CENTRO DE EDUCAO PROFISSIONAL IRMO MRIO CRISTVO

CURSO TCNICO EM BIOTECNOLOGIA

DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA GERAL E DE ALIMENTOS
PROF. ROBSON ALNOCH

PATRICK ALVES DOS SANTOS

GABRIEL BRUNO MEIRA
CATIELI CARVALHO
ISADORA RIPPEL

TECNICAS DE SEMEADURA
Relatrio apresentado ao Curso de Tcnico em
Biotecnologia do Programa de Aprendizagem
Microbiologia Geral e de Alimentos do Centro
Estudo Profissional Irmo Mrio Cristvo -

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TECPUC, com requisito a obteno da nota da

segunda parcial.

CURITIBA
2015

SUMRIO
2

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INTRODUO.......................................................................................................3

OBJETIVO..............................................................................................................4

MATERIAL.............................................................................................................4

RESULTADO..........................................................................................................8
QUESTES.............................................................................................................10

CONCLUSO.........................................................................................................11

REFNCIAS............................................................................................................11

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INTRODUO

No segredo algum, que em todo os lugares a microrganismos. Porm o que

quase ningum percebe que para cada lugar existe um ser mais adaptado. Isso se deve
aos fatores necessrios para o crescimento, que incluem fatores fsicos como pH,
temperatura e presso osmtica, como tambm se deve aos fatores qumicos, carbono,
nitrognio, enxofre, fsforo, oxignio e elementos traos.
Tendo em mente estes pr-requisitos para a sobrevivncia de microrganismos,
que se criou as Tcnicas de Semeaduras, sendo que so inmeras atualmente. Elas no
somente so capazes de recriar o meio ambiente que os microrganismos vivem como
tambm so usadas para o isolamento de um determinado organismo. Temos que levar
em conta que nem todos microrganismos so passiveis de serem cultivados em
laboratrio. Um gnero que at o momento no foi cultivado in vidro o
Mycobacterium isso inclui os dois principais patgenos humanos, Mycobacterium
tuberculosis e Mycobacterium leprae.
No existe relatos de quando se comeou a repicagem de microrganismos in
vitro no meio liquido, porm o cientista francs Louis Pasteur mais outro cientista
chamado Robert Koch com seus trabalhos foram quem mais se utilizaram destes meios
para a cincia, criando assim a era da Bacteriologia. Essa era, no s foi mudada pelas
inovaes de Robert Kock e seus meios gelatinosos como o gar, porm tambm pelos
estudos de Biologia Molecular que estavam engatinhando. E graas a ele a
microbiologia evoluiu extraordinariamente.5
O material nutriente preparado para o crescimento de microrganismos em um
laboratrio chamado de meio de cultura. Este meio de cultura deve ser preparado
seguindo algumas observaes referentes ao seu microrganismo. Assim no cometer o
erro de produzir o meio de cultura errado. Observaes essas que so mencionadas nos
fatores de crescimento.
Existe na cincia microbiolgica vrias formas de meios de cultura, algumas
delas so:

Meio Quimicamente Definido (Sabemos exatamente o que vai e sua

quantidade);
Meio Complexo (O meio mais utilizado em laboratrio visando que a maioria
das bactrias so capazes de serem cultivas. No sabemos a quantidade
especfica de algumas substncias);
Meios Redutores (Eliminam o oxignio do meio de cultura);
Meio Seletivo (Favorece os microrganismos de interesse);
Meio Diferencial (Diferencia as colnias de outras. Pode usar indicador de pH
como corantes);
Meio de Enriquecimento (Semelhante ao meio seletivo porm usado para
aumentar a quantidade de microrganismos at uma poro detectvel).

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As tcnicas empregadas para isolamento de microrganismos consistem em

procedimentos simples de aplicao rotineira em um laboratrio de microbiologia. Uma
poro representativa de um microrganismo, qual chamamos de inculo transferida
de uma amostra para um meio de cultura de forma assptica. Clulas microbianas
contidas na amostra so suficientemente separadas e imobilizadas o gel de gar
contendo nutrientes e se multiplicam formando um agregado de clulas idnticas,
denominada colnia.

OBJETIVO

Demonstrar os mtodos mais comuns para obteno de culturas puras.

