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ELABOR:
M.C ALICIA ROMERO ALEGRE
M.C. LEONEL CAMPOS LOPEZ
FEBRERO 2013
PRACTICAS DE BIOQUIMICA
INTRODUCCION
El plan general del manual contempla la referencia a los fundamentos tericos de la
qumica y metabolismo de las sustancias en estudio. Dado que el estudiante deber
presentar un informe para cada prctica, se describe el anlisis de manera lo ms
completa posible, con el nimo de que el estudiante tenga un margen amplio de
independencia, y facilitar el desarrollo de competencias en el mismo. Se da un
enfoque acerca de la finalidad del anlisis, con lo que se pretende reforzar la
enseanza de la materia.
COMPETENCIAS A LAS QUE CONTRIBUYE
Niveles de Desempeo
El conjunto de prcticas del presente manual te permitir llegar a un desempeo de
nivel 4 de acuerdo la clasificacin de CONOCER, a saber Nivel 4 Se desarrollan un
conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las que se tiene que mostrar
creatividad y recursos para conciliar intereses. Se debe tener habilidad para motivar y
dirigir grupos de trabajo.
Las razones por las que asumimos que obtendrs un nivel de desempeo tan alto son:
1. La realizacin de las prcticas en forma y tiempo presupone el dominio de
diferentes habilidades y conocimientos.
2. La elaboracin de un informe por prctica requiere de disciplina y laboriosidad, as
como la utilizacin de herramientas computacionales.
3. Las prcticas debern ser realizadas en equipo, lo que requiere de la participacin
armnica de los elementos. La capacidad de liderazgo deber ser usada en forma
ptima para realizar los diversos pasos de la prctica
PRACTICAS DE BIOQUIMICA
INDICE DE PRCTICAS
PRACTICAS DE BIOQUIMICA
PRACTICAS DE BIOQUIMICA
PRACTICA 1
RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS
INTRODUCCION:
Los carbohidratos son compuestos orgnicos formados por carbono, hidrgeno y
oxgeno. Estos forman parte e intervienen en una gran cantidad de procesos de los
seres vivientes. Los ms importantes son de tres tipos: energticos, de reserva y
estructurales.
Desde el punto de vista energtico uno de los carbohidratos ms sencillos, la glucosa
constituye el material de ms rpido aprovechamiento en el organismo y su oxidacin
satisface las necesidades energticas y calricas del mismo.
Como materiales de reserva, los carbohidratos existen en reino vegetal en forma de
almidones y en el reino animal en forma de glucgenos; tanto uno como el otro son
susceptibles de convertirse en glucosa para poder ser utilizados.
Y en el aspecto estructural, los carbohidratos llevan a cabo una importante funcin
en los vegetales debido a que la clula, que es su estructura leosa o esqueleto, est
constituida por cadenas de azcares simples. En los animales tambin sucede lo
anterior, as tenemos que el exoesqueleto de muchos artrpodos est constituido
tambin por cadenas de carbohidratos simples.
OBJETIVOS:
1. Identificacin de glcidos.
2. Hidrlisis del enlace de un disacrido
MATERIALES:
Muestras de glcidos: (5 gr. en 100 ml.) (glucosa, maltosa, lactosa sacarosa,
almidn).
Reactivo de Fehling A y Fehling B
Lugol (solucin yodada)
HCl al 10 %
15 Tubos de ensayo
Pinzas para tubo de ensayo
gradilla
vaso de precipitados
mechero
PRACTICAS DE BIOQUIMICA
PROCEDIMIENTO
1.- AZUCARES REDUCTORES
Reaccin de Fehling:
Fundamento: Se basa en el carcter reductor de los monosacridos y de la mayora
de los disacridos (excepto la sacarosa). Si el glcidos que se investiga es reductor, se
oxidar dando lugar a la reduccin del sulfato de cobre (II), de color azul, a xido de
cobre (I), de color rojo-anaranjado, es decir de ion cprico a cuproso
1. Tomar 2 ml. De las muestra que se requieren (glucosa, maltosa, lactosa,
sacarosa, almidn).
