Infeccin

La causa de infeccin son patgenos que pueden ser:

Virus,
Bacterias,
Hongos,
Protozoarios
Helminto

Si comparamos el tamao de
estos agentes patgenos, el
ms pequeo es el virus de la
polio, luego vienen las bacterias,
y luego los protozoos que son 10
veces ms grandes que las
bacterias como las amebas, la
leishmania, tripanosomas cruzi.
Por ltimo, los ms grandes son
los helmintos, se los puede ver
al ojo desnudo, sin la necesidad
de un microscopio como es el
caso de los virus (microscopio electrnico), las bacterias y protozoos
(microscopio ptico).

Barreras a la infeccin:

1- Fsicas y qumicas

Estn compuestas por la piel, los pulmones, los intestinos y ojos y la nariz.
Estas barreras fsicas y qumicas a su vez, se dividen mecnicas, qumicas y
microbiolgicas.
Fsicos:
Piel y descamacin de la piel,
secreciones con capacidad de arrastrar microorganismos (lgrimas,
saliva, mucus)
Oscilacin ciliar broncopulmonar
Movimientos peristlticos intestinales
Qumicos:
secreciones sebceas (c grasos inhiben crecimiento bacteriano)
Lisozima en saliva, lgrimas y secreciones nasales, que matan a las
bacterias ya que rompe la pared de peptidoglicano.
jugos gstricos
1

 protenas de unin a hierro (transferrina y lactoferrina)

protenas catinicas que desestabilizan las membranas microbianas
(defensinas, catelicidinas y BPI)
Biologicos:
Flora normal. Las bacterias patgenas deben competir con la flora
normal.
2- Inmunidad innata
3- Inmunidad adquirida

Qu es la inmunidad?
La ciencia Inmunologa se desarrolla a partir de Luis Pasteur y su teora
de los grmenes como causantes de enfermedades
Actualmente: Inmunidad es el trmino que describe el estado de tener
suficientes defensas para evitar la infeccin, la enfermedad o la invasin
biolgica.
La inmunidad es la Capacidad de un organismo de elaborar una respuesta de
defensa frente al reconocimiento de entidades identificadas como no propias.
CLASIFICACIN
Segn la etapa:
INNATA (ETAPA TEMPRANA): sus mecanismos comienzan a actuar
inmediatamente despus de la penetracin del agente agresor, a
diferencia de lo que ocurre con la inmunidad especfica que requiere
de cierto tiempo para que se haga efectiva. Lo que se procura en
primera instancia es la eliminacin del agente infectivo y la reparacin
del dao tisular originado, jugando un papel muy importante en ello el
denominado proceso inflamatorio.
Los principales componentes de la inmunidad innata son:
1. Las barreras fsicas y qumicas
2. Clulas fagocticas, neutrfilos macrfagos y linfocitos citotoxicos
naturales (NK).
3. El sistema del complemento que son una serie de protenas sanguneas,
es una cascada de eventos que concluyen el al formacin de un poro en
una clula.
4. Citocinas que regulan y coordinan las actividades de las clulas
encargadas de la inmunidad innata.

Las clulas que actan en primera instancia son los MACRFAGOS LOCALES,
que ligan a su membrana al agente agresor. Como consecuencia de esa
interaccin los macrfagos sintetizan y liberan interleuquina 1 (IL-1), factor
necrosante de tumores (TNF) y factor quimiotctico de neutrfilos (NCF). Estos
factores inducen la rpida emigracin de los polimorfonucleares NEUTRFILOS
circulantes a los sitios extravasculares donde se encuentra el agente patgeno.
Estas citoquinas inducen, a su vez, alteraciones en el endotelio vascular a
travs del cual se produce la emigracin de los neutrfilos.
Las interacciones entre las molculas de la membrana de los neutrfilos y las
del epitelio vascular transducen seales, en las que participan protenas G,
fosfolipasa C, proteinquinasa entre otras, y llevan a la activacin del neutrfilo.
La injuria tisular inducida por ste es debido a la liberacin de productos
intermediarios del oxgeno (H2O2, anin superxido, radicales hidroxilo) y a la
exocitosis de los contenidos de los grnulos citoplasmticos, especialmente
elastasa.
Todo este proceso hace que los polimorfonucleares neutrfilos sean las clulas
defensivas que acuden en primer trmino al lugar de la infeccin,
observndose acumulo de ellas en las primeras 24 horas, y posterior
destruccin, por fagocitosis, de los neutrfilos que participaron activamente en
el proceso. A partir de ese momento las clulas predominantes son los
macrfagos los que, dada su distribucin, tardan ms tiempo en llegar y son
las que al fagocitar las bacterias habrn de provocar su destruccin.
La muerte de las bacterias tiene lugar por mecanismos endocelulares que
ocurren en los macrfagos y por mecanismos exocelulares mediados por el
sistema complemento. Los microorganismos fagocitados son, en gran parte,
destruidos por accin enzimtica y metabolizados como material extrao. El
pasaje de las partculas al citoplasma de los fagocitosno es simple y ello ocurre
previa invaginacin de la membrana citoplasmtica que engloba a la partcula
en su fase inicial y la rodea finalmente, originando un fagosoma.
Seguidamente, los grnulos lisosomales se unen al fagosoma y forman un
fagolisosoma; durante este proceso las enzimas de los grnulos lisosomales
pasan al interior del fagolisosoma y se inician los procesos de digestin del
material fagocitado, que es consecuencia de la activacin que ha
experimentado el macrfago.
ACTIVACION DEL COMPLEMENTO: son muchas protenas que se activan en
forma de cascada, cumple con muchas funciones, en cuanto a ataque contra
agentes extrao tiene 3 funciones
-

generacin de inflacin
lisis de bacterias: el citoplasma de una bacteria es hipertnico,
hay mucha concentracin de sales que hace que sea hipertnico.
3

Si liso la membrana, la bacteria revienta por formacin de poros e

hinchamiento
opzonizacin: son molculas que se pegan a la superficie de la
molcula y son reconocidas por el macrfago, que fagocita mejor.