Obter colnias isoladas, o que permite distinguir os diferentes microrganismos
em um material ou cultura microbiana atravs da sua morfologia colonial

MATERIAL
Placas com gar nutriente;
Tubo com caldo nutriente;
Tubo com gar nutriente inclinado;
Tubos com cultura de microrganismos;
Ala de platina;
Ala de Drigalski;
lcool.
MICRORGANISMOS:
1 - Escherichia coli;
2 - Bacillus cereus;
3 - Staphylococcus aureus;
4 - Saccharomyces cerevisiae.
MEIOS:
Placa A: Sal Manitol;
Placa B: MacConkey;
Placa C: gar Levedura;
Placa D: Brain Heart Infusion ou Infuso de crebro e corao - BHI
MTODOS
Utilizamos 3 mtodos de obteno de culturas puras, sendo eles o esgotamento
simples, esgotamento composto e semeadura em tubos4. Devemos pensar que quando
estamos isolando microrganismos de seus ambientes naturais, estamos isolando uma
populao mista2. A fim de que se possa separar as espcies nela contida, necessrio
que se proceda a uma purificao4. Est purificao nada mais do que os mtodos que
abordaremos, usando tcnicas de semeaduras.
5

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SEMEADURA POR ESTRIAS SIMPLES EM PLACA4:

1. Colocar sobre a bancada a Placa de Petri com o meio preestabelecido.

2. Com a Ala de Platina em mos, flambar a agulha at esterilizar a mesma. Deixando
a esfriar por alguns segundos ao lado do Bico de Bunsen.
3. Se o seu Meio com a Cultura for lquido devesse introduzir a agulha no Meio, e agitar
um pouco a ala com movimentos circulares. Caso seu meio seja slido. Esfregue a
agulha de modo a fazer movimentos de zig-zag. Assim poder ter uma quantidade
considervel de microrganismos em sua Ala de Platina. No esquecendo de sempre
flambar a boca do Tubo.
4. Agora com a Placa de Petri e a Ala de Platina em mos e a uma distncia
considervel do Bico de Bunsen, vamos inocular os microrganismos*.
5. Movimente em zig-zap a Ala de Platina sobre o Meio Nutriente da Placa de Petri
escolhida de uma ponta a outra.
6. Incubar a Placa invertida a 37 C por 24 horas

Figura 1
Obs.: No sempre necessrio ir de uma ponta a
outra de forma linear, como mostra a Figura 1.
Tambm possvel dividir em fraes a Placa de
Petri com linhas imaginarias e inocular dentro
destas divises. Repare como fica a Figura 2

Figura 2
SEMEADURA POR ESTRIAS COMPOSTAS EM PLACA4:

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1. Colocar sobre a bancada a Placa de Petri com o meio preestabelecido.

2. Fracionar a Placa de Petri escolhida. Visando que ter mais de uma origem de
populao mista. Melhor compreenso visualize a Figura 3.
3. Com a Ala de Platina em mos, flambar a agulha at esterilizar a mesma. Deixando
a esfriar por alguns segundos ao lado do Bico de Bunsen.
4. Se o seu Meio com a Cultura for lquido devesse introduzir a agulha no Meio, e agitar
um pouco a ala com movimentos circulares. Caso seu meio seja slido. Esfregue a
agulha de modo a fazer movimentos de zig-zag. Assim poder ter uma quantidade
considervel de microrganismos em sua Ala de Platina. No esquecendo de sempre
flambar a boca do Tubo.
5. Agora com a Placa de Petri e a Ala de Platina em mos e a uma distncia
considervel do Bico de Bunsen, vamos inocular os microrganismos*.
6. Movimente em zig-zap a Ala de Platina sobre o Meio Nutriente da Placa de Petri
escolhida, porm somente nas demarcaes estabelecidas. A cada quadrante feito somos
obrigados a Flambar novamente a Ala de Platina, esfria-la e pegar em outro Tubo ou
Meio a nova Cultura Mista. Gire a Placa 90 e toque a ala no canto da estria do
primeiro quadrante e deslize vrias vezes, repetindo o movimento de zig-zag at o outro
extremo do segundo quadrante, e assim sucessivamente at o ultimo quadrante.
7. Incubar a Placa invertida a 37 C por 24 horas.

Figura 3

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Obs.: Os fracionamentos podem ser feitos com Caneto para uma melhor separao das
Culturas.
Obs2: Nem sempre Gire a Placa 90 isso vai depender de quantos quadrantes voc quer
obter na sua placa.
SEMEADURA POR TUBOS COM CALDO NUTRIENTE EM PLACA (DIFUSO):

