Spirulina platensis: optimizacin de procesos para la obtencin de

biomasa
Spirulina platensis: otimizao de processo para a obteno de biomassa
Iracema de Oliveira MORAES1, Regina de Oliveira Moraes ARRUDA1,2*, Natlia Rocha MARESCA3,
Aline de Oliveira ANTUNES3, Rodrigo de Oliveira MORAES1,4
Abstract
Spirulina platensis is a photoautotrophic mesophilic cyanobacterium. Its main sources of nutrients are nitrate, urea, and
ammonium salts. Spirulina cultivation requires temperature, light intensity, and nutrient content control. This microalgae
has been studied and used commercially due to its therapeutic and antioxidant potential. In addition, several studies have
reported its ability to use CO , its immune activity, and use as an adjuvant nutritive factor in the treatment of obesity. The
objective of this study is the production of biomass of S. platensis using different rates of stirring, nitrogen source, amount
4
of micronutrients, and luminosity. A 2 experimental design with the following factors: stirring (120 and 140 RPM),
amount of nitrogen (1.5 and 2.5 g/L), amount of micronutrients (0,25 and 0,75 mL/L) (11 and 15 W), and luminosity was
used. Fermentation was performed in a 500 mL conical flask with 250 mL of culture medium and 10% inoculum in an
incubator with controlled stirring and luminosity. Fermentation was monitored using a spectrophotometer (560 nm), and
each fermentation lasted 15 days. Of the parameters studied, luminosity is the one with the highest significance, followed
by the amount of nitrogen and the interaction between stirring and micronutrients. Maximum production of biomass for
15 days was 2.70 g/L under the following conditions: luminosity15W; stirring, 120 RPM; source of nitrogen, 1.5 g/L; and
micronutrients, 0.75 mL/L.
Keywords: Spirulina platensis; human food; biomass; cyanobacteria.
2

Resumen
Spirulina platensis es una cianobacteria mesfilica fotoautotrofica. Sus principales fuentes de nutrientes son las sales de
nitrato, urea y amonio. El cultivo de Spirulina requiere control de temperatura, intensidad de la luz y de contenido de
nutrientes utilizados Este microalgas se ha estudiado y utilizado por su potencial teraputico y antioxidante y su actividad
inmune. y su capacidad para fijar CO2, y el uso como un factor para el tratamiento de la obesidad. El objetivo de este
estudio es la produccin de biomasa de S. platensis utilizando diferentes tasas de agitacin, fuente de nitrgeno, la
cantidad de micronutrientes, y la luminosidad. Un diseo experimental 24 con los siguientes factores: revolviendo (120 y
140 RPM), la cantidad de nitrgeno (1,5 y 2,5 g / L), la cantidad de micronutrientes (0,25 y 0,75 ml / L) (11 y 15 W), y la
luminosidad que fue usado. La fermentacin se realiz en un matraz erlenmeyer de 500 ml con 250 ml de medio de
cultivo y 10% de inculo en una incubadora con agitacin y luminosidad controlada. La fermentacin se control
utilizando un espectrofotmetro (560 nm), y cada fermentacin dur 15 das. De los parmetros estudiados, la
luminosidad es la que tiene la mayor importancia, seguido por la cantidad de nitrgeno y la interaccin entre agitacin y
micronutrientes. La mxima produccin de biomasa durante 15 das fue 2.70 g / L en las siguientes condiciones:
luminosidad 15W; agitacin, 120 RPM; fuente de nitrgeno, 1,5 g / L; y micronutrientes, 0,75 ml / l.
Palabras clave: Spirulina platensis; la alimentacin humana; biomasa; cianobacterias.

Introduccin

Las algas verde-azules son tal vez

las formas ms primitivas de vida en la
Tierra.
Se han encontrado microorganismos
fosilizados que data de 3,5 millones de
aos. Las algas se han utilizado como
alimento humano desde la antigedad en
diversas partes del mundo tales como
China, India, Mxico, Amrica del Norte,
Per, Japn, y otros.

El gran inters nutricional para la

produccin de la biomasa de algas es
debido a su alto contenido de protenas
(60 a 65% en la biomasa de Spirulina
sp.), alta digestibilidad y equilibrada
contenido de algunos aminocidos
esenciales. La obtencin de la biomasa de
Spirulina sp. Puede ser un ejemplo
representativo de produccin de algas.
Algunas estrategias de produccin
incluyen el uso de procedimiento de
alimentacin por lotes (para el control de

nutrientes) y simple proceso por lotes.