CITOQUINAS: son sintetizadas por macrfagos en respuesta a algo. Cuando el

macrfago reconoce algo extrao, lo endocita, e induce la transcripcin de
citoquinas.
Estas sustancias son glucoprotenas o protenas de bajo peso molecular (PM),
generalmente 8-75 kD, las que son producidas durante la fase efectora de la
respuesta inmune tanto natural como de la especfica, con el fin de mediar y
regular la amplitud y duracin de las respuestas inmune e inflamatoria.
Cuando el cido araquidnico es metabolizado a travs de la cicloxigenasa se
origina otra familia de compuestos, la de las prostaglandinas y tromboxanos,
con diversas acciones biolgicas. Las prostaglandinas constituyen un grupo de
cidos grasos no saturados, estrechamente relacionados, derivados de un
compuesto hipottico de 20 carbonos con un anillo ciclopentano (cido
prostanoico). Los tromboxanos son compuestos no prostaglandnicos con un
tomo de oxgeno insertado en el anillo.
Inmunidad adquirida o adaptiva: se adquiere luego del nacimiento, alta
especificidad, respuesta demorada y tarda en llegar a mxima, genera
memoria inmunolgica, presente solo en vertebrados.
Los principales componentes de la inmunidad adquirida son:
1. Linfocitos B y sus productos de secrecin (anticuerpos)
2. Linfocitos T (CD4 y CD8)
3. Clulas presentadoras de antgenos.
El sistema inmunitario adaptativo recurre a 3 estrategias para combatir los
microbios:
Los anticuerpos segregados se unen a los microorganismos
extracelulares, bloquean su capacidad para infectar las clulas y
favoreces su ingestin por los fagocitos y su posterior eliminacin
Los fagocitos ingieren los microbios y los destruyen y los linfocitos T
helper fomentan su capacidad microbicida.
Los linfocitos T citotxicos destruyen las clulas infectadas por los
microbios inaccesibles a los anticuerpos.
La Inmunidad Innata y Adquirida dependen de la habilidad del Sistema
Inmune en distinguir entre molculas propias y no propias, o extraas al
organismo. Sin embargo, tambin una sustancia ajena al organismo que no
tenga carcter infeccioso puede generar una respuesta inmune (alergia). As
mismo, aquellos mecanismos que en condiciones normales nos protegen de
4

infecciones y eliminan las sustancias ajenas en algunas circunstancias son

capaces de provocar lesiones tisulares y enfermedades (enfermedades
autoinmunes).
Las clulas T con receptores gama-delta y las clulas T NK que son muy activas
intervienen tanto en la inmunidad innata como en la adaptativa.
Especificidad

Diversidad

Inmunidad innata
Actua frente a
estructuras compartidas
por microorganismos
afines (PAMPs), como por
ejemplo: ADN o ARN
viral, acido lipoteicoico
en bacterias.
El reconocimiento se
produce mediante
receptores de
reconocimiento de
patrones (RRP)
Limitada, todas las
clulas de la misma
estirpe tienen los
mismos receptores, es
decir la diversidad es
determinada por la lnea
germinal.

Inmunidad adaptativa
Alta especificidad para
los antgenos
microbianos o no.

Memoria

Nula

Falta de reactividad
frente a uno mismo
Barreras celulares y
qumicas

si

Muy amplia, los

receptores se producen
por la recombinacin
somtica de segmentos
gnicos. Los linfocitos T
y B van a tener
receptores capaces de
reconocer un amplio
rango de
microorganismos, los
clones se van
diferenciando.
Tiene memoria ante una
segunda exposicin
gracias a la existencia
de linfocitos de
memoria. La respuesta a
esta segunda exposicin
y a las sucesivas son
ms rpidas y amplias.
si

-Piel, epitelios, mucosas,

productos qumicos
antibacterianos.

Linfocitos presentes en
los epitelios, anticuerpos
segregados en las
5

Protenas sanguneas
Clulas

-Monocitos/macrfagos,
neutrfilos y clulas NK.
Complemento
Fagocitos (macrfagos y
neutrfilos)
Linfocitos NK

superficies epiteliales
Anticuerpos
Linfocitos T y B
Linfocitos NK

SISTEMA INMUNE es un sistema complejo que incluye numerosas

molculas, clulas y rganos que forman una red profundamente
interrelacionada e imbricada (superpuesta) en un organismo, que protege de
la enfermedad al identificar y matar organismos patgenos y clulas
tumorales.
Desde este punto de vista, a las molculas extraas se las denomina
ANTIGENOS (antibodies generator) y se definen como sustancias que unen
a receptores especficos (ANTICUERPOS y RECEPTORES DE CELULAS T
(TCR), y generan la respuesta inmune. La especificidad de la respuesta
inmune adquirida se debe a estas 2 molculas, los anticuerpos y los receptores
TCR.
ANTGENO = Cualquier molcula (protenas, hidratos de carbonos, ADN,
lpidos, etc.) capaz de ser reconocida por componentes del sistema inmune.
INMUNGENO = Molculas complejas (protenas, hidratos de carbonos, ADN,
lpidos, etc.) capaces de ser reconocidas por componentes del sistema inmune
In vivo y desencadenar una respuesta
Los antgenos T-independientes no inducen cambio o switch de clase de
inmunoglobulina por lo que la respuesta es siempre de tipo IgM. El cambio de
IgM a IgG u otros isotipos de inmunoglobulinas es dependiente del antgeno y
6

de las diferentes interleuquinas sintetizadas principalmente por los linfocitos

Th.
Si el inmungeno es un antgeno T-dependiente, el antgeno por s solo no es
suficiente para que la respuesta inmune sea efectiva. Para que ello ocurra
necesita de la cooperacin de los linfocitos Th.
El linfocito B cuando fija al antgeno por su receptor especfico lo internaliza,
procesa y expone en su membrana los diferentes pptidos resultantes
asociados a molculas de antgenos CMH clase II, de modo anlogo al que
hacen las clulas presentadoras de antgeno. Este producto es el que reconoce
el linfocito Th.
INMUNGENO vs. ANTGENO
Antgeno: Cualquier molcula que reacciona especficamente con anticuerpos
o receptores de linfocitos T (TcR).
Inmungeno: Cualquier molcula capaz de desencadenar una respuesta
inmune en un husped determinado.
Condiciones que debe cumplir un inmungeno:
Ser reconocido como No propio
Tamao
Concentracin
HAPTENO = Molcula pequea que puede reaccionar con un Ac, pero es
incapaz de provocar por s misma, en forma aislada, una respuesta inmune
humoral. Ejemplos: Dinitrofenol (DNP), Insulina, Vit B12, Hormonas T3 y T4.
DETERMINANTES ANTIGENICOS O EPITOPES = es
una zona restringida de la molcula antignica, y es la
que va a ser reconocida por los receptores especficos
de los linfocitos T o B.
Valencia del antgeno: N de determinantes en una
molcula antignica
Valencia total: nmero de determinantes
antignicos (ocultos + expuestos)
Valencia funcional: nmero de determinantes antignicos expuestos

EPITOPES CONTINUOS Y EPITOPES DISCONTINUOS:

Los EPITOPES CONTINUOS son aquellos que estan formados por
una secuancia lineal, como por ejemplo una proteina en su
estructura primaria, una secuancia lineal de aa o un
polisacarido.

