Microscopía y Técnica Histológica

Universidad Nacional Autnoma de Mxico
Facultad de medicina
Departamento de Biologa Celular y Tisular
Microscopa y Tcnica Histolgica
Dr. C. Guillermo Moreno Fernndez
Reflexin inicial
La verdadera sabidura est en
reconocer la propia ignorancia.
Scrates
Tropezar no es malo, encariarse

con la misma piedra si.
LUZ
Issac Newton introduce el trmino

fotn,
LUZ.- Es la energa en forma de ondas, que

se propaga en todas direcciones y siempre
en lnea recta, a travs de agua o aire
La luz es una forma de energa radiante

electromagntica que percibimos con el
sentido de la visin.
La luz es la porcin visible de la energa
radiante
Longitud de Onda: Es la distancia que existe entre dos crestas o dos valles sucesivos de la onda luminosa.
Determina la visibilidad y color de la luz. La longitud de una onda luminosa se expresa por la letra griega
lambda l
Amplitud de Onda: Es la distancia que existe entre la parte superior e inferior de la onda. Determina la
intensidad de la luz
Luz visible 400 nm violeta

700 nm roja
FENMENOS DE LA LUZ
REFLEXIN
El rayo de luz incide en un

ngulo de 45 sobre una
superficie, devolvindolo al
medio, de esta manera se hace
visible (espejo)
REFRACCIN
Es el cambio de velocidad
que experimenta una onda
que pasa de un medio con
un ndice de refraccin
dado a otro diferente.
Ejemplo: cuando la luz

pasa a travs del aire sobre
una superficie caliente,
produciendo un
espejismo
NDICE DE REFRACCIN
Es la modificacin en la velocidad de
la luz al incidir un rayo
perpendicularmente a travs de un
cuerpo transparente
Velocidad de la luz en el aire

IR=
Velocidad de la luz en el medio
ndices de refraccin de una serie de sustancias transparentes.
Agua = 1.3300
Aceite de inmersin = 1.5150
Fluorita = 1.4340
Vidrio (crown) = 1.5200
Flint = 1.6600
MESCLA DE COLORES
COLORES TRANSPARENTES:
SUSTRACCIN DE COLORES
COLORES OPACOS: SUMA

O ADICIN DE COLORES
Microscopa
Fotografa de una rplica

mostrando los componentes de
microscopio compuesto fabricad
por los Jansen.
MICROSCOPA
Microscopa
Es uno de los mtodos de estudio de la
Biologa Celular y Tisular
Es un instrumento ptico
que sirve para obtener
imgenes aumentadas de
objetos
minsculos
o
detalles muy pequeos de
los mismos.
La ciencia que investiga los

objetos
pequeos
utilizando este instrumento
se llama microscopa.
MICROSCOPIO FOTNICO
Microscopio de luz
Fotnico
De Luz Blanca
De Campo Claro
Esta constituido por:

Componentes pticos.
: Condensador.
: Objetivos.
: ocular(es)
Componentes mecnicos.
: Base o pie.
: Brazo o columna.
: Platina.
: Revolver.
: Tubo ptico.
: Carrito o pinzas.
Componentes de iluminacin.
: Bombilla de luz
Microscopa
Definicin etimolgica
Mikrs = pequeo
Skopoo = Observar
Es lo mismo VER que OBSERVAR?
Observar es ir ms all.
Microscopa
Microscopa
Bichat (20 tejidos)
4 Tejidos Bsicos:
Epitelial
Conectivo
Muscular
Nervioso
Microscopio
INSTRUMENTO DE PRECISIN QUE
PROPORCIONA IMGENES AMPLIFICADAS DE
LOS OBJETOS Y MAS DETALLES QUE LOS
OBSERVADOS A SIMPLE VISTA.
Variedades de Microscopa
Microscopio fotnico: Simple o Compuesto

Microscopio electrnico
Microscopio de rayos x
Microscopio de fuerza atmica
Microscopio fotnico
Instrumento de precisin por medio del cual
se modifican las propiedades de la luz por
sistemas pticos para ver propiedades fsicas y
qumicas de la materia.
Simple: Lupa
Compuesto: Ms de dos lentes
Componentes del microscopio

fotnico compuesto
pticos
Condensador
Oculares
Objetivos
Mecnicos
Base o pie
Brazo o columna
Platina
Revolver
Tubo ptico
Platina
Tornillos
macromtrico y
micromtrico
Iluminacin
Fuente luminosa
Sistema ptico: Lentes

Cuerpos transparentes limitados por 2 caras
esfricas, una puede ser plana.
Convergentes (+)
Divergentes (-)
Lentes
Convergentes
Positivas
Biconvexo
Cncavo-Convexo
Plano-Convexo
Bicncava
Convexo-Cncavo
Plano-Cncavo
Divergentes
Negativas
EP
F
LC: LENTE CONVERGENTE

EP: EJE PRINCIPAL O EJE OPTICO
F: FOCO PRINCIPAL
R: RAYOS DE LUZ
LD
EP
F
R
LD: LENTE DIVERGENTE

EP: EJE PRINCIPAL O EJE OPTICO
F: FOCO PRINCIPAL
R: RAYOS DE LUZ
Caractersticas de las imgenes

obtenidas
De acuerdo a su tamao
Aumentadas (mayor tamao)
Disminuidas (menor tamao)
Mismo tamao

obtenidas
De acuerdo a su posicin que adopta en el
espacio:
Derecha
Invertida

obtenidas
De acuerdo a su orientacin que toma con
respecto a la lente:
Real (Del otro lado, se recoge con una
pantalla)
Virtual (Mismo lado)
Imgenes obtenidas en sistemas

pticos
Sistemas
Imagen Final
Lupa
Ocular
Mayor, Derecha, Virtual
Proyector
Objetivo
Mayor, Invertida, Real
Condensador
Ojo humano
Cmara digital
Menor, Invertida, Real
Microscopio
Mayor, Invertida, Virtual
Esquema
Sistema ptico
Son tres las lentes que lo componen:
Condensador
Objetivo
Ocular
Solo el objetivo y el ocular amplan las

imgenes
Condensador
Lentes convergentes (1
a 2)
Renen los rayos
luminosos y los orienta
hacia la muestra
Diafragma
Objetivos
Son los elementos mas importantes en la
formacin de la imagen.
Formado por lentes convergentes y
divergentes
Forman la imagen primaria del microscopio
Objetivos
Aumentos de los Objetivos

Capacidad de ampliar la imagen del objeto
observado
Aumentos de los Objetivos

Tipos:
5x : Lupa
10x : Objetivo seco de poca amplificacin
(aumento)
40x : Objetivo seco de gran amplificacin
(aumento)
100x : Objetivo de inmersin de gran
amplificacin
Seco de poco
aumento
Seco de gran
aumento
De inmersin
de gran
aumento
Poder de resolucin
Capacidad que posee el objetivo para
distinguir la distancia mnima entre dos
puntos para que se vean visualizados como
separados
Lmite de resolucin
Distancia mnima requerida para distinguir dos
puntos como separados
Entonces, PODER = LMITE?
A mayor poder de resolucin (mas potente)
menor ser el lmite de resolucin.
Lmite de resolucin
LMITE DE RESOLUCIN
PODER DE RESOLUCIN
Es la capacidad del ojo o de un sistema

ptico para individualizar DOS puntos
cercanos entre s
LR = K x lambda
AN
Lambda = Longitud de onda (luz blanca
550nm (0.55 micras)
Es la distancia mnima de separacin que puede

existir entre dos puntos o estructuras, para se
reconocidos por un sistema ptico
A mayor AN, mayor resolucin

PR (d) ojo= 0.2 mm
PR (d) ML= .2 micras
PR (d) MET = 0.5-1 nm
PR (d) MEB = 5-20 nm
Lmite de resolucin
Apertura Numrica
Capacidad de un
objetivo de captar
los rayos luminosos
refractados
Tamao del cono de
luz que entra en la
lente del
microscopio
despus de pasar
por la muestra
Apertura Numrica
APERTURA NUMRICA
(AN)
Cifra que corresponde a la capacidad de la lente

frontal, para captar la mayor cantidad de rayos de
luz.
AN= SEN alfa x IR
Alfa= ngulo de admisin de la lente
IR = Del medio presente entre la muestra y la lente

frontal
EJEMPLO
OBJETIVOS
AN= sen alfa x IR (aceite de

inmersin)
AUMENTO
SECO DBIL
10
SECO FUERTE
40
INMERSIN
100
AN
.25
AN= sen 58 x 1.56

.65
AN= 0.85 X 1.56

AN = 1.33
1.25 1.40
Relacin Objetivo-Aumento-Lmite de
resolucin
Con un aumento de 100x y una apertura

numrica, el mximo poder de resolucin del
microscopio fotnico es de 0.2 m
Oculares
Forman la segunda imagen ampliada a partir
de la imagen primaria de los objetivos
Amplan a ciertos niveles:
5x
8x
10x
12x
Aumento Total
Aumento
Objetivo
Aumento Ocular
Aumento Total
Lupa
5x
10x
50x
Bajo aumento
seco
10x
10x
100x
Gran aumento
seco
40x
10x
400x
De Inmersin
100x
10x
1000x
Variedades de Microscopa
Fotnica
Microscopio de campo claro

Fundamento
Equipo:
Comn
Material a observar:
Muestras procesadas
mediante la tcnica
histolgica ordinaria
Microscopio de campo oscuro

Fundamento
Fenmeno de Tyndall
Equipo:
Condensador
Muestras vivas sin fijar ni
teir.
Cultivos
Cristales
Microscopio de contraste de fases

Fundamento
Equipo:
Anillo condensador PH
Filtro de color (verde)
teir.
Estructura interna
Anlisis CUALITATIVO
Microscopio Interferencial Diferencial

segn Normansky
Fundamento
Equipo
Material a
observar:
Muestras vivas sin
fijar ni teir.
Estructura externa
(superficie)
Anlisis
CUANTITATIVO
Microscopio de Polarizacin
Fundamento
Luz Polarizada
Equipo:
Polarizador
Analizador
teir.
Estructuras con anisotropa
(Hueso, Msculo)
Microscopio de Fluorescencia
Fundamento
Rayos UV
Equipo:
Anticuerpos marcados con
fluorocromo
Muestras procesadas
mediante tcnica
histolgica especial
Microscopio Confocal (Scanning)
Microscopio Confocal
Microscopa Electrnica
Fundamento de la microscopa
electrnica
El ser humano siempre quiere saber ms
SIEMPRE!
Cmo mejorar lo que se ha hecho?
Cmo hacerle para ver MS?
electrnica
electrnica
El microscopio electrnico es un instrumento
que:
Permite conocer la ultraestructura biolgica.
Tiene un poder de resolucin mayor que el del
microscopio fotonico, porque utiliza electrones que
tienen una longitud de onda de 0.005 nm.
Utiliza la propiedad que tienen los haces de electrones
de ser desviados por un campo electrosttico o
electromagntico, igual que un rayo de luz es
refractado al atravesar una lente.
Tipos de Microscopa Electrnica

Microscopia electrnica de transmisin (MET):
a. De bajo voltaje: 50-100 KV.
b. De alto voltaje: 500-3000 KV. Permite estudiar
cortes de 5 mm y clulas vivas en cmaras
especiales.
Microscopia electrnica de barrido (MEB).
Aumentos
Aumentos que proporciona el MET:
20,000 x
1,000,000 x ( lentes intermedias ).
10,000,000 x ( negativos de fotografas ).
El microscopio electrnico tiene mayor

profundidad de foco.
Tcnica Histolgica Especial

TECNICA DE PREPARACION DE ESPECIMENES
1. FIJACION EN GLUTARALDEHIDO AL 3% EN AMOTIGUADOR
DE FOSFATO
2. LAVADO EN AMORTIGUADOR.
3. POSTFIJACION EN Os04 al 1%.
4. LAVADO EN AMORTIGUADOR.
5. DESHIDRATACION EN ALCOHOLES A 4 C:
R-OH 50%
R-OH 70%
R-OH 80%
R-OH 96%
R-OH 100%
A TEMPERATURA AMBIENTE:
R-OH 100%
6. DIAFANIZACION:
OXIDO DE PROPILENO.
Tcnica Histolgica Especial

7.
IMPREGNACION
RESINA-OXIDO DE PROPILENO
RESINA
8. INCLUSION
EN RESINA EN CAPSULAS DE GELATINA
POLIMERIZACION A 60 C.
9. CORTE EN ULTRAMICROTOMO
CORTES DE 60 A 100 NM
10. TECNICA DE SOMBREADO
SE UTILIZAN SALES DE METALES PESADOS COMO
URANIO, PLOMO, ETC., PARA AUMENTAR LA
ELECTRODENSIDAD DE LOS COMPONENTES TISULARES.
GRACIAS POR SU ATENCIN!

