Abstracto.

Aunque existen numerosos mtodos para la determinacin

cuantitativa de antioxidante vitaminas: C, E y A, no existen mtodos favorables
para el entendido ampliamente analtica la prctica - que tienen varias fallas y
limitaciones o requieren aparatos caros. Modificaciones tanto, hemos elaborado
de mtodos espectrofotomtricos valiosos para la determinacin cada una de
estas vitaminas, que en un principio no se podran aplicar para el laboratorio la
prctica de diversos aspectos. Se basan en: la vitamina C - reaccin de color
con forma peridica fosfotungstato reactivo preparado; para la vitamina E reaccin de color con batophenanthroline,FeCl3 y H3PO4 ; para la vitamina A medicin espectrofotomtrica de extractos de probado muestras. Pruebas de
control mostraron correccin completa de los parmetros analticos obtenidos
con esas modificaciones con preservacin de ventajas de los mtodos
originales. Por lo tanto, se pueden implementar con xito a los anlisis clnicos
de rutina. El elaborado modificaciones tambin se pueden utilizar para la
determinacin de los A / m vitaminas en los productos alimenticios, para
ejemplo: en los zumos, leche y homogeneizados o extractos de alimentos
slidos. Palabras clave: vitaminas antioxidantes, espectrofotometra, alimentos,
muestras biolgicas
INTRODUCCIN
En ciencias de la nutricin y la medicina, hay mucho inters en los anlisis de
las vitaminas C, E y A, ya que, adems de tener actividad de la vitamina,
tambin se caracterizan por antioxidante de accin y por lo tanto se definen
como vitaminas antioxidantes. Al neutralizar especies reactivas de oxgeno y
radicales libres de oxgeno en el organismo, estas vitaminas juegan * El trabajo
parcialmente presentado en la Conferencia Cientfica realiz en la Academia de
Agricultura en Pozna, Facultad de Ciencias de la Alimentacin y Nutricin (2930.01.2007): "Los antioxidantes naturales desde materia prima para el
organismo ". El estudio ha sido apoyado por la Universidad de Medicina otorga
No 502-17-019 y 502-17-552. Un papel significativo en la prevencin de
numerosas
enfermedades
degenerativas
metablicas
[Przeciwutleniacze ..2007]. Como la comida es la principal fuente de las
vitaminas para los seres humanos, la determinacin de su contenido en los
alimentos parece ser un elemento importante de nutritiva Evaluacin valor de
esos productos [Kompendium ... 2006]. Las pruebas clnicas que se realizan en
el material biolgico recogido de pacientes son igualmente importantes, porque
ellos permitir reconocer la deficiencia de las vitaminas y de introducir algunos
cambios en el la dieta y / o aplicar la suplementacin con preparados
vitamnicos farmacuticas cotidiana. Sin embargo, la realizacin de
determinaciones de vitaminas antioxidantes es una difcil analtica tarea. Esto
es en gran parte debido a la inestabilidad de estos compuestos que son
susceptibles a la atmosfrica oxgeno y otros agentes oxidantes, as como al
calor, la luz, el pH alto y bajo valores, y la presencia de iones de metales
transitorios [Koodziejczyk 2004]. La eleccin apropiada mtodos analticos que
sera lo suficientemente sensible, precisa, selectiva, y al mismo tiempo no
excesivamente tiempo y el trabajo que consume, siendo tambin ajustado a
pequea volumen de la muestra, disponibles para el anlisis de rutina y

