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So Paulo
2012
Dissertao
Instituto
de
apresentada
ao
Biocincias
da
So Paulo
2012
FICHA CATALOGRFICA
COMISSO JULGADORA
Prof(a). Dr(a).
Prof(a). Dr(a).
Prof. Dr.
Orientadora
AGRADECIMENTOS
vi
vii
Sumrio
INTRODUO .................................................................................................................. 1
1. Sistema Purinrgico........................................................................................................ 1
1.1
1.2
ATP......................................................................................................................... 2
1.3
1.3.1
Receptores P1 ................................................................................................. 7
1.3.2
1.3.3
2.2
3.2
3.3
3.4
3.5
OBJETIVOS ....................................................................................................................... 30
MATERIAL E MTODOS ............................................................................................... 32
1. Animais ......................................................................................................................... 32
2. Drogas e Reagentes ...................................................................................................... 32
3. Preparo de Drogas ........................................................................................................ 34
4. Cultura de Glndula Pineal ......................................................................................... 35
5. Cultura de Pinealcitos ................................................................................................ 35
6. Dosagem de indolaminas por cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC) .... 37
7. Dosagem radioimunolgica de melatonina ............................................................... 37
8. Extrao de protena nuclear ....................................................................................... 38
9. Ensaio de Eletromobilidade em Gel (EMSA) ............................................................. 39
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
RESULTADOS .................................................................................................................. 47
1. Efeito da estimulao purinrgica sobre a produo de NAS e melatonina
induzidas por isoproterenol em glndulas pineais em cultura .................................... 47
3.2
3.2.1
3.2.2
Lista de Abreviaturas
alfa
beta
[Ca2+]i
2-Cl-adenosina
2-cloroadenosina
2-ClATP
2-cloroATP
2MeSADP
2-metiltioADP
2MeSAMP
2-metiltio AMP
2MeSATP
2-metiltio ATP
5-HIAA
cido 5-hidroxi-indolactico
5-HIAL
5-hidroxi-indolacetaldedo
5-HL
5-hidroxitriptofol
5-HT
serotonina
5-HTP
5-hidroxitriptofano
5-MIAA
cido 5-metoxi-indolactico
5-ML
metoxitriptofol
A2P5P
adenosina 2, 5-bifosfato
A3P5P
adenosina 3, 5-bifosfato
A3P5PS
adenosina 3'-fosfato-5'-fosfosulfato
AAAD
AA-NAT
AC
adenilil ciclase
ADP
adenosina 5'difosfato
ADPS
adenosina 5'-O-2-tiodifosfato
AFMK
N1-acetil-N2-formil-5-metoxiquinuramina
Akt
AMK
N1-acetil-5-metoxiquinuramina
AMP
monofosfato de adenosina
AMPc
AMP-PNP
adenosina paranitrofenilfosfato
ANOVA
anlise de varincia
AP-1
protena ativadora 1
ATP
adenosina 5'-trifosfato
BAPTA
bZIP
CaMKII
CAT
catalase
CRE
CREB
CYP450
citocromo P450
DAG
dicilglicerol
DNA
cido desoxirribonuclico
EMSA
E-NPPs
ectonucleotdeo pirofosfatase/fosfodiesterase
E-NTPDases
ecto-nucleosdeo-trifosfato-difosfohidrolases
epm
EPPO
eosinilperoxidase
GMPc
HIOMT
enzima hidroxindol-O-metiltransferase
HRP
horseradish peroxidase
IB-MECA
N6-(3-iodo-benzil)-5-(N-metilcarbamoil) adenosina
ICER
IDO
indolamina-2,3-dioxigenase
IKB
IKK
IP3
trifosfato de inositol
ISO
isoproterenol
IB
MAOB
monoamina oxidase B
MAPKs
MPO
mieloperoxidase
NAS
N-acetilserotonina
NECA
5'-N-etilcarboxamidoadenosina
NF-B
NO
xido ntrico
NPY
neuropeptdeo Y
NSQs
ncleos supraquiasmticos
NTPDase
nucleosdeo-trifosfato-difosfohidrolases
PCR
PDTC
pirrolidina ditiocarbamato
PKA
PKC
PLA
foslolipase A
PLC
fosfolipase C
PLD
fosfolipase D
PPADS
PVN
ncleo paraventricular
QR2
quinona redutase 2
RHD
RNAm
RNS
ROS
R-PIA
(R)N6-fenilisopropiladenosina
STAT3
TAD
TPH
triptofano-hidroxilase
TPOH
UDP
uridina-5'-difosfato
UTP
uridina-5'-trifosfato
M e mM
INTRODUO
INTRODUO
INTRODUO
1.