Dudas ?
EQUIVALENCIAS
1 picmetro
1 angstrom A
10 A
1 nm
1000 nm
1000 micrmetros
0.01 A
0.1 nm
1.0 nm
1000 picmetros
1.0 micrmetros
1.0 mm
Histologa Mdica. Las Tcnicas Histolgicas.

Todo curso de Histologa tiene cuatro partes o secciones.
Histologa
Mtodos de estudio
Biologa celular
Biologa tisular
Organografa
La primera seccin que corresponde a los mtodos de estudio, se
divide a su vez en dos nuevas porciones:
a) Tcnicas histolgicas
b) Microscopio

LAS TCNICAS HISTOLGICAS

TCNICA HISTOLGICA:
Conjunto de procedimientos por los que una muestra de
tejido es sometida a cambios fsicos y qumicos con el fin de
obtener una preparacin que puede observarse con un
microscopio.
Tcnica
Histolgica
Esencialmente se trata de tomar una muestra de una estructura en estudio y someterla a diversos
procedimientos que tienen como resultado final la obtencin de una preparacin histolgica que
podemos ver en un microscopio.

a) Tcnica histolgica ordinaria
b) Tcnicas histolgicas especiales
La tcnica histolgica ordinaria se define por tres

caractersticas fundamentales:
a) Fijacin en formol al 10%
b) Inclusin en parafina
c) Tincin con hematoxilina y eosina

LA OBTENCIN DE LA MUESTRA
1. Estado vital del individuo.
El individuo del que obtenemos la muestra, est vivo o no?
2. Mtodo de obtencin.
Qu mtodo empleamos para obtener la muestra?
3. Momento del diagnstico.
Se realiza el diagnstico despus de o durante el acto quirrgico?
1.
Estado vital del individuo:

1.1. Vivo = Biopsia
1.2. Muerto = Necropsia
Biopsia de piel.
Muestra pequea
Pieza quirrgica.
Segmento de intestino
Los trminos necropsia y
autopsia se usan
indistintamente en la
prctica mdica para
referirse al ESTUDIO
ANATOMOPATOLGICO DEL
CADVER.
EL ESTUDIO ANATOMOPATOLGICO DEL CADVER.
La autopsia puede ser:
Mdica: Es la que ocurre normalmente en los

hospitales. La idea es identificar
especficamente las causas del
fallecimiento con mayor certeza que lo
expresado en el historial mdico.
Mdico-Legal: Ocurre generalmente en los
servicios forenses. Intenta detectar las
condiciones legales relacionadas con el
fallecimiento.
2. Mtodo de obtencin:
De acuerdo con este criterio, distinguimos al menos cuatro
variantes:
2.1. Corte
2.2. Puncin
2.3. Impronta
2.4. Raspado
El corte.
Es el mtodo ms comn de obtencin de la
muestra, con este fin el mdico puede
emplear muy variados instrumentos:
a) Bistur clsico
b) Variantes de bistur: de diamante,
elctrico, de rayos gamma, laser, etctera.
Aqu se muestran distintos tipos de instrumentos que se emplean en la prctica mdica

para obtener muestras por corte.
El corte que realizamos en nuestro paciente, puede incidir sobre
nuestro sujeto de estudio (corte por incisin: en azul en la foto), o bien,
puede extraer completamente nuestro sujeto de estudio (corte por
escisin: en rojo en la foto).
Nuestro sujeto de
estudio es la
lesin
pigmentada.
El corte en azul,
incide sobre la
lesin, mientras
que el corte en
rojo no lo hace.
Puncin venosa.
Es el procedimiento ms
comn para la obtencin de
sangre que permite el estudio
de biometra hemtica,
qumica sangunea y tiempos
de coagulacin.
Es sin duda el primer tipo de
obtencin de la muestra que
los mdicos realizan en su
prctica hospitalaria.
Puncin arterial.
La sangre arterial se usa para el estudio del pH y de las concentraciones de

gases en sangre (gasometra). En general es un procedimiento ms
complicado que la puncin venosa porque las arterias son profundas.
Puncin de mdula sea.
La mdula sea es el sitio
donde se producen las
clulas de la sangre.
Se pueden obtener
muestras para estudio
citolgico e histolgico.
Se analizan las
caractersticas anormales
en casos de anemias y
leucemias (cncer de
clulas de la sangre).
Puncin con aguja fina (BAAF = Biopsia por aspiracin con
aguja fina).
Permite obtener muestras de estructuras superficiales como la tiroides y las

glndulas mamaria y partida con un procedimiento que no requiere del quirfano,
que se puede realizar en el consultorio.
Puncin renal.
Los riones son rganos cuya localizacin anatmica hace muy difcil el
abordaje por ciruga. Resulta mucho ms sencillo localizar las lesiones a
analizar por medio de estudios de imagen y con esta gua puncionarlas
obteniendo una muestra para estudio histolgico.
Puncin cerebral guiada por estereotaxia:
El aparato de estereotaxia es un dispositivo que permite guiar al cirujano

ayudado por estudios de imagen de modo que se pueda puncionar
exactamente en el lugar en que se encuentra la lesin. Se emplea
La impronta.
La obtencin de la muestra por impronta (Huella) consiste
en la aplicacin directa del portaobjetos sobre la muestra
que se pretende estudiar.
En la actualidad su uso se circunscribe casi de manera
exclusiva a los estudios transoperatorios.
En el estudio de los ganglios linfticos en que se sospecha
linfoma resulta una maniobra imprescindible.
La obtencin de la muestra por raspado consiste en emplear
un instrumento romo con el que raspamos la superficie del
tejido que deseamos estudiar, dejando numerosas clulas
en el mismo.
El ejemplo ms frecuente e importante es el caso del
raspado del crvix uterino para la deteccin oportuna del
cncer.
La muestra cervical se obtiene por raspado (actualmente se
recomienda el cepillo citolgico).
Se extiende sobre la lmina portaobjetos
Se fija con una solucin de base alcohlica
Se tie con el colorante de Papanicolaou.
3. Momento del diagnstico:
3.1. Diagnstico post-operatorio (rutina)
La mayor parte de las veces el diagnstico histolgico se realiza despus
de que ha concludo el acto quirrgico que permite la obtencin de la
muestra.
3.2. Diagnstico transoperatorio.
En otros casos, es importante contar con un diagnstico histolgico antes
de que termine el proceso quirrgico ya que de hecho, el propio diagnstico
histolgico permite elegir una u otra posibilidad de tratamiento.
LA FIJACIN TISULAR
LA FIJACIN TISULAR
La disminucin resultante en las concentraciones de oxgeno en el tejido,
condiciona una serie de cambios metablicos que eventualmente alteran las
caractersticas morfolgicas y funcionales del mismo.
Evitar estos cambios secundarios a hipoxia (dficit de oxgeno en un
organismo).
LA FIJACIN TISULAR
En condiciones normales, las clulas de un tejido se encuentran en un
estado que conocemos como de equilibrio u homeostasis.
Para que se de el equilibrio vital tisular es necesario que se cumplan
varias condiciones.
a) Condiciones intrnsecas:
a.1. Integridad del genoma. El mensaje gentico no debe tener
alteraciones.
a.2. Integridad del metabolismo. Todas las reacciones qumicas que

ocurren en el citoplasma deben estar normales.
b) Condiciones extrnsecas:
b.1. Interaccin con el entorno. Las relaciones de la clula con otras clulas
vecinas y con la matriz extracelular.
b.2. Factores trficos. Incluye la sangre, as como estmulos nerviosos y

hormonales.
LA FIJACIN TISULAR
6
Equilibrio vital tisular
4
3a
Hormona
H
2
Hormona
O2
3b
Aminocidos
Glcidos
Lpidos
Las clulas no se encuentran aisladas delVitaminas
entorno. Su estabilidad depende de factores
intrnsecos como el genoma (1) y el metabolismo (2). Adems es necesaria una adecuada
interaccin con otras clulas vecinas (3-a) y con molculas de la matriz extracelular (3-b), a lo
que debemos agregar el estmulo trfico de los nutrientes que llegan por la sangre (4) y los
efectos del sistema endocrino (5) y nervioso (6).
LA FIJACIN TISULAR
6
X
1
3a
H
5
H
H
3b
O2
Aminocidos
Glcidos
En condiciones patolgicas cada uno Lpidos
de los elementos aqu sealados puede fallar y como regla
termina afectando a todos los dems.Vitamina
Por ejemplo, un defecto en el genoma puede traducir un
tipo anmalo de protena que afecta el metabolismo celular. La clula as daada puede alterar
las condiciones de las clulas vecinas y su interaccin con la matriz extracelular.
LA FIJACIN TISULAR
6
3a
H
5
H
H
3b
O2
Aminocidos
Glcidos
El aporte adecuado de oxgeno a los tejidos
es resultado de muy diversas condiciones. Aqu hay
Lpidos en que este proceso ocurra. Por ejemplo,
que considerar todos los elementos involucrados
puede ser que los pulmones estn daados
y no capten suficiente cantidad de oxgeno. Puede
Vitamina
ser que los eritrocitos tengan algn problema y aunque se capte por los pulmones, no lo puedan
transportar, etctera. A la condicin en que falta oxgeno en los tejidos se le llama hipoxia.
LA FIJACIN TISULAR
En condiciones en que falte el aporte de oxgeno a los tejidos, el

metabolismo intermediario se cambia a la ruta anaerbica.
De este modo, ocurren dos consecuencias fundamentales:
a) Disminuye la cantidad de ATP intracitoplsmico

b) Aumenta la cantidad de cido lctico y por lo tanto el pH citoplsmico
disminuye.
La disminucin en la cantidad de ATP intracitoplsmico tiene como
consecuencia el que todas las funciones celulares que dependan de energa
irn disminuyendo gradualmente.
LA FIJACIN TISULAR. LA HIPOXIA.

Pieza I. Metabolismo intermediario.
Glucosa
Glucosa-P
ATP
[O2]
[O2]
Acetil CoA
Ciclo de
Krebs
ATP
e
ATP
Piruvato
Lactato
Cuando el tejido se ve sometido a hipoxia (disminucin de los niveles normales de oxgeno)

entonces la va metablica es la anaerbica y ya no pasamos a piruvato sino a lactato. Al
bloquear la va del piruvato, bloqueamos el paso al ciclo de Krebs y a la cadena respiratoria, por
lo que las concentraciones de ATP disminuyen importantemente.

Pieza II. El transporte transmembrana.
Na+
Na+
Na+ Na+
Na+ Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+ Na+
Na+ Na+
Na+
Na+ Na+
Na+
Na+
Las reglas de la difusin establecen:

a) Las partculas en solucin se
desplazarn desde un sitio de
mayor concentracin hacia un sitio
de menor concentracin.
b) Si tienen carga, las partculas
sern atradas por la carga
contraria y rechazadas por cargas
iguales.
En condiciones normales, la cantidad o

concentracin de sodio (Na+) fuera
de la clula es mucho mayor que la
que se encuentra en el interior.
Si dejamos as como est representada en nuestro esquema a la clula, la diferencia de
concentraciones de sodio entre el medio interno y el externo impulsar al sodio hacia el
interior. Si agregamos el hecho de que el interior es menos positivo, por lo que se
considera negativo, entonces las cargas positivas del sodio, tambin lo impulsarn hacia
el interior.

Na+
Na+
Na+ Na+
Na+ Na+
Gradiente de concentracin
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+ Na+
Na+ Na+
Na+
Gradiente de carga
Na+ Na+
Na+
Na+
De acuerdo con lo que acabamos de mencionar, existen dos fuerzas que impulsan al
sodio hacia el interior de la clula:
a) Gradiente (o diferencia) de concentraciones
b) Gradiente (o diferencia) de cargas.
Estas dos fuerzas se mantienen mientras que existan las diferencias o gradientes, por lo
que cesarn hasta que dichos gradientes lleguen a desaparecer.

Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Una vez que se ha alcanzado el equilibrio de concentraciones y de cargas entre el medio

interno y el externo, los gradientes ya no existen, por lo que el movimiento neto de
partculas se suspende.
Resulta interesante el hecho de que este estado de equilibrio es incompatible con la
vida.
Para que el proceso vida ocurra es indispensable que se mantenga el desequilibrio.

Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Si queremos mantener la diferencia de concentraciones para el sodio, ser necesario

contar con un sistema que tenga la capacidad de sacar el sodio que entre. Semejante
sistema deber transportar sodio en contra de las fuerzas establecidas por los gradientes
de carga y de concentracin. Para realizar esto, ser necesario gastar energa.

Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
ATP
Na+
Na+
ADP + Pi
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
El sistema encargado de mantener la diferencia de concentraciones para el sodio es una

molcula protica de membrana que tiene la capacidad de transportar sodio contra
gradiente, para lo cual debe obtener energa al romper una molcula de ATP. Dado que
esta misma protena hace lo propio con el potasio (K+), se conoce como bomba de
Na+/K+ ATPasa. Al mecanismo de transporte contra gradiente con gasto de energa se le
conoce como transporte activo.

Na+
Na+
Na+ Na+
Na+ Na+
ATP
Na+
Na+
Na+
Na+
ADP + Pi
Na+ Na+
Na+ Na+
Na+
Na+ Na+
Na+
Na+
El trabajo constante de la bomba de Na+/K+ ATPasa, por medio del consumo de ATP y
por el mecanismo de trasporte activo, mantiene las diferencias de concentracin para
sodio y para potasio entre el medio interno y el externo de la clula.
TERMODINMICAMENTE POCO PROBABLE Y MANTENIDO GRACIAS A LA
INVERSIN CONSTANTE DE ENERGA.

Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Aqu tenemos una tina con agua y sodio. En el compartimiento A, encontramos menos sodio
que en el compartimiento B. Dado que el nivel de agua se encuentra igual, pareciera que hay
la misma cantidad de agua en A que en B. Pero si consideramos que el sodio ocupa un lugar
en el espacio, entonces resulta que hay ms agua en A que en B. De este modo, existe un
gradiente de concentraciones para sodio de B hacia A y simultneamente un gradiente de
concentraciones de agua de A hacia B. El caso es que la membrana que separa los
compartimientos slo deja pasar el agua (Membrana semipermeable).

Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Na+
Como resultado de este experimento, se aprecia un flujo neto de agua desde A hacia B
debido a un proceso de difusin simple a travs de una membrana semipermeable. A
este fenmeno se le conoce como SMOSIS. Pareciera que el SODIO JALAGUA pero en
realidad no ocurre as.
Este fenmeno de SMOSIS se puede presentar con otros solutos, podramos cambiar el
sodio por protenas y tendramos el mismo efecto.

SODIO JALAGUA, SODIO JALAGUA, SODIO JALAGUA, SODIO JALAGUA

Pieza III. El destructor de todo.
Uno de los organelos que se encuentran
flotando en el citoplasma, est limitado por
membrana y en su interior contiene
numerosas enzimas que tienen la
capacidad de destruir casi todo lo que
tocan.
Dado que la destruccin que condicionan
estas enzimas ocurre en un medio acuoso,
se conocen como enzimas hidrolticas.
Dado que el pH ptimo de estas enzimas es
de alrededor de 5.0, se conocen como
enzimas hidrolticas cidas o hidrolasas
cidas.
Este organelo, originalmente descubierto
por el Dr. Christian de Duve, se conoce
Si aceptamos que cuando decimos todo, nos referimos
a las macromolculas, entonces
como lisosoma.
al decir que las enzimas lisosomales destruyen todo, decimos que destruyen:
a) Protenas: Proteasas (colagenasas, elastasas)
b) Lpidos: Lipasas
c) Carbohidratos: Glucosidasas
d) Nucleasas: (ADNasa y ARNasa)

Pieza III. El destructor de todo.
El hecho de que el pH en el interior de un
lisosoma sea de 4.8, mientras que el pH en
el citoplasma que le rodea sea de 7.2.,
implica que la concentracin de
Bombas
hidrogeniones dentro del lisosoma es muy
de
alta.
protones
Para mantener este gradiente de protones
es indispensable que la membrana del
pH = 4.8
lisosoma cuente con un sistema de
protenas con capacidad de ATPasa que
constantemente bombeen protones hacia el
pH = 7.2
interior del lisosoma.
As, la membrana de este organelo tiene
bombas de protones en abundancia, que
requieren para su funcionamiento, de
En condiciones normales, si las enzimas lisosomales
salieran
del organelo, no
adecuadas
concentraciones
detendran
ATP
actividad destructora debido a que se encontraran
en el citoplasma con un pH muy
citoplsmico.
alejado de su nivel ptimo.
Pero si por alguna razn ocurriera que el pH del citoplasma descendiera, entonces s
estaramos en problemas ya que estas grandes destructoras s podran ejercer su efecto
ltico.

El tejido que deseamos estudiar con fines diagnsticos en nuestro
paciente, se encuentra en las condiciones del equilibrio vital tisular.
En el momento en que obtenemos la biopsia, separamos al tejido de su
fuente nutricia vascular, por lo que obligadamente, las concentraciones de
oxgeno en el mismo descienden gradualmente, de modo que entra en
condiciones de hipoxia.
Glucosa
Ciclo de
Krebs
Acetil CoA
Piruvato
Lactato
pH
ATP

Esto conlleva la desviacin hacia la gluclisis anaerbica, por lo que se
bloquea el paso al ciclo de Krebs y a la obtencion de ATP en la cadena
respiratoria.
Esto tiene como resultado la disminucin de las concentraciones de ATP
en el citoplasma y la acumulacin de cido lctico con la consecuente
disminucin del pH citoplsmico.
Glucosa
Ciclo de
Krebs
Acetil CoA
Piruvato
Lactato
ATP
pH

La disminucin en la cantidad de ATP disponible en el citoplasma tiene
como consecuencia que las funciones que dependan de esta molcula irn
disminuyendo gradualmente.
Si empieza a fallar la bomba de Na+/K+ el resultado ser la entrada de Na+
al citoplasma y como dice mi amigo el fisilogo, SODIO JALAGUA. Por lo
que la clula literalmente se hinchar (Edema celular).
Glucosa
Ciclo de
Krebs
ATP
Acetil CoA
Piruvato
Lactato
H2O
EDEMA
CELULAR
Na+
Na+
H2O

Las bombas de protones de los lisosomas, tanbin irn disminuyendo
gradualmente su funcin, con lo que la cantidad de protones citoplsmicos
aumentar llevando a una disminucin gradual del pH citoplsmico.
El edema celular favorece la salida de enzimas lisosomales, que ahora
entrarn en contacto con un pH cido por lo que s funcionarn,
destruyendo todo lo que encuentren a su paso: AUTLISIS.
Glucosa
Ciclo de
Krebs
Acetil CoA
Piruvato
ATP
PROTEASAS
LIPASAS
GLUCOSIDASAS
NUCLEASAS
ACTIVAS
Lactato
AUTLISIS
pH = 4.8
H2O
EDEMA
CELULAR
Na+
Na+
H2O
LA FIJACIN TISULAR
La fijacin qumica se logra por la aplicacin de diversas
sustancias disponibles para el histlogo:
a) Formaldehdo
e) Glutaraldehdo
b) Formol
f) Osmio
c) Alcohol
g) cido pcrico
d) Acetona
La ms sencilla y barata aunque no ideal es la inmersin
de una muestra en alcohol etlico al 96%. Este mtodo se
puede emplear en caso en que no tengamos otro fijador a la
mano y resulte urgente mantener la preservacin del tejido.
LA FIJACIN TISULAR
El fijador ms comunmente empleado en la investigacin y
en la prctica mdica es el FORMOL AL 10%
El formol, tambin conocido como formalina, es una
solucin que contiene aproximadamente 60% de agua y
40% de un gas conocido como formaldehdo.
FORMOL Y FORMALDEHDO NO SON LO MISMO.
+
Gas formaldehdo
40%
=
Agua
60%
Formol al 100%
LA FIJACIN TISULAR
Para hacer una mezcla de formol al 10%, en un

recipiente ponemos una parte de formol y nueve
partes de agua.
En la mezcla resultante, el formaldehdo queda a una
proporcin de 4%
El agente activo fijador de el formol es el gas
formaldehdo.
Con el fin de obtener una fijacin ptima del tejido a
estudiar, es muy importante tomar en cuenta que el
formaldehdo tiene una velocidad de penetracin
tisular de aproximadamente 1 mm/hr.
Agua
Formol
LA FIJACIN TISULAR
En general, mi amigo el histlogo recomienda que por cada
unidad de volumen de tejido, agreguemos de 20 a 40
unidades de volumen de fijador.
Si la biopsia que obtenemos es de 1cm3, entonces
necesitaremos de 20 a 40 cm3 de fijador. Si igualamos 1 cm3
con 1 ml; entonces bastarn entre 20 y 40 ml de fijador.
De este modo, nos queda claro que la fijacin de biopsias
pequeas no representa problema alguno.
Pero, qu ocurre en el caso de la fijacin de las piezas
quirrgicas que suelen ser mucho ms grandes?
LA FIJACIN TISULAR
Pensemos en el caso de que queremos estudiar
un tero en el que el ultrasonido detect varios
tumores y queremos el estudio debido a que
nos interesa saber si son benignos o malignos.
La pieza que se recibe en el servicio de
Anatoma patolgica es muy grande. Si
aceptamos que la pieza midi: 15 x 10 x 5 cm,
entonces su volumen aproximado es de 15 x 10
= 150 x 5 = 750 cc = 750 ml.
Siguiendo las recomendaciones del histlogo,
deberemos sumergir la pieza en un volumen de
fijador igual a:
750 x 20 = 15,000 ml = 15 LITROS!
Semejante circunstancia es inaceptable en un
hospital.
LA FIJACIN TISULAR
Cmo solucionar este problema?
Es imperativo que las piezas quirrgicas que lleguen al
servicio de Anatoma patolgica sean estudiadas a la
brevedad.
De las zonas seleccionadas por ejemplo en el caso del
utero con miomas los tumores, se deben cortar
rebanadas de tejido que tengan un espesor mximo de
0.5 cm. De este modo, la rebanada resultante podra
medir 3 x 2 x 0.5 cm. Dimensiones que permiten una
rpida y adecuada entrada del fijador.
.
LA FIJACIN TISULAR
Aqu vemos un segmento de intestino delgado que una vez cortado muestra la
superficie interna o mucosa. Note que se ha seleccionado un pequeo fragmento
LA FIJACIN TISULAR
Los cortes seleccionados
se introducen en las
cpsulas de inclusin.
Aqu se muestran unas de
metal y una de plstico.
Note que estos
dispositivos cuentan con
numerosos agujeritos que
permiten el contacto del
tejido con distintas
soluciones que se
emplean en el
procesamiento histolgico.
LA FIJACIN TISULAR
Los fijadores, como es el caso del formol al 10% tienen varios efectos
importantes sobre el tejido, incluyendo:
A) Detienen la mayor parte de los procesos metablicos tisulares. Esto
tiene como consecuencia que DETIENEN EL PROCESO DE AUTLISIS,
pero adems, matan a todo elemento viviente, lo que incluye a
bacterias que podran causar putrefaccin y a las propias clulas que
queremos estudiar.
B) Endurecen los tejidos. Esta circunstancia favorece el corte de los
mismos.
C) Favorecen la tincin (efecto mordente). Los tejidos bien fijados se
colorean mucho mejor, mientras que un tejido mal fijado, se colorea
mucho menos.
D) Causan prdida de sustancias intracelulares. En general, se pierde
agua y elementos grasos.
LA FIJACIN TISULAR
En la prctica mdica, los primeros dos pasos de las tcnicas
histolgicas: LA OBTENCIN DE LA MUESTRA Y LA FIJACIN, las lleva a
cabo el mdico tratante.
Si el mdico tratante pasa por alto este detalle, puede arruinar el
estudio diagnstico de un paciente.

EL PROCESAMIENTO

EL PROCESAMIENTO HISTOLGICO
Una vez que las muestras de tejido se encuentran
adecuadamente fijadas y en las cpsulas de inclusin, estn
listas para la parte de la tcnica histolgica que conocemos
como el procesamiento histolgico.
En trminos bsicos podemos plantear a partir de este
momento 3 metas fundamentales:
A) Realizacin de cortes translcidos
B) Tincin de los cortes
C) Proteccin del preparado final


La observacin con el tipo de microscopio que
tenemos en los laboratorios requiere de cortes
o rebanadas de tejido lo suficientemente
delgadas como para que pase la luz a travs de
ellas. Es decir, se requiere de cortes
translcidos.

Una manera para solucionar este problema es congelar
el tejido y realizar los cortes en un medio con muy
bajas temperaturas. Es el caso de los cortes por
congelacin.
No hace dao recordar que el instrumento para
realizar estos cortes es el criostato y que en la prctica
mdica tiene aplicaciones en los siguientes casos:
a) Estudios transoperatorios
b) Estudios de inmunofluorescencia en biopsias renales
y de piel.
c) Estudios de histoqumica enzimtica en casos de
patologa muscular.
d) Estudio de grasas neutras en tejido adiposo

a) Parafina
b) OCT (Mezcla comercial de alcohol polivinlico,
polietilenglicol y excipientes) empleada para los cortes
por congelacin. Es un compuesto hidroflico.
c) Resinas acrlicas, polister y epxicas (empleadas para
estudios de microscopa electrnica)
* Como ya hemos comentado, la tcnica histolgica
ordinaria requiere de inclusin en parafina, por lo que
partiremos de esta.

