3B-2

GUA DE PRCTICAS

Unidad acadmica: EAP DE FARMACIA Y BIOQUMICA

CONTROL MICROBIOLGICO DE LOS MEDICAMENTOS

Autor (es): Mg. Ana Mara Chvez Fernndez

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

INTRODUCCIN

La posibilidad de acceder a medicamentos seguros, eficaces y de calidad es un derecho esencial de

la poblacin que siempre debe ser garantizado. El aseguramiento de la calidad implica un conjunto
de metodologas y procedimientos que exceden el control del producto terminado, e involucran
todos los aspectos que intervienen en el proceso de elaboracin.
Entre estos aspectos puede mencionarse la forma y el modo en que se recibe la materia prima en el
establecimiento elaborador, los procesos de produccin del medicamento, las caractersticas de los
espacios donde se llevan adelante esos procesos, los modos en que se depositan y tratan los
productos una vez terminados, y el funcionamiento del laboratorio de control de calidad de la
planta, entre otros. Estos controles se fundamentan en orientaciones tcnicas que se basan en el
conocimiento exacto de la informacin contenida en las principales obras de referencia en general y
las consideraciones microbiolgicas que aplican a la industria farmacutica en particular, en la
preparacin y el control de los medios de cultivo, las cepas de prueba, los equipos, los indicadores
biolgicos para esterilizacin y los desinfectantes empleados en la industria farmacutica, en el
aprendizaje de la metodologa del anlisis microbiolgico del agua y la aplicacin de los criterios e
interpretacin de resultados en la industria farmacutica y de la evaluacin microbiolgica de
cuartos limpios y ambientes controlados.
Adems de ello deben conocerse las pruebas previas a la evaluacin microbiolgica de un producto
farmacutico no estril y estril, las pruebas de aptitud de los mtodos as como

entender y

aplicar los criterios de validacin de los mtodos de anlisis microbiolgico.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

I. PRCTICA N 1
REVISIN SISTEMTICA Y USO PRCTICO DE LAS OBRAS OFICIALES:
FARMACOPEA DE LOS ESTADOS UNIDOS DE AMRICA (USP),
FARMACOPEA BRITNICA (BP)
Y FARMACOPEA EUROPEA (EP), EDICIONES VIGENTES
1.1

Marco terico

El conocimiento de las principales obras oficiales de referencia es un requisito indispensable

para el qumico farmacutico, entender la organizacin de su contenido permite consolidar su
conocimiento de la industria farmacutica en relacin a las pruebas microbiolgicas que
aplican a los procesos de elaboracin de productos farmacuticos (materia prima, excipientes,
almacenamiento, empaques, productos en proceso, productos terminados).
La preparacin de monografas se realiza en consulta con un grupo internacional de expertos y
usando como referencia las farmacopeas vigentes. Se hace hincapi en el uso de mtodos que
estn al alcance de laboratorios de control de calidad modestamente equipados en pases de
escasos recursos.
La certificacin de la calidad de los productos farmacuticos documentada en las
farmacopeas, se basa en el objeto de comercio internacional de proporcionar un instrumento
normativo y un vehculo para el intercambio de informacin entre las autoridades competentes
de los pases importadores y exportadores.
Las actividades de armonizacin concentradas inicialmente en las prcticas adecuadas de
fabricacin se han complementado con directrices sobre la inspeccin de los fabricantes, la
validacin de los procesos de fabricacin y las prcticas adecuadas de elaboracin de
productos farmacuticos y biolgicos destinados a la investigacin. A medida que la produccin
local de productos farmacuticos y biolgicos aumente y se propague a los nuevos pases
fabricantes, esas directrices tendrn una creciente pertinencia, puesto que servirn de
respaldo a las normas reconocidas internacionalmente, que forman la base de la garanta de la
calidad.
Contina la labor de seleccionar productos internacionales de referencia o de "comparacin"
para uso en estudios de equivalencia y de elaborar los Principios rectores para la autorizacin
reglamentaria de productos farmacuticos intercambiables procedentes de distintas fuentes
(genricos).
De tener xito, la armonizacin de los requisitos farmacuticos redundar en cuantiosos
ahorros del tiempo y de los costos que exige la elaboracin e investigacin de nuevos
medicamentos. Al estar de acuerdo sobre la documentacin y los expedientes bsicos comunes
relacionados con eficacia, inocuidad y calidad, se facilitarn los exmenes reglamentarios y el
reconocimiento internacional de los medicamentos autorizados.
La organizacin de las obras oficiales involucra pues, las advertencias o noticias generales, las
monografas (generales o por forma farmacutica y especficas o de formas farmacuticas) y
los captulos generales que incluyen los mtodos de anlisis.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

Para que las normas y los patrones sean, primero, aplicables y, luego, debidamente cumplidos,
todas las partes interesadas deben participar tan activamente como sea posible.
1.2

Competencias
Relaciona los tipo de medicamentos y formas farmacuticas, en funcin de los procesos
de fabricacin y los estndares que las obras oficiales exigen en cuanto criterios

microbiolgicos.
-

Practica el uso de las farmacopeas, la organizacin de su contenido, la bsqueda de la

informacin precisa en cuanto a estndares microbiolgicos.

Valora la importancia del cumplimiento de los estndares de las normas de calidad

microbiolgicas.

1.3
-

Materiales y equipos
Texto de las principales obras oficiales (ediciones vigentes):
o Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica (USP).
o Farmacopea Britnica (BP).
o Farmacopea Europea (EP).

1.4 Procedimiento
-

Discusin del material bibliogrfico revisado.

Elaboracin y presentacin de un mapa mental del contenido de las obras oficiales

revisadas, estableciendo un orden de prelacin en cuanto a la forma en que se presentan
los estndares en general y los criterios microbiolgicos en particular.

Presentacin del reporte final con las conclusiones.

Fig. 1.1. USP 32-NF 26

Fig. 1.2. BP 2009

Fig. 1.2. EP 6 Edicin

1.5 Resultados

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

1.6 Cuestionario
-

Defina lo siguiente:
o
o
o
o

Farmacopea.
Estndar.
Monografa.
Artculo farmacopeico.

Cul es la diferencia entre Especificacin y Criterio de aceptacin?. Explique y d

ejemplos.

1.7

Fuentes de informacin

Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP

32- NF 27).

Farmacopea Britnica 2008 (British Pharmacopoeia, 2009), 2009.

Farmacopea Europea Sexta Edicin (European Pharmacopoeia, 6 Ed.), 2009.
Farmacopea Internacional. Cuarta Edicin.
(International
Pharmacopoeia, fourth
edition), 2008.

Ulises E. Mapas mentales una forma de estimular las ideas. [Blog en internet]. 2007,
Agosto.
[acceso
26
de
julio
de
2009];
Disponible
en:
http://el50.com/2007/08/14/mapas-mentales-una-forma-de-organizar-y-estimularlas-ideas/Autor/es.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

II. PRCTICA N 2
PREPARACIN Y CONTROL DE MEDIOS DE CULTIVO, CONTROL DE CEPAS DE
PRUEBA, CONTROL DE EQUIPOS, REGISTRO Y EVALUACIN DE INFORMACIN
USO DE INDICADORES BIOLGICOS Y QUMICOS PARA ESTERILIZACIN EN LA
INDUSTRIA FARMACUTICA
2.1

Marco terico

Las buenas prcticas en un laboratorio de microbiologa involucra actividades que se basan en

varios principios, tales como las tcnicas aspticas, el control de los medios de cultivo, el
control de las cepas de prueba, el control de los equipos, el registro detallado as como la
evaluacin de los datos y la capacitacin del personal. La observancia de estos principios
coadyuvar a la confiabilidad y reproducibilidad de los mtodos microbiolgicos, considerando
la variabilidad que caracteriza a los mismos (vase USP 32, <1117> y <1111>).
El control per se requiere reconocer la importancia del uso de indicadores biolgicos para
esterilizacin, del uso de desinfectantes y adems del uso de inhibidores de la actividad
antimicrobiana; todos estos elementos necesarios para asegurar las buenas prcticas antes
mencionadas (vase USP 32, <1035>).
2.2

Competencias
Reconoce las tcnicas que sustentan las buenas prcticas de un laboratorio microbiolgico
y aplicarlas.
Aplica y experimenta las buenas prcticas microbiolgicas ejecutando las operaciones per
se.
Asume la optimizacin de las prcticas microbiolgicas en la liberacin de productos
farmacuticos.

