UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA

DE MXICO
FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES
ZARAGOZA
MDULO DE MICROBIOLOGA I
Chvez Hernndez Ana Mara
Garca Villegas Daniela Jazmn
Hernndez Villalva Claudia
Gonzlez Olmos Arianna
Equipo 3 Grupo 1602
Asesor: Beatriz Arellano
Anlisis Microbiolgico del agua
|| OBJETIVO ||
Aprender la manera correcta de realizar
el anlisis microbiolgico del agua y su
importancia en el mbito de la salud
pblica.
|| RESUMEN ||
Debido a que un gran nmero de
enfermedades son transmitidas por el
agua, es necesario analizarla en busca de
microorganismos
principalmente
de
coliformes.
Para esto se realizan las pruebas de
Nmero Ms Probable (NMP), que es una
prueba presuntiva de la presencia de
coliformes, aislamiento en agar EMB e
IMViC que son pruebas confirmatorias
para coliformes. Solo se realizo NMP, la
muestra fue de agua de garrafn de
purificadora, debido a que es agua
potable la NOM-127-SSA1-1994 reporta
cual es la carga microbiana permitida. Se
obtuvo 460 NMP/100mL.
|| INTRODUCCION||
El agua es el elemento de contagio
directo o indirectamente de los agentes
productores de enfermedades y con el fin
de garantizar el mayor grado posible de
inocuidad del agua destinada al consumo

pblico, la mayora de los pases han

establecido normas de potabilidad tanto
fsicas, qumicas y bacteriolgicas. Bajo
el aspecto bacteriolgico la eleccin de
grmenes indicadores de contaminacin,
esencial para la interpretacin de la
calidad de las aguas objeto de examen,
ha sido y es motivo de debata bajo la luz
que proporcionan las nuevas tcnicas
analticas, los medios de cultivo ms
selectivos y el mejor conocimiento
epidemiolgico, que permiten conceder a
cada indicador bacterianos el crdito de
confianza que real y verdaderamente
merece.
A continuacin de acuerdo a la NOM127-SSA1-1994 se describirn los
parmetros establecidos para que el
agua sea potable y as poder hacerla
apta para su uso y consumo humano.
El agua deber estar libre de coliformes,
dicho en otras palabras ausencia de
microorganismos Gram (-), cocobacilos,
catalasa (+), oxidasa (-) que pertenecen
a la familia de las Enterobacterias,
fermentan lactosa con produccin de H2S
y CO2 y son facultativos.
Para la determinacin de presencia de
coliformes se utilizan los siguientes
mtodos:
Nmero
ms
probable
(NMP),
tambin conocido como el mtodo de los
ceros de Poisson, es una forma de
obtener
datos
cuantitativos
en
concentraciones de elementos discretos
a partir de datos de incidencia
positiva/negativa. Es una estrategia
eficiente para estimar densidades de

poblacin que se emplea cuando una

evaluacin cuantitativa de elementos
individuales. Consiste en sembrar tres
alcuotas de la muestra original seriadas
en 9 o 15 tubos con medio apropiado el
nmero
de
microorganismos
se
determina
utilizando
las
tablas
convencionales del NMP. Entre sus
ventajas tiene que es relativamente
sencillo y barato y que mediantes el uso
apropiado de medios selectivos y
diferenciales se puede determinar el
nmero
de
microorganismos
pertenecientes a grupos especficos.
IMViC es una prueba utilizada en
biologa para la identificacin bacterias.
Se
compone
de
cuatro
pruebas: Indol, Rojo de metilo, VogesProskauer y Citrato. El resultado de este
test se expresa mediante smbolos de
positivo o negativo (+ o -) segn el
resultado de cada prueba, siguiendo
siempre el orden establecido por las
iniciales del mtodo. As por ejemplo, el
IMViC
de
la
bacteria Salmonella y Citrobacter es -++.
Para
E.coli
es
++-y
para Klebsiella y Enterobacter es --++.
Cuenta en placa: Cosiste en una serie
de diluciones que se realiza en tubos con
solucin salina isotnica, para despus
cada dilucin vaciarla en placa en agar
nutritivo, la cantidad de microorganismo
se calcula multiplicado el nmero de
UFC/mL por el reciproco de la dilucin.
Filtracin por membrana: Consiste en
hacer pasar una cantidad previamente
determinada de agua a travs de una
membrana (celulosa o policarbonato) con
un dimetro de poro de 0.45 que
retiene a las bacterias, pero que permite