Sistema Purinrgico
mediando
diferentes
eventos
biolgicos,
tais
como:
INTRODUO
1.2 ATP
O ATP uma molcula de distribuio ubqua no sistema nervoso central
e perifrico e fundamental atividade celular. composto de trs fosfatos, um
acar e um anel de adenina (Figura 1). A ligao entre os dois ltimos grupos
fosfato uma ligao fraca e instvel. Quando quebrada, o ATP alterado para
ADP e um fosfato, liberando energia para ser usado em reaes celulares. ATP
uma molcula solvel e, portanto, facilmente transportada. A maior parte das
molculas do ATP sintetizada na mitocndria e difunde-se para o citoplasma
e para as membranas.
INTRODUO
INTRODUO
INTRODUO
INTRODUO
Adenosina
A
Acoplados
protena G:
Gs, Gq, Gi, Go
Receptor P2
ATP
ADP
UTP
UDP
Dinucleotdeos de adenosina
P2X
P2Y
Canal inico
Subtipos
P2X1-7
Efetores
Ca2+> Na+> K+
Agonistas
R-PIA
CGS21680
IB-MECA
NECA
Antagonistas
XAC, CSC,
MRS 1067
Seletivo P2X
, -mATP
, -mATP
Bz-ATP
Acoplados protena G:
Gq/11, Gi, Gs
P2Y1, P2Y2, P2Y4, P2Y6,
P2Y11, P2Y12, P2Y13, P2Y14
IP3, Ca2+, DAG
, AMPc
No-seletivo
ATPS
2MeSATP
Ap4A
Seletivo P2Y
ADP
2MeSADP
ADPS
UTP/UDP
INTRODUO
1.3.1 Receptores P1
Os receptores P1 so receptores metabotrpicos, acoplados protena G,
cujo ligante endgeno a adenosina. Quatro diferentes subtipos de receptores
P1 foram clonados e caracterizados: A1, A2A, A2B e A3 e, como todos os
representantes da superfamlia dos receptores acoplados a protena G, estes
apresentam 7 segmentos transmembrnicos, o terminal amino voltado para o
meio extracelular e o terminal carboxil para o meio intracelular (Ralevic &
Burnstock, 1998; Burnstock 2007b). Estes diferentes subtipos se diferenciam pelo
tipo de protena G a que esto acoplados e pela transduo de sinais que
desencadeiam, sendo A1 e A3 ligados protena inibitria Gi/o e A2A e A2B
ligados protena estimulatria GS (Fredholm et al., 2001). Quando ativados, os
receptores A1 e A3 inibem a adenilil ciclase (AC), levando a uma diminuio no
monofosfato cclico de adenosina (AMPc) e um aumento na concentrao
intracelular de Ca2+ ([Ca2+]i), por uma via que envolve a ativao da enzima
fosfolipase C (PLC). Os receptores A2A e A2B por sua vez, levam a uma ativao
da AC, aumentando a concentrao intracelular de AMPc (Abbracchio et al.,
1995; Fredholm et al., 2001).
INTRODUO
INTRODUO
diviso
farmacolgica
proposta
por
Abbracchio
INTRODUO
2, 4, 6, 11
acoplados a
10
INTRODUO
11
INTRODUO
2.
12
INTRODUO
13
INTRODUO
constitutivo
potencia
sntese
de
melatonina
induzida
por
14
INTRODUO
3.