Si queremos sustituir el agua que se encuentra en el interior de la clula por
parafina, lo primero que debemos hacer es eliminar el agua.
Una manera muy conocida por algunos caballeros, es la deshidratacin con
alcohol.
Con el fin de evitar el efecto de encogimiento del tejido como resultado de la
deshidratacin brusca, los tejidos pasan a varios baos con etanol en grados
crecientes. Al final del proceso, donde haba agua en la clula, ahora hay etanol.
ETANOL
AL 60%
ETANOL
AL 70%
ETANOL
AL 80%
ETANOL
AL 96%
ETANOL
AL 100%

Con la DESHIDATACIN EN ETANOL EN GRADOS CRECIENTES hemos logrado eliminar
el agua del tejido. Ahora donde haba agua, hay etanol.
Pero resulta que el etanol no se mezcla con la parafina, por lo que tambin deberemos
eliminarlo. Obviamente debemos emplear una sustancia que se mezcle tanto con el
etanol como con la parafina.
Para lograr este fin la mayor parte de las veces empleamos XILOL tambin conocido
como XILENO. Podemos emplear tambin TOLUENO o BENCENO.
ETANOL
AL 100%
XILOL
Aqu no usamos grados crecientes de XILOL.

Este proceso se conoce como ACLARAMIENTO.
Al final, donde haba etanol, ahora hay xilol.
Estamos listos para pasar nuestro tejido a
parafina.

Terminada la etapa de ACLARAMIENTO, donde primero haba agua y despus
haba alcohol, ahora hay XILOL.
Enseguida la muestra pasa a un recipiente con parafina caliente de modo que
se encuentra lquida y podemos sumergir la muestra.
La parafina entra ahora reemplazando al xilol. A este paso se le llama
INFILTRACIN.
Hasta aqu hemos logrado nuestra
meta fundamental que era
sustituir el agua por un material
ms duro que facilitara la
realizacin de cortes delgados, tan
delgados que sean translcidos.
XILOL
PARAFINA
LQUIDA
TEJIDO
INFILTRADO

A la secuencia de pasos que incluye la deshidratacin en alcoholes de grados
crecientes, el aclaramiento y la infiltracin del tejido, el histotecnlogo le
conoce como EL PROCESO no el de Kafka o en ocasiones le llama ms
adecuadamente, EL PROCESAMIENTO.
TEJIDO
BIEN
FIJADO
ETANOL
60%
ETANOL
70%
ETANOL
80%
ETANOL
96%
DESHIDRATACIN
EN ALCOHOL
EN GRADOS CRECIENTES
ETANOL
100%
XILOL
PARAFINA
LQUIDA
ACLARAMIENTO
INFILTRACIN
TEJIDO
BIEN
INFILTRADO

Es importante considerar que cada uno de estos pasos, requiere un tiempo
que vara entre una y dos horas. Los tiempos y soluciones pueden variar
levemente entre uno y otro laboratorio, pero esencialmente siguen los
principios aqu marcados.
Si aceptamos un procesamiento como el aqu sealado, entonces el tiempo
desde el primer paso a etanol hasta tener un tejido bien infiltrado, consume
un total de 7 a 14 horas!
TEJIDO
BIEN
FIJADO
ETANOL
60%
ETANOL
70%
ETANOL
80%
ETANOL
96%
ETANOL
100%
XILOL
PARAFINA
LQUIDA
TEJIDO
BIEN
INFILTRADO

En los viejos tiempos, el procesamiento histolgico se hacia a mano. Uf!
Por suerte, ahora los laboratorios cuentan con aparatos que hacen
automticamente el procesamiento. Su nombre, muy imaginativo, es el de
PROCESADOR AUTOMTICO DE TEJIDOS.


La muestra completamente infiltrada, pasa ahora a un recipiente cuadrilongo en el que
se vierte parafina lquida y posteriormente se deja enfriar. De este modo, la parafina se
solidifica y queda un bloque de parafina con tejido incluido en su interior. A este paso
se le conoce como INCLUSIN.
PARAFINA
LQUIDA
TEJIDO
INFILTRADO
BLOQUE
DE
PARAFINA

El resultado final es un bloque de parafina que en su interior contiene el tejido
que se puede ver a travs de la parafina y que est listo para realizar un
corte lo suficientemente delgado como para que pase la luz a travs de l.

Para la realizacin de un corte muy delgado se emplea un instrumento
especial que se conoce como microtomo.
En realidad existen varios tipos de microtomos, el que se usa para las tcnicas
ordinarias se conoce como microtomo rotativo.
El microtomo contiene un
soporte para el bloque de
parafina (flecha roja) y otro
para un cuchilla muy afilada
que debe manejarse con
mucho cuidado (flecha azul)
Cuenta con un sistema que
permite un avance muy
gradual del bloque de modo
que al acercarse a la
cuchilla, salen los cortes.

En esta imagen vemos el detalle de la cara frontal del microtomo rotativo. Se
puede idenfificar el bloque de parafina con una muestra de tejido incluida en
su interior. Se aprecia adems la cuchilla y sobre ella, una tira de cortes.
Conforme sale cada una de las rebanadas o cortes de tejido, una se va
quedando pegada a la que sigue y se forma una tira de cortes delgadsimos
que se conocen como cortes de parafina.
El tcnico puede tomar con mucho cuidado la tira de cortes de parafina para
continuar con el procedimiento.

El tcnico pone con mucho cuidado un fragmento de la tira de cortes de
parafina sobre una lmina portaobjeto y le agrega unas gotitas de alcohol, con
el fin de que los cortes se estiren.
Enseguida, los pasa a una tina con agua que tiene un sistema que permite
regular la temperatura. Con cuidado pone los cortes sobre la superficie del
agua que se encuentra en el bao de flotacin, donde se siguen estirando un
poco ms.

Para terminar, el tcnico selecciona los cortes que tienen mejor aspecto y los
captura con una lmina portaobjetos, de modo que quedan adosados a la
superficie de la misma.
Al final, se cuenta con numerosos cortes de parafina ya en las lminas
portaobjetos y se ponen en rejillas especiales que permiten manipular hasta
cincuenta laminillas.

Con estos pasos hemos cumplido la meta primaria: obtener cortes tan
delgados que sean translcidos, de modo que ahora podemos estudiarlos con
nuestro microscopio.
Los cortes obtenidos con el microtomo rotativo tienen espesores que varan
entre 4 y 8 micrmetros o micras.
Frecuentemente estaremos mencionando medidas microscpicas por lo que
conviene recordar algunas de ellas.

Ahora s, estamos listos para observar con nuestro microscopio. Tomamos
nuestra laminilla que tiene un corte de parafina con un espesor de slo 6
micrmetros por lo que la luz facilmente puede atravesarla y nos asomamos a
ver cmo se ve.
Mmmmh! Pues s se ve algo, pero como que no muy bien no crees?
Cmo se vera coloreado?
Mmmmh! Se ve mucho mejor. Tal vez s debemos colorearlo.

El problema con el que topamos ahora es que los
colorantes son generalmente soluciones acuosas y
nuestro corte es de parafina lo que implica un medio
graso por lo que as no es posible colorearlo.
Nos estorba ahora la parafina. Debemos eliminarla.
Para esto necesitamos ahora repetir los pasos que
realizamos antes, pero en sentido inverso. Es decir, ser
necesario quitar la parafina desparafinar y sustituirla
por xilol aclaramiento para finalmente hidratar los
cortes hidratacin en alcoholes de grados
decrecientes.
Osh! qu lata!
Ni modo, manos a la obra.

Para lograr la tincin de los cortes de parafina por la tcnica histolgica
ordinaria, el tcnico tiene una serie de recipientes de vidrio que contienen las
soluciones necesarias.
Las laminillas montadas en una canastilla pueden pasarse manualmente de
una a otra solucin. Por suerte, en este procedimiento los tiempos son mucho
ms cortos.
Ponemos nuestra canastilla en xilol durante unos 15 minutos para que se
desparafinen. Algunos tcnicos ponen las laminillas en xilol en una estufa de
modo que se acelere el proceso. Esto debe hacerse con mucho cuidado ya
que el xilol es inflamable.
Despus, las laminillas pasan a dos baos de etanol al 96% seguidos de otros
dos en etanol al 100%
El tiempo entre cada paso es de medio minuto a dos minutos.
Por lo tanto el tiempo de deshidratacin es de 15 + 2 = 17 minutos a 15 + 8 =
23 minutos.

Una vez hidratados los cortes, pueden pasar a tincin con hematoxilina y
eosina en el caso de la tcnica histolgica ordinaria. Si pasan a otra tincin,
entonces se trata de una tcnica histolgica especial.
Note Usted que el procedimiento de obtencin de cortes de parafina fue el
mismo tanto para la tcnica histolgica ordinaria (hematoxilina y eosina)
como para una tcnica histolgica especial.

Ahora s podemos observar muchos detalles histolgicos en nuestro corte
recin teido con hematoxilina y eosina.
Pero, tomando en cuenta que su espesor es de slo 6 micrmetros, resulta ser
muy frgil, por lo que si nos equivocamos y pasamos un dedo por su
superficie, podemos daarlo de manera permanente.
La idea es que el corte pueda ser estudiado hoy y tambin dentro de 20 aos,
por lo que debemos protegerlo.

Para proteger nuestro corte y lograr una preparacin histolgica permanente,
le vamos a pegar un fragmento laminar de vidrio que llamamos cubreobjetos.
El problema reside en que nuestro corte est hidratado y el pegamento para
el cubreobjetos es una resina de naturaleza grasa.
Por lo que qu crees? Deberemos de nueva cuenta deshidratar los cortes
en alcoholes de grados crecientes, aclararlos en xilol, y finalmente agregar la
resina y pegar el cubreobjetos (montaje).

Con el fin de visualizar desde otra perspectiva los pasos de la tcnica
histolgica, vamos ahora a revisar un esquema que adems nos facilitar el
recordarlos.
Vamos a imaginar que sobrevolamos un misterioso pas con una geografa
muy peculiar. Tenemos dos grandes avenidas que llamamos medio acuoso y
medio graso.
Estas se encuentran separadas por dos ros peculiares. Uno es maravilloso
para algunos caballeros porque es de alcohol! El otro, no es muy amigable
porque es de xilol.
MEDIO GRASO
XILOL
ETANOL
MEDIO ACUOSO

MEDIO GRASO
XILOL
100%
ETANOL
96%
80%
70%
60%
MEDIO ACUOSO
Con ms detalle observamos que el ro de etanol est separado en canales
que implican graduaciones.

MEDIO GRASO
XILOL
ETANOL
100%
96%
80%
70%
60%
2. FIJACIN
1. OBTENCIN
DE LA MUESTRA
MEDIO ACUOSO
La obtencin de la muestra y la fijacin ocurren en medio acuoso. La primera

porque el tejido es rico en agua y la segunda porque la mayora de los
fijadores son soluciones acuosas.

MEDIO GRASO
6. INCLUSIN
5. INFILTRACIN 7. CORTE
XILOL
4. ACLARAMIENTO
ETANOL
100%
96%
80%
70%
60%
3. DESHIDRATACIN
ALCOHOLES DE
GRADOS CRECIENTES
2. FIJACIN
1. OBTENCIN
EN
DE LA MUESTRA
MEDIO ACUOSO
La infiltracin, la inclusin y el corte ocurren en medio graso. Por lo que, para

llevarlas a cabo, deberemos atravesar los dos ros, pasando primero por
grados crecientes de etanol deshidratacin y luego por xilol
aclaramiento, como marca la flecha ascendente.

MEDIO GRASO
6. INCLUSIN
XILOL
4. ACLARAMIENTO
ETANOL
100%
96%
80%
70%
60%
3. DESHIDRATACIN
EN
9. HIDRATACIN
EN
ALCOHOLES DE
ALCOHOLES DE
GRADOS CRECIENTES
GRADOS DECRECIENTES
2. FIJACIN
1. OBTENCIN
8. ACLARAMIENTO
DE LA MUESTRA
8. TINCIN (H Y E)
MEDIO ACUOSO
Nuestra siguiente meta es la tincin. Pero sta ocurre en medio acuoso. Por lo
que deberemos cruzar de nueva cuenta los dos ros, pero ahora en sentido
inverso. Aclaramiento y la hidratacin en etanol en grados decrecientes.
Como marca la flecha descendente.