Spirulina platensis es una especie que se
encuentra en Mxico y algunas regiones
de africa y se desarrolla entre el rango de
temperaturas 25-26 C, un pH alcalino
(9,5 a 11), y alta concentracin de sal que
van de 8,5 a 200 g / L; por lo tanto, su
produccin es relativamente simple y no
requiere un medio de cultivo complejo y
de alto costo, por lo tanto permite llevar
su estudio (ARRUDA et al., 2009;
PELIZER et al., 2002; PELIZER;
MORAES,2009).
Arthrospira (Spirulina) sp., Es una
cianobacteria filamentosa, auttrofa,
tambin conocido como las algas verdeazul, y debe su nombre a su morfologa
helicoidal o espiral filamentos. Este
microorganismo crece de forma natural
en muchos lugares, especialmente
cuerpos de aguas poco profundas y en
presencia de bicarbonato de sodio, un
medio alcalino de alta salinidad
(Vonshak; TOMASELLI, 2000).
Algunas microalgas como la
Spirulina y Chlorella son certificadas
como GRAS (generalmente reconocidos
como seguros) por sus siglas en ingls y
puede ser utilizado como alimento sin
riesgo para la salud. Desde 23 de junio
1981, Spirulina ha sido legalmente
aprobado por la FDA (Administracin de
Alimentos y Medicamentos), que
confirm que:
la Spirulina es una fuente de
protenas, vitaminas y minerales. La
Spirulina puede ser comercializado
legalmente en los Estados Unidos como
un alimento, siempre y cuando se marca
que no contiene sustancias contaminantes
o adulteradas (FOX, 1996, p. 89).
La cianobacteria Spirulina se ha
comercializado y estudiado por sus
propiedades nutricionales y teraputicas

para el tratamiento de enfermedades tales

como el cncer, la hipercolesterolemia, y
la aterosclerosis. Ciertos compuestos
presentes en Spirulina, tales como
compuestos fenlicos, ficocianina, y
tocoferol
puede
tener
actividad
antioxidante
(COLLA;
FURLONG;
COSTA, 2007; Muliterno et al., 2005;
ANDRADE;
CAMERINI;
COSTA,
2008).
Los
estudios
nutricionales
muestran que estos microorganismos
tienen uno de los ms altos contenidos de
protena que se ha encontrado, de alto
valor nutricional, buena digestibilidad, y
todos los aminocidos esenciales en la
proporciones recomendadas por la FAO,
con la excepcin de metionina. (AVILALen et al., 2010). Algunos aspectos
tcnico de la produccin de Spirulina
tienen ventajas sobre otros fotoauttrofos,
tales como su fcil recoleccin del medio
de cultivo debido a su forma espiral y
tamao ms grande (dimetro de 10
micrmetros y de longitud tiende a
cientos de m). La biomasa puede variar
de produccin de acuerdo con el medio de
cultivo utilizado y las condiciones del
ambiente externo. La manipulacin de las
condiciones de cultivo puede promover la
biosntesis de diversos compuestos, y,
adems, se puede controlar estas variables
con el fin de reducir los costos del
proceso de produccin (Reinehr, 2001).
vila y Len et al. (2012)
investigaron la produccin de protenas
de una sola clula de Arthrospira
platensis debido a la composicin de la
biomasa y capacidad de crecer en medios
alternativos. Se evaluaron los efectos de
diferentes tasas de dilucin (D) y las
concentraciones de urea (N0) sobre A.
platensis en cultivo continuos en trminos
de crecimiento, los parmetros cinticos,

la composicin de la biomasa, y la
eliminacin de nitrgeno.

de micro-Kjeldahl y se obtuvo un
promedio de 49%.

Se ha observado la dependencia
del crecimiento celular en funcin de la
intensidad de la luz, es decir, existe una
correlacin entre el aumento de la energa
luminosa recibida y el crecimiento
celular, aunque limitado por ciertas
enzimas
producidas
durante
el
crecimiento (PELIZER et al., 2002). Este
lmite se llama punto de saturacin de luz,
que es de 5-10 Klux para cianobacterias
(BALLONI et al., 1980). Este hallazgo
experimental indica que la tasa mxima
de crecimiento de la clula est limitada
por otros factores adems de la
asimilacin de carbono y nitrgeno.