2.3
-

Materiales y equipos
Materiales, Reactivos y Medios de cultivo:
o 30 Tubos estriles de 18 x 150 mm (con tapa rosa)
o 28 Placas Petri estriles descartables
o 12 Placas Rodac estriles descartables
o 7 Frascos x 250 mL
o 1 Frasco x 1 L
o 4 Probetas x 100 mL x 250 mL
o 1 Probeta x 1 L
o 4 Beaker de 100 mL
o 20 Pipetas x 1 mL
o 4 Pipetas x 2 mL
o 2 Micropipeta de 10-100 uL
o 30 Tips
o 2 Litros de agua destilada
o 8 Baguetas de vidrio
o 1 Bao de agua a ebullicin
o 4 Trpodes
o 4 Ollas
o 4 Guantes quirrgicos estriles
o 4 Apsitos de algodn
o Cepas de estudio:

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

Staphylococcus aureus, cultivo de 24 horas en Agar Digerido de Casena y Soja en

tubo inclinado.
Aspergillus niger, cultivo de 5 das en Agar Sabouraud en tubo inclinado
Candida albicans, cultivo de 5 das en Agar Sabouraud en tubo inclinado.
Reactivos:
o Fosfato monobsico de potasio (0,034 g en 800 mL de agua destilada con Hidrxido
de Sodio o cido Clorhdrico 1N.
o Polisorbato (0,05 gramos en 100 mL de buffer)
o Agar Digerido de Casena y Soja (6 g por cada 150 mL de agua destilada (3); 8 g por
cada frasco con 200 mL de agua destilada (1)).
o Agar Sabouraud Glucosado (9,75 g por cada 150 mL de agua destilada (2); 6,5 g por
100 mL de Agar Sabouraud Glucosado(1)).
o 4 Frascos con alcohol al 70%
o 1 Frasco con Solucin de Hidrxido de Sodio 1N
o 1 Frasco con Solucin de cido Clorhdrico 1N
o 1 Frasco con Polisorbato 80 (Tween 80)
Equipos:
o Estufa u horno
o Autoclave
o 1 Vortex
o 1 Potencimetro
o 2 Termmetros
o 4 Balanzas

2.4 Procedimiento
2.4.1 Medios de Cultivo:
Operaciones preliminares:
- Del personal y del rea de trabajo:
Proveerse de los elementos de proteccin necesarios para la prctica microbiolgica.

Fig. 2.1. Elementos de proteccin

Limpiar y desinfectar la zona de trabajo.

Fig. 2.2. Algodn y alcohol

Registro:
Cada vez que se prepara un medio de cultivo, se procede al registro respectivo en el formato
correspondiente, en el cual se anotan los siguientes datos: fecha, nombre del medio de
cultivo, lote, cantidad preparada, pH, nmero de lote asignado al medio preparado.
Preparacin:

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

- Escoger un recipiente limpio y de una capacidad que exceda aproximadamente en un 40%, el

volumen del medio a preparar.
- Colocar la cinta indicadora de esterilizacin a todos los envases en donde se distribuirn los
medios preparados.
- Rotular los envases con el nombre del medio de cultivo, lote de preparacin y fecha de
preparacin.
- Medir en una probeta el volumen de agua purificada a usar.
- Pesar la cantidad de medio de cultivo deshidratado siguiendo las indicaciones dadas por el
fabricante (etiqueta del frasco del medio respectivo).
- Para el caso de un medio de cultivo no deshidratado, pesar los ingredientes Individualmente,
unirlos en un recipiente y luego proceder igual que el medio deshidratado.

Fig. 2.3. Uso de la balanza para pesar medios de cultivo

AGAR
PLATE
COUNT

AGAR
PLATE
COUNT

Fig. 2.4. Rotulado del material de vidrio

- En el recipiente elegido depositar una parte del agua medida, luego agregar el medio de
cultivo y completar con el resto del agua.
- Disolver el medio, si se trata de caldos nutritivos, con suficiente agitacin, si se trata de
medios de cultivo que contienen agar, disolver poco a poco con agua caliente hasta
observar que el medio est transparente.
- Tomar el pH del medio con el potencimetro o con cintas indicadoras de pH de rango
adecuado. Si fuera necesario, corregir el pH mediante el uso de NAOH HCl diluidos.
- Distribuir el medio de cultivo preparado en frascos, tubos u otro material segn el anlisis a
realizar.
Esterilizacin
- Cerrar los envases que contienen el medio de cultivo disuelto.
- Proceder a la esterilizacin en autoclave siguiendo las indicaciones de esterilizacin para
cada medio.
Control
- Distribuir los medios que contienen agar y as lo requieran en placas petri estriles y dejarlos
solidificar.
- Incubar los medios preparados incluyendo los distribuidos en las placas petri a una
temperatura de 30C 35C por 48 horas.
- Transcurrido el periodo de incubacin retirar los medios y almacenarlos en condiciones
adecuadas hasta su uso.

- Los
F-CV3-3B-2

Expiracin
mediosFig.
de2.5.cultivo
preparados y esterilizados, ya
Rotulado de las placas
Rev. Junio 2007

sean conservados en los recipientes que fueron esterilizados o dispensados en otros envases
en forma asptica, sern utilizados hasta un mes despus de su preparacin, en la
refrigeradora a una temperatura de 2C 8C, luego del cual sern eliminados si no se
utilizaron.
- Tambin se pueden almacenar a temperatura ambiente protegidos de la luz por un perodo
mximo de 15 das.
- Los frascos de medios de cultivo, cerrados, tendrn la vigencia que reporta el fabricante,
siempre que hayan sido conservados en condiciones adecuadas.
- Los medios de cultivo se emplearn dentro de fecha de vigencia, salvo que presenten
manifestacin visible de su deterioro, por ejemplo: en medios no reconstituidos, cambio de
color, apelmasamiento del polvo, etc. o en medios reconstituidos, agrietamiento por
desecacin, cambio de color.

Fig. 2.6. Control de los medios de cultivo

Fig. 2.6.1. Estufa de esterilizacin

Fig. 2.6.2. Uso de indicadores

Fig. 2.7.2.Indicadores
Qumicos y Biolgicos

2.4.2 Buffer Fosfato pH 7,2:

Solucin Stock
- Disolver 34 g de fosfato potasio monobsico en 500mL de agua purificada en una fiola de
1000 mL
F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

- Ajustar el pH a 7,2 0,2

- Homogenizar y esterilizar a 121C
- Guardar en la refrigeradora de 2C 8C
Solucin de uso
- Para 1 Litro, transferir 1,25 mL de la solucin stock a una fiola de 1000 mL
- Aadir aproximadamente 500mL de agua purificada, agitar, luego aadir 1g de tween 80,
agitar y llevar a volumen con agua purificada.
- Ajustar el pH a 7,2 0,2
- Esterilizar.
2.5 Resultados
Registrar los resultados obtenidos.
Presentacin del reporte final con las conclusiones.
2.6 Cuestionario
-

Explique la diferencia entre un mtodo trazable y otro que no lo es.

Presente un formato de reporte que demuestre la trazabilidad en la preparacin de los
medios de cultivo del laboratorio de microbiologa? Explique y d ejemplos.

2.7 Fuentes de informacin

- Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP
32- NF 27).
- Cuesta A. Aseguramiento de calidad. Medios de Cultivo y Reactivos. [Internet]. 2006,
Noviembre.
[acceso
26
de
julio
de
2009];
Disponible
en:
http://www.rlc.fao.org/es/inocuidad/codex/rla3014/pdf/presen3.pps

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

III. PRCTICA N 3
TOMA DE MUESTRA Y ANLISIS MICROBIOLGICO DEL AGUA
CRITERIOS E INTERPRETACIN DE RESULTADOS EN LA INDUSTRIA
FARMACUTICA
3.1

Marco terico

El agua se usa ampliamente como materia prima, ingrediente y disolvente en el procesamiento,

formulacin y fabricacin de productos farmacuticos, ingredientes farmacuticos activos
(API), productos intermedios, artculos farmacopeicos y reactivos analticos.
Para asegurar el cumplimiento de determinadas normas de calidad microbiogica y qumica
mnimas, el agua usada en la produccin de frmacos o la que usa como fuente de alimentacin
para la preparacin de distintos tipos de aguas purificadas debe cumplir los requisitos de las
reglamentaciones bsicas relativas al agua potable (vase USP 32, <1231>).
3.2

Competencias

- Reconoce la importancia y adquiere destreza en la realizacin de controles microbiolgicos

del agua.
- Aplica y experimenta la metodologa existente para el anlisis de agua en la industria
farmacutica.
- Distingue los requerimientos de los tipos de agua en la industria farmacutica.
3.3

Materiales y equipos

Materiales
o 4 Frascos estriles x 500 mL con 0,5 mL de Tiosulfato de Sodio al 3%
o 4 Frascos x 500 mL con 300 mL de agua destilada estril
o 4 Mecheros Bunsen
o 4 Mecheros de alcohol
o 8 Pipetas bacteriolgicas de vidrio estriles x 10 mL con algodn
o 4 Equipos de filtracin estriles (embudo y porta membrana) dos para agua potable y
otro dos para agua purificada
o 4 Bombas de vaco
o 4 Kitasatos estriles x 1 L
o 30 Membranas filtrantes de 0,45 m de dimetro con cuadrculas, estriles
o 8 Pinzas estriles
o 10 Placas petri con agar recuento de placa (plate count) o agar de recuento de placa
de mtodos estndar o TGYA.
o 4 Frascos con 100 mL de Agar Recuento de Placa (Plate Count) o Agar de Recuento de
Placa de Mtodos Estndar o TGYA licuado
o 12 Pipetas estriles x 1 mL x 2 mL
o 24 Placas Petri estriles
o 4 Placas con Agar Mac Conckey.
o 4 Placas con Agar Cetrimide.
Medios de Cultivo
o Agar de Recuento de Placa (plate count) o Agar de Recuento de Placa de Mtodos
Estndar (TGYA): 4,125 g para 150 mL para 6 placas con medio solidificado.
o Agar de Recuento de Placa (plate count) o Agar de Recuento de Placa de Mtodos
Estndar (TGYA) 2,35 g por cada 100 mL de medio licuado.
o Agar Mac Conckey, 8 g para 160 mL de medio.
o Agar Cetrimide, 7,2 g para 160 mL de medio.