ser atravesada por el agua. La

membrana se coloca posteriormente en
una caja Petri en la que se ha depositado
un medio de cultivo adecuado y sometida
a continuacin a incubacin a 35-37 C,
para coliformes y a 44-45 C para
coliformes fecales durante 20 horas. Al
cabo de este periodo se observan las
colonias aparecidas. Si es necesario, las
colonias individuales recogidas son
sometidas a subcultivos en caldo
lactosado y observacin microscpica
previa tincin de Gram.
|| METODOLOGIA ||
Se prepararon 9 tubos de caldo Rojo de
fenol + lactosa, de tres en tres a
diferentes concentraciones. Los primeros
3 tubos contenan 10 mL de una solucin
a doble concentracin, los siguientes tres
contenan 9 mL de una disolucin a una
concentracin normal y los ltimos tres
contenan 9.9 mL tambin a una
concentracin normal. Cada uno de los
tubos se le agreg previamente una
campana de Durham, la cual es til para
observar la produccin de gas. Despus
de
aadir
las
cantidades
antes
mencionadas a cada tubo, se agitaron
voltendolos de cabeza y colocndolos
bien de nuevo para propiciar que el
lquido se colocara dentro de la campana
de Durham tambin.
Despus se
procedi a aadir la muestra de agua a
analizar, siendo 10 mL de muestra para
los tubos que contenan 10 mL de la
solucin a doble concentracin, un mL de
muestra para los tubos que contenan 9
mL a concentracin normal y 0.1 mL para
los tubos que contenan 9.9 mL de la
solucin a concentracin normal.
Se colocaron los tubos en la incubadora a
37C durante 24 hrs y se procedi a leer

los resultados obtenidos con ayuda de las

tablas de McCrady para NMP.
NOTA: solo se realizaron las pruebas
presuntivas, las pruebas confirmativas no
se llevaron a cabo y por lo tanto no se
reporta morfologa colonial debido a la
falta de material (placa de agar EMB),
tampoco fue posible realizar la prueba de
IMViC para la identificacin de los
coliformes
presentes
en
el
agua
analizada, tambin por falta de material.

|| RESULTADOS||

Producci
n de
gas

Producci
n de
acido

Interpret
acin

10 ml
Concentr
acin de
lactosa
doble

Positiva

Positiva

(+) Ac/
(+)Gas

1 ml
Concentr
acin de
lactosa
normal

Positiva

Positiva

(+) Ac/
(+)Gas

Serie

NMP (3 tubos)

0.1 ml
Concentr
acin de
lactosa
normal

Nmero de tubos
positivos
1
2
3
NMP= 460/dL

1
Positivo
2
negativo

Positiva

(+) Ac/
(+)Gas
(+) Ac/
(-)Gas

10 ml

1.0 ml

0.1 ml

+
+
+

+
+
+

+
-

|| ANALISIS DE RESULTADOS||
Ana Mara:
El mtodo de los tubos mltiples es uno
de los ms utilizados para la deteccin y
numeracin de organismos coliformes en
exmenes sanitarios que se realizan para
determinar la calidad del agua potable.
Se
realiz
solamente
la
prueba
presuntiva para 3 grupos de 3 tubos con
caldo lactosado, inoculando en cada
grupo 1, 10 y 0.1ml de la muestra de
agua a analizar. Tal prueba dio positiva,
al observarse un cambio de color, de
rojizo a amarillo, debido a la produccin
de acido y CO2 por la fermentacin de la
lactosa, caracterstica de organismos
coliformes, pero a pesar de dar
positiva, se requiere de la realizacin
de la prueba confirmativa debido a que
tal fermentacin pudo ser provocada por
otros microorganismos no coliformes.
Se utiliza agar EMB para inocular a partir
de cada tubo y si se observan colonias
verde brillante se confirma la presencia
de coliformes, y se diferencia el gnero
de la bacteria con ayuda de pruebas
IMViC (Indol, Rojo de Metilo, Vogues
Proskauer y Citrato) la cual arroja
resultados diferentes para:
Klebsiella sp
Escherichia sp
Citrobacter sp
Enterobacter sp
Desafortunadamente no fue posible
realizar las pruebas confirmativas debido
a falta de material (places EMB y tubos
para las pruebas IMViC).
Conclusin:
Se aprendi a realizar el anlisis
microbiolgico del agua, a pesar de no
poder realizar algunas pruebas y se
confirma lo importante que es en el
mbito de la salud pblica, que se
cumpla con lo establecido en la NOM-

127-SSA1-1994, sobre la cantidad de

microorganismos coliformes permitidos
para no poner en riesgo la salud, por un
mal tratamiento de purificacin del agua.

