PROBLEMAS DE CINTICA ENZIMTICA

Problema 1:
1- Un sustrato S se transforma por una enzima, y la velocidad de desaparicin se mide
cada 30 seg. durante 3 min. Se prepar en tubos de ensayo una serie de seis tubos con
1.5 g de enzima (peso mol 30,000) aadindose un mismo volumen de disolucin de
sustrato a distintas concentraciones. Los resultados estn resumidos en la tabla.
Cules son las velocidades iniciales para cada tubo con distinta concentracin de
sustrato?
Tiempo (min)
0

0.5
1
1.5
2.0
2.5
3
Conc. Inicial
(moles ml-1)

S
0.0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.0

S
0.49
1.05
1.66
2.23
2.81
3.40
2.32

S
0.71
1.52
2.36
3.18
4.00
4.55

Sustrato transformado (mol)

3
4
S
S
1.10
1.36
2.24
2.74
3.48
12.66
38.50

S
1.45
3.00
200.00

Solucin: Paso 1. Corregir cada lectura sustrayendo el cambio aparente en la disolucin

testigo (0S) en el tiempo correspondiente.
1

S
0.4
9
0.9
5
1.4
6
1.9
3
2.4
1
2.9

0.71 1.1

1.36 1.45

1.42 2.14 2.64 2.90

2.16 3.28 -

2.88 -

3.6
-

Paso 2. Representar moles de sustrato transformado para cada concentracin frente al

tiempo (Figura). Trazar la mejor recta para cada serie de puntos.

Sustrato transformado (mol)

4
5

S
3

Tiempo (minutos)
De esta figura determinar la velocidad de sustrato transformado por minuto para cada
concentracin de sustrato en el tramo lineal de cada curva. Estos valores sern las pendientes
de las porciones lineales y sern tambin las velocidades iniciales.
[1S]
2.32
2
[ S]
4.55
[3S] 12.66
[4S] 38.50
[5S] 200.00

x
x
x
x
x

10-3 M
10-3 M
10-3 M
10-3 M
10-3 M

V= 0.95 mol min-1

V= 1.44 mol min-1
3
V= 2.31 mol min-1
4
V= 2.64 mol min-1
5
V= 2.90 mol min-1
2

Velocidad inicial (mol min-1)

Estos valores se representan unos frente a otros

Conc. Sustrato (M x 103)

Problema 2:
v0 = Vmx [S]
Km + [S]
Utilizando la ecuacin de Micaelis-Menten, calcular el cambio en la [S] necesaria para
aumentar la velocidad de una reaccin del 10 al 90 % de la velocidad mxima.
SOLUCIN
Poniendo v0 = 0,1 Vmx
Entonces

[S]
= 0,1
Km + [S]
[S] = (Km + [S]) . 0,1
[S] = 0,1 Km + 0,1 [S]
[S] - 0,1 [S] = 0,1 Km
0,9 [S] = 0,1 Km
9 [S] = Km

Es decir, [S] = Km / 9
Poniendo
entonces

v0 = 0,9 Vmax encontramos que [S] = 9 Km,

[S]90% = 9 Km = 81
[S]10%
Km/9

Es decir, se debe aumentar la [S] 81 veces.

Problema 3:
Las velocidades iniciales a varias concentraciones de sustrato para una reaccin catalizada
por una enzima hipottica son:
[S] (moles/l) V (moles/min)
5x10-2
0.25
5x10-3
0.25
-4
5x10
0.25
5x10-5
0.20
-6
5x10
0.071
5x10-7
0.0096
a) Cul es la velocidad mxima para esta reaccin?
b) Por qu la velocidad inicial permanece constante a una [S] mayor de 5x10-4 M
c) Cul es la concentracin de enzima libre para una [S] de 5x10-4 M?
d) Cul es la Km de la enzima?
e) Calcular la velocidad inicial para [S]=1x10-6
y [S]=1x10-1
3

f) Calcular la concentracin de producto formado en los cinco primeros minutos de reaccin