3.4 Procedimiento
-

F-CV3-3B-2

Toma de muestra:
o Desinfectar el grifo o punto de salida del agua, flameando con un mechero de alcohol.

Rev. Junio 2007

o Dejar correr 1 o 2 minutos el agua y proceder a la toma de muestra de 300 mL a 500

mL.
o Si se trata de aguas de cisterna o pozos, se sumergir el frasco sin tapa, permitiendo
el ingreso del agua.
o Utilizar un frasco estril de boca ancha con tapa rosca para la toma de muestra; si se
trata de agua potable el frasco deber contener 1 mL de tiosulfato de sodio por cada
litro de agua muestreada (inactivando el cloro presente en el agua potable).
o La muestra debe tomarse con sumo cuidado evitando rozaduras y lo mas estril como
sea posible, en el caso de agua potable o de cisterna.
o Procesar la muestra dentro de las dos primeras horas despus de haber sido
recolectada y si no fuera posible se deber mantener la muestra en refrigeracin (2C
a 8C durante mximo 12 horas).
o Cerrar hermticamente el frasco y etiquetar.
Recuento
o Rotular el material a utilizar.
o Volumen de muestra:
Vertido en Placa: 1,0 mL
Este mtodo se aplica para agua potable.
Filtracin por Membrana: 100 mL y 10 mL
Este mtodo se aplica para agua destilada y agua potable; en el caso de agua
destilada se filtran volmenes de 100 mL para cada medio a emplear (APC, MC, AC)
y en el caso de agua potable se filtran 10 mL tambin para cada medio (APC, MC,
AC).
o Medio de cultivo: Agar Recuento de Placa de Mtodo Estndar o TGYA o Agar Plate
Count
o Condiciones de Incubacin: 30C a 35C.
o Tiempo de incubacin: 48 a 72 horas.
Mtodo de Filtracin por Membrana

Mtodo de Vertido en Placa

Fig. 3.1. Sistema de filtracin:

Filtracin por Membrana

3.5 Resultados
Registrar los resultados obtenidos.

Fig. 3.2. Siembra por

vertido en placa

3.6 Cuestionario
- Defina:
o Niveles de alerta
o Niveles de accin.
3.7
-

F-CV3-3B-2

Sustente el seguimiento microbiolgico que aplica a los diferentes tipos de agua.

Fuentes de informacin
Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP
32- NF 27).
World Health Organization. WHO Technical Report Series, No. 929, Thirty-ninth report.
2005. Annex 3. WHO Good Manufacturing Practices: water for pharmaceutical use.

Rev. Junio 2007

IV. PRCTICA N 4
TOMA DE MUESTRA Y ANLISIS MICROBIOLGICO DE AMBIENTES Y SUPERFICIES
CRITERIOS E INTERPRETACIN DE RESULTADOS EN LA INDUSTRIA
FARMACUTICA
4.1

Marco terico

Dado que los microorganismos se desarrollan en una amplia variedad de ambientes naturales,
es importante controlar su presencia, ms an cuando en la industria farmacutica se llevan a
cabo procesamientos aspticos de frmacos a granel, formas farmacuticas y en ciertos casos,
dispositivos mdicos, adems de la necesidad de la necesidad del establecimiento y control de
la calidad microbiolgica de ambientes controlados (vase USP 32, <1116>).
4.2

Competencias
Reconoce la importancia y adquiere destreza en la realizacin de controles
microbiolgicos de los ambientes en la industria farmacutica.
Aplica y experimenta la metodologa para la toma de muestra de ambientes y
superficies.
Observa las especificaciones y requerimientos de los cuartos limpios y ambientes
controlados en la industria farmacutica.

4.3

Materiales y Equipos
-

Materiales:

o 4 Lminas de papel manteca estriles de dimensin A4, que en la parte central

presenten un recuadro recortado de 10 x 10 cm
o 4 Tubos de 30 x 20 mm conteniendo 10 hisopos estriles cada uno
o 12 Tubos estriles de 18 x 150 mm
o 20 Pipetas estriles x 1 2 mL
o 1 Vortex
o 40 Placas Petri estriles descartables
o 4 Probetas estriles x 100 mL
o 4 Frascos de 100 mL de Agar Digerido de Casena y Soja.
o 4 Frascos de 100 mL Agar Sabouraud Glucosado.
o 4 Tubos con 5 mL de Cloruro de Sodio al 0,9 %.
o 12 Placas Rodac con Agar Digerido de Casena y Soja*.
o 16 Placas Petri con Agar Digerido de Casena y Soja*.
-

Medios de Cultivo y Reactivos:

o
o
o

Agar Digerido de Casena y Soja: 4 g por cada 100 mL de medio.

Agar Sabouraud Glucosado: 6,5 g por cada 100 mL de medio.
Cloruro de Sodio: 0,45 g de Cloruro de Sodio en 50 mL de agua destilada

4.4 Procedimiento
-

Microorganismos Viables Transportados por el Aire:

o Placas de Sedimentacin.
Microorganismos Viables en Superficies:
o Placas de contacto Rodac (Replicate Organism Direct Agar Contact).
o Hisopado.

_________________________
* Material preparado en la prctica N 2

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

Fig. 4.2. Solucin de enjuague

Fig. 4.1. Hisopos

Fig. 4.3. Placas Rodac

Control de ambientes
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o

Seleccionar el rea del laboratorio para realizar el control ambiental.

Colocar placas petri con Agar Digerido de Casena de Soya (por duplicado cada
punto a monitorear) por espacio de 20 minutos como mnimo.
Realizar el mismo procedimiento pero esta vez exponiendo placas petri con agar
Sabouraud Glucosado.
Luego de la exposicin, proceder a incubar:
Las placas de Agar Digerido de Casena de Soya a 30C a 35 oC, por dos das
Las placas de Agar Sabouraud Glucosado a 20 C a 25 oC, por cinco das.
Realizar las observaciones diarias de las placas para evidenciar el crecimiento
microbiano y reportar los resultados obtenidos.
Realizar las observaciones al microscopio y reportar los resultados obtenidos:
Para las bacterias realizar primero la coloracin Gram.
Para los hongos preparar lminas con hidrxido de potasio (KOH).

Control de superficies

Seleccionar el mtodo adecuado para los objetos asignados.

o Placas RODAC:
Aplicar la placa sobre la superficie a evaluar.
o Hisopado:
a. Embeber el hisopo en solucin salina e hisopar segn el tipo de superficie a
evaluar.
- Usando la plantilla con la superficie delimitada haciendo uso de las lminas
con el rea de 10 x 10 cm. , hacindolo primero en forma horizontal, luego
vertical, en diagonal de derecha a izquierda y despus de izquierda a derecha.
- Hisopado directo.
b. Terminada la operacin introducir el hisopo en un tubo que contiene 5 mL de
solucin salina, rotular y agitar en un vortex por 1 minuto.
c. Tomar 1 mL y trasladarlo a una placa estril para adicionarle 15 mL de agar
digerido de casena y soja.
d. Incubar de 30 a 35C por 48 a 72 horas.
e. Reportar las observaciones y anotar los resultados obtenidos.
f. Realizar las observaciones al microscopio y reportar los resultados obtenidos:
i. Para las bacterias realizar primero la coloracin Gram.
ii. Para los hongos preparar lminas con hidrxido de potasio (KOH).
4.5 Resultados
Registrar los resultados obtenidos.
F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

4.6 Cuestionario
4.7
-

F-CV3-3B-2

En qu se basan las diferentes normativas que clasifican los ambientes controlados?

Qu clase de ambientes requieren un constante monitoreo ambiental ?
Fuentes de informacin
Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP
32- NF 27).

