

ESTRIADO)
Recopilar

las

muestras

respectivas

de

los

diversos

microorganismos existentes: en la mano, cara y zona bucal; con

hisopos respectivamente.
Recopilacin de las muestras

MICROBIOLOGA GENERAL

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
CULTIVO DE

MICROORGANISMOS

Tomar con

la

mano

izquierda

la

placa

Petri

con

agar,

descansando la base sobre los dedos, medio, angular o

meique; el ndice acta de bisagra y con el pulgar; levantar la
tapa lo suficiente para el paso del hisopo cargado. esta
operacin se realiza a la altura del mechero encendido.
Cogiendo la placa petri

Con los hisopos se distribuye el inoculo por estras en ZIGZAG

con escasa separacin unas de otras.

Distribuyendo el inoculo

Dejar caer la tapa con el control de los dedos pulgar e ndice.

Muestra

MICROBIOLOGA GENERAL

10

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

CULTIVO DE

Rotular los datos sobre el dorso de la placa petri sembrada as

numero de grupo tipo de siembra y fecha.
Rotulando

Incubar a 37C por 24 horas. Colocar las placas en la estufa en

posicin invertida.
Incubar a 37C

MICROBIOLOGA GENERAL

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CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

CULTIVO DE

RESULTADOS (FALTA)

AISLAMIENTO POR DISEMINACION (LECHE)

Se practica mediante la pipeta de Pasteur estril para la toma del

inoculo. Esta por capilaridad permite el ascenso del inoculo a discrecin el
cual es depositado sobre el medio solido contenido en la placa , una asada
o una gota de la muestra a sembrar que luego se extender por toda la
superficie del medio de cultivo con una esptula de Drigalsky.
La placa Petri del cultivo debe destaparse lo suficiente como para permitir la
estrecha penetracin de la esptula de siembra, as se evite la
contaminacin.

MATERIALES:
INSTRUMENTOS DE LABORATORIO

MICROBIOLOGA GENERAL

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CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
CULTIVO DE

MICROORGANISMOS

ESPATULA DE DRIGALSKY

PIPETA PASTEUR

PLACA PETRI
MUESTRA

LECHE

PROCEDIMIENTO:
AISTLAMIENTO POR DISEMINACION (LECHE)

Tomar el inoculo de la muestra

problema con la pipeta Pasteur y
depositar una gota sobre el medio
de la placa Petri, que descansa en
posicin normal sobre la mesa.

Devolver el sobrante al tubo o

al embase de la muestra.

Rotular: nmero de grupo, tipo de siembre y fecha.

13
MICROBIOLOGA GENERAL
45

Incubar igual a los mtodos

anteriores.

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

CULTIVO DE

Desechar la esptula en el
frasco bacteriano.

Introducir la esptula de drigalsky y

diseminar la gota por la superficie
del medio, no pasando dos veces
por el mismo plano.

AISLAMIENTO POR DIFUSION

El mtodo que vamos a utilizar consiste en realizar diluciones

sucesivas de la muestra en condiciones de esterilidad con objeto de
sembrar despus cantidades conocidas de las mismas en una serie de
placas de Petri. Considerando que alguna de las diluciones ser tal
que al distribuir una parte de ella en la placa, originar colonias
aisladas. Contando el nmero de colonias, el volumen sembrado en la
placa y la dilucin correspondiente, podremos calcular el nmero de
unidades formadoras de colonias presentes en la muestra inicial.
Tcnica que consiste en obtener una suspensin de la mezcla de
microorganismos y hacer diluciones seriadas que se vierten en

MICROBIOLOGA GENERAL

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CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
CULTIVO DE

MICROORGANISMOS

una placa Petri hasta conseguir colonias aisladas. Se debe trabajar,

como siempre, en condiciones estriles, flameando la boca de los
tubos antes y despus de introducir la pipeta, en las proximidades del
mechero. Mediante una pipeta estril, tomar una muestra del cultivo
mixto, y depositar 1ml en el primer tubo (dilucin 10 -1). Agitar hasta
conseguir

una

suspensin

homognea.