Bajo las condiciones examinadas,

la que produjo mejores resultados en
trminos de produccin de biomasa en
todos los ensayos fue el biorreactor que
contiene 300 ml de medio de cultivo
modificadas con la mitad de la fuente de
nitrgeno (KNO3). S. platensis se cultiv
en un medio de cultivo auttrofa con
bicarbonato sdico y mixotrfico con
0.25, 0.50, 0.75, y 1.00 g / L de la melaza
se secaron (MEP) o melaza lquidos
(MEL); el crecimiento se complet en 35
das. La concentracin mxima de
biomasa (2,83 g / l) y un rendimiento de
0,098 g da / L se alcanzaron en los
cultivos con MEL 0,50 g / L. Los cultivos
con MEP 0,25 g / L alcanzaron
concentracin de biomasa de 2,59 g / L y
la productividad de 0,066 g / L por da. Se
puede concluir que la melaza se puede
utilizar para obtener la biomasa de algas
para ayudar a combatir la desnutricin
(ANDRADE; COSTA 2008).

Ya que Spirulina sp. es auttrofa,

la intensidad de la luz cuasa que los
metabolitos varan en la biomasa segn la
incidencia de la luz, es decir, una mayor
produccin bajo altas intensidades de luz
con menor alimentacin (BEZERRA,
2006).
Arruda et al. (2009) afirma que en
las condiciones estudiadas, la que dio
mejores resultados en trminos de
produccin de biomasa en todos los
ensayos fue el biorreactor que contiene
300 ml de medio de cultivo Paoletti et al.
Modificado con la mitad de la fuente de
nitrgeno (KNO3). Trabajando con la
viabilidad de la produccin de Spirulina
platensis en un reactor de plstico
(polipropileno con un volumen de 1 L),
los mejores resultados en trminos de
produccin de biomasa se logr en el
tratamiento con 300 ml de medio y 15%
de inculo con un rendimiento promedio
de 2,32 g / L en 18 das de fermentacin.
Pelizer et al. (2008), determin el
contenido de protena total por el mtodo

Tambin se estudi el cultivo de S.

platensis con la adicin de glucosa. Un
diseo 23 factorial se utiliz para el
cultivo, y las variables fueron: la
concentracin de glucosa (0,5 g / L y 1,0
g / L), la dilucin de medio de Zarrouk
(50% y 75%), y la iluminacin (1.800 lux
y 3000 lux). La concentracin mxima
alcanzada fue 5,38 g / L con una tasa de
crecimiento de 0,0063 h-1 y 0,5 g / L de
glucosa, dilucin medio del 75%, y la
iluminancia de 3000 lux (Muliterno et al.,
2005).
El presente estudio investig la
produccin de biomasa de S. platensis
bajo diferentes tasas de agitacin, fuente
de nitrgeno la concentracin, la cantidad
de micronutrientes, y luminosidad, as
como la influencia de estos factores en el

medio de cultivo sobre la produccin de

Spirulina platensis centrndose en
aumento de la biomasa bajo diferentes
tasas de agitacin, fuente de nitrgeno, la
cantidad de micronutrientes, y la
luminosidad.
2. Materiales y mtodos

3. Resultados y discusin

Los factores considerados en este

experimento la agitaban, Luz, contenido de
nitrgeno, y la cantidad de micronutrientes.
La fermentacin se realiz en un matraz de
500 ml cnico con 250 ml de medio de
cultivo y 10% de inculo en una incubadora
con agitacin controlada y luz. Monitoreo de
la fermentacin se llev a cabo usando un
espectrofotmetro (560 nm), y cada
fermentacin dur 15 das. Se utiliz un
diseo experimental 23, y los valores de cada
parmetro estudiado, se muestran en la Tabla
1. Todos los experimentos se realizaron por
duplicado. La variacin de estos valores se
utiliz para verificar el efecto de los factores
en la produccin de bioproductos. Se muestra
el medio usado para la fermentacin en la
Tabla 2. Los experimentos se realizaron por
duplicado usando 500 ml de cada medio de
cultivo.

La respuesta del diseo experimental

se logr mediante la absorbancia, al final del
experimento, que fue convertida en biomasa
(g / L) por ajuste de curvas. (Ecuacin 1).
Estos resultados se muestran en la Tabla 3 y
la Figura 1. Dado que los experimentos se
realizaron por duplicado, se utiliz la media
de los valores de cada experimento.

Tabla 1. Valores asignados a cada parmetro estudiado

para la produccin de S platensis.

Tabla 2. Composicin del medio mineral

(suponiendo un volumen de 500 ml).

Biomasa = (lectura de absorbancia) * 1,0955 + 0,506

(1)

Los resultados experimentales se resumen en

la Tabla 3 eran analizados mediante los
siguientes programas de software: Regresin
esencial (ER) y Essential Diseo
Experimental (EED) para Excel
97/2000/2002/2003
(http://www.jowerner.homepage.tonline.
de/download.htm) para la estimacin de
efecto, como se muestra en la Tabla 4.
Tabla 3. Produccin de S. platensis bajo diferentes
condiciones de agitacin, la luz, cantidad de nitrgeno y
micronutrientes.