Rev. Junio 2007

V. PRCTICA N 5
PRUEBAS DE PROMOCIN DE CRECIMIENTO Y APTITUD DEL MTODO PREVIO
AL ANLISIS DE UN PRODUCTO FARMACUTICO NO ESTRIL: LISTA DE
CHEQUEO Y EJECUCIN
5.1

Marco terico

El examen microbiolgico de productos farmacuticos no estriles incluye en primera instancia

las pruebas de recuento cuantitativo de bacterias mesfilas y hongos que pueden desarrollarse
en condiciones aerbicas.
Si los productos a examinar poseen actividad antimicrobiana, sta deber eliminarse o
neutralizarse para lo cual los inactivadores debern ser de probada eficacia adems de ser
inocuos para los probables microorganismos contaminantes.
Previo al anlisis debern realizarse la prueba de promocin de crecimiento y la prueba de
aptitud del mtodo de recuento, sta ltima ser definida segn la naturaleza del producto y
el lmite de microorganismos requerido (vase USP 32: <61>, <62>).
5.2 Competencias
5.3
-

F-CV3-3B-2

Reconoce
la necesidad de ejecutar procedimientos previos a las pruebas
microbiolgicas de recuento en productos no estriles.
Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de promocin de crecimiento y
de aptitud de los mtodos de recuento microbiano.
Material y Equipos
Materiales
o 35 Tubos con 10 mL de Buffer pH 7,2 (volumen total 350 mL).
o 15 Tubos con 10 mL de Buffer pH 7,2 (volumen total 350 mL) ms Polisorbato al
0,05%
o 88 Placas Petri estriles
o 5 Pipetas de 0,1 1,0 mL
o Gradillas
o 15 Esptulas de Drigalsky estriles
o 24 Pipetas de 2,0 mL
o 12 Placas con Agar Manitol Salado
o 12 Placas con Agar Cetrimide
o 12 Placas con Agar Sabouraud
o 4 Frascos con 100 mL de Agar Digerido de Casena y Soja
o 4 Frascos con 100 mL de Agar Manitol Salado
o 4 Frascos con 100 mL de Agar Cetrimide
o 4 Frascos con 100 mL de Agar Sabouraud
o 8 Tubos com 9 mL de Caldo Agar Digerido de Casena y Soja
o 4 Tubos com 9 mL de Caldo Sabouraud
Medios de Cultivo y Reactivos:
o Fosfato monobsico de potasio
o Agar Manitol Salado
o Agar Cetrimide
o Agar Sabouraud
o Agar Digerido de Casena y Soja
o Agar Manitol Salado
o Agar Cetrimide
o Agar Sabouraud Glucosado
o Caldo Digerido de Casena y Soja
o Caldo Sabouraud
Cepas de estudio:

Rev. Junio 2007

o
o
o

4 Cultivos puros de Aspergillus niger en Agar Sabouraud (agar inclinado), de por lo

menos 5 a 7 das.
4 Cultivos puros de Staphylococcus aureus en Agar Casoy (agar inclinado), de por lo
menos 24 horas antes de la prctica.
4 Cultivos puros de Pseudomonas aeruginosa en Agar Casoy (agar inclinado), de por
lo menos 24 horas antes de la prctica.

5.4 Procedimiento
Para la prueba de promocin del crecimiento de los medios se emplearn los mtodos de:
Vertido en placa, Extensin en superficie e Inoculacin Directa utilizando:
a. Agar Digerido de Casena y Soja.
b. Agar Saboureaud Dextrosa.
c. Agar Cetrimide.
d. Agar manitol salado.
e. Caldo Digerido de Casena y Soja.
-

Promocin del Crecimiento de los Medios (Medio ms inculo)

o

o
o
o
-

Mtodo de Vertido en Placa (vase figura 3.2.):

o

o
o
o
-

Inocular los medios con no ms de 100 ufc de los siguientes microorganismos.

- Staphylococcus aureus (ATCC 6538) o ambiental, Pseudomonas aeruginosa (ATCC
9027) o ambiental, para los medios medios (a) y (b).
Inocular los medios con no ms de 100 ufc de los siguientes microorganismos.
- Aspergillus niger (ATCC 16404) o ambiental, para el medio (d).
Incubar de 30C a 35C por tres das para el caso de las bacterias y de 20C a 25C
por 5 das para el caso de hongos.
Reportar los resultados obtenidos teniendo en consideracin que el resultado no
debe diferir en un factor mayor que 2 a partir del valor calculado en medios slidos.
Agregar 1 mL de la suspensin (inculo de 100 ufc) y 15 a 20 mL de los medios
slidos adecuado segn sea el caso, manteniendo la temperatura de a no ms de
45C.
Incubar segn se indic anteriormente.
Realizar el recuento y reportar la media aritmtica del nmero de ufc obtenido en
cada medio.
Contrastarlo con el nmero de ufc del inculo original.

- Mtodo de Extensin en Superficie:

o
o
o
o

Esparcir un volumen de 0,1 mL de suspensin (inculo de 100 ufc) en las placas que
contienen los medios segn sea el caso.
Incubar segn se indic anteriormente.
Realizar el recuento y reportar la media aritmtica del nmero de ufc obtenido en
cada medio
Contrastarlo con el nmero de ufc del inculo original.

Fig. 5.1. Siembra en Superficie

- Inoculacin Directa:

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

Agregar un inculo de suspensin bacteriana correspondiente equivalente a 100 ufc,

al caldo especfico.
Tabla 5.2. Preparacin de las Cepas para las Pruebas de de Promocin de Crecimiento y
Aptitud del Mtodo de Recuento e Presencia del Producto

Microorganismos

5.5

Preparacin de
Cepas

Promocin de Crecimiento
RTMA

RTCHL

S. aureus

ADCS o CDCS
30 35C
18 24 h

ADCS o CDCS
100 ufc
30 35C
3d

__

P. aeruginosa

ADCS o CDCS
30 35C
18 24 h

ADCS o CDCS
100 ufc
30 35C
3d

__

B. subtilis

ADCS o CDCS
30 35C
18 24 h

ADCS o CDCS
100 ufc
30 35C
3d

__

C. albicans

A. SAB o C.SAB
20 25C
23d

A. niger

A. SAB o PDA
20 25C
57d

ADCS
100 ufc
30 35C
5d
ADCS
100 ufc
30 35C
5d

A. SAB
100 ufc
20 25C
5d
A. SAB
100 ufc
20 25C
5d

Aptitud del Mtodo de Recuento en

Presencia del Producto
RTMA

RTCHL

ADCS o CDCS
(NMP)
100 ufc
30 25C
3d
ADCS o CDCS
(NMP)
100 ufc
30 25C
3d
ADCS o CDCS
(NMP)
100 ufc
30 25C
3d
ADCS
100 ufc
20 25C
5d
ADCS
100 ufc
20 25C
5d

__

__

__

SAB
100 ufc
20 25C
5d
SAB
100 ufc
20 25C
5d

Resultados

Emisin de reporte final.

5.6 Cuestionario
-

5.7
-

F-CV3-3B-2

Cul es la finalidad para la aplicacin de los diferentes mtodos de recuperacin de

microorganismos ?
De no contar con suficiente material de vidrio para la ejecucin de las pruebas de
promocin de crecimiento a qu microorganismos
se restringira esta prueba
preliminar?
Fuentes de informacin
Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP
32- NF 27).
Farmacopea Internacional. Cuarta Edicin. (International
Pharmacopoeia, fourth
edition), 2008.

Rev. Junio 2007

VI. PRCTICA N 6
ANLISIS MICROBIOLGICO DE FORMAS SLIDAS ORALES: TABLETAS Y CPSULAS
VALIDACIN DEL MTODO
61.1 Marco terico
El anlisis microbiolgico de estas formas farmacuticas incluye pruebas que permiten calcular
el nmero de microorganismos aerbicos viables y el nmero de hongos filamentosos y
levaduras presentes, as como determinar la ausencia de especies microbianas patgenas
consideradas como indicadores de contaminacin(vase USP 32: <61>, <62>).
6.2 Competencias
-

Reconoce la importancia de comprobar la aptitud de los mtodos de anlisis: recuento y

pruebas de microorganismos especficos.

Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de microorganismos especficos de

una forma farmacutica slida oral.

6.3 Material y Equipos

- Materiales
o 24 Tubos x 9 mL de Buffer pH 7,2
o 12 Tubos con 9 mL de Caldo Mossel
o 12 Frascos de 250 mL, con 90 mL de Buffer pH 7,2
o 8 Frascos de 250 mL, con 100 mL de Buffer pH 7,2
o 4 Frascos con 200 mL de Agar Digerido de Casena y Soja
o 4 Frascos con 200 mL de Agar Sabouraud Dextrosa.
o 4 Frascos con 90 mL de Caldo Mossel.
o 16 Frascos con 90 mL de Caldo Digerido de Casena y Soja
o 4 Frascos con 100 mL de Caldo Mac Conckey
o 4 Frascos con 100 mL de Caldo Rappaport Vassiliadis.
o 12 Placas con Agar Manitol Salado
o 4 Placas con Agar Cetrimide
o 16 Placas con Agar Violeta Rojo Bilis.
o 32 Pipetas de 1 mL, 2mL
o 12 Pipetas de 10 mL.
o 1 Bao Mara a 22,5 C
o 20 Pipetas de 5 mL.
o 4 Asas de siembra
- Medios de Cultivo y Reactivos
o Buffer pH 7,2
o Caldo Mossel
o Agar Digerido de Casena y Soja
o Agar Sabouraud Glucosado
o Caldo Mossel
o Agar Digerido de Casena y Soja
o Caldo Mac Conckey
o Caldo Rappaport Vassiliadis.
o Agar Manitol Salado
o Agar Cetrimide
o Agar Violeta Rojo Bilis
F-CV3-3B-2

Cepas de estudio:
Rev. Junio 2007

Staphylococcus aureus y Pseudomonas aeruginosa, cultivo de 24 horas en Agar Digerido

de Casena y Soja en solucin amortiguada de fosfato monobsico de potasio de pH 7,2
que permitan obtener inculos de 100 ufc.
Aspergillus niger, cultivo en solucin amortiguada de fosfato monobsico de potasio ms
0,05 % de polisorbato 80, de pH 7,2 de 5 das que permita obtener inculos de 100 ufc.

