GESTIN DE COLONIAS DE RATONES

MODIFICADOS GENTICAMENTE
LEGISLACIN DE RMGs

Gestin en general
La gestin de una colonia de ratones puede
definirse como la provisin de todos los
recursos materiales, humanos, y temporales,
necesarios para conseguir unos objetivos
preestablecidos.

Gestin en RMG
recursos materiales:

recursos humanos:

Formacin
Modelo animal
Personal suficiente
Instalacin, equipamiento
Espacio
recursos temporales:
Financiacin
Registros de datos
Tiempo necesario

Redactar PROYECTO
Cual es el objetivo cientfico
Qu RMG espero obtener
Genotipos, edades, sexos, etc.
Qu datos espero obtener
Muestras, experimentos, tcnicas, etc.
Cuales sern los controles
Establecer una cronologa

Queremos traer ratones Apoe

Vamos a estudiar
ateroesclerosis en diferentes
genotipos con dietas ricas en
grasa
Se cran bien. Necesitaremos
grupos de 10 machos y hembras

Recoger informacin
Informacin sobre el gen
Publicaciones
MGI

Informacin sobre la modificacin

Mutantes espontaneos
Mutantes inducidos (qumico, radiaciones)
Mutaciones dirigidas (tcnicas de recombinacin)
Mutantes condicionales (Cre-lox, Tet-on, etc.)
Transgnicos

All alleles(39) : Targeted(18) Gene trapped(19) Transgenic(1)

Spontaneous(1)
Mutations at this locus cause diet-induced hypercholesterolemia and
atherosclerosis.

Recoger informacin
Informacin gentica: Apoe nomenclatura
B6.129P2-Apoetm1Unc/J
B6.129P2-Apoetm1(APOE*2)Mae
B6.129P2-Apoetm1(APOE*3)Mae
B6.Cg-Tg (APOE-Cyp7a1)1Rjd/Mmcd
SHL/StmRbrc

Apo E

Recoger informacin
Informacin gentica: fondo gentico
129S6/SvEv-Apoetm4Mae/J
B6.129P2-Apoetm1Unc/J
AKR.129P2(B6)-Apoetm1Unc/J
D2.129P2(B6)-Apoetm1Unc/J
B6.Cg-Apoetm1Unc (D12Mit182-D12Mit2)/Pgn

Recoger informacin
Informacin gentica: fondo gentico
DBA/2J

AKR/J

C57BL/6J

C57BLKS/J

SUSCEPTIBILIDAD A DIETAS ALTAS EN GRASAS

Mouse Phenome Database

http://phenome.jax.org/

Recoger informacin
Informacin gentica: genotipo
Muestras para genotipado e identificacin.
Edad de genotipado
Tcnicas de genotipado
NO INICIAR LA PRODUCCIN SIN TENER LA TCNICA
TESTAR SIEMPRE LOS FUNDADORES
TESTAR SIEMPRE LOS FONDOS GENETICOS

Recoger informacin
Informacin gentica: genotipo
FELASA guidelines for the production and nomenclature of transgenic rodents

Recoger informacin
Informacin gentica: genotipo

alelo wild type

alelo KO

transgn

homocigoto
heterocigoto
hemicigoto

Recoger informacin
Informacin gentica: genotipo
B6.Cg-Tg(GFAP-APOE*3)37Hol Apoetm1Unc/J

B6.Apoe KO

-/-, +/-, +/+

B6.Cg-Tg (APOE-Cyp7a1)1Rjd/Mmcd

B6.Apoe Tg

-/-, +/-, +/+

B6.Tg Apoe KO

(+/+) (-/-)
(+/-) (+/-)
(+/+)
(-/-) (-/-)
(+/-)
(+/+)

B6.129P2-Apoetm1Unc/J

Recoger informacin
Informacin gentica: genotipo
B6.Cg-Tg(GFAP-APOE*3)37Hol Apoetm1Unc/J

B6.Apoe KO

-/-, +/-, +/+

B6.Cg-Tg (APOE-Cyp7a1)1Rjd/Mmcd

B6.Apoe Tg

-/-, +/-, +/+

B6.Tg Apoe KO

(+/+) (-/-)
(+/-) (+/-)
(+/+)
(-/-) (-/-)
(+/-)
(+/+)