Un EPITOPE DISCONTINUO es el epitope que esta

formado por la conformacion de esa region de la
molecula. Cuando esta molecula antigenica se
despliega al desnaturalizarla, el determinante
antigenico se pierde porque esta dado por la
conformacion.

RECONOCIMIENTO DE EPITOPES:
Los linfocitos B es capaz de reconocer un epitope antignico presente en una
molcula antignica en forma nativa, no necesita que le presenten un
antgeno. Puede reconocerlos directamente pptidos, protenas, cidos
nucleicos, polisacridos, lpidos y pequeas molculas gracias a receptores
especficos que llamamos inmunoglobulinas de superficie. Lo reconoce
mediante los determinantes antignicos por los que tenga especificidad en
forma directa.
Los linfocitos T reconocen solamente pptidos y necesita que le presentes
estos determinantes antignicos, mediante clulas presentadoras de antgenos
(clulas dendrticas, macrfagos, linfocito B). Estas CPA capta el antgeno
mediante receptores de la inmunidad innata, los fagocita o endocita, los
procesan y los pptidos con una determinada secuencia se reexpresan en la
superficie de las CPA en un contexto de unas molculas que se denominan
molculas del complejo mayor de histocompatibilidad. Finalmente lo presentan
a los linfocitos T. Los linfocitos T son especficos frente a secuencias de aa de
los pptidos.

Los linfocitos T colaboradores CD4+ reconocen

pptidos unidos a molculas del CMH de clase II,
mientras que los linfocitos T citotxicos CD8+
reconocen pptidos unidos a molculas del CMH de
clase I. los linfocitos T colaboradores reconocen
pptidos derivados de protenas extracelulares de
las CPA, mientras que los T CD8+ reconocen
pptidos derivados de protenas citoslicas,
habitualmente de sntesis endgena.
Estas molculas del CMH constan de una hendidura
extracelular que se une a pptidos y estn ancladas a la clula por dominios
transmembrana. Tambin tienen dominios similares a las Ig que contienen
sitios de unin a las molculas de los linfocitos T CD4+ y CD8+
CMH I: la molcula de clase I es un hetrodimero formado
por una cadena , una -microglobulina y un pptido
antignico unido y la expresin estable de las molculas
de clase I sobre la superficie celular requiere la presencia
de los 3 componentes del heterodimero. El segmento 3
se pliega en un dominio Ig cuya secuencia de aa es
altamente conservada en todas las molculas de clase I.
este segmento contiene un bucle que acta como punto
de unin a CD8.

CMH II: La molcula de clase II totalmente ensamblada

es un heterodimero que consta de una cadena , una
cadena y un pptido antignico unido y al igual que
para el CMH de tipo I, la expresin estable sobre la
superficie celular requiere la presencia de los 3
componentes. De unin a CD4+.

Cada molcula del CMH de tipo I y II presenta una nica hendidura de unin a
pptidos, unen un solo pptido por vez, aunque cada molcula se puede unir a
varios pptidos. Una nica molcula del CMH puede unirse a mltiples
pptidos, ya que cada individuo posee solo un pequeo nmero de CMH que
deben ser capaces de presentar pptidos procedentes un gran nmero de
antgenos protenicos.
Las molculas de clase I se expresan constitutivamente en todas las clulas
nucleadas mientras que las de tipo II se expresan normalmente solo en las

clulas dendrticas, los linfocitos B, los macrfagos y algunos otros tipos

celulares.
La funcin efectora de los linfocitos T CD8+ restringidos por la clase I es
destruir clulas infectadas con microbios intracelulares, como los virus.
Los linfocitos T colaboradores CD4+ restringidos por la clase II tienen un
conjunto de funciones que requieren el reconocimiento del antgenos
presentados por un nmero limitado de tipos celulares. Los linfocitos T CD4
vrgenes reconocen antgenos presentados por las CPA en rganos linfticos
perifricos. Los CD4 diferenciados actan principalmente para activar o ayudar
a los macrfagos a eliminar microbios extracelulares y activar a los linfocitos B
para que sinteticen anticuerpos que eliminan tambin los microbios
extracelulares.
La expresin de las molculas del CMH aumenta por las citocinas producidas
durante las respuestas inmuni5aria innatas y adaptativas.
Los interferones IFN-, IFN-, IFN-, el factor de necrosis tumoral (TNF) y la
lunfotoxina (LT) aumentan la expresin de las molculas del CMH de tipo I.
El IFN- es la principal citocina que estimula la expresin de las molculas de
clase II en las CPA. El IFN- pueden producirlo los linfocitos NK durante las
reacciones inmunitarias innatas y es un mecanismo mediante el cual la
inmunidad innata estimula a la adaptativa. Tambin es sintetizado por los
linfocitos T activados por antgenos, y su capacidad para aumentar la expresin
de CMH de clase II en las CPA es un mecanismo de amplificacin de la
respuesta inmune adaptativa.
Tipos de respuesta inmunitaria:

Humoral
-Innata: sistema del complemento; sistema de la coagulacin; enzimas;
interleuquinas; colectinas y pentoxinas
-Adaptativa: anticuerpos

Celular
- Innata: neutrfilos; macrfagos y basfilos.
- Adaptativa: linfocitos T y B.

En la inmunidad humoral, los linfocitos B segregan anticuerpos que impiden las

infecciones y eliminan los microorganismos extracelulares. En la inmunidad
celular, los linfocitos T cooperadores activan los macrfagos para destruir los
microbios fagocitados o los linfocitos T citotoxicos destruyen las clulas
infectadas y eliminan los reservorios de infeccin.