6.4. Procedimiento
6.4.1.Criterios a aplicar segn la solubilidad de las muestras:
Proceder a preparar las muestras a analizar para cada una de las siguientes pruebas segn los
criterios que se describen:
a. Productos solubles en agua: Dilucin 1 en 10 (o adicionales de ser necesario) del producto a
examinar (ajustando el pH de 6 a 8, de ser necesario), en:
- Solucin Amortiguada de Cloruro de Sodio-Peptona de pH 7,0
- Solucin Amortiguada de Fosfato de pH 7,2
- Caldo Digerido de Casena y Soja
b. Productos no grasos insolubles en agua: dem al anterior; puede aadirse un tensoactivo (1
g por L de polisorbato 80).

Fig. 6.1. Dilucin de

la muestra a evaluar

6.4.2. Pruebas de Verificacin de Propiedades de Promocin de Crecimiento e Inhibitorias de

los Medios
Analizar cada preparacin de medio verificando las propiedades promocin de crecimiento de
los medios en general, as como las propiedades inhibitorias especficas y las propiedades
indicadoras de los medios selectivos y diferenciales, segn sea el caso (vase tabla 6.1.a. y b.).
Tabla 6.1.a. Propiedades de Promocin de Crecimiento, Inhibitorias e Indicadoras de los Medios
Prueba
Medio
Propiedad
Cepa
Bacterias Gram- Negativas
tolerantes a la Bilis
Escherichi coli

Prom. de crecimiento
Inhibitoria
Prom. Crecim + Indic.
Prom. De crecimiento
Inhibitoria
Prom. Crecim + Indic.

C. Moss
VRB
C.Mc
MC

E. Coli / P. aeruginosa
S. aureus
E. Coli / P. aeruginosa
E. coli
S. aureus
E. coli

Tabla 6.1.b. Propiedades de Promocin de Crecimiento, Inhibitorias e Indicadoras de los Medios

Prueba

Medio

CRV
Salmonella
XLD
Pseudomona aeruginosa

CT

Staphylococcus aureus

Mn

Clostridios
Candida albicans

F-CV3-3B-2

C.Ref
A.Col
C.Sab
SAB

Propiedad

Cepa

Prom. de crecimiento
Inhibitoria
Prom. Crecim + Indic.
Indicadora
Prom. de crecimiento
Inhibitoria
Prom. Crecim + Indic.
Inhibitoria

S. typhimurium
S. aureus
S. typhimurium
E. coli
P. aeruginosa
E. coli
S. aureus
E. coli

Prom. de crecimiento

Cl. sporogenes

Prom. de crecimiento

Cl. sporogenes

Prom. de crecimiento

C. albicans

Prom. Crecim + Indic.

C. albicans

Rev. Junio 2007

6.5.
Pruebas de Aptitud de los Mtodos de Recuento y de Microorganismos Especficos:
Para cada producto nuevo a analizar, realizar una preparacin de la muestra de 1 en 10, al
momento de la mezcla, agregar cada cepa de prueba en el medio indicado en una cantidad de
no ms de 100 ufc (medio ms producto a analizar y ms inculo).
Realizar la prueba segn se indica en el perodo ms corto de incubacin; cualquier
actividad
antimicrobiana, requiere de la neutralizacin correspondiente.
A. Aptitud del Mtodo de Recuento
a. Inoculacin y dilucin: Agregar a las muestras de productos preparadas y a un control (sin
producto), un volumen de suspensin microbiana para obtener un inculo de 100 ufc.
b. Recuperacin de microorganismos en presencia de producto:
Filtracin por Membrana (vase figura 3.1.):
- Transferir una cantidad que represente 1 g del producto al filtro de membrana con un
volumen adecuado de diluyente.
- Transferir el filtro de membrana a la superficie del Agar Digerido de Casena y Soja
para determinar el recuento total de microorganismos aerobios (RTMA).
- Transferir el filtro de membrana a la superficie del Agar Saboureaud Dextrosa para
determinar el recuento total combinado de hongos filamentosos y levaduras (RTCHL).
- Incubar.
- Realizar el recuento y reportar.
Recuento en Placa:
Trabajar por duplicado cada medio y usar el recuento medio del resultado.
- Mtodo de Vertido en Placa (vase figura 3.2.):
Agregar 1 mL de la muestra preparada y 15 a 20 mL de los medios slidos, Agar
Digerido de Casena y Soja, y,
Agar Saboureaud Dextrosa segn sea el caso, manteniendo la temperatura de
ambos medios a no ms de 45C.
Incubar segn se indica en 5.1.c.
Realizar el recuento y reportar la media aritmtica del nmero de ufc obtenido
en cada medio
Contrastarlo con el nmero de ufc del inculo original.
Mtodo de Extensin en Superficie:
- Agregar de 15 a 20 mL de los medios slidos, Agar Digerido de Casena y Soja, y,
Agar Sabouraud Dextrosa segn sea el caso, mantenidos a la temperatura de no ms
de 45C, a cada placa.
Dejar solidificar.
Esparcir un volumen de 0,1 mL de la muestra preparada.
Incubar.
Realizar el recuento y reportar la media aritmtica del nmero de ufc obtenido
en cada medio
Contrastarlo con el nmero de ufc del inculo original.
c. Neutralizacin/Eliminacin de la actividad Antimicrobiana:
- Comparar el nmero de microorganismos recuperados a partir de la muestra
preparada y diluida versus el nmero de microorganismos recuperados a partir de la
muestra control.
- Si se inhibe el crecimiento en un factor mayor a 2 modificar el procedimiento segn
se indica a continuacin:
i. Aumentando el volumen del diluyente o medio de cultivo.
ii. Incorporando agentes neutralizantes generales o especficos en el diluyente.
iii. Filtracin por membrana.
iv. Una combinacin de todos los anteriores.
B. Aptitud de los mtodos para las pruebas de microorganismos especficos.
a. Bacterias Gram Negativas Tolerantes a la bilis (vase Fig. 6.2.a).
Preparar las muestras e inocularlas, usando como diluyente Caldo Digerido de Casena y
Soja. Mezclar e incubar a 20 - 25C por 2 horas (suficiente para resucitar bacterias),
pero no ms de 5 horas.
- Prueba de Ausencia: usar un volumen correspondiente a 1 g del producto e inocular
Caldo Mossel para enriquecimiento de Enterobacterias: incubar de 30 a 35C, durante
F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

24-48 horas. Subcultivar en Agar Violeta Rojo Bilis Glucosa; incubar de 30 a 35C
durante 18-24 horas. El producto cumple con la prueba si no se desarrollan colonias.
- Prueba Cuantitativa: inocular Caldo Mossel para enriquecimiento de Enterobacterias
con preparaciones que contengan 0,1 0,01 g y 0,001 g mL de la muestra a evaluar;
incubar a 30 - 35C durante 18-24 horas. El producto cumple con la prueba si no se
desarrollan colonias; indicar la menor cantidad de producto que produce resultado
positivo y la mayor cantidad de producto que produce resultado negativo(vase Tabla
6.2.a.).
Tabla 6.2. Interpretacin de Resultados en la Prueba Cuantitativa de
Bacterias Gram Negativas Tolerantes a la Bilis
Cantidad probable de
Resultados para cada cantidad del producto
bacterias

0,1 g mL

0,01 g mL

0,001 g mL

(por g o mL del producto)

+
+
+
-

+
+
-

+
-

Ms de 103
Menos de 103 y ms de 102
Menos de 102 y ms de 10
Menos de 10

CDCS (90mL)
10 g 10mL

20 25C
25h

10mL

0,1 g. o mL

0,1 g. o mL

0,1 g. o mL.

Caldo Mossel
(100mL)

Caldo Mossel (10mL)

30 35C
24 48 h

VRB

VRB

30 35C
24 48 h

30 35C
24 48 h

Prueba de Ausencia

F-CV3-3B-2

Fig. 6.2.a. Bacterias Gram

Negativas Tolerantes a a la
Bilis

Prueba Cuantitativa

Rev. Junio 2007

b. Salmonella: Preparar las muestras e inocularlas, usando como diluyente Caldo Digerido de
Casena y Soja; usar no menos de 10 g 10 mL para inocular Caldo Digerido de Casena y
Soja, mezclar e incubar de 30 a 35C durante 18-24 horas. Agitar y transferir 1 mL a 100 mL
de Caldo Digerido de Casena y Soja e incubar a de 30 a 35C durante 18-24 horas. Transferir
0,1 mL a 10 mL de Caldo Rappaport Vassiliadis para Enriquecimiento de Salmonella, e incubar
a 30 - 35 C, durante 18-24 horas. Subcultivar en una placa de Agar Xilosa Lisina
Desoxicolato. Incubar a una temperatura de 30-35C por 18-48 horas (vase Fig. 6.2.b.).
El crecimiento de colonias color rojo (con o sin centro negro) indica posible presencia de
Salmonella, lo cual debe confirmarse con pruebas de identificacin.