MEDIO GRASO
6. INCLUSIN
13. MONTAJE
XILOL
4. ACLARAMIENTO
12. ACLARAMIENTO
ETANOL
100%
96%
80%
70%
60%
3. DESHIDRATACIN
EN
9. HIDRATACIN
EN
11. DESHIDRATACIN
ALCOHOLES DE
ALCOHOLES DE
EN ALCOHOLES DE
GRADOS CRECIENTES
GRADOS DECRECIENTES
GRADOS CRECIENTES
2. FIJACIN
1. OBTENCIN
8. ACLARAMIENTO
DE LA MUESTRA
10. TINCIN (H Y E)
MEDIO ACUOSO
Por ltimo, para el montaje que ocurre en medio graso, deberemos de nueva
cuenta pasar al medio acuoso. Deshidratacin en etanol en grados crecientes
y aclaramiento, como marca la segunda flecha ascendente.

MEDIO GRASO
6. INCLUSIN
13. MONTAJE
XILOL
4. ACLARAMIENTO
12. ACLARAMIENTO
ETANOL
100%
96%
80%
70%
60%
3. DESHIDRATACIN
2. FIJACIN
1. OBTENCIN
8. ACLARAMIENTO
DE LA MUESTRA
9. HIDRATACIN
10. TINCIN (H Y E)
11. DESHIDRATACIN
MEDIO ACUOSO
Le recomendamos repasar los pasos de la tcnica histolgica relacionados con el

esquema, de modo que trate de memorizar un grfico, ms que un texto.
Note que las tres flechas ascendente, descendente y ascendente marcan la
secuencia de procedimientos.

El resumen mnimo de este procedimiento se constituye por 3 flechas
La primera flecha ya fue revisada. Incluye los pasos que van desde la
obtencin de la muestra, fijacin, deshidratacin, aclaramiento, infiltracin e
inclusin y corte.
Nos habamos quedado en la etapa en que ponamos numerosas laminillas
con cortes de parafina en una canastilla.

En el laboratorio de histologa, los tcnicos han dispuesto una serie de frascos
de vidrio que contienen las soluciones necesarias para llevar a cabo las flechas
2 y 3 del esquema descendente y ascendente.
A esta disposicin en fila, tambin se le conoce como en batera. Por eso, el

tcnico llama a este arreglo: batera de tinciones.
Vamos ahora a identificar las soluciones.

El tcnico va pasando la rejilla con

laminillas por las distintas soluciones.
El tcnico sumerge las laminillas en el

colorante hematoxilina.
Aqu vemos dos rejillas con

numerosos cortes que ya estn
El tcnico pone resina sobre el corte

para terminar el paso del montaje.

El resultado final de todo este proceso es una preparacin histolgica de
acuerdo con los principios de la tcnica histolgica ordinaria.
Esta laminilla puede ser estudiada con un microscopio fotnico compuesto de

iluminacin comn, como el que tenemos en nuestros laboratorios que
equivale al o los que se encuentran en la mayora de los laboratorios del
mundo.
En su interior se encuentra un corte o rebanada de tejido muy delgada en el
caso de la imagen mostrada, de 5 micrmetros que puede ser estudiada al
momento o muchos aos despus.

LA TCNICA HISTOLGICA ORDINARIA

LA TCNICA HISTOLGICA ORDINARIA (THO)
Ya hemos mencionado que la tcnica histolgica ordinaria se define al
cumplir tres requisitos esenciales:
A) Fijacin en formol al 10%
B) Inclusin en parafina
C) Tincin con hematoxilina y eosina
La gran mayora de las muestras obtenidas a partir de nuestros
pacientes en los hospitales, se fijan originalmente en formol al 10% y
pasan a procesamiento histolgico hasta inclusin en parafina y
obtencin de cortes de 4 a 8 micrmetros; los que finalmente se tien
con hematoxilina y eosina (H y E).

La tincin con hematoxilina y eosina emplea dos colorantes por lo que
constituye una tcnica bicrmica.
La hematoxilina es un compuesto que se obtiene a partir de la planta
leguminosa Haematoxilum campechianum conocida como palo de
Campeche.
Es nativo de Mxico, particularmente del estado de Yucatn, aunque se

encuentra tambin en Guatemala y Belice.

La hematoxilina es un producto natural que al oxidarse produce una
sustancia de color morado obscuro conocida como hematena.
Para aumentar la eficacia de la coloracin, la hematoxilina debe
combinarse con iones metlicos como hierro o aluminio que funcionan
como mordentes, o sea, favorecedores de la tincin.
En los textos de histotecnologa se relata una gran variedad de mezclas
de hematoxilina, algunas con hierro y otras con aluminio.
La ms comunmente empleada es la llamada hematoxilina de Harris que
incluye aluminio en sus componentes.
NOTA: Fue en 1880 que Wilhelm Waldeyer introdujo el empleo de la hematoxilina en las
tinciones histolgicas.
La hematoxilina de Harris, al igual que la mayora de las otras mezclas de

hematoxilina, se comporta como una sustancia bsica.

La eosina es una sustancia que resulta de la accin del bromo sobre la
fluorescena. El resultado es un polvo rojo que se usa ampliamente
como colorante en la industria textil y en las tcnicas histolgicas.
Existen al menos dos variantes de eosina, la eosina Y amarilla y la eosina
B azul.
La ms empleada en las tcnicas histolgicas es la eosina Y amarilla. En
general la eosina es un compuesto cido.
En conclusin, la hematoxilina es morada y bsica; mientras que la
eosina es rosa a rojo y cida.
Estas caractersticas son fundamentales para comprender los resultados
tintoriales de la tcnica de H y E.

Como recordamos, un tejido est constituido por dos elementos
fundamentales: clulas y sustancias intercelulares.
Aceptando que la sustancia intercelular ms comn y fcilmente
identificable es la colgena, podramos plantear un dibujo muy
esquemtico de un tejido de la siguiente manera.
En el dibujo podemos identificar una clula ms o menos cuadrada con

su ncleo redondo en el centro. Junto a la clula tenemos una fibra de
colgena representada por una barra rectangular.

Si bien las protenas en general pueden comportarse como bases o
como cidos, la mayor parte de ellas cuando son sometidas al
procesamiento histolgico se comportan como bases.
Dado que la colgena sustancia intercelular es una protena, se
comporta generalmente como base.
El citoplasma celular contiene grandes cantidades de protenas, por lo
que tambin se comporta como base.
El ncleo celular, por otro lado, tiene grandes cantidades de cidos
nuclicos, por lo que su comportamiento general es cido.
CIDO
BASE

Debemos recordar que de acuerdo con el Dr. Johannes Nicolaus
Brnsted (1879-1947), los cidos son donadores de protones y las bases
o alclis, son aceptores de protones.
Cuando una molcula dona un protn comportamiento cido pierde
una carga positiva, por lo que queda con carga negativa.
De este modo, un cido tiene carga negativa y una base, carga positiva.
-CIDO
CARGA NEGATIVA
BASE
CARGA POSITIVA

Como sabemos bien: cargas del mismo signo se repelen, mientras que
cargas de signos contrarios se atraen.
De este modo, las estructuras tisulares que tienen comportamiento
cido, como es el caso de los cidos nuclicos que fundamentalmente
se encuentran en el ncleo, mostrarn afinidad o apetencia por
sustancias bsicas. A esta afinidad se le conoce como basofilia.
As, el ncleo celular resulta ser basfilo por lo que atrae al colorante
bsico que es la hematoxilina. Dado que la hematoxilina es morada,
entonces los ncleos se vern morados.

Hemos dicho que las protenas generalmente se comportan como
bases. Por lo tanto tendrn afinidad por las sustancias cidas, propiedad
que conocemos como acidofilia.
Dado que la eosina es un colorante cido, entonces todos los
componentes tisulares ricos en protenas como es el caso de la mayor
parte de los citoplasmas y el caso de la colgena, sern acidfilos por lo
que se teirn con la eosina que les imparte un tinte rosado.
De este modo, tenemos el contraste fundamental de la tincin con H y
E; los ncleos se ven morados y el citoplasma rosa al igual que la
colgena.

Un caso particular de la tincin con H y E lo constituyen los eritrocitos.
Los eritrocitos humanos son clulas que normalmente no tienen ncleo.
Su citoplasma tiene grandes cantidades de una protena muy
importante que conocemos como hemoglobina. Es tan notable la
cantidad de esta protena en los eritrocitos que en vez de verse rosa, se
ven con tinte rojo escarlata.
En los cortes histolgicos teidos con H y E se identifican como
estructuras redondeadas sin ncleo de color rojo brillante y con una
zona central ms plida.

La gran mayora de los campos microscpicos teidos con H y E que
revisemos, siguen las reglas de tincin aqu sealadas.
Sin embargo, tambin es posible encontrarnos clulas que muestren
basofilia en el citoplasma.
Esto se debe a la presencia de ribosomas. Como ya mencionamos, los
ribosomas son organelos constituidos por ARN y protenas que se
encargan de la sntesis de protenas.
Por lo tanto, la presencia de basofilia citoplsmica nos representa que
esa clula est sintetizando grandes cantidades de protenas.
CLULA SIN BASOFILIA CITOPLSMICA
CLULA CON BASOFILIA CITOPLSMICA

De este modo podemos apreciar que la tincin con H y E no slo nos da
un buen contraste del detalle celular, sino que adems nos permite
establecer inferencias funcionales.
Las clulas con basofilia citoplsmica tienen una mayor actividad de
sntesis (anablica) que las clulas sin basofilia citoplsmica.
CLULA SIN BASOFILIA CITOPLSMICA

SNTESIS DE PROTENAS MODERADA
CLULA CON BASOFILIA CITOPLSMICA

SNTESIS DE PROTENAS INTENSA
Ahora s estamos listos para estudiar algunos campos microscpicos

teidos con H y E.

Observe detenidamente la imagen. Note el detalle de los ncleos celulares teidos de

morado con la hematoxilina. Observe el contraste de los ncleos con el citoplasma rosado.
Este es un corte de hgado. En el centro de la imagen tenemos a un hepatocito clula del
hgado que le est haciendo ojitos.

Aqu tenemos otra preciosa imagen de hgado teida con H y E. De nuevo, note el contraste
entre los ncleos y los citoplasmas. En el ncleo del centro se identifica claramente un
gran nuclolo.

En este corte, de nuevo notamos el contraste entre los ncleos y los citoplasmas. Las zonas ms
plidas corresponden a tejido conjuntivo de la dermis. Las zonas ms obscuras,
corresponden a tejido epitelial de la epidermis.

En este corte de pncreas, usted puede identificar claramente los ncleos. Pero ahora es posible
notar que los citoplasmas tienen una zona basfila (presencia de abundantes ribosomas.
flechas amarillas) y otra zona acidfila (presencia de abundantes protenas. Flechas rojas).

En algunas clulas como estas (clulas plasmticas) el citoplasma, adems de mostrar basofilia
intensa, permite identificar una zona clara perinuclear que corresponde al aparato de Golgi.
Por eso a esta imagen clara sobre fondo basfilo, se le conoce como imagen negativa de
Golgi.

La tcnica histolgica ordinaria tiene muchas ventajas en trminos de
costo y de identificacion de detalles de estructuras celulares y tisulares.
Sin embargo, como todo, tiene sus limitantes. Es importante conocerlas
entre otras razones, porque en algunos casos tiene relevancia en el
estudio de pacientes.
Las limitantes de la tcnica histolgica ordinaria se basan esencialmente
en la naturaleza del propio proceso.
El paso de la deshidratacin elimina el contenido de agua del tejido y el
paso del aclaramiento, elimina en gran medida las grasas neutras.
Tambin es posible que el procesamiento elimine del tejido grandes
cantidades de carbohidratos complejos, entre los que sobresale el moco
producido por las glndulas.
Esto condiciona que en las zonas del citoplasma donde se encuentren
estas sustancias agua, grasa o moco se identifiquen espacios vacos,
que dado que usamos luz blanca para ver con el microscopio, se ven
blancos.

La traduccin prctica de esta circunstancia es que, cuando veamos
huecos claros en el citoplasma, es posible que hayan estado ocupados in
vivo por grasa, moco o agua.
En general, el principal reservorio de grasas neutras en los tejidos se
constituye por el tejido adiposo.
Las clulas del tejido adiposo pueden tener una gran gota de grasa en el
citoplasma, tan grande que desplaza a todos los rganos hacia la
periferia, dndole a la clula una forma que mi amigo el histlogo ha
comparado con un anillo de sello.

Si ponemos juntos muchos adipocitos clulas del tejido adiposo el
aspecto general es el de una reja conformada por numerosas
estructuras redondeadas con huecos claros, apiladas entre s.