Glndula Pineal
15
INTRODUO
16
INTRODUO
propranolol,
bloqueou
completamente
produo
de
17
INTRODUO
hidroxilado
pela
enzima
triptofano-hidroxilase
(TPH)
formando
descarboxilase
(AAAD),
gerando
assim
serotonina
18
INTRODUO
19
INTRODUO
TRIPTOFANO
TPH
5-HTP
AAAD
MAO B
5-HIAL
Aldedo
desidrogenase
5-HIAA
SEROTONINA
lcool
desidrogenase
AA -NAT
5-HL
NAS
HIOMT
5-ML
5-MIAA
MELATONINA
CYP450
IDO/ CYP450/
HRP/ MPO/
EPPO
6-HIDROXIMELATONINA
AFMK
AFM/ CAT
5-MT
6-SULFATOXIMELATONINA
AMK
20
INTRODUO
essencial para a
elevando a
1,
21
INTRODUO
22
INTRODUO
Bubenik, 2002), clulas epidrmicas (Slominski et al., 1996, 2002; Fischer et al.,
2008), ovrio (Itoh et al., 1999), testculos (Tijmes et al., 1996) e clulas
imunocompetentes (Carrillo-Vico et al., 2004, 2005; Pontes et al., 2006; Naranjo et
al., 2007).
A melatonina, advinda desta produo extra-pineal, tem sido envolvida
num amplo espectro de atividades biolgicas apresentando, portanto, atravs
de comunicaes autcrina e parcrina, um importante papel na coordenao
de eventos intracelulares.
23
INTRODUO
24
INTRODUO
25
INTRODUO
26
INTRODUO
quando
estimulados,
potenciam
produo
de
NAS
induzida
por
27
INTRODUO
28
OBJETIVOS
OBJETIVOS
OBJETIVOS
30
MATERIAL E MTODOS
MATERIAL E MTODOS
MATERIAL E MTODOS
1.
Animais
Foram utilizadas ratos (Rattus novergicus) machos, da linhagem Wistar,
2.
Drogas e Reagentes
As drogas e reagentes utilizados esto listados a seguir, de acordo com a
procedncia.
Amersham Biosciences (Reino unido): [125I]-2-iodomelatonina.
32
MATERIAL E MTODOS
(5-CGGCTACCACATCCAAGGAA-3
5-GCTGGAATTACC
GCGGCT-3).
Merck (Brasil): A3P-5P adenosina-3, 5-bifosfato; acetato de sdio;
cido ctrico; cido clordrico; cido perclrico; lcool etlico; EDTA (do
ingls,
ethylenediaminetetracetic
acid
dissodium
salt);
metanol;
metabisulfito de sdio;
Perkin
Elmer
(Boston,
MA,
EUA):
Easy
TidesR
Adenosine
33
MATERIAL E MTODOS
de
sdio;
adenosine
5'-difosfato
(ADP);
Pirrolidina
ditiocarbamato (PDTC).
3.
Preparo de Drogas
Solues estoque de NAS (1 mM) e melatonina (1 mM) foram preparadas
34
MATERIAL E MTODOS
4.
por Parfitt et al. (1976) e modificado por Ferreira et al. (1994). As pineais recm
removidas dos animais foram cultivadas em placas de cultura de 24 poos
(TPP), uma glndula por poo em 200 L de meio de cultura BGJb, pH 7,4,
acrescido de glutamina (2 mM), penicilina (100 U/mL) e estreptomicina
(100 g/mL) e mantidas a temperatura de 37C em atmosfera com 95% de
saturao de O2 e 5% de CO2 por 48 horas. O meio foi trocado aps 24 h. e no
momento anterior ao tratamento. Decorridas 48 h., as glndulas foram
submetidas estimulao e incubadas por 5 h. de acordo com os protocolos
experimentais. Aps o tratamento em cultura, as glndulas pineais foram
imediatamente armazenadas a -80C para posterior anlise da expresso gnica
das enzimas AA-NAT e HIOMT bem como da translocao nuclear dos fatores
de transcrio AP-1 e NF-B. Os meios de cultura foram armazenados a -20C
para posterior dosagem do contedo de NAS e melatonina.
5.
Cultura de Pinealcitos
Os pinealcitos foram preparados conforme tcnica descrita por
35
MATERIAL E MTODOS
25;
albumina
fetal
bovina
(BSA,
g/L)
glicose
36
MATERIAL E MTODOS
6.
7.
37
MATERIAL E MTODOS
8.