utilizando 10 ml de una disolucin de sustrato 2x10-3 M.
SOLUCIN
a) Vmax = 0.25 mol/min, ya que por encima de [S] de 5x10-4 no aumenta.
b) Porque todos los enzimas est ocupados transformando un sustrato.
c) Cero, todos los enzimas ocupados, a esa [S] se da la Vmax.
d) Empleando la ecuacin de Michaelis, utilizando la velocidad 0.20, 0.070 0.0096 y sus
correspondientes [S], como sabemos la Vmax, obtenemos una Km 0 1,25 x 10-5 moles/l.
e) Sabiendo la Km y Vmax, aplicamos Michaelis utilizando esas [S], y
obtenemos: V = 0,018 mol/min y V = 0,25 mol/min.
f) A [2x10-3] la V = Vmax = 0,25 mol/min. En 5 min 0,25 x 5 = 1,25 mol. Tenemos 10 ml
de sustrato, luego 1,25 mol / 10-2 l = 1,25 x 102 mol/l

Problema 4:
Se estudi la actividad de la enzima ureasa, que cataliza la reaccin:
CO(NH2)2+H2O CO2+2NH2
en funcin de la concentracin de urea, con los resultados siguientes:
Concentracin de urea (mmoles dm-3)
30
V inicial (mmoles urea consumidos min-1 mg enzima-1) 3,37

60
5,53

100
7,42

150
8,94

250
10,70

400
12,04

Cules son los valores de Km y Vmx para esta reaccin?

SOLUCIN
Los datos se ordenan en la forma adecuada para una grfica lineal (por ejemplo, 1/V inicial
frente a 1/[S], aunque existen otras formas de linealizar que no son motivo de nuestro
estudio). La grfica de la doble inversa se indica en la Figura. De la grfica se puede calcular
que Km es 105 mmoles dm-3 y la Vmx es 15,2 mmoles urea consumidos mg -1 min-1. Observar
la distribucin de los puntos y tener presente cuando se eligen los valores adecuados para la
concentracin de sustrato al planificar un experimento.

-1

1/Vinicial (mg min mmoles )

0.30

0.24

0.18

0.12

0.06

0.00
0.00

0.01

0.02
3

0.03

0.04

-1

1/[urea] (dm mmoles )

Ejemplo resuelto de acuerdo con el mtodo de doble inversa o de Lineweaver-Burk.

Problema 5:
Se investig el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una reaccin catalizada
enzimticamente sobre un solo sustrato, obtenindose los siguientes resultados
4

Concentracin de sustrato
(mmol L -1)

0.05
0.10
0.20
0.40
0.50

Concentracin del inhibidor

(mmol L -1)
0
0.5
1.0
Velocidad de reaccin (mol L -1 min-1)
0.33
0.50
0.67
0.80
0.83

0.20
0.33
0.50
0.67
0.71

0.14
0.25
0.40
0.57
0.63

A) De que manera acta el inhibidor? B) Obtngase los valores para Vmx, y Km.
SOLUCIN
A) La manera ms sencilla de deducir cmo acta un inhibidor es graficar 1/ en funcin de
1/[S]0 para cada concentracin del inhibidor.

0.5
Vmx

-1/Km
Grfica de Lineweaver-Burk del efecto de un inhibidor
A partir de la grfica se puede observar que la pendiente de las curvas se modifica con los
cambios en la concentracin del inhibidor pero no la interseccin en el eje 1/Vmax). Por
ello los datos anteriores indican que el inhibidor I est actuando como un inhibidor
competitivo.
B) De la interseccin en el eje 1/ se puede estimar Vmax= 1(mol L -1 min-1) y de la
interseccin con el eje 1/[S]0 los valores de Km=0,1 (mmol L -1) sin ihnhibidor, Km=0,2(mmol
L -1) con 0.5(mmol L -1) de inhibidor y Km=0,3 (mmol L -1) con 1(mmol L-1)

Problema 6:

A partir de los siguientes datos de una reaccin enzimtica, determinar de que manera est
actuando el inhibidor. Determinar la Km y la velocidad mxima.
[S] mM g producto/h
g producto/h
(sin inhibidor)
(6 mM inhibidor)
2
139
88
3
179
121
4
213
149
10
313
257
15
370
313
SOLUCIN
Se calculan los inversos de [S] y de v, producto sin inhibidor y producto con inhibidor y se
representa. Sin inhibidor: Vmax = 0,5x103 g/h y Km = 5 mM. Con inhibidor: Vmax es la
misma y Km=9 mM.