financieramente asequible (costo del aparato y los reactivos) tambin pueden

ser molestos. Aunque numerosos mtodos para la determinacin de vitaminas
C, E y A estn disponibles: titrometric o - en la actualidad usa ms
frecuentemente
Instrumental:
electroqumica,
fluoromtrico,
espectrofotometra
y
cromatografa de [Moszczyski y PYC 1999], an se vean abrumados con
varios defectos y limitaciones. Informes con frecuencia no pueden describir
importantes detalles metodolgicos, lo que puede obligar a interpretaciones
individuales propias e inhiben la implementacin exitosa de los mtodos en la
prctica analtica.
Los autores elaboraron previamente sus propias modificaciones de algunas
espectrofotomtrico conocida mtodos para la determinacin de: vitamina C acc. a Kyaw [1978], la vitamina E - Acc. a Tsen [1961] y la vitamina A - acc. a
Bessey et al. [1946]. Estos mtodos a pesar que son selectivos, rpido y fcil
de realizar, as como la aplicable a la semimicro pruebas de escala y barato, no
son adecuados para su aplicacin general, debido a las razonesdado en la
Discusin. Introduccin de complementos, correcciones y cambios a esos
mtodos han llevado a subir de modificaciones, conveniente para el sentido
amplio la prctica analtica.
Aunque las modificaciones anteriores se han desarrollado para la
determinacin de antioxidante vitaminas en la sangre, tambin se han aplicado
para los ensayos en otra biolgica muestras incluyendo el jugo gstrico
altamente cido y tambin tejidos [por ejemplo, Rutkowski et al. 1,999, 2,002].
Los autores desean proponer la posibilidad de aplicacin de estas
modificaciones en anlisis de alimentos.
MATERIAL Y MTODOS
Material
Comestible lquido o biolgica, homogeneizado (o extracto) de una muestra de
alimento o tejido.
Equipos
Una centrfuga y, dependiendo de la vitamina determinado: un agitador de
tubos de ensayo, un agua bao, una nm lmpara UV 250-300, un
espectrofotmetro VIS o UV, de vidrio o de cuarzo cubetas 1-1,5 ml. Las
modificaciones de mtodos espectrofotomtricos ...
Reactivos
Determinacin de la vitamina C: reactivo fosfotungstato (PR) - elaborado
peridicamente, como se le agota (suspensin de 150 g de tungstato sdicomolibdeno libre y 60 g sodio anhidro hidrgeno fosfato en 240 ml desionizada
(DI), mezclar con calefaccin para disolver y aadir lentamente 145 ml de cido
sulfrico 3,7 M (VI); calentar la solucin para 2 hora con condensador de reflujo
no permitiendo que la ebullicin; despus de enfriar la solucin de abajo,
ajustar el pH a 1,0 aadiendo gota a gota cido sulfrico concentrado (VI) - El

reactivo debe ser luz de color amarillo verdoso, uno ms oscuro es intil); 56,8
M de vitamina C (cido L-ascrbico) solucin estndar hecha con solucin mM
uso 50 de cido oxlico como disolvente.
Determinacin de la vitamina E: etanol anhidro; xileno (mezcla de ismeros);
6.02 solucin mM de batophenanthroline * solucin (estable durante tres
semanas en un frigorfico), 0,98 mM de cloruro de hierro anhidro (III) (estable
durante una semana en un refrigerador) y una solucin de 40 mM de cido
ortofosfrico cristalino - todo en etanol anhidro; 23.2 M
estndar solucin de vitamina E (como sustancia de Trolox *
- En agua DI, o como -tocoferol - en anhidroetanol). Determinacin de la
vitamina A: xileno (a / a); Solucin de hidrxido de potasio 1 M en Etanol 90%.
Realizacin de determinaciones Analizar muestras frescas, trabajando en el
stand protegidos contra la lluvia directa ligero.
Determinacin de la vitamina C [Rutkowski et al. 1998]:
- Medida 1 ml del lquido analizado en el tubo de ensayo de centrfuga, aadir 1
ml de la PR, mezclar bien y dejar en una temperatura ambiente durante 30
minutos
- Centrifugar el tubo (7.000 g, 10 minutos), y recoger la totalidad de los
separados sobrenadante con una pipeta - el sobrenadante es una muestra de
ensayo espectrofotomtrico para mediciones
- Preparar la muestra estndar como anteriormente (usando 1 ml de la solucin
estndar en vez del lquido analizado), sin centrifugacin
- Medir la absorbancia de la Ax muestra de ensayo y de la muestra patrn
Como en 700 nm en contra de la mezcla de PR: solucin 50 mM de cido
oxlico = 1: 1 (v / v) como referencia muestra Concentracin calcular cx de
vitamina C (M) en el lquido analizado, utilizando el frmula:
* Batophenanthroline es un nombre coloquial comnmente usado para 4,7difenil-1,10-fenantrolina. Trolox es un anlogo sinttico soluble, el agua de la
vitamina E (precisamente de -tocoferol se se forma predominante),
constituyendo el 6-hidroxi-2,5,7,8-tetramethylchromano-2-carboxlico cido.
Determinacin de la vitamina E [Rutkowski et al. 2,005]:
- Medida de 0,5 ml del fluido analizado en el tubo de ensayo I (centrfuga) con
un apretado tapn, aadir 0,5 ml de etanol anhidro y agitar vigorosamente la
prueba enchufado tubo durante 1 minuto
- Aadir 3 ml de xileno, conecte el tubo de ensayo y agitar vigorosamente
durante otro 1 minuto
- Centrifugar el tubo para separar el extracto (1.500 g, 10 minutos);
simultneamente medir 0,25 ml de solucin de batophenanthroline en un tubo
de ensayo habitual II