2. Aadir 1 ml de Fehling A y 1 ml. de Fehling B. El lquido del tubo de ensayo
adquirir un fuerte color azul.
3. Calentar el tubo suavemente con un mechero.
4. La reaccin ser positiva si la muestra se vuelve de color rojo-ladrillo.
5. La reaccin ser negativa si la muestra queda azul, o cambia a un tono azulverdoso.
Figura 3
PRACTICAS DE BIOQUIMICA
Tomar una muestra de sacarosa y aade unas 10 gotas de cido clorhdrico al 10%.
Calentar a la llama del mechero durante un par de minutos.
Dejar enfriar y realizar la Prueba de Fehling.
Observa el resultado de la sacarosa (Figura 5). La reaccin positiva nos dice que
hemos conseguido romper el enlace O-glucosdico de la sacarosa.
Figura 5
PRACTICAS DE BIOQUIMICA
Figura 7
ACTIVIDAD:
Completar el siguiente cuadro de acuerdo a los resultados obtenidos en cada una de
las pruebas realizadas escribiendo si la reaccin es positiva o negativa:
Glcido
Fehling
Fehling + HCl
Lugol
GLUCOSA
MALTOSA
LACTOSA
SACAROSA
ALMIDON
ACTIVIDADES DE APRENDIZAJE
1. Cules son las principales funciones biolgicas de los glcidos?
2. Cita un polmero de inters biolgico para las clulas animales que est
constituido por glucosa e indica la funcin que desempea.
3. Explica la importancia biolgica de los siguientes glcidos: glucosa, ribosa y
celulosa.
4. Definir e indicar la funcin biolgica de la sacarosa.
5. Tipos de enlaces para constituir polisacridos.
6. Cita alguna prueba para reconocer los glcidos
FECHA_______________________
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PRACTICAS DE BIOQUIMICA
PRACTICA 2
RECONOCIMIENTO DE LIPIDOS
INTRODUCCION
Adems del agua, los carbohidratos y las protenas, los seres vivos estn constituidos
por otras molculas que, aunque en menor cantidad, desempean funciones muy
importantes.
Los lpidos son biomolculas insolubles en agua que se encuentran en los seres vivos
y desempean funciones diversas como: ser componentes estructurales de
membranas, almacenan energa, separan, por sus condiciones de insolubilidad en
agua regiones donde tiene lugar reacciones diferentes. Funcionan tambin como
cubierta protectora en el caso de algunos animales mamferos.
OBJETIVO
Poner de manifiesto algunas propiedades de los lpidos, las cuales pueden servirnos
para su identificacin.
MATERIAL
Bao Mara.
Mechero.
Gradillas con 5 tubos de ensayo
2 Vasos de precipitado
Aceite vegetal
Solucin de Sudn III en frasco cuentagotas
Tinta roja en frasco cuentagotas
Solucin de Hidrxido sdico al 20%.
ter
PRACTICAS DE BIOQUIMICA
PROCEDIMIENTO
1. Colocar en un tubo de ensayo 2ml.de aceite vegetal y 2ml. de una solucin de
hidrxido sdico al 20%.
2. Agitar enrgicamente y colocar el tubo al bao Mara de 20 a 30 minutos.
3. Transcurrido este tiempo, se puede observar en el tubo tres capas: la inferior
clara, que contiene la solucin de sosa sobrante junto con la glicerina formada;
la superior amarilla de aceite no utilizado, y la intermedia, de aspecto grumoso,
que es el jabn formado
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PRACTICAS DE BIOQUIMICA
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PRACTICAS DE BIOQUIMICA
ACTIVIDADES DE APRENDIZAJE
1. Qu es el tejido adiposo? Cul es su funcin y su importancia en los
mamferos?