Existen variantes sobre el tema de grasa en gotas o inclusiones
citoplsmicas.
En primer lugar debemos mencionar a la llamada grasa parda. En este
tipo de tejido adiposo, las clulas tienen muchas gotitas de lpidos, no
slo una. El aspecto que adquiere el adipocito es el de una clula
multivacuolar. De hecho, se conoce tambin como adipocito
multilocular en contraposicin con los adipocitos uniloculares que ya
vimos.
ADIPOCITO
UNILOCULAR
ADIPOCITO
MULTILOCULAR

El aspecto de clula con numerosos huecos claros en el citoplasma, que
se observa en los adipocitos multiloculares de la grasa parda, es
compartido por otros tipos celulares. Un ejemplo se encuentra en la
corteza suprarrenal, que en su capa media tiene clulas llamadas
espongiocitos con numerosas gotitas de lpido citoplsmico. El tercer
ejemplo se encuentra en las clulas de glndulas de la piel llamadas
sebceas.
ADIPOCITO
MULTILOCULAR
ESPONGIOCITO
CLULA DE
GLNDULA
SEBCEA

CORTEZA SUPRARRENAL. LA CAPA MEDIA TIENE CLULAS
GRASA PARDA. NUMEROSOS ADIPOCITOS MULTILOCULARES
CUYO CITOPLASMA SE APRECIA CLARO Y ESTN DISTRIBUIDOS QUE SE ENCUENTRAN ALTERNANDO CON OTROS
EN CORDONES.
SON LOS ESPONGIOCITOS.
UNILOCULARES EN ARREGLOS EN CONGLOMERADOS.

GLNDULA SEBCEA EN PIEL HUMANA. NOTE QUE DESDE BAJOS AUMENTOS, LA

GLNDULA SE VE PLIDA. A GRANDES AUMENTOS RECUADRO SE APRECIA EL
ASPECTO CITOPLSMICO CON NUMEROSAS GOTITAS DE LPIDO.

La gran mayora de las glndulas producen secreciones ricas en
carbohidratos complejos que conocemos comunmente como moco.
El procesamiento histolgico elimina en gran medida el moco de los
tejidos y el que queda, debido a sus caractersticas qumicas, no se tie
intensamente con H y E, por lo que las clulas que contienen moco en
su citoplasma muestran tambin un citoplasma claro.
Aqu observamos el aspecto de la clula
mucoproductora ms famosa: la clula
caliciforme. Note que la porcin superior
del citoplasma se encuentra
completamente llena por numerosos
grnulos de moco que con H y E se ven
claros. Note que el resto del citoplasma se
encuentra adelgazado hacia la periferia de
modo que el ncleo queda rechazado
hacia la porcin basal de la clula.

Con bajos aumentos, el aspecto de las clulas caliciformes es muy
caracterstico. Se observan como bolas blancas en estrecha relacin
con otras clulas, en el caso de la imagen, de intestino.

Aqu observamos otros ejemplos de clulas productoras de moco cuyo
citoplasma muestra un aspecto claro con la tincin con H y E.
LAS
CLULAS DEL EPITELIO SUPERFICIAL DEL ESTMAGO,
MUESTRAN LA PORCIN SUPERIOR CON ABUNDANTE MOCO, DE

MODO QUE SE APRECIA CLARA.
LAS
CLULAS DE CITOPLASMA MS CLARO, CORRESPONDEN A
CLULAS MUCOPRODUCTORAS DE UNA GLNDULA MUCOSA.

El glucgeno es un polmero de glucosa de alto peso molecular que se
almacena principalmente en el hgado y en el msculo.
Las clulas de los epitelios escamosos planos estratificados con o sin
estrato crneo de mucosas, normalmente almacenan grandes
cantidades de glucgeno citoplsmico. Por esta razn suelen mostrar un
citoplasma claro, como si estuviera vaco.

En conclusin, cuando identifiquemos huecos claros en el citoplasma de
una clula, las posibilidades son:
A) Agua
B) Carbohidratos
C) Grasa
Los huecos claros citoplsmicos relacionados con presencia de agua, se
observan slo en condiciones patolgicas de lesin celular. Recuerde lo
comentado sobre el edema celular.
Los carbohidratos intracitoplsmicos que se manifiestan como huecos
blancos pueden ser de dos tipos fundamentales:
a) Glucgeno
b) Moco
Los lpidos intracitoplsmicos que forman huecos blancos pueden
encontrarse en los adipocitos uni y multiloculares y en las glndulas
sebceas de la piel.

De este modo terminamos la revisin bsica de los conceptos
relacionados con la tcnica histolgica ordinaria (THO).
Es necesario que ahora el alumno repase imgenes de campos
microscpicos para que aprenda a identificar una tincin de H y E.
Debe quedarnos claro que la tincin bicrmica de H y E puede realizarse
en cortes obtenidos por congelacin. En este caso, desde luego, ya no es
tcnica histolgica ordinaria; se trata de una tcnica histolgica especial.
Recuerde que para ser THO se deben cumplir los tres criterios.
Por ltimo, para resolver las limitantes que nos plantea la THO, existen
numerosas tcnicas histolgicas especiales
Pero, esa es otra historia y ser contada en otra ocasin.
Departamento de Biologa Celular y Tisular
Tcnicas histolgicas
especiales
Enrique A. Sampedro Carrillo.

Mdico especialista en Anatoma Patolgica
Tcnicas histolgicas especiales.

Debemos recordar que la tcnica histolgica
ordinaria se define por tres caractersticas
esenciales:
a) Fijacin en formol al 10%
b) Inclusin en parafina
c) Tincin con hematoxilina y eosina
De este modo, las tcnicas histolgicas especiales
quedan definidas como todas aqullas que no
cumplan al 100% con estos requisitos.

Existen muchas maneras de clasificar a las tcnicas histolgicas
especiales, aqu presentamos un esquema simplificado:
Tcnicas histolgicas especiales

1. THE de primer orden
a) Tinciones
b) Histoqumica
c) Impregnaciones metlicas
2. THE de segundo orden
a) Microscopia electrnica
b) Inmunolgicas
c) Biologa molecular
Tcnicas histolgicas especiales. Tinciones

Podemos dividir a las tinciones en dos grandes grupos:
a) Metacromticas
b) Ortocromticas
La gran mayora de las tinciones son ortocromticas (color
correcto). Esto significa que el color que imparten es el
mismo que el color que tienen.
Un colorante azul, tie de azul a varias estructuras.

En el caso de las tinciones metacromticas, ocurre que el
colorante tiene un color x, por ejemplo, azul y las
estructuras coloreadas adquieren un color distinto y, por
ejemplo rojo.
Esto se debe a que las molculas de los colorantes
metacromticos, normalmente se encuentran separadas
en solucin, pero cuando se juntan o polimerizan,
adquieren un color distinto.
Molculas de colorante
en solucin (monmeros)
Molculas de colorante
polimerizadas en el tejido

Las estructuras tisulares que son metacromticas
tienen en comn en formar polmeros regulares,
esto es, con molculas muy similares entre s.
En este grupo se incluye a los mucopolisacridos
conocidos tambin como glucosaminoglucanos.
Debido a que la matriz del cartlago es muy rica
en glucosaminoglucanos, resulta que el cartlago
es metacromtico.

En los tejidos conjuntivos se encuentra un tipo de
clula que se caracteriza por poseer numerosos
grnulos de secrecin en el citoplasma.
Estos grnulos contienen sustancias reguladoras
asociadas con los fenmenos alrgicos.
Entre estas, se encuentra un tipo especial de
glucosaminogucano que se denomina heparina.
Por esta razn, los grnulos de estas clulas que
se conocen como mastocitos o clulas cebadas,
son metacromticos.

En la prctica mdica existen condiciones diversas
en las que el nmero normal de clulas cebadas
se encuentra aumentado.
La mayora de estas condiciones conocidas
globalmente como mastocitosis, se manifiestan
con lesiones en la piel, por lo que suele ser
necesario el estudio de una biopsia.
Para identificar a las clulas cebadas se emplean
rutinariamente tinciones metacromticas como el
azul de toluidina.

En la
Biopsia de piel de paciente con

mastocitosis teida con HE.
Clulas cebadas indetificadas

por la metacromasia de sus
grnulos. Azul de toluidina.

Para fines prcticos, podemos afirmar que todas
las dems tinciones se basan en el empleo de
colorantes ortocromticos.
En general las tinciones especiales estn
diseadas de modo que permitan la identificacin
de estructuras que no se ven claramente con
hematoxilina y eosina.
Dado que la THO ordinaria emplea dos
colorantes, se dice que hematoxilina y eosina es
una tcnica bicrmica.
As, una manera de aumentar el detalle, consiste
en aumentar el nmero de colorantes empleados.

Las tinciones que emplean ms de dos colorantes
se pueden llamar policrmicas, de las que la
combinacin ms comn es con tres colorantes,
por lo que tenemos el grupo de los tricrmicos.
El histlogo cuenta con un extenso arsenal de
tinciones tricrmicas; aqu slo revisaremos de
manera superficial los ms comunes:
a) Tricrmico de Masson
b) Tricrmico de Gallego

Tricrmico de Masson
Esta tcnica tintorial es una de las ms
frecuentemente usadas en la prctica mdica.
Se debe a uno de los patlogos ms famosos y
notables que haya existido: el Dr. Pierre Masson.
El azul de anilina que se

emplea en esta tcnica, tie
de manera especfica a la
colgena.
De esta manera es posible
diferenciarla del msculo.
Dr. Pierre Masson. 18801959

Con el tricrmico de Masson, la colgena se
aprecia en azul, los citoplasmas epiteliales y
musculares en rojo escarlata y los ncleos en
negro.
Corte de lengua teido con Masson. En azul se observa la colgena

y en rojo se identifican epitelio y msculo.

La identificacin ms o menos especfica de la
colgena en la prctica mdica tiene relevancia en
casos de lesin heptica.
En algunas ocasiones las clulas del hgado no
sobreviven y mueren. Como resultado, el
organismo intenta llenar el hueco pero
desafortunadamente no lo hace con nuevos
hepatocitos, sino con tejido conjuntivo rico en
colgena.
A esta fibrosis del hgado asociada con muerte de
hepatocitos se le conoce como cirrosis.

La cirrosis puede ser el resultado de la lesin
heptica debida a numerosos factores entre los
que sobresalen: por etanol y por virus.
Si bien la cirrosis es irreversible, en muchos casos
el tratamiento antiviral evita la progresin de
estos cambios, por lo que el mdico debe tener
una idea clara de dicha evolucin verificando la
cantidad de colgena extensin de la lesin en
el hgado del paciente.
En estos casos, el tricrmico de Masson resulta
particularmente til.

Hgado con intensa fibrosis demostrada con
Masson.

Tricrmico de Gallego
Desarrollada originalmente por don Abelardo
Gallego, ilustre histlogo espaol.
Los tejidos muestran ncleos en
color rojo, la colgena en verde y
los citoplasmas, como los del
msculo en amarillo.
El resultado es un predominio de
tintes verdes en la imagen.
La tcnica fue posteriormente
modificada por el Dr. Alfonso
Reyes Mota.
Dr. Abelardo Gallego

1879-1930

La tcnica original de Gallego
permite diferenciar las fibras
elsticas en un color magenta
obscuro.
El Dr. Alfonso Reyes-Mota cambi
el mordente con lo que result
que ahora las fibras elsticas se
identifican en color rojo brillante,
mucho ms fcil de diferenciar de
otras estructuras.
Dr. Alfonso Reyes-Mota

1912-1974



La tcnica tricrmica de Gallego modificada por
Reyes-Mota, adems de los contrastes ya
mencionados, permite identificar de manera muy
clara a las fibras elsticas en un color rojo
brillante.
Pared de la aorta
Cartlago elstico

Tcnicas de Romanowsky
En 1891, Ernst Malachowsky y Dimitry Leonidovich Romanowsky
desarrollaron tcnicas tintoriales con una mezcla de eosina y azul de
metileno modificado.
La mezcla resultante daba un tercer color inesperado de tinte prpura, con
lo que el contraste era tricrmico a pesar de slo emplear dos colorantes.
Estas tcnicas fueron mejoradas por los doctores James Homer Wrigth y
Gustav Giemsa.
Ernst Malachowsky D.L. Romanowsky

(1857-1934)
(1861-1921)
Dr. J.H. Wright

(1869-1928)
Dr. G. Giemsa
(1867-1948)

Las tcnicas tintoriales de Wright y de Giemsa se
emplean de manera rutinaria para el estudio de
extendidos o frotis de sangre y de mdula sea.


Tcnica de Papanicolaou
En 1928, en una conferencia mdica en Battle Creek, Michigan, el Dr.
Georgios Nicholas Papanikolaou, patlogo de origen griego, present a la
comunidad cientfica un trabajo en el que se describa un procedimiento
sencillo, reproducible y de bajo costo para la deteccin del cncer del crvix
uterino.
Para variar la comunidad cientfica rest importancia a este trabajo y no
fue hasta el ao de 1943, tras la publicacin junto con el Dr. Herbert Traut,
del libro Diagnosis of Uterine Cancer by the Vaginal Smear, que se le empez
a dar importancia.
Dr. George Papanicolaou

(1883-1962)

La tcnica de obtencin de la muestra por raspado de la superficie de
transicin cervical, permite el estudio de las clulas epiteliales que
normalmente se descaman citologa exfoliativa que despus de ser
sometidas a un extendido en un portaobjetos, pueden fijarse y teirse
con el colorante de Papanicolaou.
Con este procedimiento se pueden estudiar las variaciones
hormonales del epitelio genital femenino, los microorganismos que le
infectan y se pueden identificar tempranamente los cambios
precursores de cncer.