- Recoger 1,5 ml del extracto (capa superior), traslado al tubo de ensayo II y

mezclar el contenido
- Aadir 0,25 ml de FeCl3 solucin al tubo de ensayo II, mezcla, aadir 0,25 ml
de solucin de H3PO4 y mezclar de nuevo - de esta manera una muestra de
ensayo se obtiene para espectrofotomtrico mediciones
- Preparar la muestra estndar (0,5 ml de la solucin estndar en lugar de lo
analizado lquido): usando Trolox - preparar como muestra de ensayo,
utilizando -tocoferol aada 0,5 ml de agua DI en lugar de etanol anhidro al
inicio del anlisis; no centrifugar esta muestra
- Medida de absorbancia de la Ax muestra de ensayo y de la muestra patrn
Como al 539 nm frente al ensayo en blanco (preparacin - como muestra de
ensayo, pero utilizando agua en vez del lquido analizado)
- Calcular la concentracin cx de la vitamina E (M) en el lquido analizado,
utilizando la a / a frmula presentada.
Determinacin de la vitamina A [Rutkowski et al. 2,006]:
- Medida 1 ml de lquido analizados para el tubo de ensayo I (centrfuga) con un
apretado tapn y aadir 1 ml de la solucin de KOH, conecte el tubo y agitar
vigorosamente durante 1 minuto
- Calentar el tubo en un bao de agua (60 C, 20 minutos), y luego enfriarlo
con agua fra
- Aadir 1 ml de xileno, conecte el tubo y agitar de nuevo vigorosamente
durante 1 minuto
- Centrifugar el tubo (1.500 g, 10 minutos), recoger la totalidad del extracto
separado (capa superior) y la transfiere al tubo de ensayo II de vidrio "suave"
(de sodio)
- Medir la absorbancia A1 del extracto obtenido a 335 nm frente xileno
- Irradiar el extracto en el tubo de ensayo II a la luz UV durante 30 minutos,
luego medir la absorbancia A2
- Calcular la cx concentracin de vitamina A (M) en el lquido analizado,
utilizando el frmula: cx = (A1 - A2) 22.23 dnde: 22,23 - multiplicador
recibidos sobre la base del coeficiente de absorcin de la solucin de 1% de
vitamina A (como la forma retinol) en xileno a 335 nm en un medidor cubeta
sobre espesor = 1 cm. Las modificaciones de mtodos espectrofotomtricos...
RESULTADOS
Nuestro propio estudio sobre modificacin de los mtodos seleccionados para
la determinacin cuantitativa de vitaminas C, E y A, proporcionndoles la
utilidad para la prctica analtica, constaba de tres etapas que se presentan en
detalle en la discusin.