2. Que alimentos tienen alto contenido de lpidos?
3. Caractersticas generales de los lpidos
4. Funciones ms importantes de los lpidos.
5. Son correctas las denominaciones de colesterol "bueno" y colesterol "malo".
Qu significan realmente?
FECHA_______________________
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PRACTICAS DE BIOQUIMICA
PRACTICA 3
VITAMINA C EN JUGOS DE FRUTAS
INTRODUCCION
Las vitaminas pertenecen a uno de los grupos constituyentes de los alimentos que
provocan ms controversias, debido en gran medida al desconocimiento de su
funcin. Las vitaminas empezaron a adquirir importancia cuando se observ que la
carencia de estas sustancias en la dieta provocaba cuadros clnicos dramticos.
Bajo esta designacin se agrupan trece compuestos que tienen estructuras qumicas
orgnicas muy dismbolas; tienen funciones catalticas en concentraciones muy bajas
ya que, comparadas con las protenas, los hidratos de carbono y los lpidos en
conjunto, solo representan de 0.015 a 0.02% de la dieta del individuo. No producen
energa ni son parte de la estructura, pero actan en el control y la catlisis de
diversas reacciones propias del anabolismo y del catabolismo.
OBJETIVO
Evaluar cualitativamente el contenido de vitamina C en diferentes frutas y hortalizas.
MATERIAL Y REACTIVOS
Materiales
1 Bao mara
1 Mechero bunsen
1 Tela de asbesto
1 tripi
3 Vasos de precipitado 500 ml
4 vasos de precipitado de 100 ml
1 mortero
1 pistilo
1 probeta de 250 ml
1 pipeta de 1 ml
1 pipeta de 5 ml
1 frasco gotero
Reactivos
2.5 g almidn soluble
1 gotero de solucin de yodo
recin preparada
Solucin de vitamina C o tableta
de vitamina C de 250 mg, recin
adquiridas
TRAER POR EQUIPO DE TRABABJO
1 naranja
1 Toronja
1 Pimiento verde
10 Uvas moradas
10 fresas
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PRACTICAS DE BIOQUIMICA
PROCEDIMIENTO
1. Vierte aproximadamente 0.5 g de almidn en un vaso de precipitado con 50 ml de
agua.
2. Coloca la mezcla a fuego lento y remueve su contenido hasta que el almidn se
disuelva por completo. Vierte la solucin en un frasco y espera a que se enfre.
3. En otro vaso de precipitado mezcla 5 ml de solucin de almidn con 240 ml de
agua y 4 gotas de yodo. Al aadir el yodo, la solucin de almidn y agua se volver
azul, creando un test estndar que te servir para detectar la presencia de
vitamina C mediante un proceso llamado dosificacin o anlisis volumtrico.
4. Para comprobar tu solucin de muestra, disuelve la solucin o la tableta de 250
mg de vitamina C (previamente pulverizada) en 240 ml de agua fra.
5. Vierte 30 ml de la solucin de almidn en un vaso de plstico pequeo, aade una
gota de la solucin de vitamina C disuelta y remueve la mezcla. El color azul de la
solucin desaparecer.
6. Coloca un poco de jugo de cada fruta y verdura en vasos de plstico separados.
Coloca el pimiento verde en un mortero y tritralo hasta que hayas extrado el
zumo.
7. Repite el paso 5 pero sustituyendo la solucin de vitamina C por los jugos de las
muestras. Usa un vaso de plstico limpio y solucin de almidn para cada muestra
de jugo. Cuenta el nmero de ml del jugo de cada fruta que debes aadir para que
desaparezca el color azul de la solucin de muestra.
8. Compara las dosis necesarias de cada jugo para eliminar el color azul de la
solucin test estndar y reprtalo en una tabla comparativa.
9. Establece cualitativamente cual fruto contiene mayor cantidad de vitamina C y
compara con lo indicado en la bibliografa.