CDCS (90mL)
10g o 10mL

30 35C
18 24 h

0,1mL

Caldo Rappaport
Vassiliadis (10mL)
30 35C
18 24 h

XLD
30 35C
18 48 h
Fig. 6.2.b. Samonella sp.

c. Escherichia coli: Preparar las muestras e inocularlas, usando como diluyente Caldo Digerido de
Casena y Soja; usar 1 g 1 mL para inocular Caldo Digerido de Casena y Soja, mezclar e
incubar de 30 a 35C durante 18-24 horas. Agitar y transferir 1 mL a 100 mL de Caldo Mac
Conckey e incubar a 42 - 44 C, durante 24-48 horas. Subcultivar en una placa de Agar Mac
conckey a 30-35C por 18-72 horas.
El crecimiento de colonias indica posible presencia de E. coli, lo cual debe confirmarse con
pruebas de identificacin (vase Fig. 6.2.c-e.).
d. Pseudomonas aeruginosa: Preparar las muestras e inocularlas, usando como diluyente Caldo
Digerido de Casena y Soja; usar 1 g 1 mL para inocular Caldo Digerido de Casena y Soja,
mezclar e incubar de 30 a 35C durante 18-24 horas. Agitar y transferir 1 mL a 100 mL de
Caldo Digerido de Casena y Soja e incubar a de 30 a 35C durante 18-24 horas. Subcultivar
en una placa de Agar Cetrimide. Incubar a una temperatura de 30-35C por 18-72 horas.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

El crecimiento de colonias indica posible presencia de Ps. aeruginosa, lo cual debe

confirmarse con pruebas de identificacin (vase Fig. 6.2.c-e.).
Fig. 6.2.c-e. Escherichia coli; Pseudomonas aeruginosa; Staphylococcus; Clostridium sp.y Candida albicans

Dilucin 1/10
Diluyente (90mL)

10mL

10mL
10mL

CDCS
(100mL)

80C
10 min

30 35C
18 - 24 h

C.T.

30 35C
3-5d

Mn.

Caldo MC
(100mL)

42 44C
24 - 48 h

30 35C
18 - 72 h
Pseudomonas
aeruginosa

30 35C
18 - 72 h
M.C.
Escherichia coli

Caldo SAB
(100mL)

30 35C
18 - 72 h
Staphylococcus
aureus

Caldo Ref.
(100mL)

Caldo Ref.
(100mL)

Anaerobiosis
30 35C
48 h
A.Col.

A.Col.

SAB.

30 35C
24 48 h
Candida albicans

Anaerobiosis
30 35C
48 h
Clostridium sp.

e. Staphylococcus aureus: Preparar las muestras e inocularlas, usando como diluyente Caldo
Digerido de Casena y Soja; usar 1 g 1 mL para inocular Caldo Digerido de Casena y Soja,
mezclar e incubar de 30 a 35C durante 18-24 horas. Agitar y transferir 1 mL a 100 mL de
Caldo Digerido de Casena y Soja e incubar a de 30 a 35C durante 18-24 horas. Subcultivar
en una placa de Agar Cetrimide. Incubar a una temperatura de 30-35C por 18-72 horas.
El crecimiento de colonias color amarillo, o blanco rodeado de amarillo indica posible
presencia de Staphylococcus aureus, lo cual debe confirmarse con pruebas de identificacin
(vase Fig. 6.2.c-e.).
6.4.4. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en A. y B. pero sin inculo.
6.5 Resultados
Emisin de reporte final.
6.6 Cuestionario
- Si se trata de realizar el examen microbiolgico de un antibitico, explique las operaciones
preliminares y fundamente su respuesta.
- De no contar con suficiente material de vidrio para la ejecucin de todos las pruebas
preliminares Qu hara? Obviara alguna de ellas? Procedera a la ejecucin de todas
consecutivamente? Si es as En qu orden procedera ? Fundamente su respuesta.
6.7 Fuentes de informacin
- Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP 32NF 27).
- Farmacopea Internacional. Cuarta Edicin. (International Pharmacopoeia, fourth edition),
2008.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

VII. PRCTICA N 7
ANLISIS MICROBIOLGICO DE FORMAS SLIDAS ORALES: TABLETAS Y CPSULAS
VALIDACIN DEL MTODO
7.1

Marco terico

Este ensayo aplica alas formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la
prctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos
aerbicos viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como
determinar la ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de
contaminacin (vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
7.2 Competencias
-

Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de recuento y de microorganismos

especficos de una forma farmacutica semislida y lquida.

Reconoce las diferencias en la metodologa para el anlisis microbiolgico de formas

farmacuticas no estriles slidas, semislidas y lquidas.

7.3 Material y Equipos

-

Materiales
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o

Frascos de 250 mL, con 5 g de Polisorbato estril

8 Frascos de 250 mL, con 85 mL de Buffer, pH 7,2
27 Tubos con 9 mL de Caldo Digerido de Casena y Soja
6 Tubos con 9 mL de Buffer, pH 7,2
Kitasatos estriles de 1 L
Equipos de filtracin estriles
Pinzas estriles
Placas de Agar Digerido de Casena y Soja
Placas de Agar Sabouraud Dextrosa.
12 Membranas filtrantes estriles
Frascos con 90 mL de Caldo Digerido de Casena y Soja.
Frascos con 100 mL de Caldo Mac Conckey
Tubos con 10 mL de Caldo Rappaport Vassiliadis.
Placas con Agar Mac Conckey
Placas con Agar Xilosa Lisina Desoxicolato
Placas con Agar Manitol Salado
Placas con Agar Cetrimide
9 Placas don Agar Digerido de Casena y Soja
Frascos con 90 mL de Buffer pH 7,2
Pipetas de 10 mL.
12 Pipetas de 1 2 5 mL
Pipetas de 0,1 mL
Gradillas

- Medios de Cultivo y Reactivos

o
o
o
o
o
o
F-CV3-3B-2

Polisorbato estril
Buffer, pH 7,2
Caldo Digerido de Casena y Soja
Agar Digerido de Casena y Soja
Agar Sabouraud
Caldo Digerido de Casena y Soja
Rev. Junio 2007

o
o
o
o
o
o
o

Caldo Mac Conckey

Caldo Rappaport Vassiliadis.
Agar Mac Conckey
Agar Xilosa Lisina Desoxicolato
Agar Manitol Salado
Agar Cetrimide
Agar Digerido de Casena y Soja

7.4 Procedimiento
7.4.1. Pruebas de Verificacin de las Propiedades de Promocin de Crecimiento e Inhibitorias de
los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Especficos
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
7.4.2. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en 1.4.1. pero sin inculo.
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
7.5 Resultados
Emisin de reporte final.
7.6 Cuestionario
-

7.7

Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.
Fuentes de informacin

Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP

32- NF 27).
Farmacopea Internacional. Cuarta Edicin.
(International
Pharmacopoeia, fourth
edition), 2008.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

VIII. PRCTICA N 8
VALIDACIN DEL MTODO
PRUEBAS DE APTITUD DEL MEDIO PREVIO AL ANLISIS DE UN PRODUCTO
FARMACUTICO ESTRIL
8.1

Marco terico

Este ensayo aplica alas formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la
prctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos
aerbicos viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como
determinar la ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de
contaminacin (vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
8.2 Competencias
-

Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de recuento y de microorganismos

especficos de una forma farmacutica semislida y lquida.
Reconoce las diferencias en la metodologa para el anlisis microbiolgico de formas
farmacuticas no estriles slidas, semislidas y lquidas.

8.3 Material y Equipos

12 Tubos con 10 mL de Buffer, pH 7,2
Tubos con 10 mL de Buffer, pH 7,2, ms Polisorbato
Frascos con 150 mL de Agar Digerido de Casena y Soja
Frascos con 100 mL de Agar Sabouraud Dextrosa
21 Pipetas de 0,1 y 1 ,0 mL estriles
Kitasatos estriles de 1 L
Equipos de filtracin estriles
Pinzas estriles
Membranas filtrantes estriles
Balanzas
Jeringas de 20 mL descartables estriles
18 Frascos con 100 mL de peptona pH 7,1
Frascos con 100 mL de Medio Tioglicolato Lquido
Frascos con 100 mL de Caldo Digerido de Casena y Soja
Cultivos puros de Aspergillus niger en Agar Sabouraud (agar inclinado), de por lo menos 5
a 7 das.
o Cultivos puros de Staphylococcus aureus en Agar Casoy (agar inclinado), de por lo menos
24 horas antes de la prctica.

o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o

Medio de Cultivo

Microorganismo
Especie

Incubacin

Cepa ATCC

Tiempo

S. aureus
C. sporogenes
P. aeruginosa

19404

3035C

3 das

Caldo Casoy

B. subtillis

6538
6633
9027

3035C

3 das

Caldo Casoy

B. subtillis
C. albicans
A. niger

10231
16404

2025 C

5 das

Caldo Tioglicolato

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

7.4 Procedimiento
7.4.1. Pruebas de Verificacin de las Propiedades de Promocin de Crecimiento e Inhibitorias de
los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Especficos
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
7.4.2. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en 1.4.1. pero sin inculo.
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
7.5 Resultados
Emisin de reporte final.
7.6 Cuestionario
-

7.7

Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.
Fuentes de informacin

Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP

32- NF 27).
Farmacopea Internacional. Cuarta Edicin.
(International
Pharmacopoeia, fourth
edition), 2008.
World Health Organization. WHO Technical Report Series, No. 902, Thirty-six report. 2002.
Annex 6. Good manufacturing practices for sterile products.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