En la primera etapa, manteniendo sin cambios las bases analticas que fue
ejecutado el - los equipos y de procedimiento modificaciones - como resultado
de los requisitos de la rutina anlisis '- en la realizacin de formas de
determinaciones definidas en los mtodos originales. Los resultado de esta
etapa de las investigaciones era atribucin a los mtodos modificados de una
tcnicamente forma til para la prctica analtica.
La segunda etapa del estudio incluy modificaciones de las bases analticas
para particulares mtodos con respecto a los resultados obtenidos en la
primera etapa con el fin de evitar las lagunas existentes descriptivos,
inconsistencias y defectos encontrados experimentalmente, as como para
adaptar el mtodo por el Tsen [1.961] que fue diseado exclusivamente para la
determinacin de la vitamina E en soluciones - para la determinacin en
material biolgico. Los resultados conjuntos de ambos la primera y segunda
etapa se convirti propias modificaciones de los mtodos originales
seleccionados, que el control de la correccin analtica fue sometido en la
tercera etapa del estudio. Las pruebas de control se realizaron de acuerdo con
el desempeo de las determinaciones en biolgica lquidos. Una serie de
soluciones estndar - en el suero bovino como un disolvente - de vitamina C y
Se han usado formas solubles en agua de las vitaminas E y A. Serie individual
incluido concentraciones dentro del rango fisiolgico para esos vitaminas (M):
para la vitamina C (como L- cido ascrbico): 14.2, 28.4, 56.8, 85.2, 113.6, para
la vitamina E (como sustancia Trolox) 5.8, 11.6, 23.2, 34.8, 46.4, para la
vitamina A (en forma de complejo de acetato de retinol y cyclodextrane) 0,465,
0,93, 1,86, 2,79, 3,72.
Las soluciones estaban sujetos a los procedimientos de acuerdo con los
algoritmos desarrollados de determinaciones y medidas de absorbancia finales
produjeron conjuntos de puntos determinar curvas de anlisis en la A, C
sistema que se presenta en la Figura 1. Basado coordinan en las curvas que
encontramos como sigue:
- Cumplimiento de la ley de Lambert-Beer dentro del rango especificado de las
concentraciones con la linealidad total resultante de las curvas y de su paso por
el punto 0
- Alta precisin de los mtodos modificados que fue determinado por el logro de
los coeficientes de curvas de correlacin casi hasta 1
- Muy buena sensibilidad de todos los mtodos (. Lmite de deteccin de la
aplicacin 0.05 M) resultante a partir de grandes ngulos de inclinacin de las
curvas
- Ningn efecto de las protenas de suero en la A / m curvas que sugiere su
desnaturalizacin completa durante los trabajos de anlisis y la falta de
injerencia de otros reductores presente en el suero. Precisin adecuada de los
mtodos modificados fue confirmada por pruebas de recuperacin, los valores
medios de los cuales se obtuvieron a partir de tres veces repetidas pruebas y
slo fueron ligeramente diferente a 100%. Adems, se confirm la alta precisin
de los mtodos por su repetibilidad y reproducibilidad. Los parmetros se