ACTIVIDADES DE APRENDIZAJE
1. Qu factores influyen en el mecanismo de degradacin de la Vitamina C?
2. Por qu se considera la Vitamina C como la ms inestable de todas las
vitaminas?
3. Qu relacin existe entre la degradacin oxidativa de la vitamina C y la
presencia de pigmentos obscuros en los alimentos?
4. Cmo se podra evitar la oxidacin del cido ascrbico?
5. Qu importancia biolgica tiene la Vitamina C?
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PRACTICAS DE BIOQUIMICA
PRACTICA 4
IDENTIFICACION DE PROTEINAS
INTRODUCCION:
Las protenas son elementos vitales para los organismos, encontrndose en plantas y
animales en una proporcin elevada. Hay una gran variedad de protenas y cada una
desempea una funcin biolgica especfica que puede ser de reserva, de sostn,
transporte, estructural, etc.
Qumicamente las protenas estn constituidas por combinaciones complejas de
carbono, hidrgeno, oxgeno, nitrgeno y otros elementos en menor proporcin
como son azufre, cobre, fsforo y fierro.
Cuando la estructura de la protena se desorganiza, se dice que se encuentra
desnaturalizada y esto trae como consecuencia la prdida de la actividad biolgica. La
desnaturalizacin puede lograrse por medios fsicos como el calor o qumicos como
una variacin de pH, observndose una disminucin en la solubilidad y la formacin
de un coagulo. Este mtodo es utilizado para demostrar la presencia de protenas.
Tambin se pueden identificar protenas mediante el uso de sustancias que al ponerse
en contacto con ellas, producen una coloracin especfica; tal es el caso de la
Reaccin de Biuret. En esta tcnica, se agrega hidrxido sdico y sulfato cprico a la
protena; el cobre se combina con ella y toma una coloracin prpura.
OBJETIVOS:
Determinar la presencia de protenas en la albmina de huevo
MATERIAL:
5 tubos de ensayo
Gradilla
Pinzas para tubo de ensayo
Bao mara
Mechero
REACTIVOS:
Hidrxido de sodio 40%.
cido actico
Hidrxido sdico al 20%. HNO3
Sulfato cprico diluida al 1%
Acetato de plomo al 5%.
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PRACTICAS DE BIOQUIMICA
PROCEDIMIENTO
Para ver la coagulacin de las protenas se puede utilizar clara de huevo, para
conseguir ms volumen puede prepararse para toda la clase una dilucin de clara de
huevo en agua, de forma que quede una mezcla an espesa.
1. Colocar en un tubo de ensayo una pequea cantidad de clara de huevo (2 ml).
2. Aadir 5 gotas de cido actico y calentar el tubo a la llama del mechero.
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PRACTICAS DE BIOQUIMICA
PROCEDIMIENTO
1.
2.
3.
4.
5.
Que en contacto con una solucin de sulfato cprico diluida, da una coloracin
violeta caracterstica.
PROCEDIMIENTO
1.
2.
3.
4.
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PRACTICAS DE BIOQUIMICA
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PRACTICAS DE BIOQUIMICA
ACTIVIDADES DE APRENDIZAJE
1.
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PRACTICAS DE BIOQUIMICA
PRACTICA 5
EXTRACCIN DE ADN VEGETAL
INTRODUCCION:
La extraccin de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones
salinos son atrados hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolucin y
posterior extraccin de la clula. Se empieza por lisar (romper) las clulas mediante
un detergente, vacindose su contenido molecular en una disolucin tampn en la
que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampn contiene ADN y todo un surtido
de restos moleculares: ARN, carbohidratos, protenas y otras sustancias en menor
proporcin. Las protenas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrn fraccionado
en cadenas ms pequeas. y separado de l por accin del detergente. Slo queda, por
tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampn y detergente, para lo cual se utiliza
alcohol isoamlico, probablemente el nico reactivo de esta prctica que no suele
haber en una cocina.
OBJETIVO:
Aprender un mtodo de extraccin de material gentico (ADN) en clulas vegetales.