B6.129P2-Apoetm1Unc/J

Apo E

Recoger informacin
Informacin gentica: fenotipo
Alteraciones reproductivas

Fenotipo esperado en el tiempo

Fertilidad,
Desarrollo,
Prolificidad,
Parto,
Destete,

Cancer
Neurodeg.,
Endocrinas,
Metablicas,
Cardiovascular

Bases de datos
Trazabilidad
Id. en la cubeta

Id. de la muestra

Genotipo

Id. ratn/Marcaje
Base de datos
Datos: reproductivos, cruces, muestras, etc.

Establecer la produccin

Cuntos animales necesitamos?

Cada cuanto tiempo?
De qu edad?
De qu sexo?
De qu genotipos?
Qu informacin del cruce necesitamos?
Cuntos animales por camada produce la cepa?
Cuntos cruces frtiles tiene la cepa?

Establecer la produccin

6.8
4.8

Factores a tener en cuenta

Factores ambientales (Luz, T, HR %, Ruido, etc..)

Instalacin
Alojamiento
Manejo y experiencia
Enriquecimiento
Estado sanitario

Sistemas de cruces
Pubertad 6-8 semanas

Ciclo estral: 4-5 das

Sincronizacin de ciclos
Monta 1-3 hembras
Tapn Gestacin
Efecto Whitten / Lee-Boot
Bruce
Gestacin 18-22 das

Discontinuo Vs. Continuo

Monogamia-Trios Vs. Poligamia
Programado Vs. Al azar

Sistemas de cruces
Homocigosis (A/A)
Menor coste (genotipos)
Niveles de expresin (transgnicos)
Toda la produccin puede utilizarse
para experimentos
Heterocigosis (A/a)
Se obtienen controles wild type
Se evita la creacin de sub-estirpes

Sistemas de cruces
Mantenimiento del fondo gentico
Stocks no consanguneos
Estirpes Consanguneas
Estirpes hbridas
Establecimiento de congnicos (Speed Congenics)

RMGs-stocks no consanguneos

RMGs-estirpes consanguneas
Ventajas

Desventajas

Isogenicidad
Baja capacidad de reproduccin
Homocigosidad
Caras
Uniformidad genotpica Sensibles a factores ambientales
Estabilidad en el tiempo
129X1/SvJ
A/J
Individualidad
BALB/cByJ
Distribucin internacional
BALB/cJ
C3H/HeJ
Identificables
C57BL/6J
C57BL/6NJ
Sensibilidad
C57BL/10J

RMGs-estirpes hbridas
F1

x
B6

BALB/c

B6CF1

x
B6CF1

F2

B6CF1

B6CF2

RMGs-Congnicos

Elecciones de controles
No consanguneas
Parentales en heterocigosis
Los WT CONTROLES

Hbridos
Primera generacin
Los F1 son CONTROL

Consanguneas
Parentales en ambos
La CEPA es CONTROL

Congnicos
Parentales en ambos
La CEPA es CONTROL
Los WT CONTROLES

Mantenimiento de RMGs
Congelacin de embriones
Congelacin de esperma
Tcnicas de reproduccin asistida
X

Ncleo fundador

Colonia de expansin

A tener en cuenta

A tener en cuenta

RESUMEN
Recabar informacin gentica
Recabar informacin del fenotipo
Identificar los animales (genotipado)
Plantear los cruces dependiendo de las
necesidades y la instalacin
Analizar los animales
Evitar la variabilidad (3Rs)

Bases de datos
http://www.informatics.jax.org/mgihome/no
men/gene.shtml
http://www.informatics.jax.org/mgihome/no
men/index.shtm

Legislacin RMGs

Legislacin RMGs

Legislacin sobre animales de experimentacin

RD 1201/2005, de 10 de octubre, sobre proteccin de los animales utilizados
para experimentacin y otros fines cientficos
Ley 32/2007, de 7 de noviembre, para el cuidado de los animales, en su
explotacin, transporte, experimentacin y sacrificio, incorpora un rgimen
sancionador.
Directiva 2010/63/UE relativa a la proteccin de los animales utilizados para
fines cientficos

Legislacin sobre OMGs

Ley 9/2003 sobre rgimen jurdico de la utilizacin confinada, liberacin
voluntaria y comercializacin de OMGs.
RD 178/2004 con el reglamento para el desarrollo y ejecucin de la ley 9/2003.