ensayaron para 5 consecutivo da: concentraciones de vitaminas C, E y A en

soluciones de suero almacenados a -80 C (nominales concentraciones: 51.3,
21.6, 1.34 m, respectivamente) se determinaron. Intra-serie coeficiente de
variacin fue estimado a partir de las concentraciones medias obtenidas cada
da (n = 10) y oscil entre 0,7% a 3,2%. Coeficiente de Inter-serie de variacin
calculada basado en los medios diarios individuales (n = 5) fue incluso 4.35.2% .values de parmetros analticos para las modificaciones desarrolladas de
todos los mtodos que se obtuvieron durante los estudios de validacin
discutidos anteriormente, se presentan en la Tabla 1. Los autores de los
mtodos originales no realiz estudios similares, cualquier comparativa anlisis
tanto, es imposible.
DISCUSIN
Para ser capaz de determinar las vitaminas A, E y C en el material biolgico en
una precisa, rpida y barato manera espectrofotometra fue elegido. A pesar de
la disponibilidad de numerosos mtodos instrumentales, espectrofotometra
parece ser utilizado con mayor frecuencia en analtica laboratorios. Esto es
debido a una buena precisin del mtodo, la disponibilidad de
espectrofotmetros como aparatos no muy caros y el uso de fcil acceso, ya
que relativamente reactivos baratos. Como resultado, los mtodos
espectrofotomtricos son ampliamente utilizados, entre otros en anlisis de los
alimentos para la determinacin de muchos compuestos naturales, incluyendo
vitaminas. Numerosos mtodos espectrofotomtricos permiten la determinacin
cuantitativa de la reducida forma de vitamina C (cido L-ascrbico) o, as
llamado, la vitamina C total - una suma de la reducida y forma oxidada (cido
dehidro-L-ascrbico). Un mtodo popular usando 2,4- dinitrofenilhidrazina [Roe
y Kuether 1.943] se utiliza para la determinacin del total vitamina C. La
mtodo, sin embargo no es suficientemente preciso, sus resultados estn
exageradas debido a la presencia de cido 2,3-dioxo-L-gulnico (metabolito
biolgicamente inactiva de la vitamina C) en las muestras analizadas, adems
de que tambin requiere de incubacin de 3 horas a 37 C y adicin de H2SO4
concentrado a las muestras. Otro mtodo bien conocido que utiliza soluciones
acuosas de 2,2'-bipiridilo, FeCl3 y H3PO4 [Sullivan y Clarke 1,955], permite
determinaciones selectivos de la vitamina C reduce, pero se caracteriza por
una baja sensibilidad, curso lento de la reaccin (1 hora) y la turbidez de las
muestras analizadas que requiere su centrifugacin final. Varias adaptaciones
espectrofotomtricos de titulacin los Tillmans ' mtodo que utiliza 2,6diclorofenolindofenol (por ejemplo [Omaye et al. 1979]) son igualmente
aplicada. Son fciles de realizar, pero no totalmente selectiva y requieren
separada mediciones de absorbancia para el color resultante y despus de su
retirada. La vitamina E puede determinarse espectrofotomtricamente con dos
mtodos populares relativa a la llamada, la vitamina E total que es una mezcla
de cuatro tocoferoles y cuatro tocotrienoles. De acuerdo con el primero
[Emmerie y Engel 1.938] La vitamina E es ex M. Rutkowski, K. Grzegorczyk
extrajeron con bencina de petrleo a partir de las muestras analizadas y los
extractos se exponen a soluciones de etanol de 2,2'-bipiridilo y FeCl3. El color
resultante permite la absorbancia medicin, pero es inestable y dura slo

durante 30 segundos; selectividad y sensibilidad a la baja determinacin,

tambin. En el otro mtodo [Hashim y Schuttringer 1966] esos inconvenientes
se han evitado mediante la sustitucin de 2,2-bipiridilo con batophenanthroline
y la introduccin de H3PO4 para aumentar la estabilidad del color. La
extraccin de la muestra con heptano tambin fue adoptado en este mtodo.
Una modificacin posterior [Desai y Machlin 1985] se diferencia en las
concentraciones y volumen de soluciones de reactivos e intercambia heptano
como el agente de extraccin para el xileno menos inflamable. Nuestros
intentos de aplicar la Este ltimo mtodo demostr que el color resultante es
demasiado oscuro, y las lecturas de absorbancia fluctuar dentro de la gama de
0,002. Inestabilidad marcada del color resultante que se encontr para la
versin modificada, hace resultados fiables imposible de obtener. Hay dos
mtodos espectrofotomtricos conocidos para determinacin de vitamina A que
se utilizan para los extractos. El ms ampliamente utilizado [Carr y Price 1926]
se basa en el uso de la solucin SbCl3 en cloroformo actuacin sobre el
extracto a base de cloroformo del la vitamina A. El mtodo se caracteriza por
una alta sensibilidad, sino tambin por carotenoide interferencia (correcciones
analticas son obligatorios) con el color que resulta extremadamente inestable
(aprox. 10 segundos). Por otra parte, SbCl3 es susceptible de trazas de
humedad y muestra propiedades corrosivas. La vitamina A tambin se puede
determinar utilizando el mtodo de medicin espectrofotomtrica directa en UV
[Parrish 1977]. La muestra de ensayo mezclado con etanol y solucin acuosa
de KOH se calienta bajo nitrgeno hasta que se hierve durante 30 minutos para
la desproteinizacin y la hidrlisis de los steres de vitamina A (retinol)
principalmente acetato, para sus mximos de absorcin son diferentes de las
del retinol libre en UV. Los hidrolizado se extrae con ter etlico, se lav con
agua y el extracto separado es se evapor bajo nitrgeno hasta seco. El
residuo se disolvi en isopropanol se mide para absorbancia a varias
longitudes de onda. Sin embargo, los carotenoides y otros polienos con la
absorcin picos cercanos a la de retinol interfieren con la vitamina A.
Tambin hay que sealar que en el caso de la determinacin cuantitativa de
vitamina A usando El ltimo mtodo, los resultados se obtienen calculationally,
a raz de sustitucin de la medido valores de absorbancia a dos frmulas. En el
caso de todos los dems mtodos de determinacin de vitaminas antioxidantes
que se han discutido, los resultados se leen de las curvas de calibracin (como
se conoce la preparacin es tiempo y trabajo a tarea que consume). Todas pero
el ltimo de los mtodos presentados requiere tambin un poco de trabajo y el
tiempo adicional para desproteinizacin en las muestras de prueba - con cido
tricloroactico, que puede actuar destructivamente en las vitaminas
determinado (aquellos susceptibles a, entre otros, valores bajos de pH - vase
la Introduccin), ya que es un cido fuerte.
Numerosos inconvenientes de los mtodos populares para la determinacin de
vitaminas antioxidantes que se han mostrado aqu atrajo nuestro inters
espectrofotomtrico menos conocido mtodos, que - segn sus autores - estn
libres de defectos analticos.