IX. PRCTICA N 9
ANLISIS DE UN PRODUCTOS FARMACUTICO ESTRIL Y
VALIDACIN DEL MTODO (TRANSFERENCIA DIRECTA: DISPOSITIVO MDICO Y
POLVO PARA RECONSTITUIR)
9.1 Marco terico
Este ensayo aplica alas formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la prctica
precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos aerbicos
viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como determinar la
ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de contaminacin
(vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
9.2 Competencias
- Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de recuento y de microorganismos
especficos de una forma farmacutica semislida y lquida.
- Reconoce las diferencias en la metodologa para el anlisis microbiolgico de formas
farmacuticas no estriles slidas, semislidas y lquidas.
9.3 Material y Equipos
o
o
o
o
o
o
o
o
o

4 Kitasatos estriles de 1 L
4 Equipos de filtracin estriles
8 Pinzas estriles
6 Membranas filtrantes estriles
1 Bomba de vaco
8 Jeringas de 20 mL descartables estriles
12 Frascos con 100 mL de peptona pH 7,1
8 Frascos con 100 mL de Medio Tioglicolato Lquido
8 Frascos con 100 mL de Caldo Digerido de Casena y Soja

9.4 Procedimiento
9.4.1. Pruebas de Verificacin de las Propiedades de Promocin de Crecimiento e Inhibitorias de
los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Especficos
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
9.4.2. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en 1.4.1. pero sin inculo.
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
9.5 Resultados
Emisin de reporte final.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

PRUEBA DE ESTERILIDAD:
Mtodo de Transferencia Directa

Limpiar la superficie de
las envolturas que
contienen las muestras
con alcohol al 70% y
abrirlas cuidadosamente
con tijeras estriles

Transferir las muestras a un

frasco que contenga
1000 mL de caldo thioglicolato y
a otro frasco que contenga 1000
mL de caldo tripticase soya

Con ayuda de
pinzas estriles

Llevar a
incubar por 14
das:

Caldo tioglicolato,
a 20 a 25C
Caldo tripticase
soya a 30 a 35C

Presencia de
crecimiento: el
producto no cumple
con los
requerimientos de la
prueba

Ausencia de
crecimiento: el
producto cumple
c o n lo s
requerimientos de
la prueba

9.6 Cuestionario
-

9.7

Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.
Fuentes de informacin

Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP

32- NF 27).
Farmacopea Internacional. Cuarta Edicin.
(International
Pharmacopoeia, fourth
edition), 2008.
World Health Organization. WHO Technical Report Series, No. 902, Thirty-six report. 2002.
Annex 6. Good manufacturing practices for sterile products.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

X. PRCTICA N 10
ANLISIS DE UN PRODUCTOS FARMACUTICO ESTRIL Y VALIDACIN DEL
MTODO (FILTRACIN POR MEMBRANA: SOLUCIN INYECTABLE).
10.1

Marco terico

Este ensayo aplica alas formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la prctica
precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos aerbicos
viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como determinar la
ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de contaminacin
(vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
109.2 Competencias
- Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de recuento y de microorganismos
especficos de una forma farmacutica semislida y lquida.
- Reconoce las diferencias en la metodologa para el anlisis microbiolgico de formas
farmacuticas no estriles slidas, semislidas y lquidas.
10.3 Material y Equipos
3 Balanzas
8 Frascos con 100 mL de Medio Tioglicolato Lquido
8 Frascos con 100 mL de Caldo Digerido de Casena y Soja
4 Frascos con 500 mL de Medio Tioglicolato Lquido
4 Frascos con 500 mL de Caldo Digerido de Casena y Soja
4 Cultivos puros de Aspergillus niger en Agar Sabouraud (agar inclinado), de por lo menos
5 a 7 das.
o 4 Cultivos puros de Staphylococcus aureus en Agar Casoy (agar inclinado), de por lo menos
24 horas antes de la prctica.
o
o
o
o
o
o

10.4 Procedimiento
10.4.1. Pruebas de Verificacin de las Propiedades de Promocin de Crecimiento e Inhibitorias de
los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Especficos
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
10.4.2. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en 1.4.1. pero sin inculo.
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
10.5 Resultados
Emisin de reporte final.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

PRUEBA DE ESTERILIDAD:
Mtodo de Filtracin por Membrana

Limpiar la
superficie de las
ampollas con
alcohol al 70%

Transferir el contenido de las muestras a

travs la unidad de filtracin estril (con
la membrana filtrante de :47 mm y
poro: 0,45 .
Tomar el
contenido de las
ampollas con una
jeringa estril

Desmontar el equipo
aspticamente y con pinzas
estriles tomar la membrana
cortarla y transferir:

Enjuagar la membrana con

agua peptonada

Una mitad a 100

m L d e ca l d o
tripticase soya,
incubar a

20 a 25C
Incubar por 14
das a...
30 a 35C

La otra mitad a
100 mL de caldo
thioglicolato

10.6 Cuestionario
-

Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.

10.7 Fuentes de informacin

-

Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP

32- NF 27).
Farmacopea Internacional. Cuarta Edicin.
(International
Pharmacopoeia, fourth
edition), 2008.
World Health Organization. WHO Technical Report Series, No. 902, Thirty-six report. 2002.
Annex 6. Good manufacturing practices for sterile products.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

XI. PRCTICA N 11
OPERACIONES PREPARATORIAS PARA LA PRUEBA DE ENDOTOXINAS
BACTERIANAS, CLCULOS PARA HALLAR EL MVD: LISTA DE CHEQUEO
DETERMINACIN DE LOS LMITES DE ENDOTOXINAS PARA ARTCULOS NO
FARMACOPEICOS
11.1

Marco terico

Este ensayo aplica alas formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la
prctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos
aerbicos viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como
determinar la ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de
contaminacin (vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
Consiste en verificar si el Reactivo de Lisado de Amebocitos (LAL) tiene la sensibilidad
etiquetada y/o se encuentra dentro de los rangos aceptables (0,5 lambda a 2 lambda).
Para esto, se enfrentan diferentes concentraciones de un Control Estndar de Endotoxinas con
el reactivo de LAL.
Se reconstituye el Control de Endotoxinas (5 000 EU/vial) con 5 mL de agua apirgena
certificada, homogenizndola en un vortex por 30 minutos.
Usando micropipetas calibradas y tubos despirogenados, se hacen diluciones en forma asptica
hasta obtener concentraciones de endotoxina de: 2 , , 0,5 , 0,25 , las cuales son
equivalentes a:
Spike*: 0,6 UE/ mL
2 : 0,06 UE/ mL
: 0,03 UE/ mL
0,5 : 0,015 UE/ mL
0,25 : 0,0075 UE/ mL
11.2 Competencias
- Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de recuento y de microorganismos
especficos de una forma farmacutica semislida y lquida.
- Reconoce las diferencias en la metodologa para el anlisis microbiolgico de formas
farmacuticas no estriles slidas, semislidas y lquidas.
11.3 Material y Equipos
2 Bao Mara a 37C
4 Gradillas para 40 tubos de 10 mm x 100 mm
4 Gradillas para tubos de 18 x 150 mm
4 Cronmetros
4 Termmetros
4 Micropipetas de 100 uL (Eppendorf)
4 Micropipetas de 10 uL (Eppendorf)
4 Agitadores Vortex
8 Paquetes de 50 tubos cada uno apirgenos de 10 x 75 mm
4 Cajas de tips apirgenos de 5 a 100 uL
1 Caja de tiras indicadoras de pH
50 Tubos de 18 x 150 mm despirogenizados con tapas de acero (180C x 3 horas) envueltas
en paquetes de 8 tubos con papel aluminio.
o 10 Pipetas de 10 mL despirogenizadas a 180C x 3 horas con papel aluminio.
o 10 Pipetas de 5 mL despirogenizadas a 180C x 3 horas con papel aluminio.
o 20 Pipetas de 1 a 2 mL despirogenizadas a 180C x 3 horas con papel aluminio.
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

o 1 Frasco de control estndar de endotoxina

o 8 Frascos del reactivo Lisado de Amebocitos de Limulus
o 8 Frascos de agua LAL
11.4 Procedimiento
11.4.1. Pruebas de Verificacin de las Propiedades de Promocin de Crecimiento e Inhibitorias de
los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Especficos
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
11.4.2. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en 1.4.1. pero sin inculo.
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.

11.5 Resultados
Emisin de reporte final.
11.6 Cuestionario
-

Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.

