Introduccin

En este proyecto se analiz la osificacin de distintos Philum por medio de una

tcnica anatmica llamada diafanizado, que a su vez presenta diferentes
protocolos dependiendo del autor.
La diafanizacin es una tcnica til para transparentar tejidos y se basa en la
igualacin del ndice de refraccin de la luz dentro y fuera del tejido, para este
proyecto se utiliz la tcnica de diafanizacion y tincin diferencial para cartlago
y hueso (Wassersug, 1976) y la tcnica de Dawson // Schultz.
Esta investigacin utiliza una metodologa cualitativa, con un enfoque
descriptivo y comparativo, que permite identificar las caractersticas de los
distintos Philum como; Mamalia, Anfibia, Ave, Pez, as establecer diferencias y
semejanzas que permitan realizar una correlacin anatmica morfolgica con
respecto a una comparacin con la especie humana.
Que es diafanizado, para quw sirve
Lado pedaggico

Objetivos

Aplicar las distintas tcnicas de diafanizado encontradas, con el fin de

poder generar muestras que puedan ser utilizadas como material
didctico en los establecimientos educacionales.
Diferenciar y comparar el desarrollo seo presente en los diversos
Phillun existentes.

Materiales
Tcnica de Wassersug

Formalina al 10%.
Solucin de Azul de Alcian.
Alcohol absoluto
Solucin de hidrxido de potasio.
Agua destilada.
Solucin de alizarina
Glicerina
Agua oxigenada

Tcnica de Dawson

Alcohol 99.5%
Disolucin de grasa en xilol

Solucin de Hidrxido de potasio

Agua destilada
Carmn alcohlico
Glicerina.

Mtodos: protocolo mencionar los 4 por la misma tcnica y

diferente tcnica
Protocolo
Jueves 4 de Octubre
Descripcin: Las muestras biolgicas (pez, pjaro, rana, ratn) se pasaron a
formalina al 10%
Mircoles 10 de Octubre
Descripcin: Luego de dejarlos por un tiempo en formalina, especficamente
una semana, se procedi a retirarles la piel a todas las muestras animales, con
un bistur del numero 4 y con la ayuda de las pinzas, y se dej nuevamente en
formalina al 10%.
Pez (Tricho azul) Trichogaster trichopterus
Mircoles 17 de Octubre
Descripcin: A las 14:25 hrs de la tarde se comenz a lavar la muestra N1
que corresponde al pez, el cual se dejo 3 hrs en un recipiente con el agua
corriendo. Se sac a las 17:45.
Luego paso a dejar en la tincin para la que se deba preparar con dos partes
de alcohol absoluto (50 ml), una parte de cido actico (25ml), ms el polvo de
azul de alcian (0,33 gr). Se prepararon tres concentraciones con 0,99 gr de
Azul de alcian, 150 ml de alcohol etlico y 75 ml de cido actico, la
concentracin se aumento para que el individuo quedara cubierto
completamente por la solucin.
Viernes 19 de Octubre
Descripcin: A las 12:30 pm se sac el individuo de la tincin y se introdujo en
alcohol absoluto por 3 hrs aproximadamente para que se fije mejor el colorante
hasta las 15:26.
De las 15:27 a 16:27 hrs se dejo en agua destilada.
De 16:28 a 16:38 se preparo una solucin de hidrxido de potasio la que se
preparo con 250 ml de agua destilada y media cucharada (C1) de granallas de
KOH, Luego se agrega la preparacin de Alizarina la que se comenz

mezclando media cucharada (C2) con unas gotas de agua destilada con un
agitador de vidrio hasta obtener un liquido homogneo y espeso de color
anaranjado-amarillento.
Luego se aadi a la solucin de KOH, unas gotitas de la solucin de alizarina,
donde al color cambio a un purpura, en este punto la solucin esta lista y se
puede introducir al material.
Lunes 29 de Octubre
Descripcin: Se cambio la concentracin de Hidrxido de potasio (KOH),
aumentndola a 250 ml de agua destilada y tres cucharadas (C1) de Hidrxido
de potasio.
Mircoles 31 de Octubre
Descripcin: El pez se dej en estado de latencia, esto quiere decir, que se
detuvo el proceso por un tiempo, ya que la universidad estara cerrada por
motivo del 1 de noviembre, lo que se realizo agregndole agua destilada por 5
das (por recomendacin del seor Elas).
Lunes 5 de Noviembre
Descripcin: Se retom el proceso introduciendo la muestra nuevamente en
KOH, la concentracin fue de 250 ml de agua destilada ms una cucharada
(C1) de hidrxido de potasio.
Jueves 8 de Noviembre
Descripcin: El pez se dej una solucin de 0,5 ml de KOH y en 100 ml de
glicerina.
Viernes 9 de Noviembre
Descripcin: Se cambio la concentracin de glicerina en la relacin de 1:3,
con 1 gr KOH, 200 ml de agua destilada, 300 ml de glicerina y mas 15 gotas de
agua oxigenada (H2O2).
Pjaro y ratn
Jueves 8 de Noviembre 2012
Descripcin: Se comenz el procedimiento a las 10:50hrs con el lavando de l
Mus musculus y Sporagra barbata, esto con una solucin de agua corriente
destilada, la cual se dejo correr hasta las 14:20hrs
Luego de esto a las 14:20 hrs ambos se extrajeron del agua y se comenz a
desvicerar tanto de la laucha como del pjaro, para as tener una mejor
observacin.