Hemos decidido introducir un mtodo selectivo y rpido para la determinacin

de la reduccin forma de la vitamina C, utilizando un PR preparado
peridicamente [Kyaw 1978]. Este reactivo se reduce por el cido L-ascrbico
que est contenido en la muestra y produce el tungsteno azul, absorbancia de
la cual se mide. Los denaturates PR tambin protenas contenido en la
muestra, eliminando as la necesidad de eliminacin de protenas como un
separada paso. El mtodo de determinacin selectiva de vitamina E (total)
[Tsen 1 961] que era elegido, tiene el mismo fondo que el batophenanthroline
discutido previamente mtodo con su modificacin, pero utiliza diferentes
concentraciones y proporciones de reactivo soluciones. A pesar del hecho de
que el mtodo fue desarrollado para el anlisis de la vitamina E en soluciones,
resultados correctos de los ensayos (usando las soluciones de -tocoferol en
etanol) Las modificaciones de mtodos espectrofotomtricos .nos anim a
adaptarlo a la realizacin de determinaciones en lquidos biolgicos. Para el
determinacin de vitamina A, hemos decidido aplicar un mtodo
espectrofotomtrico directo medicin en UV [Bessey et al. 1946], que se basa
en otro principios que el mtodo por Parrish [1.977]. La muestra de ensayo es
la protena-agotado y hidrolizado con la solucin de KOH en etanol, lo que
permite ms suave y ms corto de calentamiento (60 C, 20 minutos) sin la
necesidad de usar la atmsfera de nitrgeno. El queroseno-xileno KOH mezcla
en la que no se disuelve, se utiliza para la extraccin que hace enjuagando con
redundante agua. Adems, debido a la mezcla de baja volatilidad del
procedimiento no requieran ningn cambio de disolvente o cualquier
evaporacin asociada con este proceso. Los mediciones de absorbancia del
extracto (en una sola longitud de onda) se combinan con la eliminacin de la
interferencia e incluir como sigue: I medicin de la absorbancia suma de la
vitamina A y las sustancias que interfieren, vitamina A liquidacin con luz UV, la
medicin II de las sustancias de interferencia absorbancia, clculo de la
vitamina A determinada absorbancia siendo una diferencia entre los resultados
de las mediciones I y II. El computacional resultado de la determinacin
totalmente selectiva se obtiene de una frmula simple.
Los trabajos sobre la aplicacin del mtodo de determinacin de la vitamina C
de acuerdo con Kyaw [1.978] mostr sin embargo, que el reactivo de
fosfotungstato cual se prepara segn la descripcin original, es intil. Lagunas
descriptivas y metodolgico inconsistencias que se encontraron excluyen la
posibilidad de aplicar el presentado procedimiento analtico como una gua para
las determinaciones. La falta de una descripcin detallada del procedimiento
analtico puso un obstculo grave en el proceso de adaptacin del mtodo por
Tsen [1961] para las determinaciones realizadas en fluidos biolgicos. Adems,
la adaptacin debe preocupar - de acuerdo con el tema del estudio - el anlisis
de las soluciones de vitamina E. Tambin parece imposible introducir un
mtodo para la determinacin de vitamina A segn a Bessey et al. [1946] de
una manera sencilla porque el mtodo requiere el uso de highpurity queroseno
que no es de fcil acceso, 20 0,3 cm tubos de ensayo con una forma inusual
de centrifugacin de las mezclas de post-extraccin (utilizando un taladro
elctrico con un especial la cabeza; despus de la centrifugacin el autor