11.7 Fuentes de informacin

-

Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP

32- NF 27).
Farmacopea Internacional. Cuarta Edicin.
(International
Pharmacopoeia, fourth
edition), 2008.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

XII. PRCTICA N 12
PRUEBA DE ENDOTOXINAS BACTERIANAS Y PRESENTACIN DE UNA MATRIZ QUE
INCLUYE TODAS LAS ACTIVIDADES INVOLUCRADAS
12.1

Marco terico

Este ensayo aplica alas formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la
prctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos
aerbicos viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como
determinar la ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de
contaminacin (vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
Consiste en verificar si el Reactivo de Lisado de Amebocitos (LAL) tiene la sensibilidad
etiquetada y/o se encuentra dentro de los rangos aceptables (0,5 lambda a 2 lambda).
Para esto, se enfrentan diferentes concentraciones de un Control Estndar de Endotoxinas con
el reactivo de LAL.
Se reconstituye el Control de Endotoxinas (5 000 EU/vial) con 5 mL de agua apirgena
certificada, homogenizndola en un vortex por 30 minutos.
Usando micropipetas calibradas y tubos despirogenados, se hacen diluciones en forma asptica
hasta obtener concentraciones de endotoxina de: 2 , , 0,5 , 0,25 , las cuales son
equivalentes a:
Spike*: 0,6 UE/ mL
2 : 0,06 UE/ mL
: 0,03 UE/ mL
0,5 : 0,015 UE/ mL
0,25 : 0,0075 UE/ mL
12.2 Competencias
- Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de recuento y de microorganismos
especficos de una forma farmacutica semislida y lquida.
- Reconoce las diferencias en la metodologa para el anlisis microbiolgico de formas
farmacuticas no estriles slidas, semislidas y lquidas.
12.3 Material y Equipos
2 Bao Mara a 37C
4 Gradillas para 40 tubos de 10 mm x 100 mm
4 Gradillas para tubos de 18 x 150 mm
4 Cronmetros
4 Termmetros
4 Micropipetas de 100 uL (Eppendorf)
4 Micropipetas de 10 uL (Eppendorf)
4 Agitadores Vortex
8 Paquetes de 50 tubos cada uno apirgenos de 10 x 75 mm
4 Cajas de tips apirgenos de 5 a 100 uL
1 Caja de tiras indicadoras de pH
50 Tubos de 18 x 150 mm despirogenizados con tapas de acero (180C x 3 horas) envueltas
en paquetes de 8 tubos con papel aluminio.
o 10 Pipetas de 10 mL despirogenizadas a 180C x 3 horas con papel aluminio.
o 10 Pipetas de 5 mL despirogenizadas a 180C x 3 horas con papel aluminio.
o 20 Pipetas de 1 a 2 mL despirogenizadas a 180C x 3 horas con papel aluminio.
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

o 1 Frasco de control estndar de endotoxina

o 8 Frascos del reactivo Lisado de Amebocitos de Limulus
o 8 Frascos de agua LAL
12.4 Procedimiento
12.4.1. Pruebas de Verificacin de las Propiedades de Promocin de Crecimiento e Inhibitorias de
los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Especficos
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
12.4.2. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en 1.4.1. pero sin inculo.
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

12.5 Resultados
Emisin de reporte final.
12.6 Cuestionario
-

Elabore un alista de verificacin sobre todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.

12.7 Fuentes de informacin

-

Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP

32- NF 27).
Farmacopea Internacional. Cuarta Edicin.
(International
Pharmacopoeia, fourth
edition), 2008.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

XIII. PRCTICA N 13
PRUEBA DE POTENCIA ANTIBITICA PARA UN ANTIMICROBIANO:
OPERACIONES PRELIMINARES, PREPARACIN DE MATERIALES, ESTNDAR,
INCULOS Y EJECUCIN DEL ANLISIS
13.1

Marco terico

Este ensayo aplica a las formas farmacuticas semislidas y lquidas y tambin como en la
prctica precedente incluye pruebas que permiten calcular el nmero de microorganismos
aerbicos viables y el nmero de hongos filamentosos y levaduras presentes, as como
determinar la ausencia de especies microbianas patgenas consideradas como indicadores de
contaminacin (vase USP 32: <61>, <62> y <1111>).
Consiste en verificar si el Reactivo de Lisado de Amebocitos (LAL) tiene la sensibilidad
etiquetada y/o se encuentra dentro de los rangos aceptables (0,5 lambda a 2 lambda).
Para esto, se enfrentan diferentes concentraciones de un Control Estndar de Endotoxinas con
el reactivo de LAL.
Se reconstituye el Control de Endotoxinas (5 000 EU/vial) con 5 mL de agua apirgena
certificada, homogenizndola en un vortex por 30 minutos.
13.2 Competencias
- Aplica y experimenta la metodologa para las pruebas de recuento y de microorganismos
especficos de una forma farmacutica semislida y lquida.
- Reconoce las diferencias en la metodologa para el anlisis microbiolgico de formas
farmacuticas no estriles slidas, semislidas y lquidas.
13.3 Material y Equipos
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o
o

3 Frascos x 50 mL
3 Frascos x 100 mL
3 Frascos x 400 mL
3 Frascos x 1 L
2 Frasco Roux
30 Perlas de vidrio
60 Placas Petri
10 Pipetas x 1 mL
10 Pipetas x 2 mL
10 Pipetas x 5 mL
10 Pipetas x 10 mL
4 Sacabocado
4 Beaker x 10 mL
3 Alcohol al 70% x 200 mL
3 Gasa

13.4 Procedimiento
13.4.1. Pruebas de Verificacin de las Propiedades de Promocin de Crecimiento e Inhibitorias de
los Medios y Aptitud de las Pruebas de Recuento y de Microorganismos Especficos
Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la
practica N 6.
13.4.2. Prueba de Producto:
Proceder de la misma forma que en 1.4.1. pero sin inculo.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

Proceder para las siguientes pruebas segn se muestra en el texto correspondiente de la

practica N 6.
POTENCIA ANTIBITICA:
Mtodo Cilindro-Placa de Cultivo

13.5 Resultados
Emisin de reporte final.
13.6 Cuestionario
-

Elabore tres mapas mentales que involucren todas las actividades y pruebas del examen
microbiolgico para una forma farmacutica no estril slida, semislida y lquida.

13.7 Fuentes de informacin

-

Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP

32- NF 27).
Farmacopea Internacional. Cuarta Edicin.
(International
Pharmacopoeia, fourth
edition), 2008.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

XIV. PRCTICA N 14
SEMINARIO DE INVESTIGACIN: PRESENTACIN DEL PROTOCOLO DE VALIDACIN
DE UN MTODO MICROBIOLGICO
14.1

Marco terico

El monitoreo analtico de un producto farmacutico, o de ingredientes especficos dentro del

producto, es necesario para garantizar su inocuidad y eficacia a travs de todas las fases de su
vida de estantera, incluyendo almacenamiento, distribucin y uso. Este monitoreo debera
realizarse de acuerdo con las especificaciones validadas durante el desarrollo del producto.
El propsito principal de la validacin analtica es garantizar que un procedimiento analtico
seleccionado de resultados reproducibles y confiables que son adecuados para el propsito
intentado. Es necesario definir en forma apropiada tanto las condiciones en las cuales el
procedimiento va a ser usado como el propsito para el cual es intentado. Estos principios se
aplican a todos los procedimientos descritos en un farmacopea o no descritos en una farmacopea
usados por la empresa fabricante. Estas pautas se aplican a los procedimientos usados para
examinar atributos qumicos y fisicoqumicos, pero muchos son igualmente aplicables a
procedimientos biolgicos y microbiolgicos.
De acuerdo a algunas personas es virtualmente imposible validar completamente los
procedimientos de ensayo para cada microorganismo que podra ser objetable, sin embargo, los
mtodos son validados generalmente para la recuperacin de microorganismos indicadores
especficos propuestos por las farmacopeas y los que generalmente se requiere estn ausentes del
producto.
La validacin del mtodo demuestra que cualquier sustancia inhibitoria presente en la muestra ha
sido neutralizada/inactivada o diluida a niveles por debajo del nivel inhibidor. Involucra la
inoculacin de medios de cultivo con niveles bajos de microorganismos inhibidores especficos, en
presencia y en ausencia del material a ser ensayado.
La capacidad de los medios para promover el crecimiento de los microorganismos puede afectarse
por el proceso de preparacin del medio, por los procesos de esterilizacin y de almacenamiento.
La edad de los medios de cultivo puede afectar sus propiedades de promocin del crecimiento y
de selectividad. Por esta razn, la vida de estantera de los medios de cultivo debera ser
validada y los medios no deben usarse ms all de su fecha de vencimiento. Todos los lotes de
medios de cultivo preparados deben ser sometidos a Control de Calidad para garantizar que los
medios son adecuados para sus fines propuestos.
Los mtodos que el fabricante seleccione deben poder detectar confiablemente la presencia de
microorganismos objetables tales con especies de Pseudomonas, hongos, Escherichia coli, etc.

14.2 Competencias
- Disea el protocolo de validacin de un mtodo microbiolgico y realiza la parte
experimental a nivel grupal como actividad colaborativa recopilando la data de todos los
ensayos.
- Asume la importancia de la validacin de un mtodo microbiolgico presentando el estudio
completo en el tiempo establecido.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007

14.3 Material de Revisin Bibliogrfica

Meja L. Validacin de la Tcnica para la Cuantificacin de Tilosina en un producto slido.
Pontificia Universidad Javeriana. Tesis : Bogot. 2008.
14.4 Procedimiento
Diseo de un protocolo de validacin en base a la revisin del material bibliogrfico propuesto
adems de cinco fuentes similares en contenido y nivel.
14.5 Resultados
Exposicin del protocolo final.
14.6 Cuestionario
-

Elaboracin del glosario especfico relacionado a validacin de mtodos analticos y

validacin de mtodos microbiolgicos.

14.7 Fuentes de informacin

-

Farmacopea de los Estados Unidos de Amrica 32 Rev.Formulario Nacional 27 Ed. (USP

32- NF 27).
Farmacopea Internacional. Cuarta Edicin.
(International
Pharmacopoeia, fourth
edition), 2008.
Meja L. Validacin de la Tcnica para la Cuantificacin de Tilosina en un producto slido.
Pontificia Universidad Javeriana. Tesis : Bogot. 2008.

F-CV3-3B-2

Rev. Junio 2007