Daniela:
Para la determinacin de coliformes en
agua se realiz el mtodo del nmero
ms probable, los tubos despus de la
incubacin se observaron amarillos, lo
cual indica que el medio se acidifico y
haba presencia de gas (burbujas) en la
gran mayora de los tubos. La presencia
de coliformes es evidente sin embargo no
se
realizaron
las
pruebas
de
identificacin de los microorganismo
presentes, debido a una confusin que se
realiz en la prctica no hubo una placa
de EMB disponible para poder sembrar y
posteriormente poder realizar de una
colonia aislada IMViC, pero se sabe que si
en la placa de EMB hubiera habido
crecimiento bacteriano de colonias verde
brillante u oscuras, serian colonias
sospechosas y entonces se hubiera
realizado la prueba de identificacin
IMViC en la que se inocula una colonia
perfectamente aislada en SIM, Rojo de
Metilo, Vogues Proskauer y Citrato,
despus de inocular se incuban a 44.5 C por
24 horas para saber si son coliformes fecales
y para coliformes totales se incuba a 37C ,

los posibles resultados son los siguientes:

Finalmente se reportan los resultados de

cada prueba y podramos saber de qu m.o
se trata, ya que cada uno tiene una clave,
Salmonella y Citrobacter es -+-+.Para E.coli

es ++-- y para Klebsiella y Enterobacter es -++

Conclusin:
Se aprendi a realizar la prueba de
control microbiolgico del agua (NMP) y
la importancia que tiene, adems de las
pruebas
que
requiere
para
su
identificacin, la muestra de agua
proporcionada de una purificadora se
rechaza ya que no es potable, al no
cumplir con la higiene y sanitacin para
el consumo humano. No se determin si
la presencia de coliformes era total o
fecal, ni de que microorganismo estaban
contaminadas, sin embargo se sabe que
son coliformes.
Arianna:
Debido a que no se pudieron realizar las
pruebas confirmativas por falta de
material slo se pudieron obtener los
resultados de la prueba presuntiva de
Nmero ms probable para coliformes, Al
observarse el vire de color en todos los
tubos,
se
puede
determinar
que
posiblemente
existen
bacterias
coliformes en la muestra analizada, ya
que esta formacin de cido se da
gracias a la fermentacin de la lactosa,
que es el disacrido contenido en el
medio. Sin embargo, no solo los
coliformes
pueden
fermentar
los
discaridos, sino que otras bacterias
mesfilas aerobias tambin pueden
degradar la lactosa por lo que era
indispensable la realizacin de las
pruebas confirmativas para determinar la
presencia de coliformes, ya que el medio
agar EMB es selectivo y diferencial para
bacterias Gram negativas, y siendo que
las bacterias coliformes son entricas la
mayora de estas son Gram negativas,
buscndose principalmente la presencia
de E. coli (Gram negativa), la cual es el
principal indicador de contaminacin por
coliformes; y la prueba de IMViC era

necesaria para poder confirmar la

presencia de E. coli que de haber sido
aislada en el medio agar EMB y
sembrada en el medio antes mencionado
hubiese presentado, segn la literatura,
los siguientes resultados: Indol positivo,
Rojo de Metilo positivo, Vogues-Proskauer
negativo y Citrato negativo .
Tambin se present la formacin de gas,
que tiene la misma causa que la
formacin de cido, ya que entre los
productos finales de la fermentacin
tambin se encuentran el CO2.
Conclusin:
Se determin que posiblemente existan
bacterias coliformes en la muestra de
agua analizada.
Claudia:
Al solo realizar la prueba de nmero ms
probable que es una prueba presuntiva la
determinacin de coliformes no es
confiable. La determinacin del nmero
ms
probable
del
microorganismo
coliforme al fermentar la lactosa produce
acido y gas que es lo observable en esta
prueba ya que el medio tubo un vire del
indicador y en la campana de Durham
quedaron atrapadas burbujas. Por una
distribucin probabilstica se obtuvo en
nmero de NMP.
La NOM-127-SSA1-1994 menciona que la
cantidad
permitida
de
coliformes
presentes en la muestra de agua potable
debe ser de 2NMP/100mL; al obtener 460
NMP/100 mL la muestra de agua de
garrafn, tiene un elevado nmero de
microorganismos, al cual para confirmar
que eran de origen fecal se realizan las
pruebas confirmativas, estas no fueron
realizadas a causa de falta de material.
Conclusin:
La
determinacin
de
microorganismos en el agua permite

determinar si esta tiene la posibilidad de

causar alguna enfermedad.
Aunque solo sea posible de que el agua
analizada
tenga
coliformes,
se
recomienda no consumirla.
|| REFERENCIAS||

Secretaria de Salud, NOM-127SSA1-1994, Salud ambiental, agua

para uso y consumo humano,

lmites permisibles, Mxico D.F.,
1994.
Koneman
E.W.
Diagnostico
microbiolgico: texto y atlas
Editorial Medica Panamericana,
2001.