10

Inmunizacin:
Inmunid
ad
activa:
cuando
la

inmunidad se genera por la exposicin a un antgeno extrao. Ej:

vacunas, es un tipo de inmunidad activa artificial.
Inmunidad pasiva: el individuo se vuelve inmune al antgeno
especifico sin haber estado expuesto a l. Se produce por el paso de
un suero o linfocitos desde una persona con inmunidad especifica. Es
til cuando se requiere una respuesta rpida. No se genera memoria.
Ej: el paso de anticuerpos maternos al feto.
Natural
Activa
Pasiva
inmunes

Artificial

Infeccin

Vacunacin

Materna

Sueros

rganos del sistema inmune:

rganos linfoides centrales o primarios (no encapsulados): donde

los linfocitos expresan por primera vez los receptores del antgeno y
adquieren su madurez fenotpica y funcional.
-M.O (medula sea): maduracin de linfocitos B y generacin de todas
las clulas sanguneas
11

-Timo: maduracin de linfocitos T

rganos linfoides secundarios: donde se ponen en marcha y

progresan las respuestas linfocticas a los antgenos extraos
-encapsulados: bazo, ganglios
- no encapsulados o difusos: tejido linfoide asociado a mucosas (MALT):
urogenital, placa de peyer del intestino (GALT), lamina propia (GALT),
tejido bronquial linfoide (BALT), amgdalas (NALT).
MALT: mucosa-associated tissues
NALT (adenoides y amgdalas)
BALT (bronquios)
GALT (intestinos: placas de Peyer y lmina propia)

Los vasos linfticos drenan fluidos extracelulares de los tejidos perifricos en

los ganglios linfticos y el conducto torcico donde la linfa se junta con la
sangre. Permiten la recirculacin de linfocitos entre sangre y tejido linftico. Los
ganglios tienen irrigacin sangunea.
La medula sea tiene unas clulas llamadas pluripotentes que son las clulas
madre a partir de las cuales se generan todas las dems clulas. Esta clula
pluripotente da origen al progenitor linfoide, que tambin est en la medula
oses, da origen a las clulas B (en medula sea) o a las clulas T y NK (en el
timo). Estas clulas pasan a la sangre y a los ndulos linfticos, y migran al
lugar de la infeccin. En los ndulos linfticos ocurre la presentacin antignica
y los linfocitos pasan de ser linfocitos vrgenes a linfocitos efectores.
En la medula sea tambin hay una clula progenitora mieloide comn que da
origen a la serie eritroide, al megacariocito, a los basfilos, eosinfilos y a los
granulocitos. Los granulocitos son los monocitos y neutrfilos, y precursores de
los mastocitos. Los monocitos y las clulas precursoras de mastocitos van
hacia los tejidos, donde se convierten en macrfagos y mastocitos
respectivamente.
Las clulas dendrticas pueden ser linfoides o mieloides, tienen gran
importancia en la organizacin de la respuesta inmune. Son clulas
presentadoras de antgenos (CPA) por excelencia ya que pueden activar a un
linfocito virgen. Adems sintetizan citoquinas y hacen fagocitosis.

12

Celula
Macrfago

Clulas
dendrticas

Neutrfilos

Funcin
Fagocitosis y digestin.
Se activan por estmulos externos como los microbios.
Son clulas presentadoras de antgenos (CPA).
Secretan citoquinas pro inflamatorias.
Se encuentran en la etapa tarda de la inflamacin
porque tardan mas en llegar al sitio de inflamacin que
los neutrfilos.
Tienen propiedades fagociticas.
Captacin de antgenos en sitios perifricos.
Son las clulas presentadoras de antgenos por
excelencia ya que pueden activar linfocitos vrgenaes
en los ganglios linfticos.

Intervienen en las primeras fases de la respuesta

inmunitaria.
Fagocitosis y activacin de mecanismos bactericidas.
Su citoplasma contiene grnulos llenos de enzimas
13

como lizosima, colagenasa y elastasa.

Eosinfilos

Mata parsitos recubiertos con anticuerpos

Basfilos

desconocida

Mastocitos

contienen grnulos con histamina

Inflamacin

Inflamacin
Tumor o
hinchazn

1. Adherencia de los microorganismos en el epitelio.

2. Rompen las barreras de alguna manera e ingresan en el organismo
3. Los microorganismos son reconocidos por macrfagos y clulas
dendrticas.
4. Las clulas dendrticas migran hacia los ndulos linfticos.
5. El macrfago al tomar contacto con el microorganismo, libera una serie
de sustancias que se llaman citoquinas y quimiocinas que produce la
activacin del endotelio capilar.
6. Aumenta la permeabilidad de los vasos, permitiendo la salida de clulas,
fluidos y protenas provocando calor, tumor, dolor y rubor.

14

Objetivos de la inflamacin:
- Evitar la propagacin del agresor
- Destruirlo
- Reparar el dao
En las primeras 4 hs luego de la infeccin, se produce un reconocimiento por
parte de la RI innata a travs de macrfagos que poseen receptores de
inmunidad innata. Muchos microorganismos mueren por accin del macrfago
y del sistema del complemento, provacando una inflamacin muy pequea.
Los microorganismos que no mueren en este acto, o los que hayan ingresado
dentro de una clula, se producen reacciones dentro de los macrfagos, por
reconocimiento de patrones asociados a microbios (PAMPs) como por ejemplo
el peptidoglicano de las bacterias, que eliminan la infeccin en 96 hs.
En estos 3 das comienza a desarrollarse la RI adaptativa, donde hay
reconocimiento por parte de las clulas T y B, hay expansin clonal y
diferenciacin. Un neutrfilos o un macrfago (de la RI innata), van a reconocer
al patgeno pero no va a proliferar, no se va a reproducir en el tejido infectado,
sino que van a venir nuevos macrfagos de la medula sea, las clulas B y T
van a proliferar y a aumentar su nmero a partir del reconocimiento de que
entr un patgeno.
1ra lnea de defensa celular: PMN Neutrfilos hasta 24 h:
1. En la luz vascular ocurre la migracin rodamiento y adhesin: las
selectinas presentes en el endotelio capilar se unen a los
oligopolisacaridos unidos en forma covalente a glicoprotenas de los
leucocitos. La activacin del endotelio por mediadores de inflamacin
incrementa la expresin de las selectinas E y P (rodamiento). Se produce
una adhesin inicial rpida mediada por selectinas.
2. Se produce una adhesin firme mediada por integrinas.
3. Transmigracin a travs del endotelio (diapdesis) mediado por I-CAM1integrinas y Ve-CAM1 sobre los leucocitos.
4. Migracin a los tejidos intersticiales

15

Los neutrfilos son los primeros que llegan al sitio de inflamacin y mueren
ah, nunca regresan a la sangre. Luego los macrfagos que arriban a las 24 hs
de la infeccin y fagocitan los restos celulares, las bacterias, etc.