38
MATERIAL E MTODOS
DTT 1 mM e PMSF 0,1 mM). Aps incubao de 15 min. em gelo, sob agitao,
as amostras foram centrifugadas (20000 x g; 5 min.; 4C) e o sobrenadante
contendo o extrato protico nuclear foi transferido para um novo tubo e
armazenado a -20C. A quantificao do contedo de protena no extrato
nuclear foi realizada a 280 nm no espectrofotmetro ND-1000 (Nanodrop,
Wilmington, DE, EUA).
9.
dupla-fita
correspondente
ao
consenso
para
NF-B
32P.
39
MATERIAL E MTODOS
40
MATERIAL E MTODOS
12. Sntese
da
fita
de
DNA
complementar
(cDNA)
por
transcriptase reversa
A sntese de cDNA, a partir de RNA total (0,5 g) e random primer foi
realizada utilizando-se SuperScript III. A mistura de RNA, random primer
(50 ng) e dNTP mix (10 mM) foi incubada inicialmente a 65C por 5 min.
Imediatamente aps a incubao, foi transferido para cuba com gelo,
adicionando-se tampo PCR 5x (4 L), DTT (0,1 M) e Superscript III RT
(200 U/ L), finalizando um volume de 20 L. A mistura foi homogenizada e,
aps breve centrifugao, incubada por 5 min. a 25C, 50C por 55 min., sendo a
reao inativada a 70C por 15 min. O cDNA produzido foi utilizado nos
ensaios de PCR ou estocado a -20oC at o uso. Reaes na ausncia de
transcriptase reversa foram realizadas como controle negativo para avaliar
possvel contaminao genmica das amostras analisadas.
41
MATERIAL E MTODOS
42
MATERIAL E MTODOS
5'-AGCGCGAAGCCTTTATCTCA-3',
5'-AAGTGCCGGAT
43
MATERIAL E MTODOS
44
MATERIAL E MTODOS
45
RESULTADOS
RESULTADOS
RESULTADOS
1.
B
100
100
80
60
40
20
0
-5
-4
-3
80
60
40
20
-5
-4
-3
47
RESULTADOS
2.
20000
15000
10000
5000
0
-5
-4
-3
48
RESULTADOS
3.
49
RESULTADOS
Ligao AP-1/DNA
(unidades artitrrias)
250
200
*
150
100
50
0
tempo (min.)
50
RESULTADOS
do
decurso
temporal
da
translocao
nuclear
dos
complexos
51
RESULTADOS
P
A
+
TC
PD
A
D
TC
+
IS
O
m
M
1
+
1
0,
PD
TC
PD
+
IS
O
IS
O
D
A
+
1
P
A
D
m
M
M
+
IS
O
IS
O
PD
TC
IS
O
0,
12
,
*
20
20
40
40
60
60
IS
O
80
80
12
,
IS
O
NAS (ng/200 L)
100
MELATONINA (ng/200 L)
Figura 9. Efeito de PDTC sobre o contedo de NAS e melatonina nos meios de incubao
de glndulas estimuladas com isoproterenol na ausncia e na presena de ADP.
Glndulas pineais em cultura foram pr-tratadas com PDTC (12,5 M, 30 min.) e
estimuladas com isoproterenol (ISO, 0,1 M), na ausncia e na presena de ADP (1 mM) por
5 horas. Os dados representam media epm de 4 glndulas por ponto. * p<0,05 vs
glndulas estimuladas apenas com isoproterenol.
52
RESULTADOS
4.
100
80
60
40
20
0
-5
-4
-3
RNAm hiomt
(Unidades arbitrrias sobre basal)
RNAm aa-nat
(Unidades arbitrrias sobre basal)
5.0
2.5
0.0
-5
-4
-3
Figura 10. Efeito da estimulao purinrgica sobre a produo dos transcritos aa-nat e hiomt.
Glndulas pineais em cultura estimuladas com isoproterenol (ISO, 0,1 M) na ausncia e na
presena de ADP (0,01 1 mM) por 5 horas tiveram a quantidade do RNAm dos genes aa-nat e
hiomt determinados por RT-PCR em tempo real. Os valores foram normalizados a partir de
glndulas no estimuladas (basal). A - Produo do transcrito aa-nat. B- Produo do transcrito
hiomt. Os valores representam media epm, n = 7-8 glndulas por ponto.