Tcnicas histolgicas especiales. Histoqumica

Las tcnicas de histoqumica se dividen en dos
grandes grupos:
a) Histoqumica simple
b) Histoqumica enzimtica
El criterio de divisin es muy simple, en un caso
participan enzimas y en el otro no.
Las tcnicas de histoqumica simple se han
dividido de acuerdo con los grupos moleculares
que hacen evidentes.
As, hay tcnicas para lpidos, para carbohidratos y
para cidos nuclicos.

Histoqumica simple para carbohidratos.
Posiblemente la tcnica ms famosa en este grupo es la
que se conoce como P.A.S.
El trmino corresponde a las siglas para: periodic acid
Schiff.
El corte de parafina se somete a la accin del cido
perydico que rompe de manera especfica un enlace en
las unidades de monosacridos de un carbohidrato,
liberando as grupos aldehdos.
Posteriormente se agrega el reactivo de Schiff o
leucofucsina, que originalmente es cristalino y al contacto
con grupos aldehdo adquiere un tono magenta.

La tcnica de P.A.S. nos permite identificar carbohidratos, pero no
nos dice especficamente de qu carbohidrato se trata.
En esta tcnica se emplea hematoxilina, por lo que los ncleos se
tien de morado.
Debido a que normalmente el citoplasma celular posee cierta
cantidad de carbohidratos, los citoplasmas observados con P.A.S.
muestran un ligero tinte rosado, por lo que no sera difcil que el
principiante confunda un corte teido con H y E con un teido
con P.A.S.
Para evitar este problema debemos fijarnos en dos cosas: la
presencia de estructuras con muchos carbohidratos que se
aprecian magenta intenso y el tinte de los eritrocitos, que con
P.A.S. se ven plidos y con H y E se ven rojo brillante.

Corte de intestino delgado teido con P.A.S. Note las bolitas rojo-magenta que
corresponden a clulas productoras de moco (carbohidratos complejos) que se
conocen como clulas caliciformes.

Corte de intestino delgado teido con P.A.S. Note las clulas caliciformes y los
ncleos morados que recuerdan el aspecto del H y E. Observe la presencia de
eritrocitos rosados sealados con la flechas amarillas.

Observe detenidamente las diferencias y semejanzas entre el aspecto del corte

superior teido con H y E y el corte inferior, teido con P.A.S.

En la prctica mdica, la tcnica de PA.S. resulta til en las
siguientes circunstancias:
a) Identificacin de clulas mucoproductoras en neoplasias
malignas poco diferenciadas.
b) Identificacin de alteraciones en membranas basales.
Este detalle puede apreciarse en particular en el caso de las
biopsias de rin.
Carcinoma mucosecretor identificado

por la reaccin positiva con P.A.S.
Glomrulo renal que muestra el detalle

de la membrana basal con P.A.S.

Una variante de la tcnica de P.A.S se emplea
frecuentemente en la prctica mdica con el fin de
identificar de manera especfica a un tipo particular de
carbohidrato: el glucgeno.
El glucgeno es una macromolcula polimrica cuyo
monmero es la glucosa.
La prueba se conoce como P.A.S. con diastasa y se basa en
la capacidad que tiene esta enzima, tambin conocida como
alfa-amilasa, para despolimerizar y por lo tanto deshacer el
glucgeno.

Si en un corte histolgico sospechamos que se encuentra un
agregado de glucgeno, lo primero que hacemos es un corte
con P.A.S que dar reaccin positiva dado que se trata de un
carbohidrato.
Enseguida tomamos otro corte del mismo bloque de
parafina y antes de someterlo a la tcnica de P.A.S., lo
dejamos expuesto a la accin de la diastasa.
Si la estructura problema S ES glucgeno, entonces se
disolver por efecto de la diastasa y por lo tanto, no habr
reaccin positiva para P.A.S, dejando un hueco que
representa el sitio donde estaba la macromolcula.
Si por otro lado, NO ES glucgeno, entonces no sufrir el
efecto de la diastasa, por lo que S habr reaccin positiva
para P.A.S.

Aplicacin de
diastasa
Corte histolgico con
estructura P.A.S. positiva
Nuevo corte histolgico

del mismo bloque
Realizacin de la
tcnica de P.A.S.
Si la reaccin P.A.S.
positiva se mantiene,
entonces NO ES
GLUCGENO
Si la reaccin P.A.S.
positiva se pierde,
entonces S ES
GLUCGENO

Un detalle curioso de la tcnica de P.A.S. con diastasa reside
en el hecho de que la identificacin del glucgeno es
negativa.
Esta tcnica se emplea de manera rutinaria en el estudio de
biopsias de hgado.
Biopsia de hgado contrastada

con el mtodo de P.A.S. con
diastasa. Se identifican clulas
con citoplasma P.A.S. positivo
resistente a la diastasa, por lo
que su contenido NO ES
GLUCGENO. Se trata de los
macrfagos del hgado.

Existe una tcnica especial para la demostracin directa y
positiva del glucgeno, se trata del carmn de Best.
Desafortunadamente no es una tcnica comnmente
empleada en los hospitales.
Demostracin de glucgeno en
hgado de rata por medio de la
tcnica de carmn de Best. La
imagen de la izquierda es de
una rata que estaba en ayuno y
la de la derecha, de una rata
bien alimentada. El glucgeno
se aprecia como numerosos
puntos rojos en el citoplasma de
los hepatocitos.

En algunos casos es importante determinar si los
carbohidratos que hacemos evidentes con la tcnica de
P.A.S. corresponden al grupo de las mucinas.
Es importante recordar que las mucinas son una familia de
glucoprotenas, es decir, molculas formadas por protena
que contienen grandes cantidades de carbohidratos.
Las mucinas constituyen elementos secretorios de clulas
epiteliales glandulares.
Una de las tcnicas de histoqumica que permite identificar
claramente mucinas es la conocida como mucicarmn de
Mayer.

Glndula salival teida con mucicarmn de Mayer. En amarillo se aprecian los

conductos glandulares, las clulas serosas en color pardo y en rosa, las

En el caso de que sea importante diferenciar entre mucinas
neutras y mucinas cidas, podemos emplear la tcnica de
azul alciano en pH cido.
En este corte teido con azul
alciano, el moco alcalino de las
clulas normales del estmago
se aprecia rosa plido, mientras
que la mucina cida de las
clulas caliciformes que
normalmente se encuentran en
el intestino, se aprecia azul.
Este hallazgo permite confirmar
el diagnstico de esfago de
Barrett.

Histoqumica simple para cidos nuclicos.
La tcnica de Feulgen permite la identificacin especfica del
ADN.
El principio histoqumico de esta tcnica es el mismo que el
descrito en la tcnica de P.A.S. con la diferencia de que en
vez de emplear cido perydico para liberar aldehdos de
los carbohidratos, se emplea cido clorhdrico.
El HCl libera aldehdos exclusivamente a partir de un azcar
especfico que resulta ser la desoxirribosa.
Dado que la desoxirribosa solamente se encuentra en el
ADN, la aplicacin posterior del reactivo de Schiff demuestra
la presencia de este tipo de cido nuclico.

La tcnica de Feulgen nos permite apreciar el detalle de los
cromosomas en las distintas etapas de la divisin celular.
Debe quedar claro que se trata en este caso slo de un
aspecto acadmico y no diagnstico, ya que las figuras de
mitosis se pueden apreciar con H y E.
Cortes de raz de lirio contrastados con la tcnica de Feulgen. Note el detalle de

los cromosomas en metafase y en anafase.

En la prctica mdica, tambin es posible identificar de
manera especfica a los cromosomas con tcnica de
procesamiento especial.
Una vez identificados, se pueden ordenar formando lo que
conocemos como cariotipo.
Cromosomas humanos obtenidos a partir de linfocitos y extendidos en una

laminilla que se identifican especficamente con la tcnica de Feulgen.

Uno de los criterios de evaluacin de la agresividad de las
neoplasias es la cantidad de figuras de mitosis apreciables
con H y E.
Se supone que en la medida en que ms figuras de mitosis
encontremos, el tumor se reproduce ms y por lo tanto el
pronstico del paciente es ms reservado, por lo que
deberemos contemplar la posibilidad de un tratamiento
ms agresivo.

Desafortunadamente ocurre en en muchos casos, el tumor
muestra un alto nivel de reproduccin, pero los cortes
histolgicos no muestran figuras de mitosis.
Debemos saber que normalmente, las clulas, cuando van a
iniciar el proceso de divisin celular, lo primero que hacen
es duplicar su ADN.
Por lo tanto, si pudiramos saber cuntas clulas en el
tumor tienen el doble de material gentico han pasado la
llamada etapa S del ciclo celular entonces tendramos una
estimacin ms exacta que el conteo de mitosis, sobre las
clulas que estn reproducindose.

De este modo, se obtiene un corte histolgico del tumor
problema en estudio y se contrasta con la tcnica de
Feulgen.
La laminilla se pasa a un sistema de anlisis por
computadora que tiene la capacidad de medir exactamente
la cantidad de ADN por ncleo celular.
El resultado se expresa en grficos de fcil interpretacin.
Este sistema conocido como citometra esttica permite
adems obtener un estimado de la ploida de las clulas del
tumor, de modo que podemos saber exactamente cuntas
son diploides, poliploides o en su caso aneuploides.
La citometra esttica tiene aplicaciones fundamentalmente
en el estudio de neoplasias malignas.

Equipo de citometra esttica con el

microscopio, el sistema de captura de imgenes
y las computadoras encargadas del anlisis.
Grfico de contenido de ADN que nos da un
estimado de la cantidad de clulas que se
encuentran en las distintas etapas del ciclo
celular
Corte de un tumor teido con Feulgen que
resulta ser la base de este estudio.

Histoqumica simple para lpidos.
Estas tcnicas ya casi no se usan con fines diagnsticos,
debido a que han sido superadas por las tcnicas de
inmunohistoqumica.
Cuando queremos estudiar el contenido de grasas de un
tejido, es importante recordar que el procesamiento
histolgico suele eliminar el contenido lipdico del corte, por
lo que cuando vemos una seccin de tejido adiposo con H y
E, observamos huecos donde estaba la grasa.
NO SE TRATA DE QUE LA GRASA SE TIE DE BLANCO!!!
Para mantener la grasa en el tejido ser necesario obtener
cortes por congelacin, los que ahora se pueden contrastar
con tcnicas que colorean especficamente a los lpidos.

Histoqumica simple para lpidos.
Tejido adiposo con tcnica

histolgica ordinaria. Se ha
perdido la grasa y slo se
aprecian los huecos claros.
Tejido adiposo en cortes
congelados con tcnicas para
grasa.
En negro, la tincin fue con osmio
y en rojo se emple la tincin de
rojo oleoso.

Histoqumica enzimtica.
Este es otro grupo de tcnicas que va siendo cada vez
menos utilizado en el diagnstico mdico.
Las enzimas son catalizadores biolgicos, esto es, que
pueden acelerar reacciones.
Como regla, las enzimas actan de manera especfica sobre
molculas que conocemos como sustrato.
La interaccin enzima sustrato, tiene como resultado la
generacin de un producto especfico.
Frecuentemente las enzimas rompen a su sustrato dejando
como producto los fragmentos del mencionado sustrato.
ENZIMA
SUSTRATO
PRODUCTOS

Una vez ocurrida la reaccin enzimtica se agrega una
sustancia que al combinarse con el producto de la reaccin
adquiere color.
A esta sustancia se le conoce como cromgeno.
ENZIMA
COMPLEJO
CON COLOR
CLARAMENTE
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Con este procedimiento, los histlogos identificaron la
presencia de numerosas enzimas en numerosas regiones
tisulares.
Sin embargo, la tcnica tiene numerosos inconvenientes
prcticos, por lo que fue muy difcil aplicarla en los
hospitales con fines diagnsticos.
En la actualidad tiene aplicaciones en el diagnstico de
enfermedades primarias del msculo esqueltico.
Dado que la actividad enzimtica se pierde en gran medida
por el procesamiento rutinario, estas muestras requieren de
la realizacin de cortes congelados.