Biomasa (g/L)

Ensayo
Figura 1. Produccin de S. platensis variando la agitacin, luz, cantidad de nitrgeno y
micronutrientes.
Las siguientes figuras muestran las
tendencias de la produccin. La figura 2
muestra que la produccin incrementa con
una mayor cantidad de luz y fuente de
nitrgeno. La Figura 3 muestra que para
incrementar la produccin, la velocidad de
agitacin y micronutrientes deben tener
valores opuestos, es decir, si se aumenta la
velocidad de agitacin, menor cantidad de
micronutrientes se debe utilizar; y si la
velocidad de agitacin disminuye, se debe
utilizarse una mayor cantidad de nutrientes.
Los resultados encontrados son
similares a los encontrados por Muliterno et
al. (2005); la concentracin mxima celular
(5,38 gL-1) y la mxima tasa de crecimiento
especfica (0,0063 h-1) se obtuvieron con una
concentracin de glucosa de 0,5 gL-1, 50%
de dilucin, y 1800 lux de iluminancia.
Andrade y Costa (2008) encontraron
que la mxima concentracin de biomasa es

2,83 gL-1 y la productividad es de 0,098 gL1

.day-1, y estos resultados se alcanzaron en
cultivos con MEL (melazas lquidas) es de
0,50 gL-1.
Kornfeld et al. (2003), introdujo un
nuevo medio de cultivo para la produccin de
biomasa de Spirulina platensis basado en una
solucin alcalina de la industria de ctricos
efluente suplementado con fuentes de
nitrgeno, fsforo, y potasio, los cuales tena
una absorbancia de 1,024 y es equivalente a
5.1g.mL-1 en un experimento de 5 das.
El uso de la mitad de contraccin de
micronutrientes mostr que los valores de
biomasa y de absorbancia fueron menores en
comparacin con los encontrados por
Andrade y Costa (2008) y Kornfeld et al.
(2003), pero el medio de cultivo de estos
experimentos se complementaron con fuentes
de nutrientes ms caros.

Lacaz-Ruiz (2003) llev a cabo un

experimento para evaluar la produccin de
biomasa de Spirulina platensis en Lacaz-Ruiz
medios preparada con ceniza y Eucalyptus
spp. En medio de cultivo Paoletti.
Ambos medios se prepararon
utilizando la misma condiciones de los
siguientes cultivos: cantidad de inculo (75
ml), intensidad de la luz, leyendo a una
longitud de onda de 560 nm, agitacin, y la
temperatura (33,0 1,0 C). Los resultados
de la absorbancia inicial y final para el medio
de cultivo Paoletti eran 0,447 y 1,037,
respectivamente, y para el medio de cultivo

Lacaz-Ruiz que eran 0,329 y 0,831,

respectivamente, durante los 6 das de
experimento.
Spirulina platensis cultivado durante
23 das bajo temperatura controlada (30 C)
y la intensidad de luz en los 3 medios
diferentes: medio Paoletti (control), medio
Paoletti suplementado con 1 gL-1 NaCl (agua
salina), y medio preparado de acuerdo con
medio de cultivo Paoletti con el efluente
desalinizador; los resultados concentraciones
celulares fueron: 2.587, 3.545, 4.954 y gL-1,
respectivamente, similar a los encontrados
por Volkman et al. (2008).

Tabla 4. Influencia de cada factor estudiado en los resultados obtenidos por el diseo experimental.

Dnde: L = luz, N = contenido de nitrgeno, A = agitacin y M = cantidad de micronutrientes.

Biomasa (g/L)

Figura 2. Interaccin entre la luz factores (L) y la cantidad de nitrgeno (N) para la produccin de biomasa S platensis.

Biomasa (g/L)

Figura 3. Interaccin entre los factores de agitacin (A) y la cantidad de micronutrientes (M) para la produccin de biomasa S platensis.

4. Conclusin
La intensidad de luz y fuente de
nitrgeno tuvieron mayor influencia en la
produccin de Spirulina platensis.
El aumento de la intensidad de la luz
favorece la produccin de la biomasa, y este
fue el factor que ms influy en el estudio
actual.
Cuando se utiliz 2,5 g / l de
nitrgeno en lugar de 1,5 g / L, huvo un
aumento en la biomasa.
Velocidad de agitacin y la cantidad
de micronutrientes no tena ninguna
influencia sobre la biomasa en las
condiciones estudiadas, pero la interaccin
entre estos factores tenen un efecto
antagonista.
Agradecimientos
Los autores agradecen al CNPq - por el
Programa de Becas de Iniciacin Cientfica
(PIBIC) y para la Universidad de Guarulhos.
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