Objetivos

Construir una curva de calibracin y emplearla como mtodo para la

determinacin de una sustancia de inters, as como conocer las
ventajas y desventajas de su uso.
Relacionar la Ley de Lambert-Beer con la ecuacin de una recta,
comprendiendo que dicha ley afirma que la absorbencia es proporcional
a la concentracin y que esta no es la nica propiedad que est en
funcin de la misma.
Discusin:
El espectro electromagntico, representa las regiones visible y no visibles ms
importantes de la distribucin energtica, al considerar la luz de mxima
absorbancia que absorben las sustancias.
Considerando este principio, experimentalmente se trabajo con el sistema 5 el
cual es el ms concentrado he ideal para encontrar la longitud de onda optimo
ya que la ley de lamber-beer indica que la propiedad es proporcional a la
concentracin de los sistemas. Las lecturas se tomaron en un rango de 500 a
700 nm con incrementos de 10 en 10 nm, esto es debido a que estamos
trabajando en el rango de luz visible como lo indica el siguiente esquema:

Por otra parte las propiedades qumicas de nuestra muestra a analizar, el azul
de timol cuenta con sistema de electrones y electrones libres, la cuales son
causantes de producir color visible a la molcula. Es por este motivo que
generamos el barrido en el intervalo de 500 a 700 nm.

Como primer paso en la prctica experimental se determino la longitud de

onda optima en la que se debe leer la curva de calibracin para producir la
mejor linealidad, en caso de la medicion de una sola substancia la longitud de
absorbancia maxima constituye la mejor seleccion, por otra parte si se trata de
una mezcla de substancias se debe tomar en cuenta la longitud de absorbancia
con menor interferencia. En este caso se eligio 600 nm y se debio a que el azul
de timol presenta una coloracion azul en pH bsico (color reflejado) cuyo color
de luz que absorbe es el amarillo y su longitud de onda es de 580-680nm.
Dentro de los factores que originan que los valores de longitud de onda
mxima varen, se encuentra el PH, esto es debido al efecto de este sobre la
ionizacin de los compuestos. Una de las caractersticas que debe cumplir con
la preparacin de nuestros sistemas, es que la matriz sea semejante a la del
problema, para este caso utilizamos como matriz un base fuerte NaOH a
0.01M.
Dado que el azul de timol es un indicador de ph y estas sustancias tienen la
propiedad de que su molcula y el ion correspondiente presentan colorantes
diferentes, es decir el color del compuesto disociado es diferente del no
disociado, y al encontrarse en un medio bsico este se desplazara a su derecha
como base.

Es
mencionar

importante
que

Una vez determinada la longitud de onda para nuestro analito se procedi a

correr la curva de calibracin, se obtuvieron los siguientes datos utilizando el
mtodo de mnimos cuadrados o regresin lineal.
Y= 0.064x-0.034
R2= 0.998
STD: 2.548 x 10 -3
%RSD: 4.2869 %
El mtodo utilizado para la cuantificacin fue mediante una curva de
calibracin directa, utilizando la regresin lineal se interpolo la absorbancia
problema la cual fue de 0.238, dndonos como concentracin 4.2774 ppm.
De la misma forma podemos calcular la concentracin mediante la ecuacin de
Lambert-Beer, donde nos indica que A= .b.c , ya que esta ley relaciona la
concentracin con la propiedad que en este caso es la Absorbancia.
Este modelo se ajusta con la ecuacin de la lnea recta y=mx+b, en donde
y=A, m= .b X= concentracin.
A=0.064X-0.034
Xconcentracion=A(0.238)+0.034/0.034= 4.25 ppm
Por el metodo de minimos cuadrados o regresion lineal se obtiene la ecuacion
de la curva
de calibracion A = f(ppm de azul de Timol); Y= 0.064x-0.034
Donde:

R2 =0.998

y=Aabsorbancia, adimensional
0.064= coeficiente de absortividad, Lmg-1 cm-1 (para la concentracin en
ppm)
-0.034=b indicador de errores de calibracion, dimensiones de la propiedad
R2 = Coeficiente de correlacion (confirma la linealidad de la recta)

En este caso b se desprecia ya que el valor de la celda es de 1cm

A = f(M de azul de Timol); Y= 28674.75x-0.0358

R2 =0.998 Donde:

y=Aabsorbancia, adimensional
28674.75= coeficiente de absortividad, Lmol-1 cm-1 (para la concentracin
en molaridad)
-0.0358=b indicador de errores de calibracion, dimensiones de la propiedad
R2 = Coeficiente de correlacion (confirma la linealidad de la recta)
En este caso b se desprecia ya que el valor de la celda es de 1cm
Los datos estadsticos nos indican que se presentaron errores experimentales
al momento de la preparacin de las muestras ya que nuestro coeficiente de
variacin se encuentra por encima de lo indicado que es del 2%, esto se debe a
que entre todos preparamos los sistemas y al no contar con el mismo criterio
de pipeteo y aforo este ocasiono cambios en la concentracin de nuestros
sistemas y al trabajar en partes por milln la minima variacin determina un
error experimental notorio.
Nuestro coeficiente de correlacin (r2) que fue del 0.9980 el cual nos confirma
la linealidad de la curva y de la misma forma obtuvimos una pendiente positiva
como lo indica los parmetros de medicin en una curva de calibracin; sin
embargo b=0.34 como m=0.064, nos indican errores experimentales ya que
estos deben ser los ms prximos a cero.
Los resultados obtenidos nos hablan de que fueron precisos ya que se presenta
concordancia entre los valores obtenidos, sin embargo no podemos determinar
la exactitud debido a que no se conoce el valor verdadero.

Conclusiones
Los objetivos planteados fueron cumplidos satisfactoriamente, ya que
comprobamos que una curva de calibracion es confiable si cumple con los
requerimientos (Utilizar soluciones diluidas, crear al menos 5 soluciones
estandares, R21, entre otros).
Se aprendio a utilizar el espectrofotometro asi como su fundamento teorico.
Se determinaron errores experimentales en la preparacin de la curva de
calibracin debido a que nuestro coeficiente de variacin se encuentra por
encima de un 2% que es lo permitido para este mtodo.

A pesar de ser un mtodo confiable, la espectrofotometria tiene su fundamento

en la ley de Lambert-Beer y esta tiene sus limitaciones (solo sirve para
soluciones diluidas <0.01 M) ya que relaciona la Absorbancia directamente con
la concentracion.
Las sustancias que poseen color absorben en la region del espectro
electromagntico visible (380-800nm). Mientras que las que no lo poseen
absorben en la region UV (10-380nm).
Se cuantifico azul de timol debido a que este indicador de PH, es capaz de
absorber radiacin en el intervalo del espectro electromagntico visible por
tener grupos cromoforos, as como electrones libres.