AO DE LA DIVERSIFICACIN PRODUCTIVA Y FORTALECIMIENTO DE LA

EDUCACIN

LABORATORIO DE BIOQUMICA AMBIENTAL

PRCTICA N 10
INFLUENCIA DE XENOBIOTICOS EN LA INTEGRIDAD DEL ADN
FACULTAD
INGENIERA AMBIENTAL
CURSO
BIOQUMICA AMBIENTAL
INTEGRANTES
CAMACLLANQUI HUAMANLAZO, ALEX
CANCHARI MADUEO, FRANKLIN IGNACIO
CORAHUA MITMA GIOVANA FANNY
JACAY INGA, JHAIRO ROONY
MEDINA SOLANO, MARCO ANTONIO
TURNO
10:00 am - 12:00 pm

INTRODUCCION
En el transcurso de los ltimos 150 aos el hombre ha fabricado muy diversos
compuestos qumicos con objeto de satisfacer las necesidades crecientes del
desarrollo tecnolgico y mejorar su calidad de vida. Desde el inicio de la
revolucin industrial, se estiman en ms de 120,000 las sustancias qumicas de
nueva sntesis (xenobioticos) y los subproductos derivados de stas producidos
por la actividad humana, censo que se incrementa da a da y que parece no
tener fin si se considera que se incorporan a la lista cerca de 2.000 nuevos
compuestos cada ao (Olea y Fernndez 2001). Uno de ellos es el plomo que
utilizaron a ciudad romana sin pensar que se estaban daando ellos mismos,
tanto as que produjeron daos en el material gentico.
La degradacin de los ecosistemas muchas veces se dan por estos
xenobiticos producidos por el hombre ante las necesidades de combatir contra
organismos que afectan su entorno, por ejemplo las aplicaciones de grandes
cantidades de pesticidas en zonas agrcolas contribuyen a la presencia de
sustancias txicas en el medio ambiente. Estos productos qumicos pueden
encontrar su camino en los depsitos de agua, arroyos y ros, lo que produce
un impacto adverso en la vida acutica.
Lo que veremos en la prctica es como el acetato de plomo inhibe el normal
desarrollo de las clulas en las plantas a travs de la parte radicular y lo
podremos visualizar a travs de la electroforesis.

MARCO TERICO
ELECTROFORESIS
Segn Somma y Querci (2008): la electroforesis en gel es un mtodo que se
emplea para separar macromolculas en funcin del tamao, la carga elctrica
y otras propiedades fsicas. El trmino electroforesis describe la migracin de
las partculas cargadas bajo la influencia de un campo elctrico, teniendo como
finalidad la separacin, identificacin y purificacin de fragmentos de ADN que
se presentan de rpida ya que permite diferenciar fragmentos de ADN que no
pueden separarse adecuadamente con otros procedimientos.
XENOBIOTICOS Y SU ACCIN EN EL DNA
El plomo Pb es un xenobitico inorgnico que se encuentra en el grupo de los
metales pesados: Mn, Co, Pb, Zn, Fe, Cd, Cr, As, Ni, Se, Hg, Be; ya que
xenobitico es toda sustancia ajena o extraa a los seres vivos.
Los efectos que generan los xenobiticos se pueden dar a nivel gentico como
y como consecuencia entre su interaccin produciendo as rupturas en los
genes o los procesos de formacin no llegan a concluirse por su intervencin
para ver lo que realmente como sucede se hace uso de la electroforesis, donde
los pequeos fragmentos de DNA migraran al polo opuesto por atraccin.
Los compuestos sintticos (Acetato de plomo) tienen estructuras moleculares o
secuencias de enlaces qumicos no reconocibles por los microorganismos,
stos son los llamados xenobiticos. (Schwarzenbach y col., 1993) , estos
2

compuestos orgnicos pueden ser parcialmente metabolizados o pueden ser

recalcitrantes ya que es anlogo a los aromticos clorados los cuales tienes
sustituciones especiales o estructuras complejas que son resistentes a la
biodegradacin por lo tanto representan una fuente de contaminacin
ambiental. Los compuestos xenobiticos que usualmente son resistentes a la
degradacin por especies biolgicas individuales, pueden mineralizarse por
secuencias catablicas complementarias, que se llevan a cabo entre mltiples
especies microbianas, en donde la transformacin inicial es por metabolismo
(proceso en que una sustancia puede ser biodegradada en presencia de una
fuente secundaria de carbono). (Fritsche, 1985).
El acetato de plomo como comercialmente se conoce, es un compuesto daino
ya que afecta tanto a la salud dependiendo su concentracin debido a que el
plomo es metal pesado y en plantas segn investigaciones de Lerda (1992)
que encontr que el Pb reduce el crecimiento radicular y la frecuencia de
clulas mitticas, y el incremento de la frecuencia de clulas aberrantes en A.
cepa. La intensidad del efecto est en funcin de la concentracin del Pb. La
vegetacin ejerce un papel importante en la contaminacin de la cadena
alimenticia ya que, pueden acumular trazas de elementos txicos o peligrosos
que pueden ser transferidos al hombre o a los animales (Muoz, 2007).

PROBLEMTICA
La contaminacin de suelos por metales pesados como el plomo es un
problema de alcance mundial, el cual involucra a la agricultura; es decir
aquellos vegetales como la cebolla (usado en el experimento) sufrirn
alteraciones en su DNA por efecto del plomo y La hiperacumulacin de metales
pesados en plantas no solo est inducido a que la planta est contaminada,
sino que tambin el hombre puede contraerlo por medio de la dieta de estos
productos. Los principales daos provocados por xenobiticos pueden ser:
bloqueo de la capacidad transportadora de oxigeno de la hemoglobina,
irritacin de tejidos y la interferencia en el ADN.
A esta problemtica se puede determinar cunto est fragmentado el DNA y
ese quiebre de DNA se puede hace mediante electroforesis, el cual los
resultados tendran significancia para ver el efecto del acetato del plomo en el
DNA.

