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Vitae,
ISSN (Versin impresa): 0121-4004
vitae@udea.edu.co
Universidad de Antioquia
Colombia
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www.redalyc.org
Proyecto acadmico sin fines de lucro, desarrollado bajo la iniciativa de acceso abierto
RESUMEN
En la bsqueda de nuevas posibilidades quimioteraputicas para el tratamiento del cncer, se han
reportado numerosos hallazgos de actividad antitumoral en extractos derivados de diversas especies de
macroalgas marinas. En el presente trabajo se evala el efecto antitumoral del extracto metanlico de seis
especies de macroalgas marinas colectadas en el Caribe colombiano; especficamente se realiza un ensayo
citotxico, una evaluacin sobre el efecto en el ciclo celular en la lnea HT29 y un ensayo de selectividad en
linfocitos T de sangre perifrica de personas normales estimulados con fitohemaglutinina. Los resultados
muestran que el extracto metanlico de las seis especies de macroalgas marinas posee un potente efecto
antimittico, de donde se puede inferir su potencial antitumoral. ste es el primer reporte que demuestra
que el efecto citotxico de estos extractos se da por un bloqueo mittico, el cual no produce alteraciones
en la morfologa y disposicin cromosmica y se presenta desde prometafase inicial hasta anafase tarda,
diferente a lo encontrado en los cultivos tratados con Colcemid . Estos hallazgos convierten los extractos
metanlicos de estas macroalgas marinas en especies promisorias para ser usadas como fuente de drogas
antineoplsicas y como agentes antimitticos en prcticas de citogentica convencional.
Palabras clave: actividad biolgica, citotoxicidad, ciclo celular, macroalgas marinas, extracto metanlico.
ABSTRACT
Searching for new chemotherapy strategies for cancer treatment, numerous traces of antitumor activity
have been reported from different species of seaweeds extracts. This study is carried out an evaluation
of the antitumor activity with methanolic extract of six species of seaweeds collected in the colombian
Caribbean sea, a cytotoxic test, an evaluation about the effect in the cell cycle line HT29 and a selective
test in phytohemaglutinine-stimulated peripheral human blood-derived T-lymphocytes are done. All
methanolic extracts showed antimitotic effect in the cell system with a wide spectrum of blockage on
the mitotic phase from early prometaphase to late anaphase. None of the extracts tested produced an
effect on chromosome morphology. This is the first report that demonstrates that the cytotoxic effect of
seaweed methanolic extracts act by mitotic blocking, and suggest that methanolic extracts from colombian
seaweeds contains bioactive substances with potential pharmacological use in cancer chemotherapy and
cytogenetic assays. Further studies on the usefulness of such substances as cell cycle blocking agents are
in process.
Keywords: biological activity, citotoxity, cell cycle, seaweeds, methanolic extract.
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Grupo de Biotecnologa Animal, Laboratorio de Biotecnologa Animal, Universidad Nacional de Colombia, sede Medelln. Calle 59A
No 63-20, Bloque 11 oficina 214. Medelln - Colombia. Telfono 57-4-4309137. Fax 57-4-4309116.
INTRODUCCIN
Numerosos estudios en busca de productos
naturales, realizados desde la dcada de los 80, han
mostrado que en los organismos marinos se encuentran con frecuencia compuestos con estructuras y mecanismos de accin biolgica originales, que
los hacen sumamente interesantes como modelos
para la bsqueda de nuevos frmacos de aplicacin
teraputica (1). Las macroalgas marinas han sido
uno de los grupos estudiados en este campo (2);
se trata de especies vegetales macroscpicas que
habitan nichos ecolgicos muy poblados, en aguas
poco profundas en zonas costeras; poseen sistemas
inmunitarios basados en la produccin de sustancias
qumicas para interaccionar con su entorno, incluyendo compuestos citotxicos para defenderse de
sus predadores y combatir enfermedades (3).
En la actualidad se encuentran identificados
numerosos compuestos qumicos provenientes de
estas macroalgas marinas, con diversas actividades
biolgicas, entre las que se destacan: actividad antiviral, antimictica, antihelmntica, antiinflamatoria, analgsica y particularmente la antitumoral
(2,4). Estudios realizados con numerosas especies
de macroalgas marinas colectadas en las costas del
Japn encontraron en el extracto metanlico de
Digenia simplex, Gelidiella acerosa, Galaxura fastigiata
y 12 especies del gnero Sargassum, actividad citotxica, y en algunos casos selectiva, que inhibe el
crecimiento de clulas de la lnea L1210 derivadas
de leucemia murina, y poca o ninguna citotoxicidad
en clulas de la lnea normal murina NIH-3T3 (5);
tambin encontraron dicha actividad en el extracto
metanlico de Amphiroa zonata, el cual fue evaluado
en cinco lneas de leucemia humana (6), y en el extracto metanlico de Caulerpa sertularioides, en el cual
detectaron inhibicin de la enzima telomerasa en
clulas de leucemia humana MOLT-4 (7). Dichas
evidencias permiten inferir el potencial antitumoral
de estos extractos naturales.