Las clulas del sistema monocito/ macrfago se originan en la medula sea,

circulan por sangre y maduran en distintos tejidos. Los monocitos entran en
sangre perifrica pero no estn completamente diferenciados, estos penetran
en los tejidos maduran y se convierten en macrfagos. Los macrfagos
activados pueden reunirse entre s para constituir clulas gigantes
multinucleadas que reciben diferentes nombres en los distintos tejidos.
Microglia en SNC, clulas de Kupffer en hgado, macrfagos alveolares en en
vas respiratorias pulmonares, osteoclastos en hueso.
Los macrfagos tienen receptores de superficie:

16

- Receptor para
lipopolisacaridos (LPS)
- Receptor de manosa
- Receptores para
glucano
- Receptores para
lpidos (scavenger)
-receptores de tipo toll
(RTT), estn presentes
tanto en membrana
celular como en las
membranas
intracelulares.

Muchos macrfagos incorporan los microorganismos por fagocitosis, y poseen

mecanismos para eliminarlos.
1. Reconocimiento y fijacin del microorganismo que va a ser ingerido.
2. Englobamiento con posterior formacin de una vacuola fagocitaria. El
citoplasma emite seudpodos que rodean la partcula formando un fago
soma que se fusiona con la membrana de un lisosoma de manera q el
contenido se descarga formando un fago lisosoma.
3. Degradacin o digestin: el fago soma se fusiona con el lisosoma para
formar un fago lisosoma donde los microorganismos mueren por la
accin de enzimas lizosomicas y sustancias muy oxidantes como ERO
(especies reactivas del oxigeno). Este proceso se lo llama estallido
respiratorio.
Los macrfagos activados secretan citoquinas pro inflamatorias:
IL-1: produce la activacin del endotelio, activa linfocitos, produce
destruccin local de tejidos, incrementando el acceso de clulas
efectoras. Sistmicamente produce fiebre e IL-6
TNF-: activa en endotelio e incrementa la permeabilidad vascular, lo
que conduce al aumento de la entrada de IgG, complemento y
clulas a los tejido.
IL-6: Activacin de linfocitos, aumento d ela produccin de
anticuerpos.

17

 CXCL8: factor quimiotatico de reclutamiento de neutrfilos, basfilos

y clulas T en el sitio de inflamacin.
IL-12: activa las clulas NK
Las clulas NK
No reconocen a un microorganismo
sino a clulas anormales que pueden
estar infectadas o daadas y
responden con su eliminacin directa
por apoptosis y la secrecin de
citoquinas inflamatorias.
No requieren sensibilizacin previa.
La activacin de los linfocitos NK est
regulada por equilibrio entre seales
generadas a partir de los receptores
activadores e inhibidores
Matan por mecanismos de citotoxicidad
celular (enzimas)
Los receptores inhibidores existentes
en los linfocitos NK se unen al complejo mayor de histocompatibilidad de
clase 1 (CMH-1) que normalmente aparece expresado en todas las clulas
sanas.
Una infeccin por virus por ejemplo puede disminuir la expresin de estas
molculas del CMH-1, por lo que desaparecen los ligandos destinados a los
receptores inhibidores de las clulas NK. Como consecuencia se liberan
grnulos con protenas encargadas de destruir las clulas por induccin de
apoptosis
La activacin del Complemento es una cascada que puede comenzar
de varias maneras
El sistema del complemento est formado por 20 protenas plasmticas que se
activan en cascada y que puede comenzar de varias maneras:

Via clsica: la protena C1 se activa por la fijacin a un anticuerpo unido

a un antgeno.
Via alternativa: se pone en marcha por reconocimiento directo de cirtas
estructuras presentes en la superficie de un microbio. Constituye un
componente de la inmunidad innata.
Vas de las lectinas: se dispara a partir de una protena plasmtica
llamada lectina de unin a la manosa que reconoce las manosas de las
18

glucoproteinas y los glucolipidos bacterianos. Se activa una de las

protenas de la via clsica sin contar con anticuerpos.

Las tres vas convergen en la formacin del complejo de ataque de membrana

(MAC), que forma un poro sobre la membrana del microorganismo, que
desestabiliza dicha membrana produciendo la lisis del mismo.
Otros productos como el complemento C3a y C5a son pptidos mediadores de
la inflamacin, tienen poder de anafilotoxinas, aumentan la permeabilidad
vascular, producen vasodilatacin y liberacin de histamina (respuesta
anafilctica)
C3b se fija a la pared celular bacteriana y acta como opsonina favoreciendo al
fagocitosis por clulas que tienen receptores para C3b como los macrfagos.
Las clulas presentadoras de antgenos (CPA) constituyen una poblacin
celular especializada en la captura de antgenos microbianos o de otro tipo, su
exhibicin ante los linfocitos y la emisin de seales que estimulen su
proliferacin y su diferenciacin.

19

Las CPA vinculan las respuestas del sistema inmunitario innato a las clulas
Clulas dendrticas
Captan el antgeno por
pinocitosis y fagocitosis.
Adems tienen
receptores de superficie
que reconocen los
patrones moleculares
asociados a patgenos
Son capaces de activar
un linfocito T virgen,
producen su expansin
clonal y diferenciacin
en linfocitos T efectores
en los ganglios
linfticos.

Macrfagos
Captan el antgeno por
fagocitosis.

Clulas B
Tienen receptores
especficos para el
antgeno. Luego
endocitan la Ig de
membrana con el Ag
unido y lo procesan.

Presentan el antgeno a
un linfocito T efector
activndolo. Activacin
de macrfagos
(inmunidad celular)
Producen citoquinas que
atraen otras clulas
inflamatorias y las
activan.

Activacin de linfocitos T
efectores, activacin de
linfocitos B y produccin
de anticuerpos
(inmunidad humoral).

Linfocitos:

Linfocitos B: son los responsables de la respuesta humoral, es decir, de

la produccin de anticuerpos, protenas (inmunoglobulinas) que se
adhieren a un antgeno especfico (al cual reconocen de manera
unvoca). Son capaces de reconocer lpidos, protenas, glcidos.

Linfocitos T: Detectan antgenos proteicos asociados a molculas del

complejo mayor de histocompatibilidad (MHC 0 CMH)

Linfocitos T colaboradores (en ingls "helper") o linfocitos

CD4+. Reconocen antgenos presentados por el MHC-II. Se les
denomina colaboradores por que estn involucrados en la
activacin y direccin de otras clulas inmunitarias mediante la
liberacin de citocinas. Ponen en marcha la proliferacin y
diferenciacin de LT y activan LB, macrfagos, y otros leucocitos.

Linfocitos T citotxicos o linfocitos CD8+. Reconocen pptidos

presentados por MHC-I y tienen capacidad ltica. Destruyen las
clulas productoras de antgenos extraos como las que estn
infectadas por virus u otro microorganismo intracelular.