Ratn (Laucha) Mus musculus

Jueves 8 de Noviembre
Descripcin: A las 14:57 hrs el ratn se puso en agua destilada hasta las
15:15 hrs luego de esto se procedi a secarla para entonces depositarla en su
frasco respectivo,
A las 15:17 hrs se introdujo el ratn a la solucin de la tincin azul de alcian,
que est compuesta por 100 ml de alcohol etileno, 50ml de cido actico y
0.66g de azul de alcian
Martes 13 de noviembre 2012
Descripcin: Luego a las 02:30 hrs se cambi de
absoluto, hasta cubrirlo por completo durante 4 horas
-

la tincin a

alcohol

Pjaro (Jilguero) Sporagra barbata

Jueves 8 de Noviembre
Descripcin: A las 15:05 se introdujo el pjaro en agua destilada hasta las
15:44 hrs luego de esto se procedi a secar el pjaro para entonces depositarlo
en su frasco respectivo a las 15: 49 hrs se deposito en su frasco con la tincin
azul de alcian.
Martes 13 de noviembre 2012
Descripcin: Luego a las 02:38 hrs se cambi de la tincin a alcohol
absoluto, para fijarlas hasta cubrirlas por completo, el tiempo que estuvieron
aqu fue de 4 horas
Rana
Viernes 9 de Noviembre 2012
Descripcin: El procedimiento de la rana comienza con el lavado de esta en
agua corriente destilada desde las 10:10 hrs hasta las 13:10 hrs.
Posteriormente a esto a las 13:15 se retiro del agua y se seco con papel
absorbente, despus a las 13:17 hrs se introdujo la rana en un recipiente para
introducirle la tincin de azul de alcian.
Martes 20 de Noviembre 2012
Descripcin: Luego continuando con el procedimiento se le agregaron 250ml
de agua destilada ms 3 cucharadas de (c1) KOH

Feto de perro Canis lupus

Jueves 29 de Octubre
Descripcin:

Fijacin

el

alcohol

absoluto.

Martes 6 de noviembre
Descripcin:

Disolucin

de

grasas

en

Xilol

en

alcohol

(50%)

Viernes 9 de Noviembre
Descripcin:

fijacin

en

alcohol

absoluto.

Jueves 13 de noviembre
Descripcin: inmersin en KOH al 30%( 8 horas)
Inmersin
en
KOH
al
15%
Domingo 16 de noviembre
Descripcin:
Inmersin

en

KOH

al

(2
7%

dias)
(5

das)

Jueves 20 de noviembre
Descripcin:

Deshidratacin

en

Alcohol

al

70%

(3

das)

Domingo 23 de noviembre
Descripcin:

Deshidratacin

en

Alcohol

90%

(4

das)

Jueves 27 de noviembre
Descripcin:

Tincin

en

Disolucin

de

Carmn

Alcohlico

(7

das)

Martes 04 de Diciembre
Descripcin: Aclaramiento KOH 2%, Glicerina 20%, Agua destilada 78%

Conclusin:

Comparacin con el humano de las 5 phyllum

Resultados obtenidos
Pez
El pez, s bien era nuestro individuo de ensayo tanto en las mediciones de los
componentes utilizados como el tiempo de duracin, el resultado obtenido fue

claramente lo esperado, ya que se puede evidenciar su osificacin aun cuando

presentaba viseras.
En el pjaro y el ratn los resultados no fueron completamente los esperados,
debido a que la cantidad de tincin utilizada tanta de Alizarina y Alcian no fue
una proporcin acorde a su tamao y adems la cantidad de tiempo empleado
de hidrxido de potasio no fue el ptimo.
En la rana los resultados obtenidos no fueron completamente los esperados, ya
que no se logro trasparentar por completo los tejidos por lo que se puedes
visualizar tanto tejido muscular como tejido adiposo. A cuanto su estructura y
consistencia podemos decir que al ser mas cartilaginoso su osificacin, su
estructura es ms delicada y lacia

Bibliografa

EDUCA (Recursos Educativos). (2010). Tcnica de diafanizado.

Disponible en:
http://revistareduca.es/index.php/biologia/article/viewFile/823/838
CLEVES, D., Quiroga, M., Villegas, A. (2000) DIAFANIZACIN:
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