53
RESULTADOS
5.
ensaios
de
atividade
enzimtica
das
enzimas
AA-NAT
B
30
HIOMT pM/pool/h
AA-NAT pM/pool/h
600
500
400
300
200
25
20
15
10
-5
-4
-3
-5
-4
-3
Figura 11. Efeito da estimulao purinrgica sobre a atividade das enzimas AA-NAT e
HIOMT. Glndulas pineais em cultura estimuladas com isoproterenol (ISO, 1 M), na ausncia
ou presena de ADP (0,01 1 mM) por 5 horas. A - Atividade enzimtica da AA-NAT. B Atividade enzimtica da HIOMT. Os valores representam a mdia epm; n = 3-4 poos por
ponto.
54
RESULTADOS
6.
55
RESULTADOS
150
*
100
50
M
1
5'
P
D
P+
A3
'P
0,
1
M
m
5'
P
IS
O
+A
A3
'P
0,
01
D
P+
A3
'P
IS
O
+A
+A
D
P+
+A
IS
O
IS
O
5'
P
1m
3'
P5
'P
1m
M
+A
D
P
0,
1
IS
O
IS
O
Figura 12 Efeito do antagonista A3P5P sobre o contedo de NAS nos meios de incubao
de glndulas estimuladas com isoproterenol na ausncia e na presena de ADP. Glndulas
pineais em cultura foram pr-tratadas com A3P5P (0,01 1 mM, 1 hora) e estimuladas com
isoproterenol (ISO, 0,1 M) na ausncia e na presena de ADP (1 mM) por 5 horas . Os dados
representam media epm de 4 glndulas por ponto. * p<0,05 significativamente diferente de
glndulas estimuladas apenas com isoproterenol; # p<0,05 significativamente diferente de
glndulas estimuladas apenas com isoproterenol e ADP.
56
80
60
40
20
IS
O
IS
O
M
+A
IS
D
IS
P
O
O
1m
+A
+A
3'
M
D
P
P+
5'
P
A3
IS
1
'P
O
m
+A
5'
M
P
D
0,
P+
01
A3
IS
m
'P
O
M
5'
+A
P
D
0,
P+
1
m
A3
M
'P
5'
P
1
m
M
0,
1
RESULTADOS
57
DISCUSSO
DISCUSSO
DISCUSSO
59
DISCUSSO
60
DISCUSSO
61
DISCUSSO
62
DISCUSSO
expresso
da
enzima
HIOMT
pode
ser
regulada
por
diferentes
63
DISCUSSO
64
DISCUSSO
que
metabolizao
da
melatonina
plasmtica
ocorre
65
DISCUSSO
66
DISCUSSO
67
CONCLUSES
CONCLUSES
CONCLUSES
1.
agonista
3.
4.
5.
6.
69
CONCLUSES
70
RESUMO
RESUMO
A biossntese de MEL pela pineal envolve a converso da serotonina a
NAS pela enzima AA-NAT, seguida demetilao da NAS pela enzima HIOMT
gerando a MEL. A ativao -adrenrgica essencial e a co-estimulao de
receptores P2Y1 potencia a produo de NAS induzida por noradrenalina.
Neste trabalho avaliamos o efeito da estimulao de receptores P2Y1 sobre a
produo de MEL induzida pela estimulao -adrenrgica. A co-estimulao
purinrgica com ADP, levou a potenciao da produo de NAS induzida por
ISO e a inibio do contedo de MEL de maneira dependente de concentrao.
Em extratos nucleares de pineais estimuladas com ADP, a translocao nuclear
de AP-1 foi observada, no havendo alterao significativa na translocao
nuclear dos dmeros NF-B p50/p50 e p50/RelA. PDTC, inibidor de NF-B, no
alterou o contedo de NAS e MEL em pineais em cultura estimuladas com ISO
e ADP. A expresso gnica e a atividade enzimtica de AA-NAT e HIOMT no
foram alteradas pela co-estimulao com ISO e ADP. O bloqueio seletivo dos
receptores P2Y1 por A3P5P inibiu de maneira dependente de concentrao o
efeito potenciador do ADP sobre a produo de NAS induzida por ISO, mas
no reverteu a inibio observada nos nveis de melatonina. Estes resultados
apontam para um mecanismo diferencial de modulao da produo de NAS e
MEL abrindo novas perspectivas ao estudo dos mecanismos regulatrios da
produo de MEL e seus metablitos.
