Neisseria gonorrhoeae (gonococo)

Diplococo Gram negativo

Oxidasa y catalasa positivo
Causante de enfermedad de transmisin sexual conocida como gonococia
Bacteria exigente a nivel nutricional (medios no selectivos o selectivos con
factores de crecimiento) Thayer Martin (vancomicina, colistina nistatina, , y
trimetroprin con sulfametoxasol)
Morfologa
Diplococo gram negativo 0.6 a 1m de dimetro
Observacin microscpica intracelular dentro de neutrfilos
Fimbrias de superficie (Virulencia)
Divisin binaria incompleta responsable de su apariencia (Diplococos)
Metaboliza nicamente glucosa
Sensible a C02 requiere 2-3%
Cuadro clnico
Hombres
Uretritis aguda
Disuria y secrecin uretral
Mujeres
Cervicitis purulenta
Salpingitis y Enfermedad plvica inflamatoria
Sndrome de fitz hugh curtis
Salpingitis -> Perihepatitis
Toma de muestra
Recolectar muestra de sitios genitales (uretra masculina, endocervix femenino)
Si se sospecha de infeccin gonoccica diseminada tomar muestra de sangre
para hemocultivo.
Muestras deben ser recolectadas con hisopo de dracn o rayn Algodn*
Especulos vaginales lubricados con agua caliente o solucin fisiolgica
Lubricantes base agua y aceite*
Metodologa toma de muestra uretral

 Use un hisopo delgado, seco, y con un mango de alambre flexible. Si se

humedece el hisopo con agua antes de insertarlo puede ayudar a reducir la
molestia.
Introduzca el hisopo lentamente (34 cm en varones; 12 cm en mujeres),
rotando lentamente y retrelo con suavidad.
El hisopo puede ser usado directamente para inocular el medio de cultivo
apropiado o puede ser colocado en medio de transporte.
Metodologa hisopado del crvix
1. Luego de insertar un espculo para ver al crvix,
2. remoever las secreciones vaginales superficiales y los exudados
cervicales.
3. Inserte luego un hisopo estril 1-2 cm dentro del canal endocervical,
rtelo 180 para recoger clulas epiteliales columnares para el
diagnstico de N. gonorrhoeae, y retrelo.
Transporte de la muestra
Sistemas de transporte de hisopos no nutritivos
Medios de trasporte semislidos burffereados de Stuart o amies
Capaz de mantener microorganismos viables 6-12 horas
Sistemas de transporte en medios de cultivo

Medios de cultivo
A 35C en atmosfera de 3 a 5% de CO2 72 horas
Medios thayer-Martin suplementado con agar chocolate
Medio thayer-Martin modificado (adicionado con lactato de trimetroprima
5g/ml)
Colonias de gonococos obtenidas en este medio selectivo son usualmente
opacas, grisceas, convexas, de 1-4 mm de dimetro. Luego de 48 h de
incubacin pueden transformarse en colonias mucoides.
Agar NYC (agar base-peptona-almidn, suplementado con eritrocitos de
caballo y acido oxalactico)

N. gonorrhoeae puede aparecer como pequeas (0,5 a 1,0 mm) de

color blanco grisceo a incoloro colonias mucoides. N. meningitidis aparece
como gran incoloro a colonias mucoides-azulado gris.

Criterios de identificacin
Recuperacin de colonias brillantes, blanco-grisceas, convexas, opacas en
medio selectivo, despus de 24-48 horas de incubacin.
Observacin con la Coloracin de Gram, de diplococos Gram negativos
caractersticos, a partir de muestras tomadas de las colonias que crecieron en
los medios de cultivo.
Demostracin de que dichas colonias son oxidasa y catalasa positiva.
Tcnica de identificacin
Tincin de Gram
Observacin de diplococos gram negativos dentro de leucositos
polimorfonucleares
Tincin de gram sensibilidad de 90-95%
Hacer rodar el hisopo contra el portaobjetos (reduce la feformacion de
leucositos)
Proceder con la tincin (Alternativamente, se puede realizar una simple
tincin nica con azul de metileno y cristal violeta para diagnosticar N.
gonorrhoeae)

Metodologa de tincin de gram para gonococos

1. Prepare un frotis delgado en un portaobjetos a partir de un cultivo o
hisopado clnico, y de un cultivo control de gonococos.
2. Fije por calor, pasando el portaobjetos sobre una llama.
3. Cubra el portaobjetos con una solucin de cristal violeta por 1 minuto.
4. Lave con cuidado con agua fra de la canilla.
5. Cubra el portaobjeto con una solucin de iodo por 1 minuto.
6. Remueva el iodo lavando con una solucin de safranina. Cubra con safranina
por 20- 50 segundos.
7. Lave, absorba el lquido con papel de filtro, seque al aire y examine
microscpicamente.
8. N. gonorrhoeae se va a ver como cocos o diplococos rojos.

9. Se debe incluir en este estudio una cepa control (ej. un aislamiento

confirmado previamente como N. gonorrhoeae).
Prueba de oxidasa
Test de la oxidasa positivo permite la identificacin presuntiva de N.
gonorrhoeae.
El test de la oxidasa es un procedimiento cualitativo para determinar en las
bacterias la presencia de actividad citocromo C oxidasa.
El resultado es dependiente de la presencia de un sistema citocromo oxidasa
intracelular que cataliza la oxidacin del citocromo C por el oxgeno molecular.
Las colonias pueden ser estudiadas directamente para la produccin de
oxidasa, considerando que la oxidasa es letal para las clulas.
Mtodo directo en la placa de agar:
1. Agregue 2-3 gotas del reactivo para oxidasa directamente a placas de agar
con cultivos crecidos durante la noche.
2. Examine las placas para la aparicin de un cambio de color de rosado a
granate o a prpura oscuro.
Utilizacin de cepas control

TEST DEL SUPEROXOL (CATALASA)

La reaccin depende de la capacidad de la enzima catalasa para descomponer
al perxido de hidrgeno en agua e hidrgeno, producto final del metabolismo
aerbico de los carbohidratos
Mtodo de la placa de Agar:
1. Agregue 2-3 gotas de reactivo (3% H2O2) al crecimiento bacteriano
(colonias) en las placas de agar.
2. Examine inmediatamente y luego de 5 minutos para la presencia de
burbujas (reaccin positiva).
El test del superoxol se puede usar con aislamientos creciendo en agar
chocolate pero no en las placas de agar sangre
Test del superoxol: Perxido de hidrgeno al 30%*

MTODOS PARA LA CONFIRMACIN DE LOS AISLAMIENTOS DE

Neisseria gonorrhoeae
Se llevan a cabo despus que se ha completado la identificacin tentativa
(crecimiento en medios selectivos, morfologa de las colonias, tincin de Gram,
test de la oxidasa y tal vez catalasa)
Test de utilizacin de carbohidratos
Utilizacin de medios con agar triptosa cistina y agar tripticasa cistina
(adicionando carbohidratos fermentables)
Utilizacin de indicador pH rojo de fenol

Tratamiento
Ceftriazona
Ciprofloxacino