Legislacin sobre bioseguridad

RD 664/1997, de 12 de mayo, sobre la proteccin de los trabajadores contra los
riesgos relacionados con la exposicin a agentes biolgicos durante el trabajo
NTP 468: Trabajo con animales de experimentacin

Legislacion RMGs
Hasta ahora, necesaria la aprobacin del CEEA y
comunicar a la autoridad para hacer un RMG: explicar
objetivos, tcnicas a realizar, n de animales, eliminacin
del dolor, etc. NO ES NECESARIO PARA SU
MANTENIMIENTO.
A partir de ahora, adems, siempre que haya un fenotipo
potencialmente daino, incluso en mutaciones
espontaneas, para el mantenimiento de RMGs ser
necesario autorizacin expresa de la autoridad
competente .

Legislacion OMGs
Objetivo: la proteccin de la salud humana y del medio
ambiente.
Designa a la Administracin General del Estado o Autonomas,
dar la autorizacin para utilizacin confinada o liberacin
controlada.
Incluye la produccin de nuevos OMGs como la multiplicacin
de OMG ya existentes con tcnicas naturales.
El transporte de animales queda expresamente encuadrado en
el concepto de utilizacin confinada de OMGs

Requisitos de un animalario con RMGs

Debe registrarse antes de iniciar la actividad por primera vez .
Debe evaluar y clasificar las actividades que se vayan a
realizar. I, II, III, IV
Posteriormente evaluar cada actividad. Si son de tipo I, es
decir de riesgo nulo o insignificante, no debern ser
comunicadas a la autoridad competente.
Cualquier otro tipo precisa comunicacin de cada
experimento a realizar en los trminos que especifica el
reglamento.

Evaluacin de un animalario con RMGs

Evaluacin de riesgos para la salud humana y el medio ambiente
(Anexo I)
Tipo I: Riesgo nulo o insignificante
Tipo II: Bajo riesgo
Tipo III: Riesgo moderado
Tipo IV: Alto riesgo
Llevar un registro de la evaluacin
Cumplir las normas especficas de higiene y seguridad en el
trabajo.
Aplicar las normas de confinamiento especificadas por el
reglamento para cada tipo de actividad.

Evaluacin de RMGs-Tipo I
OMGs que sea poco probable que el organismo de origen o el
receptor causen enfermedades a seres vivos (humanos, plantas, o
animales)
Aquellos en los que la naturaleza del vector y el material
incorporado no originen en el OMG resultante un fenotipo que
pueda causar enfermedad a seres vivos.
Aquellos en que el OMG resultante sea poco probable que pueda
causar enfermedad en el ser humano animales o plantas en caso de
exposicin accidental en el medio ambiente o efectos nocivos sobre
el medio ambiente

Medidas de confinamiento animalario con RMGs

Especificaciones

Grado de confinamiento
1

Opcion.

Exigida

Exigida

Exigida

Locales separados con puertas

bloqueables

Opcion.

Exigida

Exigida

Exigida

Locales descontaminables y faciles de

lavar (jaulas)

Opcion.

Opcion.

Exigida

Exigida

Suelos y paredes fciles de

lavar

Opcion.

Exigida
(suelo)

Exigida

Exigida

Confinamiento de animales en jaulas

corrales o cajas

Opcion.

Opcion.

Opcion.

Opcion.

Filtros en las cajas de aislamiento o

habitaciones aisladas

Opcion.

Opcion.

Exigida

Exigida

Aislamiento de la unidad de animales

Medidas de confinamiento animalario con RMGs

Prcticamente todos los RMGs son de tipo I

Todos los animalarios cumplen tipo I
Es necesario registrarse
Es necesario llevar un registro
Es necesario evaluar
El transporte es ms complejo

Gracias
Jos Manuel Snchez
Ernesto de la Cueva Bueno
Beln Pintado
The Jackson Laboratory

OLIVER SMITHIES MARIO CAPECCHI MARTIN J. EVANS