71
ABSTRACT
ABSTRACT
The biosynthesis of MEL by the pineal gland involves the conversion of
serotonin to NAS by the enzyme AA-NAT, followed by methylation of NAS by
the enzyme HIOMT generating MEL. The activation of -adrenergic receptors is
essential and the co-stimulation of P2Y1 receptors potentiates noradrenalineinduced NAS production. In this study we evaluated the effect of P2Y1
receptors stimulation on the production of MEL synthesis induced by adrenergic stimulation. Purinergic co-stimulation with ADP potentiated ISOinduced NAS production and inhibited melatonin content in a concentration
dependent manner. In nuclear extracts from stimulated pineal glands with
ADP, the nuclear translocation of AP-1 was observed, with no significant
change in the nuclear translocation of the NF-B dimers p50/p50 and
p50/RelA. PDTC, an inhibitor of NF-B, did not alter the content of NAS and
MEL in cultured pineal glands co-stimulated with ISO and ADP. ISO and ADP
co-stimulation did not alter the transcript and enzyme activity of AA-NAT and
HIOMT. The selective blockade of P2Y1 receptors by A3'P5'P inhibited, in a
concentration-dependent manner, the potentiating effect of ADP on ISOinduced NAS production but did not change the inhibition observed on MEL
levels. These results suggest a differential mechanism on the modulation of
NAS and MEL production opening new perspectives to the study of the
regulatory mechanisms involved in the biosynthesis of MEL and its
metabolites.
72
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Abbracchio MP, Brambilla R, Ceruti S, Kim HO, von Lubitz DK, Jacobson KA,
Cattabeni F. G protein-dependent activation of phospholipase C by
adenosine A3 receptors in rat brain. Mol. Pharmacol. 48:1038-45, 1995.
Abbracchio MP, Burnstock G, Boeynaems JM, Barnard EA, Boyer JL, Kennedy
C, Knight GE, Fumagalli M, Gachet C, Jacobson KA, Weisman GA.
International Union of Pharmacology LVIII: update on the P2Y G proteincoupled
nucleotide
receptors:
from
molecular
mechanisms
and
73
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Burnstock
G.
Physiology
and
pathophysiology
of
purinergic
74
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Cecon E, Fernandes PA, Pinato L, Ferreira ZS, Markus RP. Daily variation of
constitutively activated nuclear factor kappa B (NFKB) in rat pineal gland.
Chronobiol Int. 27:52-67, 2010.
Chattoraj A, Liu T, Zhang LS, Huang Z, Borjigin J. Melatonin formation in
mammals: in vivo perspectives. Rev Endocr Metab Disord. 10:237-43, 2009.
Chik CL, Ho AK, Klein DC. Alpha 1-adrenergic potentiation of vasoactive
intestinal peptide stimulation of rat pinealocyte adenosine 3', 5monophosphate and guanosine 3',5'-monophosphate: evidence for a role of
calcium and protein kinase-C. Endocrinology. 122: 702-708, 1988.
Conti A, Conconi S, Hertens E, Skwarlo-Sonta K, Markowska M, Maestroni JM.
Evidence for melatonin synthesis in mouse and human bone marrow cells.J
Pineal Res. 28:193-202, 2000.
Couto-Moraes R, Palermo-Neto J, Markus RP. The immune-pineal axis: stress as
a modulator of pineal gland function. Ann N Y Acad Sci. 1153:193-202, 2009.
da Silveira Cruz-Machado S, Pinato L, Tamura EK, Carvalho-Sousa CE, Markus
RP. Glia-pinealocyte network: the paracrine modulation of melatonin
synthesis by tumor necrosis factor (TNF). PLoS One. 7(7):e40142. Epub 2012.
de Plaen IG, Han XB, Liu X, Hsueh W, Ghosh S, May MJ. Lipopolysaccharide
induces CXCL2/macrophage inflammatory protein-2 gene expression in
enterocytes via NF-kappaB activation: independence from endogenous
TNF-alpha and platelet-activating factor. Immunology. 118: 153-63, 2006.
Djeridane Y, Vivien-Roels B, Simonneaux V, Miguez JM, Pvet P. Evidence for
melatonin synthesis in rodent Harderian gland: a dynamic in vitro study. J
Pineal Res. 25:54-64, 1998.