Clulas asesinas naturales, Natural Killer (NK) o linfocito grande

granular. No tienen marcadores caractersticos. Participan en la
inmunidad innata, con la capacidad de reconocer lo "propio" y tambin
tienen propiedades lticas
20

Reconocimiento del Ag por parte de los LT CD4+ y CD8+:

Fases de la Respuesta Inmune:

1. Ingresa un antgeno, este es incorporado por un macrfago o una clula
dendrtica.
2. inmunidad celular: La CPA procesa el antgeno y lo presenta los
pptidos microbianos a los linfocitos T CD4+ y CD8+ vrgenes. Los
linfocitos T helper proliferan al activarse y se diferencian en clulas
efectoras que liberan IL-2, un factor de crecimiento que actua sobre los
linfocitos ya activados por un antgeno y estimula su proliferacin. Estas
clulas efectoras abandonan el ganglio linftico y se dirigen al sitio de
infeccin. Los LT CD4+ activados tambin liberan la citocina interferon
que es un activador de los macrfagos. Los linfocitos CD8+ activados
proliferan y se diferencian en LT citotxicos encargados de destruir las
clulas que llevan microbios en su citoplasma.
-inmunidad celular: Los linfocitos B proliferan y se diferencian en clulas
que segregan diversas clases de anticuerpos. La respuesta de los
linfocitos B a los antgenos proteicos requiere de seales activadoras
(cooperacin) procedentes de los linfocitos T CD4+.Los linfocitos B
ingieren los antgenos protenicos, los degradan y exhiben sus pptidos
ligados a molculas del CMH para su reconocimiento por parte de las
clulas T helper que activan a los propios linfocitos B.
21

3. Se produce una expansin clonal en los ndulos linfticos de las clulas

B, que tienen receptores de membrana que reconocen al antgeno y
comienzan a proliferar.
4. Se produce la activacin del linfocito B que comienza a liberar
anticuerpos.
5. El antgeno se elimina.
6. Los linfocitos mueren por apoptosis.

7. Quedan linfocitos de memoria (pocos) que, cuando este microorganismo

ingrese nuevamente, montan una respuesta en horas en vez de das
para controlar la infeccin. Estas clulas son capaces de sobrevivir
durante aos.

Respuesta Inmune : RI Innata + RI adquirida

22

La respuesta inmunitaria innata es la primera lnea de defensa, si un

microorganismo logro vencer las barreras fsicas y qumicas, logra ingresar al
organismo y ser reconocido como no propio por los neutrfilos, macrfagos y
linfocitos NK.
A su vez los macrfagos liberan IL-12 un potente inductor de la produccin de
IFN- por los linfocitos NK y de su actividad citotxica. A su vez IFN-
segregado por los NK activa a los macrfagos para destruir los
microorganismos fagocitados.
Las molculas producidas durante la respuesta innata estimulan la inmunidad
adaptativa. Los macrfagos activados por los microbios y por el IFN- sintetizan
coestimuladores que favorecen la activacin de los linfocitos T y B.
Especificidad, memoria y contencin de la respuesta de LB

Los anticuerpos X e Y provocan la produccin de anticuerpos diferentes

(especificidad)

23

 Cada linfocito expresa receptores de membrana capaces de discernir

diferencias sutiles en la estructura de los antgenos distintos
La respuesta secundaria al antgeno X es ms rpida y amplia que la
primaria (memoria). Los linfocitos B de memoria sintetizan anticuerpos
que se unen a los antgenos con una afinidad mayor que los producidos
en la respuesta inmunitaria primaria, y los linfocitos T de memoria
reaccionan de forma ms rpida y enrgica al estimulo antignico que
los linfocitos T vrgenes.
Los linfocitos experimentan una considerable proliferacin tras su
exposicin a un antgeno. Aumenta la cantidad de clulas que expresan
receptores idnticos (expansin clonal)
Despus de cada inmunizacin decae con el tiempo las concentraciones
sricas del anticuerpo (contencin y homeostasis)

Caractersticas de la respuesta de Acs a Ags T-dependientes

Respuesta Primaria:
Se desarrolla en 1 -2 semanas
Incluye respuesta celular y de anticuerpos
Los anticuerpos predominantes son de isotipo IgM
Los niveles de anticuerpos declinan rpidamente.
Respuesta Secundaria (memoria):
Se desarrolla mucho ms rpido y persiste por ms tiempo.
Incluye respuesta celular y de anticuerpos.
El anticuerpo predominante es de isotipo IgG(switch de isotipo)
Aumenta la calidad de los anticuerpos(madurez de la afinidad)
ISOTIPOS = variantes presentes dentro de una misma especie: las clases y
sublase de inmunoglobulinas son un ejempo
ALOTIPO = Producto
proteico de un alelo que
puede ser detectado
como antignico por otro
miembro de la misma
especie. En otro sentido,
reflejan pequeas
diferencias, constantes
entre individuos de la
misma especie, en la
secuencia de
aminocidos de

24

inmunoglobulinas que por lo dems son similares. Los determinantes alotpicos

se sitan en la regin constante de las cadenas pesadas y ligeras.
Los genes que codifican para las inmunoglobulinas se heredan en forma de
alelos mendelianos, por lo que a cada uno de este tipo de variante se le
denomina variante allica y al conjunto de variantes allicas, se le denomina
alotipo.
En el hombre se han descrito tres tipos de alotipos:
1. Gm en las cadenas g de las IgG.
2. Am en las cadenas a de las IgA.
3. Km en las
cadenas
ligeras k

IDIOTIPO = eptopo
propio de una
molcula
perteneciente a un
clon en particular.
Este elemento forma
parte o est muy
prximo al lugar de
reconocimiento del
antgeno, y est situado en la porcin variable Fab. En otras palabras, es el
paratopo, o la regin cercana de una inmunoglobulina puede ser reconocido
como un epitopo por ciertos linfocitos.
Funciones de los anticuerpos en la respuesta inmune:

Neutralizacin
Opsonizacion
Activacin del sistema del complemento por la va clsica
Degranulacion de clulas efectoras y mastocitos.