agrietado los tubos precortadas en la frontera de la fase orgnica y acuosa y

extractos recogidos con una pipeta), una especialmente construido
Lmpara UV para la irradiacin de los extractos y cubetas espectrofotomtricas
estrechas atpicos. Nuestra modificacin del mtodo para la determinacin de
la vitamina C [Kyaw 1978] evita una transferencia problemtica de las mezclas
de reaccin posterior de tubos de ensayo habituales a los centrfugos tubos de
ensayo y presenta un tratamiento de laboratorio de los fluidos analizados en
estos ltimos.
Parmetros de centrifugacin se cambiaron para recibir algunos sedimentos
ms compactos lo que facilita la separacin y recogida de los sobrenadantes.
Procedimientos que eran encontrado que falta o se describe en una forma
incompleta se completaron. Cambios en la forma de la preparacin de reactivo
phosphotungsten eran de la mayor importancia para el modificacin. Se utiliz
Na2WO4 molibdeno libre (contenido de Mo 0,001%), Na2HPO4 2H2O de
someterse a la hidratacin a 7, y 12-hidrato durante el almacenamiento y en el
mencionado mtodo original fue reemplazado por la sal anhidra y la solucin de
H2SO4 3,7 M se introdujo en lugar de la mezcla 15: 5 v / v de agua y H2SO4 (d
= 1,84). El reactivo se prepar usando el agua DI para que el agua estaba libre
de trazas de pesada metales y el reactivo se protegi de la ebullicin durante el
periodo de calentamiento de 2 horas. Un se adopt fcil mtodo de ajuste del
pH al valor requerido de 1,0. Para desarrollar un procedimiento analtico que se
adapta a las determinaciones que realizan en lquidos biolgicos fue el tema
clave al modificar el mtodo para la determinacin de vitamina E [Tsen 1961].
Nos pusimos de acuerdo para llevar a cabo el procesamiento en testtubes
centrfugas, de la desnaturalizacin con etanol, ya que no introduce ningn
iones extraos, hace no cambia el pH y no destruye la vitamina susceptibles E.
La muestra tambin es parcialmente extrada, que se complement con
extraccin con un xileno no polar. EL agitador se utiliz para mezclar el
contenido de los tubos de ensayo durante la extraccin de protenas y
extraccin. Concentraciones originales de soluciones de reactivos fueron
preservadas, pero era imposible aplicar las relaciones de volumen originales
entre ellos y los lquidos analizados, para vitamina E que est presente en
dichos lquidos se diluy durante la extraccin de protenas y extraccin por el
etanol y xileno - antes de la reaccin de color se llev a cabo. Todo el volumen
de proporciones fue corregido para lograr la concentracin de vitamina E igual
al mtodo original. A garantizar la estabilidad de la reaccin de color producido,
se utilizaron todos los reactivos aplicados en anhidro formulario incluidas
etanol. En lugar de la pequea tabla original que se us para un clculo
simplificado de las concentraciones en base a la absorbancia medida, una
frmula era aplicada para calcular con precisin las concentraciones de la
vitamina determinada.
En la modificacin del mtodo para la determinacin de vitamina A [Bessey et
al. 1946] equipos de fcil acceso se introdujo a los anlisis: tubos de ensayo
centrfugas