Dubocovich ML & Markowska M. Functional MT1 and MT2 melatonin
receptors in mammals. Endocrine. 27(2): 101-10, 2005.
75
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
76
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
77
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
78
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Klein DC, Moore RY. Pineal N-acethyltransferase and hydroxyindole-Omethyltransferase: control by the retinohypothalamic tract and the
suprachiasmatic nucleus. Brain Res. 174: 245-262, 1979.
Klein DC, Sugden D, Weller JL. Postsynaptic alpha-adrenergic receptors
potentiate
the
beta-adrenergic
stimulation
of
pineal
serotonin
N-
79
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Mortani Barbosa EJ, Ferreira ZS, Markus RP. Purinergic and noradrenergic
cotransmission in the rat pineal gland. Eur J Pharmacol. 401:59-62, 2000.
Naranjo MC, Guerrero JM, Rubio A, Lardone PJ, Carrillo-Vico A,CarrascosaSalmoral MP, Jimnez-Jorge S, Arellano MV, Leal-Noval SR, Leal M, Lissen
E, Molinero P. Melatonin biosynthesis in the thymus of humans and rats.
Cell Mol Life Sci. 64(6):781-90, 2007.
Nicholls J, Skene DJ, Hourani SM. Use of a newly developed technique to
isolate rat pinealocytes and study the effects of adenosine agonists on
melatonin production. J Pineal Res. 23(3):164-8, 1997.
Nikodijevic O & Klein DC. Adenosine stimulates adenosine 3', 5monophosphate and guanosine 3', 5-monophosphate accumulation in rat
pinealocytes: evidence for a role for adenosine in pineal neurotransmission.
Endocrinology. 125: 2150 -2157, 1989.
Nonaka KO, Reiter RJ, Withyachumnarnkul B, Stokkan KA, Lerchl A.
Adenosine effects on the rat pineal gland in vitro: cyclic adenosine
monophosphate levels, N-acetyltransferase, and thyroxine type II 5'deiodinase activities and melatonin production. J Pineal Res. 11:1-6, 1991.
Nordio M, Conte D, Nonaka KO, Reiter RJ, Isidori A. Failure to stimulate
melatonin synthesis in the rat pineal gland with an adenosine analog.
Psychoneuroendocrinology. 17(2-3):249-54, 1992.
Nosjean O, Ferro M, Coge F, Beauverger P, Henlin JM, Lefoulon F, Fauchere JL,
Delagrange P, Canet E, Boutin JA. Identification of the melatonin-binding
site MT3 as the quinone reductase 2. J Biol Chem. 275(40):31311-7, 2000.
Panger B, Panger A, Reiter RJ. Circadian variations of adrenergic receptors in
the mammalian pineal gland: a review. J Neural Transm.81: 17-29, 1990.
Pankratov Y, Lalo U, Verkhratsky A, North RA. Quantal release of ATP in
mouse cortex. J. Gen. Physiol. 129(3):257-65, 2007.
80
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Photoperiodic
control
of
the
rat
pineal
arylalkylamine-N-
81
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
of
serotonin
to
N-acetylserotoninmelatonin,
and
5-
82
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
83
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
nighttime
melatonin
content
without
changing
N-
84
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
Tzavara, E.T., Pouille, Y., Defer, N. & Hanoune, J. Diurnal variation of the
adenylyl cyclase type 1 in the rat pineal gland. Proc Natl Acad Sci USA. 93:
11208-11212, 1996.
Ueck M, Troiani ME, Reiter RJ. Transient reduction in pineal melatonin levels
but not N-acetyltransferase activity in rats forced to swim for 15 minutes at
night. Neuroendocrinol Lett. 10:8189, 1988.
Verma IM, Stevenson JK, Schwarz EM, Van Antwerp D, Miyamoto S. Rel/NFkappa B/I kappa B family: intimate tales of association and dissociation.
Genes Dev. 9:2723-35, 1995.
von Kgelgen I. Pharmacological profiles of cloned mammalian P2Yreceptorsubtypes. Pharmacol Ther. 110(3):415-32, 2006.
Wolchok JD, Goodman AR, Vilcek J.Activation of NF-kappa B may be
necessary but is not sufficient for induction of H-2 antigens by TNF in J558L
murine myeloma cells. J. Leukoc Biol. 55: 7-12, 1994.