1. Coloque sobre a bancada os Tubos com os Microrganismos e o Tubo com Caldo

Nutriente.
2. Com a Ala de Platina em mos, flambar a agulha at esterilizar a mesma. Deixando
a esfriar por alguns segundos ao lado do Bico de Bunsen.
3. Se o seu Meio com a Cultura for lquido devesse introduzir a agulha no Meio, e agitar
um pouco a ala com movimentos circulares. Caso seu meio seja slido. Esfregue a
agulha de modo a fazer movimentos de zig-zag. Assim poder ter uma quantidade
considervel de microrganismos em sua Ala de Platina. No esquecendo de sempre
flambar a boca do Tubo.
4. Agora com os Tubos e a Ala de Platina em mos e a uma distncia considervel do
Bico de Bunsen, vamos inocular os microrganismos*.
5. Abra o Tubo Caldo Nutriente e passe a boca do tubo na chama para evitar
contaminaes.
6. Introduzindo a Ala de Platina no Tubo de forma a imergir toda a agulha no Caldo
Nutriente e movimentar de forma circular para que os microrganismos se desgrude da
agulha e fique no Caldo. Para uma melhor visualizao observe a Figura 4.

Figura 4

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RESULTADOS
Aps um perodo de 24 a 48 horas examinamos as placas e obtivemos alguns resultados.
Infelizmente no Meio Sal Manitol algo de errado aconteceu quanto aos microrganismos
Escherichia coli; que no deveria crescer. Entretanto mudando o esperado acabou
sobrevivendo em um Meio altamente salino. O ocorrido no foi observado em nenhuma
outra placa. Isso nos leva a trs hipteses:
1 - O Meio de Sal Manitol no foi preparado corretamente. Diminuindo assim a sua
salinidade e facilitando a sobrevivncia dos microrganismos Escherichia coli por mais
de 48 horas.7
2 - A Tcnica de Semeadura no foi preparada corretamente. Auxiliando assim uma
contaminao no proposital no quadrante 1. Reparando na imagem da PLACA A
observasse uma colorao amarelada, caracterstica dos microrganismos
Staphylococcus aureus; Mas no somente no quadrante 3 onde realmente esto os
Staphylococcus aureus mais tambm no quadrante 1 onde deveria conter somente
Escherichia coli.1
3 - Quantidade muito grande de Escherichia coli inoculado. Assim demorando mais de
48 horas para que todos os microrganismos sucumbissem. Ao mesmo tempo que muitos
forrem exterminados, outros mais aptos conseguiriam permanecer mais tempo graas a
esta leve mudana de pH no meio. Por mais que seja vlida esta hiptese, ainda a mais
improvvel. Transferimos as bactrias Escherichia coli de um Tubo de Ensaio em Meio
Liquido, o que dificulta a inoculao de uma grande quantidade de microrganismos.
PLACA A
SAL MANITOL

MICRORGANISM
O
1
2
3
4

RESULTADO
MUDOU DE COR
CRESCEU
MUDOU DE COR
CRESCEU POUCO

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PLACA B
MCCONKEY

MICRORGANISM
O

RESULTADO

1
2
3
4

CRESCEU, COR ESCURA

NO CRESCEU
NO CRESCEU
NO CRESCEU

PLACA C
GAR LEVEDURA

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MICRORGANISM
O
1
2
3
4

RESULTADO
CRESCEU
CRESCEU MUITO
CRESCEU
CRESCEU

PLACA D
INFUSO DE CREBO E CORAO - BHI

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MICRORGANISM
O
1
2
3
4

RESULTADO
CRESCEU
CRESCEU
CRESCEU
CRESCEU POUCO

DISCUSSES
Bom no discutimos praticamente nada, porm tivemos alguns dilogos
espordicos. Pra mim j melhor que nada. Cabe a ns mesmos se organizarmos
de uma melhor forma. Para que o prximo relatrio no deixemos este tpico em
branco.
QUESTES
1. Esquematize o crescimento dos microrganismos obtido nas placas de Petri.
Resposta: Est na parte dos Resultados.
2. Por que os meios slidos so preferidos para o isolamento dos microrganismos?
Resposta: A cultura em meio solido facilita a identificao de colnias e limita o
crescimento de microrganismos contaminantes de crescimento mais rpido.

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3. Por que se deve flambar os tubos antes e depois de cada transferncia?