MATERIAL:
Muestra vegetal
Agua destilada
Sal de mesa
Bicarbonato sdico
Detergente lquido
Alcohol isoamlico a 0
Batidora
Bao Maria
Colador
Vaso precipitados
Hielo
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PRACTICAS DE BIOQUIMICA
PROCEDIMIENTO
A.- PREPARACION DE LA SOLUCION TAMPON
Preparar el tampn con los siguientes ingredientes y mantener en el refrigerador o
en un bao de hielo triturado:
120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del
grifo.
1,5 g de sal de mesa, preferiblemente pura.
5 g de bicarbonato sdico.
5 ml de detergente lquido o shampoo
B.- PREPARACION DE LA MUESTRA
1.- Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN entre los vegetales que pueda
haber en la cocina (cebolla, ajo, tomates, etc.) y cortarla en cuadraditos.
2.-. Triturar la muestra con un poco de agua en la batidora accionando las cuchillas a
impulsos de 10 segundos. As se rompern muchas clulas y otras quedarn expuestas
a la accin del detergente.
3. -Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampn
fro y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar despus los restos
vegetales ms grandes del caldo molecular hacindolo pasar por un colador lo ms
fino posible. Lo ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y despus pipetear el
sobrenadante.
4.- Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y aadir con pipeta 10 ml de
alcohol isoamlico enfriado a 0 C Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la
cara interna del recipiente, teniendo ste inclinado. El alcohol quedar flotando sobre
el tampn.
5.- Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separacin
entre el alcohol y el tampn. Remover la varilla hacia delante y hacia atrs y poco a
poco se irn enrollando los fragmentos de mayor tamao de ADN. Pasado un minuto
retirar la varilla atravesando la capa de alcohol con lo cual el ADN quedar adherido a
su extremo con el aspecto de un copo de algodn mojado.
RESULTADOS.
El producto filamentoso obtenido de la extraccin no es ADN puro ya que,
entremezclado con l, hay fragmentos de ARN. Una extraccin "profesional" se
realiza aadiendo enzimas que fragmentan las molculas de ARN e impiden que se
unan al ADN.
Esquematiza lo realizado e indica que sucede en cada paso.
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PRACTICAS DE BIOQUIMICA
FUENTES CONSULTADAS
http://iesgarciamorato.org/Bio%20y%20Geo/Pract_bioquimica.htm
http://www.gpo13.com/biok.gif imagen
http://www.um.es/molecula/gluci09.htm
http://www.unav.es/bioquimica/bqfarmacia/pagina_5.html
http://www.uaa.mx/direcciones/dgdp/escuelas/descargas/manuales/MANUA
L_PRACTICAS_BIOLOGIA_I.pdf
www.benavente.edu.mx/colegio/secundaria/practicaslab/segundos/biologia/p
racticas/2B4IDP-P.doc
http://www.arrakis.es/~rfluengo/bioquimica.html
www.geocities.com/micadesa/educacion/edudna.html
html.rincondelvago.com/extracion-del-adn-genomico-y-electroferesis-engel.html - 29k
http://www.um.es/molecula/lipi08.htm
http://www.um.es/molecula/indice.htm
www.uhu.es/08007/documentos%20de%20texto/practicas/guion_de_practicas
_05_06%20(1).doc
http://comunidad.uach.mx/carzola/MANUAL_PRACT_BIOQUIMICA.pdf
http://www.unav.es/bioquimica/bqfarmacia/pagina_5.html
www.geocities.com/l_vald/PRACTICASGENERAL
http://www.um.es/molecula/sales09.htm
http://perceianadigital.com/index.php/el-rincon-de-las-ciencias/262-practicade-laboratorio-el-agua
http://es.scribd.com/doc/19504761/Practicas-de-Laboratorioquimicaalimentos
http://francisthemulenews.wordpress.com/category/ciencia/biologia/bioquim
ica/
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