Womac, A.D.; Burkeen, J.F.; Neuendorff, N; Earnest, D.J.; Zoran, M.J. Circadian
Rhythms of Extracellular ATP Accumulation in SCN Cells and Cultured
Astrocytes. Eur J Neurosci.30(5): 869876, 2009.
Wu WT, Reiter RJ, Troiani ME, Vaughan GM. Elevated daytime rat pineal and
serum melatonin levels induced by isoproterenol are depressed by
swimming. Life Sci. 41:1473-1479, 1987.
Zhang ET, Mikkelsen JD, Mller M. Tyrosine hydroxylase- and neuropeptide Yimmunoreactive nerve fibers in the pineal complex of untreated rats and rats
following removal of the superior cervical ganglia. Cell Tissue Res. 265:6371, 1991.
Zhang Z, Chen G, Zhou W, Song A, Xu T, Luo Q, Wang W, Gu XS, Duan S.
Regulated ATP release from astrocytes through lysosome exocytosis. Nat
Cell Biol. 9(8):945-953, 2007.
85
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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SMULA CURRICULAR
SMULA CURRICULAR
Nome: Camila Lopes Petrilli
Data de nascimento: 27/12/1984
Local de nascimento: So Paulo SP, Brasil
Endereo eletrnico: camipetrilli@msn.com
Formao Acadmica/Titulao
2009 2012:
Mestrado em Fisiologia.
Instituio: Instituto de Biocincias da Universidade de So Paulo
(USP), So Paulo, Brasil.
Ttulo da dissertao: Regulao da atividade da glndula pineal por
estimulao purinrgica.
Orientao: Profa. Dr Zulma F. S. Ferreira.
Bolsa: Fundao de Amparo a Pesquisa do Estado de So Paulo
(FAPESP, processo N 2009/12307-8, vigncia: 08/2010 10/2011);
Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior
(CAPES, vigncia: 11/2009 07/2010).
2005 2008:
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SMULA CURRICULAR
FERREIRA, Z. S.; PETRILLI, C. L.; Mori, D.P.; Souza-Teodoro, L.H.; Souza, G.; Garcia,
L. D A.; MARKUS, R. P. Purinergic stimulation differentially modulates pineal gland
activity. In: Faseb Summer Research Conference-Melatonin receptors Actions and
Therapeutics, 2011, Snowmass Village. Anais da FASEB Summer Research
Conference-Melatonin receptors Actions and Therapeutics, 2011.
Resumos Apresentados em Anais de Eventos Nacionais
GARCIA, L.D., PETRILLI, C.L., TEODORO, L.H.S., MARKUS, R.P., FERREIRA, Z.S
DIFFERENTIAL EFFECTS OF PURINERGIC STIMULATION ON MELATONIN
BIOSYNTHETIC PATHWAY IN THE RAT PINEAL GLAND. In: 3 Encontro do Clube
Brasileiro de Purinas, 2012, Ouro Preto, MG. Anais do 3 Encontro do Clube
Brasileiro de Purinas, 2012.
PETRILLI, C. L.; MARKUS, R. P.; FERREIRA, Z. S. DUAL MODULATORY ROLE OF
PURINERGIC RECEPTOR STIMULATION ON PINEAL GLAND ACTIVITY. In: XXVI
Reunio Anual da Federao de Sociedades de Biologia Experimental - FeSBE, 2011,
Rio de Janeiro. Anais do XXVI Reunio Anual da Federao de Sociedades de
Biologia Experimental - FeSBE, 2011.
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SMULA CURRICULAR
PETRILLI, C. L.; MARTINS, J. M.; SOUSA, C. E. C.; PINATO, L.; MARKUS, R. P.;
FERREIRA, Z. S. IMMUNOLOCALIZATION OF P2Y1 RECEPTOR IN THE RAT
PINEAL GLAND.. In: 1 Encontro do Clube Brasileiro das Purinas: Sinalizao
Purinrgica e Implicaes Teraputicas, 2010, guas de Lindia. Anais do 1 Encontro
do Clube Brasileiro das Purinas: Sinalizao Purinrgica e Implicaes Teraputicas,
2010.
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ANEXOS
ANEXOS
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