Los anteriores informes y la gran diversidad de
macroalgas marinas (8) identificadas en las costas
colombianas motivaron, mediante este estudio, la
bsqueda de sustancias potencialmente citotxicas
en el extracto metanlico de seis especies de macroalgas marinas (Amphiroa fragilsima, C. sertularioides,
D. simplex, Galaxaura obtusa, G. acerosa y Sargassum
cymuosum), colectadas en el Caribe colombiano. Una
vez detectada la actividad citotxica, se tuvo como
objetivo determinar en cul de las fases del ciclo
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celular ejercen su efecto dichos extractos metanlicos y, finalmente, verificar la posible actividad
selectiva sobre clulas cancerosas.
MATERIALES Y MTODOS
Coleccin del material vegetal
En la primera mitad del ao se recolect un kilogramo hmedo de A. fragilsima, C. sertularioides,
D. simplex, G. obtusa, G. acerosa y S. cymuosum, en el
litoral rocoso de Baha Concha, ubicado en la costa
central del Caribe colombiano, cerca de la cuidad
de Santa Marta, en el departamento del Magdalena.
La identificacin taxonmica fue confirmada en
el Instituto de Investigaciones Marinas y Costeras
de Colombia. Inicialmente, el material vegetal se
someti a una cuidadosa remocin manual de organismos epfitos, seguida de un lavado con abundante agua destilada para lograr, entre otras cosas, la
eliminacin de posibles microorganismos asociados
o simbiontes. Posteriormente este material se someti a un proceso de secado a temperatura ambiente
hasta obtener un peso seco constante.
Obtencin de extractos metanlicos
El material vegetal seco se proces en un molino
elctrico de rbol con cuchillas de golpe (Retsch)
hasta obtener partculas de 1 mm, a las cuales se
les adicionaron 200 ml de metanol (MERCK) y se
dejaron en agitacin magntica durante 52 horas en
condiciones de oscuridad. Este extracto se filtr con
una membrana de 100 m (MILLIPORE), antes
de secar el sobrenadante a presin reducida en un
rota-evaporador (Heidolph Laborota 4001), luego se
almacen a 4 C en condiciones de oscuridad hasta
la preparacin de las concentraciones de trabajo.
Ensayo de actividad citotxica
Se realizaron cultivos sembrando 2 x 105 clulas
de la lnea celular HT29 en cajas T25 (FALCON),
en medio RPMI 1640 (SIGMA), con 10 % de suero
bovino fetal (GIBCOL), 100 UI de penicilina (GIBCOL) y 100 g/mL de estreptomicina (GIBCOL);
37 C de temperatura de incubacin y 5% de atmsfera de CO2 hasta obtener los cultivos en crecimiento exponencial. Bajo esas condiciones se evaluaron
durante 12 horas de tratamiento y por triplicado
el efecto de siete concentraciones (0.01, 1, 2.5, 10,
25, 50, 75 g/mL) del extracto metanlico de A.
fragilsima, D. simplex, C. sertularioides. El control del
solvente se trat con 25 l de metanol (MERCK),
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RESULTADOS
Ensayo de actividad citotxica
Como se muestra en la figura 1, los extractos
metanlicos de A. fragilsima y D. simplex, presentaron un potente efecto citotxico, dosis dependiente, en la linea celular HT29. De igual modo,
el extracto de C. setrularioides mostr un buen
potencial citotxico, pero a diferencia de los dos
extractos anteriores, este efecto slo se manifest
en concentraciones por encima de 10 g/mL. De
otra parte, el tratamiento con metanol no mostr
efecto citotxico en la concentracin empleada
(p < 0.01).
B)
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Figura 2. Morfologa y disposicin cromosmica inducida por: (A) el extracto metanlico de D. simplex, las
cuales fueron similares a las de otros extractos naturales evaluados; (B) el Colcemid y (C ) el metanol.
DISCUSIN
Ensayo de actividad citotxica
Los extractos metanlicos de A. fragilsima, D.
simplex y C. sertularioides, colectadas en el Caribe
colombiano, presentaron efecto citotxico en la
lnea celular derivada de cncer de colon HT29, y
aportan nueva evidencia del potencial antitumoral
de estas especies en otros ambientes marinos y en
otras lneas celulares muy diferentes a las derivadas
de leucemia, previamente reportadas (5-7), en las
que, por el contrario, el efecto citotxico no fue tan
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A)
C)
B)
D)
Figura 3. Espectro de bloqueo mittico con el extracto metanlico de D. simplex, el cual fue similar al de los otros
extractos naturales evaluados en el sistema linfocitos T normales de sangre perifrica humana estimulados con
fitohemaglutinina. A) prometafase, B) metafase, C) anafase y D) metafase clsica inducida por el Colcemid .
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AGRADECIMIENTOS
Agradecemos al Marine and Highland Bioscience Center, Saga University, del Japn, por la
bibliografa suministrada, y a Marta Cecilia Daz,
del Instituto Colombiano de Investigaciones Marinas de Colombia, por la coleccin e identificacin
del material vegetal.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.