- Para el procesamiento y la centrifugacin de los lquidos analizados, un

agitador de tubos de ensayo para mezcla de los tubos de contenido durante
la desproteinizacin con la hidrlisis y extraccin, una tpica centrfuga de
laboratorio, una lmpara UV analtica populares ("Emita", con un quemador de
6 W y el filtro de madera; Famosa, d) y semi-microcubetas estndar. Las
pruebas comparativasde extraccin con la mezcla de queroseno-xileno y con
xileno solo, basado en la espectros de absorcin en las pruebas de UV y
recuperacin, permiti la retirada del highpurity disponible queroseno y el uso
de xileno exclusivamente para los fines de determinacin. Bessey etal. [1946]
no demostrar la necesidad de utilizar queroseno para la extraccin de la
analizada muestras. Proporcion simplemente una comparacin terica de
cuatro disolventes: petrleo benzin, tolueno, xileno y queroseno, evaluando de
esta manera su capacidad para disolver la vitamina A y su volatilidad - y l
eligi los dos ltimos como una mezcla 1: 1. Cabe sealar, que el queroseno
disponible comercialmente disponible como grado "farmacopea" "puro" y de
pureza y su purificacin adicional es una tarea laboriosa que dura varios das.
Teniendo xileno introdujo como el nico agente de extraccin en nuestros
propios estudios, el perodo de tiempo de la extraer exposicin a UV fue
optimizado y el valor del coeficiente en el presente frmula de clculo se
corrigi. Sobre la base de la absorcin espectros La longitud de onda utilizada
para las mediciones de absorbancia se corrigi para los dos ltimos mtodos
(original: 534 nm para la vitamina E, 328nm para vitamina A), que fue causado
por las modificaciones aplicadas y debido a usar pasado de moda, menos
espectrofotmetros precisos por los autores originales (que utilizan el Lambda
14P aparato de Perkin-Elmer). Para facilitar los procedimientos analticos,
algoritmos para determinaciones se han desarrollado para todos los mtodos
modificados. Se presentan en
Materiales y mtodos.
Las propias modificaciones presentadas por los mtodos seleccionados para la
determinacin espectrofotomtrica vitaminas antioxidantes, adems de tener
muy buenos parmetros analticos (ver Resultados) y siendo plenamente
utilizable para el anlisis de rutina, asegurado preservacin del ventajas de los
mtodos originales: adaptacin para determinaciones semi-micro escala, y sus
bajos costos y fcil, rpido rendimiento de laboratorio. Esa aplicacin permitido
del mencionado modificaciones en la prctica clnica, y numerosos cientfica
estudios, donde fueron utilizados con xito no slo para anlisis realizados en
la sangre, sino tambin en otras muestras biolgicas. En opinin de los autores
que se pueden utilizar ms de determinacin de vitaminas C, E y A en los
productos alimenticios, que - a partir de la analtica punto de vista - son tambin
los analitos de origen biolgico, por ejemplo: en los zumos (siguiendo su
decoloracin con carbn activado), leche y productos slidos (sus
homogeneizados o extractos). Aunque las tcnicas instrumentales
equipmentically avanzado predominan en los anlisis de alimentos, mtodo
espectrofotomtrico tambin se utiliza y su facilidad de uso podra

incrementarse en los mtodos que se sugieren en este estudio. Las

modificaciones de mtodos espectrofotomtricos...
CONCLUSIONES
1. Las modificaciones desarrolladas de mtodos para la determinacin de
vitaminas antioxidantes permitidas para evitar fallos sustanciales asociados con
los mtodos originales y para conservar todas sus ventajas ser as, en
contraste con los mtodos anteriores, totalmente aplicable para
determinaciones de rutina.
2. Todas esas modificaciones se caracterizan por la selectividad de las
determinaciones, los altos precisin, muy buena sensibilidad y precisin; son
rpidos, fciles de realizar, barato y hecho con un equipo de fcil acceso.
3. Los efectos beneficiosos de la aplicacin de las modificaciones mencionadas
para determinaciones en diversas muestras biolgicas que se realizan para la
clnica y cientfica propsitos, proveen una oportunidad para su uso en anlisis
de alimentos.