Procesado y presentacin del antgeno

VAS DE PRESENTACIN ANTIGNICA:
VA EXOCTICA CMH CLASE II LTH CD4(+) AG LIBRES T DEP.
VA ENDOCTICA CMH CLASE I LTC CD8(+) AG VIRALES.
Qu acontece cuando un antgeno penetra por primera vez en el hombre u
otro vertebrado que ya ha desarrollado su sistema inmune? Las clulas que
25

actan en primer lugar son los macrfagos y otras clulas presentadoras de

antgenos. El procesamiento de ese antgeno ser distinto segn se trate:
a) de un antgeno endgenamente sintetizado, como lo son las protenas
virales correspondientes a virus que infectan las clulas, los neoantgenos
producto de clulas que han sufrido transformacin maligna, etc, o
b) que el agente agresor sea un componente antignico externo del tipo de las
bacterias, parsitos o protenas extraas.
En el primer caso,
la protena viral u
otra similar de
origen
citoplasmtico es
degradada en el
citosol por un
grupo de
proteosomas
(PRT), -unidad que
contiene sitios
catalticos
mltiples-,y se
originan
simultneamente y
a partir del mismo
sustrato diferentes
pptidos. Estos sitios proteolticos mltiples facilitan la produccin preferencial
de los pequeos pptidos que habrn de constituir los epitopes antignicos
secuenciales a reconocer por los linfocitos T. Estos pptidos son transferidos a
las unidades transportadoras (TAP) que residen en la membrana del retculo
endoplsmico (RE) y que transfieren a su vez los pptidos al lumen del RE, los
que en el Golgi se unen a las nuevas molculas del CMH de clase 1.
Esta unin induce cambios conformacionales en las molculas CMH, que
habrn de llevar a su estabilizacin y facilitar el transporte del complejo
pptido-CMH clase 1 a la superficie celular para su reconocimiento por el
receptor antignico del linfocito T. Los antgenos extraos adheridos a la
superficie de la clula que habr de participar en su presentacin sern
endocitados por pinocitosis, proceso que consiste en la ingestin de partculas
solubles o fluidos, o por fagocitosis cuando se trate de restos celulares,
bacterias o productos de agregacin. En ambos casos se forman vesculas o
vacuolas que se vierten en los endosomas tempranos, primer compartimento
dotado de proteasas eficientes a pH cidos, necesarias para iniciar la
degradacin del antgeno. Entre stas, las dos ms importantes son la
26

catepsina B y
D. El proceso
contina
luego en los
endosomas
tardos y
concluye con
la
participacin
de las
vesculas
lisosomales,

caracterizadas por contener un elevado nmero de enzimas proteolticas. Las

molculas de antgenos procesadas por la va endoctica no tienen
posibilidades de unirse a los antgenos del CMH clase L Slo lo hacen a
molculas de clase IL El ensamblado de estas cadenas a y P de los antgenos
del CMH clase II para formar el heterodmero tiene lugar en el RE. Durante la
biosntesis de estas molculas una tercera cadena denominada y o invariante
se une al heterodmero en forma transitoria, impidiendo su unin a pptidos
endgenos en el RE y asegurndole de este modo su participacin en la va
endoctica. Si bien el ensamblado de la cadena no es un requerimiento
absoluto para la expresin del heterodmero aP , incrementa la eficiencia del
proceso. Las molculas de clase II transportadas a partir del RE lo hacen bajo la
forma de un armazn complejo constituido por 3 cadenas y en el que se
insertan 3 hetrodmeros ap. Cuando las molculas llegan al retculo trans-Golgi
(RTG) y como consecuencia de una seal determinada, el complejo aPy se
dirige, por alguno de los mecanismos de la va endoctica cuya localizacin no
ha sido determinada hasta el presente, a los endosomas que contienen los
antgenos procesados. Durante este trnsito la cadena y es degradada y el
heterodmero ap puede entonces unirse a los pptidos antignicos exgenos.
El tiempo que las molculas del CMH clase II tardan en atravesar la ruta
endoctica y aparecer en la superficie celular es de 1-3 horas. El pH cido
predominante en los endosomas/lisosomas contribuye a una mejor
degradacin de las molculas de antgeno endocitadas y a un aumento dela
27

eficiencia de la unin de los pptidos a las molculas del CMH clase II. Si bien
los antgenos del CMH clase II normalmente presentan pptidos provenientes
de antgenos exgenos, pueden tambin, en determinadas circunstancias,
presentar antgenos endgenamente sintetizados. Ello ocurre en las respuestas
con formacin de anticuerpos de la clase IgG contra antgenos procedentes de
una infeccin viral, las que slo tienen lugar si el linfocito B es ayudado por
un linfocito T helper que ha aprendido a reconocer pptidos andgnicos
asociados al CMH clase II. Su mecanismo no est bien determinado; podra
ocurrir que antgenos endgenos expresados en la membrana celular asociados
a CMH clase para su reconocimiento por las clulas CD8+ fueran luego
endocitados. En este caso el proceso seguira la va endoctica que lleva a la
asociacin con antgenos clase II y su expresin en la superficie celular para su
reconocimiento por los receptores antignicos de las clulas CD4+. Otra
posibilidad es que se formen autofagosomas que incorporen protenas
citoplasmticas y que despus de la fusin con estructuras lisosomales esas
protenas antignicas sean procesadas por la va de los antgenos del CMH
clase II. La va endgena de procesamiento del antgeno, utilizada cuando los
pptidos resultantes se van a unir a antgenos del CMH clase 1, es distinta de
la que tiene lugar cuando los antgenos van a ser presentados por molculas
de clase 2.
Inmunidad Innata
La inmunidad es una respuesta protectora para mantener la
homeostasis.
Representa la primera lnea de defensa contra las infecciones.
Se alcanza por la accin coordinada de un conjunto de clulas y factores
solubles.
Etapa temprana y tarda que denominamos respuesta innata y
adaptativa respectivamente. Estas respuestas son complementarias. Ya
que la respuesta innata capacita a la respuesta adquirida.
La respuesta innata
Rpida
Limitada diversidad de reconocimiento
Reconocimiento es a travs de estructuras compartidas por los
diferentes microorganismos: Pattern recognition
Existe reconocimiento de lo propio y no propio.
No genera memoria inmunolgica.
Caractersticas comparativas entre respuesta inmune innata y
adquirida:

28

Los componentes de la inmunidad innata son:

Granulocitos: neutrfilos, eosinfilos y basfilos.

monocitos y macrfagos
clulas dendrticas
Sustancias solubles: Citoquinas que participan en la inmunidad innata,
sistema del complemento, protenas de fase aguda.