Tomar

otra

pipeta

estril, y transferir de esta primera dilucin 0,1ml al siguiente (102

), y as sucesivamente. A partir del tubo con dilucin 10-2 y 10-4, con

una pipeta estril, inocular en placa Petri tras incubar se podrn

obtener colonias aisladas.

MATERIALES:
EQUIPOS:

HORNO

son
dispositivos
elctricos utilizados para
esterilizacin
que
forman
parte
del
equipamiento
de
laboratorio

MICROBIOLOGA GENERAL

15

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

Se utiliza para pesar

pequeas cantidades de
en este caso
BALANZA masa,
ELCTRICA para determinar el la
masa
de
la
tierra
agrcola.

VORTEX

Es un dispositivo simple
que se usa comnmente
en los laboratorios para
agitar pequeos tubos o
frascos de lquido

MATERIALES DE VIDRIO:

LUNA DE
RELOJ

VARILLA
DE VIDRIO

PLACAS
PETRI

TUBOS DE
ENSAYO

Este instrumento en este

caso nos ayud para poder
pesar la muestra.

La varilla de vidrio es de
gran grosor y de vidrio que
sirve
para
mover,
remover, en este caso nos
sirvi para homogenizar la
muestra con la peptona.
Cajas
cilndricas,
se
emplean como recipientes
de medios de cultivo.
Son de forma cilndricas de
vidrio por lo general,
cerrado por un extremo,
hay de varios tamaos; en
este caso nos sirvi para
la soluciones de
(10-1,10-2,10-3,10-4)

MICROBIOLOGA GENERAL

16

CULTIVO DE

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

PIPETAS
ESTERILES

VASO
PRECIPITADO

Tubos cilndricos delgados

terminados se emplean en
la medicin de pequeas
cantidades de lquidos, en
este caso nos sirvi para
tomar muestra y as
depositarlas
a
cada
soluciones
que
se
encuentran en los tubos d
ensayo
Es un recipiente que est
hecho de vidrio graduado.
Se usan principalmente
para la preparacin de
disoluciones, en este caso
utilizamos para la mezcla.

Solucin:

PEPTONA
Muestra:
TIERRA AGRCOLA
Traer 100 gramos

PROCEDIMIENTO

MICROBIOLOGA GENERAL

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CULTIVO DE

CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

CULTIVO DE

1.- Pesar en la balanza analtica 10 g de tierra

agrcola

2.- Colocar en el vaso de precipitacin un poco

de peptona y luego echar la tierra agrcola 10
g y disolver.

3.- Con ayuda de una pipeta esteril sacamos del

vaso de precipitacin (muestra original) 1 ml de lo
disuelto y echar a uno de los tubos de ensayo que
se encuentra con la peptona de 9 ml y
homogenizar (10 -1).

4.- Agitamos bien el tubo de 10 -1 con la ayuda del

vrtex y con una nueva pipeta estril transferir 1ml
a un segundo tubo con 9ml de la solucion 10 -1.
marcarndo como la dilucin 10-2

5.- Agitamos bien el tubo 10-2 con la ayuda del

vrtex y con una nueva pipeta estril transferir 1 ml
a un tubo con 9 ml de la solcuin 10 -2. Marcando
con la dilucin 10-3

6.- Finalmente agitamos bien el tubo 10 -3 con la

ayuda del vrtex y con una nueva pipeta esteril
transferir 1ml a un tubo con 9ml de la solucion 10 -3.
marcando con la dilucion 10-4

MICROBIOLOGA GENERAL

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CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

CULTIVO DE

7.- Prender el Mechero de Bunsen y abrir la

placa Petri contenido el agar nutricio y colocar
2 gotas de la dilucin 10 -3 y 10-4 y esparcirlo
con la esptula para luego ser incubada por 24
- 48 horas

Resultados:

MICROBIOLOGA GENERAL

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CULTIVO DE
MICROORGANISMOS
MICROORGANISMOS

CULTIVO DE

CONCLUSION:
Esta tcnica consiste en obtener una suspensin de la mezcla de
microorganismos y hacer diluciones seriadas que se vierten en una
placa Petri hasta conseguir colonias aisladas.
Tras incubamos podremos obtener colonias aisladas. El recuento de
estas colonias nos permitir conocer el nmero de clulas existentes
en el cultivo original.

MICROBIOLOGA GENERAL

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