Resposta: Deve-se flambar (passar a boca do tubo na chama) para evitar
contaminaes e afetar a semeadura ou a amostra.
4. Qual a finalidade de se fazer vrias estrias, na semeadura em placa, contendo meio
slido?
Respostas: A finalidade isolamento de colnias bacterianas e culturas puras.
5. Se voc no obteve uma colnia isolada, sugira as possveis razoes para essa falha, e
o que faria para tentar corrigi-la.
Resposta: Podemos ressaltar alguns fatores como contaminao, pouca quantidade de
microrganismos, o meio no atendia as necessidades para que o microrganismo
crescesse, entre outros. Para corrigir, refazer a semeadura, atentando se aos possveis
problemas citados.
CONCLUSO
Podemos observar que praticamente em nenhum meio ouve o crescimento de todos os
microrganismos isso se deve aos fatores necessrios de crescimento de cada meio.
Mas mesmo que no obtivemos xito no crescimento de todos os microrganismos em
uma s placa de petri, ainda assim conseguimos fazer o esgotamento composto4
corretamente. Utilizando tcnicas simples de semeadura possvel ter uma cama
enorme de isolamento de microrganismos exclusivamente do meio gar nutriente. O
Meio Sal Manitol10 somente a Bactria Streptococcus aureus se transformou em
cultura. Isso ocorreu graas as caractersticas do meio sendo ele um Meio Seletivo e
tambm Diferencial. Diferencial por mudana de colorao dependendo o pH 11. J o
MacConkey o meio mais antigo de cultivo de microrganismos estricos 8. somente
seletivo para Escherichia coli neste no a mudana de colorao sendo assim no pode
ser diferencial6. O Meio Levedura12 ficamos somente com a Bactria Bacillus cereus
que pode ser patognica para os seres humanos. Este meio tem capacidade de estimular
a esporulao destas bactrias sendo assim muito utilizado na anlise de alimentos e
produtos laticnicos. No podemos afirmar que um meio seletivo visando que outras
bactrias tambm podem ser esporuladas, sendo assim conclumos que este Meio
Levedura um Meio Enriquecimento. Por fim temos o Meio BHI agar7 (Brain Heart
Infusion ou Infuso de crebro e corao) um meio de utilizao geral ou seja um
Meio Complexo, adequado para a cultura de uma grande variedade de tipos de
organismos, incluindo bactrias, leveduras e fungos filamentosos provenientes de
amostras clnicas9. E para fecharmos com chave de ouro temos uma enorme juno de
conceitos desde a assepsia, passando pelo preparo do meio at a forma de semeadura
que neste momento foi o Esgotamento Composto por estrias.

REFERENCIAS

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1 - MADIGAN, Michael T. et al. Microbiologia de Brock. 12 Edio. Porto Alegre,

Editora: Artmed, 2010.
2 - TORTORA, Gerald J; FUNKE, Berdell R; CASE, Christine L. Microbiologia: 10
Edio. Porto Alegre: Editora Artmed, 2012.
3 - TRABULSI, Luiz Rachid; ALTERTHUM, Flvio; Microbiologia, 5 Edio. So
Paulo. Editora: Atheneu, 2008.
4 - NEDER, Rahme N. Microbiologia: Manual de Laboratrio. So Paulo. Editora:
Nobel, 1932.
5 - NOGUEIRA, Joseli M. R; MIGUE, Lucieny de Faria S. Conceitos e Mtodos para a
Formao de Profissionais em Laboratrios de Sade: Bactriologia. Escola Polictnica
de Sade Joaquim Venncio, Volume 4, Rio de Janeiro: EPSJV; IOC, 2009. Disponvel
em: <http://goo.gl/1j3MgT> Acesso em: 06 de Maio, 2015.
6 - PROBAC BRASIL, Produtos Bacteriolgicos Ltda; Meios Seletivos para Isolamento
de Gram Positivos e Gram Negativos. Disponvel em: <http://goo.gl/ij5rA0> Acesso
em: 06 de Maio, 2015.
7 - Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria; Descrio dos Meios de Cultura
Empregados nos Exames Microbiolgicos. Disponvel em: <http://goo.gl/ShpSpo>
Acesso em: 06 de Maio, 2015.
8 - BIOSYSTEMS, HIMEDIA; gar Meio MacConkey sem Cristal Violeta. Disponvel
em: <http://goo.gl/lVDKEz> Acesso em: 06 de Maio, 2015.
9 - BD; Instrues de Utilizao de Meios em Placas Prontas de usar BD Brain Heart
Infusion (BHI) Agar. Disponvel em: <https://goo.gl/6n4kp8> Acesso em: 06 de Maio,
2015.
10 - BD; Instrues de Utilizao de Meios em Placas Prontas de usar BD Mannitol Salt
Agar. Disponvel em: <https://goo.gl/0fDczy> Acesso em: 06 de Maio, 2015.
11 - HIMEDIA; gar Sal Manitol. Disponvel em: <http://goo.gl/M6Ehj1> Acesso em:
06 de Maio, 2015.
12 - BIOSYSTEMS, HIMEDIA; Meio gar Batata Dextrose; Isolamento e Enumerao
de Leveduras. Disponvel em: <http://goo.gl/MIKjPM> Acesso em: 06 de Maio, 2015.

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