Los componentes de la respuesta inmune adaptativa son:

Linfocitos T
Linfocitos B (producen anticuerpos).
29

Tambin participa el sistema del complemento. Los macrfagos, las clulas

dendrticas o los eosinfilos interactan con estos elementos para poner en
marcha mecanismos efectores de la respuesta adaptativa.
En el medio encontramos un tipo celular menos frecuente, las clulas T
denominadas gama-delta (son linfocitos T con una distribucin tisular muy
especial y una respuesta muy limitada) y las clulas T NK.
Cuando una clula tiene que cumplir una funcin en una respuesta va a
desarrollar una capacidad efectora. Para cualquier clula se consideran 3
fases:
1) Fase de reconocimiento
2) Fase de activacin
3) Fase efectora o de respuesta.

PRODUCCIN DE SUEROS INMUNES

Utilizacin de los Anticuerpos como herramienta de laboratorio.

Utilizacin teraputica de los Anticuerpos (imunizacin pasiva - seroterapia)
Plan de Inmunizacin
Puntos a considerar en el diseo de un plan de inmunizacin:
Dosis del antgeno. Para conseguir una respuesta inmune es indispensable
la inoculacin de un antgeno, pero el grado de respuesta depende en gran
parte de la dosis inoculada. Dosis excesivas de antgeno pueden llevar a la
parlisis inmunolgica o ausencia de respuestas del aparato formador de
30

anticuerpos. Por otra parte, la re inoculacin de pequeas dosis de antgeno

desencadenar una estimulacin selectiva de los clones de mayor afinidad.
Adyuvantes = su accin no se debe nicamente a la adsorcin del antgeno,
lo que hace que el mismo se libere de a poco produciendo un efecto similar
al de las reestimulaciones, sino que interviene tambin, y tienen un papel
muy importante, quizs el principal], el granuloma formado en el punto de
inoculacin y las linfoquinas sintetizadas por las clulas intervinientes.
Cuando un antgeno se inocula mezclado con un adyuvante, se consigue
una respuesta superior a la que se logra con la misma dosis de antgeno
solo. Se observa la aparicin de anticuerpos a alta concentracin y por
tiempo prolongado, similar a la lograda cuando se hacen reestimulaciones
antignicas, con la ventaja de que este efecto se logra con la inoculacin de
una sola dosis de antgeno.
Husped = Edad. La capacidad para formar anticuerpos es una propiedad
inherente al vertebrado adulto. En el lactante est muy disminuida. En el
recin nacido se puede llegar a anular la respuesta futura si las dosis de
antgeno inoculadas son lo suficientemente grandes.
Va de inoculacin = Si se inocula al caballo con toxoide diftrico, para
conseguir un buena respuesta inmune es necesario que la misma sea hecha
por va subcutnea, y no por va intravenosa. En cambio, si lo que se desea
obtener son anticuerpos antineumoccicos, los microorganismos deben
inocularse por va intravenosa, siendo desfavorables los resultados si se
emplea la va subcutnea. Si el animal inoculado es el conejo y la va de
inmunizacin es la intravenosa, la inoculacin de neumococos produce
anticuerpos antipolisacridos, en tanto que el mismo microorganismo,
inoculado por va subcutnea, induce la formacin de anticuerpos
preferentemente antinucleoprotenas, pudiendo desarrollar al mismo tiempo
alergia de tipo retardado. Cuando antgenos polnicos penetran en el
hombre por la mucosa y lo hacen en forma espontnea, originan
anticuerpos, localizados en la IgE, y si los mismos plenes son inyectados
por va subcutnea, forman anticuerpos, ubicados en la IgG.
Obtencin de inmunosueros:
-Se deben inocular varios animales con el mismo Ag.
-1 Inmunizacin con adyuvante de Freund completo (activador de la
antigenicidad, constituido por un vehculo oleoso adicionado de bacilos
tuberculosos muertos- producen un granuloma en el punto de inoculacin,
donde se observa acumulacin de macrfagos y linfocitos, los que de este
modo estn ms expuestos a la accin del inmungeno)
-2 Inmunizacin con adyuvante de Freund incompleto (mezcla sin bacilos)
Se reinocula el Ag. Para inducir la maduracin de la Respuesta Inmune.
-Se toman muestras de suero del animal y se evala el ttulo del antisuero.
-Mejor ttulo se sangra el animal.
31

Plan
a. Da 0 sangra + inmunizacin c/CFA (adyuvante completo de Freund)
b. Da 14 sangra exploratoria + inmunizacin c/IFA (adyuvante incompleto
de Freund)
c. Da 28 sangra exploratoria
d. Da 30 sangra final (blanco) y sacrificio
Anticuerpos Monoclonales
Provienen de un nico clon productor de 1 Anticuerpo con caractersticas
determinadas.
Constituyen una poblacin homognea.
Reconocen un nico epitope.

Produccin de Ac Monoclonales

Para producir un
anticuerpo
monoclonal
especifico frente
a un antgeno
definido, se
inmuniza a una
rata o a un ratn
con dicho
antgeno y se
aslan los
linfocitos B del
bazo o los
ganglios
linfticos del
animal. Estos
linfocitos B se
fusionan a
continuacin con
la lnea celular
inmortalizada.

Las lneas del mieloma son la mejor pareja de fusin para los linfocitos B,
porque clulas similares tienden a fusionarse y a formar hbridos estables de
una manera ms eficiente que las clulas que no se asemejan. En la prctica
actual, las lneas del mieloma que se emplean no producen sus propias
inmunoglobulinas y la fusin celular se consigue polietilengicol.
32

Se selecciona a los hbridos para que crezcan en un medio HAT; en estas

condiciones las clulas que no expresen HGPRT (hypoxanthineguanine
phosphoribosyltransferase) ni TK (thymidine kinase) no fusionadas mueren
porque no pueden utilizar la via alternativa y os linfocitos B no fusionados no
pueden vivir no pueden vivir ms de una a dos semanas por no estar
inmortalizados, por lo que solo los hbridos crecern en este medio.
El sobrenadante del cultivo de cada pocillo en los que se detecte crecimiento
celular se estudia para comprobar la presencia de anticuerpo reactivo con el
antgeno utilizado en la inmunizacin.
Para los antgenos solubles, la tcnica habitual es el radioinmunoensayo (RIA) o
el ensayo por radioinmunoadsorcin ligado a enzimas (ELISA); para los
antgenos de superficie celular, se pueden utilizar diversos mtodos de anlisis
de unin de anticuerpos a clulas viables. Una vez que se han identificado los
pocillos positivos (que contienen hibridomas del anticuerpo deseado) se clonan
las clulas en agar semislido mediante dilucin limitante y se aslan los clones
productores de anticuerpos mediante otra ronde de seleccin.

33