Biopsia de msculo esqueltico en corte por congelacin que se proces con la tcnica
de histoqumica enzimtica para la deteccin de la enzima ATPasa. Se pueden
distinguir al menos 3 tipos de fibras: las obscuras, las claras y las intermedias. Las
alteraciones en este patrn normal de distribucin enzimtica permiten realizar

La histoqumica enzimtica para ATPasa, permite adems la
identificacin con fines de investigacin y de enseanza
de otras estructuras importantes como es el caso de las
clulas de Langerhans y los canalculos biliares del hgado.
Clulas de Langerhans con ATPasa.
Canalculos biliares con ATPasa
Tcnicas histolgicas especiales. Impregnaciones

Impregnaciones metlicas.
Los tejidos a estudiar se someten al efecto de sales
metlicas, que frecuentemente son de oro y/o de plata.
Las partculas metlicas quedan adheridas a la superficie de
las clulas y/o estructuras tisulares inertes de la muestra en
estudio.
De modo que impregnacin, es algo as como cubrir por
fuera.
Las impregnaciones clsicas que fueron las primeras en
emplearse requieren de muchos y estrictos cuidados para su
elaboracin, por lo que no suelen usarse en los hospitales.
Estas tcnicas tienen un importante valor histrico y
afectivo, en particular para los mexicanos, ya que se
considera que provienen de la escuela cajaliana.

El ms grande histlogo que pueda jams imaginarse, fue un
mdico de pueblito llamado Santiago Ramn y Cajal.
Sus estudios sobre la textura (tejidos) del sistema nervioso
le valieron el Premio Nobel de Medicina y Fisiologa en el
ao de 1906.

En la actualidad, las impregnaciones metlicas clsicas
tienen nula aplicacin en el diagnstico mdico y escasa en
el campo de la investigacin cientfica.
Las impregnaciones metlicas clsicas jugaron un papel determinante en la demostracin de la

existencia celular de las neuronas. Aqu vemos una tcnica que permite identificar el perfil de las
neuronas piramidales de la corteza cerebral humana. La secuencia: Cajal - del Ro Hortega Costero, result fundamental en el desarrollo de la anatoma patolgica y la histologa mexicanas.

Clula de Purkinje en el cerebelo.
Astrocito fibroso con prolongaciones

en contacto con vasos sanguneos.

Numerosos astrocitos fibrososo asociados

con vasos sanguneos.
Fibras reticulares en hgado

demostradas con la tcnica de doble
impregnacin de Po del Ro
Hortega.

A partir de los conocimientos obtenidos por el desarrollo de
las tcnicas de impregnacin metlica clsicas, los
histotecnlogos han llegado a desarrollar tcnicas ms
sencillas y fcilmente aplicables a cortes de parafina, por lo
que su utilidad diagnstica se ha mantenido hasta la fecha.
A estas tcnicas las conocemos como impregnaciones
metlicas modernas.
Una de las ms empleadas se basa en los principios de la
tcnica de P.A.S. ya que se emplea cido perydico para
liberar grupos aldehdos de molculas de tipo carbohidrato.
Esta tcnica conocida como plata metenamina, con las
variantes de Gomori o de Jones, se usa rutinariamente en el
estudio de biopsias renales.

Biopsia renal contrastada con la tcnica de metenamina de plata de Gomori. Se

aprecian en negro las lineas que corresponden a las membranas basales, tanto de
tbulos renales como de los glomrulos. Las alteraciones en estos arreglos
normales, permiten realizar diagnsticos en la prctica mdica.

La tcnica de Wilder, conocida comnmente como retculo, se emplea

rutinariamente en el estudio de las biopsias de hgado con fines diagnsticos.
Permite identificar en cortes de parafina, el arreglo de las fibras reticulares.

Dos conceptos importantes referidos a las impregnaciones
metlicas modernas son:
a) ARGENTAFINIDAD
B) ARGIROFILIA
Argentafinidad es un propiedad histoqumica por la que
algunas sustancias tienen la capacidad de capturar la plata
y reducirla de manera espontnea.
Argirofilia es una propiedad histoqumica por la que algunas
sustancias tienen la capacidad de capturar la plata, pero no
la reducen espontneamente. Es necesaria la aplicacin de
un agente reductor.
La plata reducida se ve negra.

En el humano existen varias sustancias argentafines y es
necesario recordarlas.
SUSTANCIAS ARGENTAFINES
a) Melanina
b) Aminas biognicas:
b.1. Serotonina
b.2. Catecolaminas (epinefrina y norepinefrina)
Las tcnicas de impregnacin metlica modernas del tipo
argentafn permiten la identificacin de estas sustancias.
La tcnica argentafn ms comnmente empleada en el
diagnstico mdico es la de Fontana-Masson.

Las sustancias argirfilas, son menos e incluyen a:
SUSTANCIAS ARGIRFILAS.
a) Fibras reticulares
b) Neuropptidos. Con este trmino nos referimos a una
familia amplia de glucoprotenas que se comportan como
hormonas y que se encuentran en tejido nervioso y en
epitelios neuroendocrinos.
La tcnica argirfila ms frecuentemente empleada en la
prctica mdica es la de Grimelius.

Piel humana contrastada con la tcnica
de Fontana-Masson. Se identifican
claramente en negro los grnulos de
melanina en la epidermis.
Intestino delgado contrastado con la

tcnica de Fontana-Masson. Se
identifican los grnulos negros de
aminas biognicas (en este caso
corresponden a serotonina) en la base
de las clulas neuroendocrinas.

Corte de apndice cecal humano contrastado con la tcnica de Grimelius. Se

aprecia el detalle de los grnulos citoplsmicos negros argirfilos de una
clula neuroendocrina.

Conclusiones:
Hasta aqu hemos revisado de manera superficial algunas de
las tcnicas histolgicas especiales de primer orden.
Conviene ahora al educando, revisar el material de nueva
cuenta con un poco ms de detenimiento.
Es importante que sepamos de cada una de las tcnicas
revisadas:
a) Que existen
b) Para qu sirven
c) Cmo se identifican
Recuerde que la mayora de las tcnicas aqu revisadas se
emplean frecuentemente en la prctica mdica con fines
diagnsticos.

Resumen de las tcnicas histolgicas especiales de primer orden:
Tinciones
a) Metacromticas. Azul de toluidina
b) Ortocromticas.
b.1. Tricrmicos: Masson, Gallego
b.2. Romanowsky: Wright, Giemsa
b.3. Papanicolaou
Histoqumica
a) Simple
a.1. Para carbohidratos: P.A.S., P.A.S. con diastasa, carmn de Best, azul alciano
a.2. Para lpidos: Osmio, rojo oleoso
a.3. Para cidos nuclicos: Feulgen
b) Enzimtica
Impregnaciones metlicas
a) Clsicas
b) Modernas: Metenamina de plata, Wilder, Fontana-Masson, Grimelius
Tcnicas histolgicas especiales. Inmunolgicas

Tcnicas inmunolgicas.
Las tcnicas inmunolgicas se basan en la especificidad que
tienen los anticuerpos para unirse a diversos tipos de
molculas.
Las sustancias a las que se unen los anticuerpos reciben el
nombre genrico de antgenos.
Podemos hacer antignica a cualquier sustancia si la
pasamos a un animal de otra especie.
Por ejemplo, si aislamos insulina humana, que en una
hormona protica reguladora de la glucemia, y la
inyectamos a un ratn; este animal reconoce como extraa
a la insulina humana y produce anticuerpos de ratn antiinsulina humana.

Ahora aislamos estos anticuerpos y les agregamos una
marca para poder identificarlos en un tejido.

Podemos pegarles una sustancia fluorescente (fluorocromo)
o una enzima cuya actividad podemos revelar empleando
histoqumica enzimtica.

Cuando empleamos un fluorocromo para marcar el
anticuerpo estamos haciendo una tcnica de
inmunofluorescencia.
El fluorocromo ms comnmente empleado es el
isotiocianato de fluorescena que brilla en color verde.
Inmunofluorescencia con anticuerpos antiactina en un fibroblasto en cultivo.
Inmunofluorescencia con anticuerpos antiIgG en una biopsia renal.

La inmunofluorescencia tiene aplicaciones en el diagnstico
mdico en casos de glomerulopatas y en algunas lesiones
de piel en que participa el sistema inmune.
Se requiere de un microscopio de fluorescencia y de cortes
por congelacin.
Inmunofluorescencia con anticuerpos antiIgG en piel de paciente con lupus

eritematoso sistmico.
Inmunofluorescencia con anticuerpos antiIgA con depsitos en vasos sanguneos en

paciente con vasculitis.

Cuando empleamos una enzima para marcar el anticuerpo y
revelamos su presencia por medio de una tcnica de
histoqumica enzimtica, estamos haciendo una
inmunohistoqumica enzimtica.
La enzima ms frecuentemente empleada para marcar
anticuerpos tiene el curioso nombre de peroxidasa del
rbano fuerte, pero se conoce comnmente como
peroxidasa.
Se pueden usar al menos dos reveladores para la
peroxidasa, el carbazol, que produce un color rojo y la ms
comn que es la diaminobencidina, que produce un color
pardo.
No se requiere de un microscopio de fluorescencia y las
laminillas pueden revisarse aos despus.

Inmunohistoqumica enzimtica con

anticuerpos primarios anti-insulina en islotes
pancreticos.

anticuerpos primarios anti-glucagon en
islotes pancreticos.


anticuerpos primarios anti-protena cida
fibrilar glial, que es un filamento intermedio
que se encuentra en astrocitos fibrosos.

anticuerpos primarios anti-actina especfica
de msculo liso en un corte de piel. Se
identifican las paredes de vasos sanguneos
de la dermis.


anticuerpos primarios anti-protena cida
fibrilar glial, que es un filamento intermedio
que se encuentra en astrocitos fibrosos.

anticuerpos primarios anti-CD3 en un corte
de piel. Se identifican los linfocitos T en un
linfoma (neoplasia maligna de linfocitos).


anticuerpos primarios anti-protena S100 en
piel humana. Se hacen evidentes las clulas
dendrticas de Langerhans.

anticuerpos primarios anti-protena S100. A
grandes aumentos, el detalle de la clula de
Langerhans y su relacin con los
queratinocitos resulta muy claro.

En la actualidad las aplicaciones de la inmunohistoqumica
enzimtica en la prctica mdica son muy extensas.
No slo nos permite resolver importantes problemas de
diagnstico histolgico, pero tambin sus resultados se
pueden traducir en el establecimiento del pronstico y
tratamiento de los pacientes con los que trabajamos.
anticuerpos primarios anti-HER2 en un
cncer de mama. Las pacientes que
muestran abundante expresin
inmunohistoqumica de esta molcula de
tipo factor de crecimiento, pueden ser
tratadas con anticuerpos monoclonales antiHER2, y su pronstico es mucho mejor que
el de aqullas que no lo expresan.

Conclusin final.
Aqu hemos presentado una muy breve revisin de algunas
de las tcnicas histolgicas que tienen relevancia en el
diagnstico, pronostico y tratamiento de nuestros pacientes.
Faltan muchas otras que muy probablemente se irn
revisando a lo largo del curso.
Es importante que no olvides que todo esto se usa
diariamente en la prctica como mdico general y
especialista, ante pacientes reales.
Sobre las tcnicas histolgicas especiales de segundo orden
que nos faltaron microscopa electrnica y biologa
molecular haremos posteriormente otra presentacin
especfica.
GRACIAS.
Introduccin al estudio de la Medicina Humana

Microscopía y Técnica Histológica

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Universidad Nacional Autnoma de Mxico

Microscopa y Tcnica Histolgica

Dr. C. Guillermo Moreno Fernndez

Tropezar no es malo, encariarse

Issac Newton introduce el trmino

LUZ.- Es la energa en forma de ondas, que

La luz es una forma de energa radiante

Luz visible 400 nm violeta

El rayo de luz incide en un

Ejemplo: cuando la luz

Velocidad de la luz en el aire

ndices de refraccin de una serie de sustancias transparentes.

COLORES OPACOS: SUMA

Fotografa de una rplica

La ciencia que investiga los

Esta constituido por:

Es lo mismo VER que OBSERVAR?

Microscopio fotnico: Simple o Compuesto

Componentes del microscopio

Sistema ptico: Lentes

LC: LENTE CONVERGENTE

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Caractersticas de las imgenes

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Imgenes obtenidas en sistemas

Mayor, Derecha, Virtual

Mayor, Invertida, Real

Menor, Invertida, Real

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Solo el objetivo y el ocular amplan las

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Es la capacidad del ojo o de un sistema

Es la distancia mnima de separacin que puede

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AN= SEN alfa x IR

Alfa= ngulo de admisin de la lente

IR = Del medio presente entre la muestra y la lente

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AN= sen 58 x 1.56

AN= 0.85 X 1.56

Con un aumento de 100x y una apertura

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Tcnica Histolgica Especial

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GRACIAS POR SU ATENCIN!

Histologa Mdica. Las Tcnicas Histolgicas.

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