OBJETIVO
Determinar que plomo inhibe el normal desarrollo de las clulas en las plantas
en la parte radicular y lo podremos visualizar a travs de la electroforesis,
determinando la integridad de la molcula de ADN.

MATERIALES

Raicillas de cebolla

Agua destilada
3

Acetato de plomo
Tubos de micro-centrifuga
Cuchara-esptula
Pinzas de reloj
Cmara electrofortica
horizontal
Buffer Tris pH 7.4

Tips amarillos y azules

Pipetas descartable
Micro-pipeta 100L
Micro-pipeta 1000 L
Tritn X-100
Lauril Sulfato
Bistures

PROCEDIMIENTO
EXPERIENCIA N1:
PREPARACIN DE LA MUESTRA
1. Colocamos una cebolla sobre un beaker de 250mL con agua de grifo, 4
das previos al desarrollo de la prctica. Seguimos las mismas
indicaciones para la preparacin de una muestra control. Muestra de
cebolla (Allium cepa) en un medio de raz flotante.
2. Agregamos 100mL de solucin de Acetato de plomo 10mM en la
Muestra Problema dos horas previas al desarrollo de la prctica.
3.
4.

Cortamos los pices de 5 raicillas (meristemos apicales) y colocamos

en tubos de micro-centrfuga (Control y Muestra Problema).
Trituramos las raicillas hasta obtener una muestra homognea.

5. Agregamos una gota de Lauril Sulfato y una gota de Triton X-100

EXPERIENCIA N2:
ELECTROFORSIS EN GEL DE AGAROSA
1. Preparamos dos placas Porta-objetos con gel de agarosa 0.5%, con
mucho cuidado mantuvimos en cada una de ellas un espacio en uno de
los extremos donde colocamos la muestra.
2. Colocamos cada homogenizado en las placas con agarosa y sellamos.
3. Introducimos las placas en la cmara electrofortica cuidando que se
encuentren en el extremo negativo.

RESULTADOS

N 6 es el tratamiento de nuestro grupo y N 7 es control utilizado en el

experimento.
ANLISIS Y DISCUSIN DE RESULTADOS
De acuerdo a los resultados de electroforesis en nuestro experimento, el tubo
control (Tubo N 7) presenta una mayor concentracin de DNA que no ha
migrado hacia el polo positivo, debido a que el DNA no est fragmentado en
partculas pequeas haciendo que sea difcil su migracin. Segn Posso
(2009) dice que: La velocidad de separacin de fragmentos de ADN por
electroforesis son reguladas por: concentracin de agarosa en el gel y el
voltaje aplicado durante la electroforesis. Entonces el resultado que se obtuvo
esta regulado por la alta concentracin de agarosa que disminuir la velocidad
de migracin del DNA fragmentado; como tambin el bajo voltaje disminuir la
velocidad de migracin.
Los metales pesados (Acetato de plomo) poseen una gran capacidad para
unirse con muy diversos tipos de molculas orgnicas. Los cidos nucleicos
(ADN y ARN) tambin resultan afectados por los metales pesados. Efecto
genotxico que puede ser catalogado en las siguientes en: mutaciones
genticas y aberraciones cromosmicas. Para el experimento el cido nucleico
fue el ADN el cual se ha visto afectado por metales pesados, siendo en el gen
en donde se producen los cambios.
El tubo tratamiento ( Tubo N6) representa una mayor velocidad de separacin
del DNA fragmentado, 4 fragmentos notorios y otros no muy asimilables a
simple vista. La trituracin es el que ha favorecido a que migren los fragmentos
de DNA, ya que mientras mas frgmentemos el DNA, mayor ser la migracin
de esta, la imagen muestra lo dicho.

https://encryptedtbn3.gstatic.com/images?q=tbn:ANd9GcQDGMEml7P5uDfYe8y3K0UT-xqxoW7LaBiNTFbzht95hpbJ1I17Kg

La electroforesis es un mtodo importante utilizado para determinacin de DNA

fragmentado, protenas y otros, que su estudio y aplicacin determinan ciertos
efectos relacionados al gen; y ya han realizado estudios Noris et al (2012), en
el cual analizan: los niveles sricos de plomo, el dao del ADN y la severidad
del autismo, en el cual el dao del ADN fue estimado por el ensayo cometa
(Electroforesis alcalina de clulas individuales).
Las races de Allium cepa en tratamiento con el acetato de plomo, es una
simulacin de la cebolla en el suelo con contenido de plomo y que esta afectar
principalmente en las races por encontrarse en constante crecimiento radicular
y mayor frecuencia de clulas mitticas. La contaminacin de los suelos por
plomo es un problema importante a nivel mundial por su impacto negativo en la
agricultura (Bocanegra et al, 2012).Los vegetales lo absorben del suelo, pero
es el pesticida que se les agrega el que contiene plomo. (Mnckeberg, 2002),
que una vez absorbido por las races de las plantas, causa efectos fitotxicos
(Bautista, 1999).

CONCLUSIONES
La parte fundamental del presente trabajo realizado fue poder experimentar los
efectos que produce los metales pesados en el material gentico, y comparar
estos resultados con los tericos. Para ello tuvimos que extrapolar los datos
tericos en un pequeo procedimiento realizado a una muestra vegetal
(cebolla), del cual podemos concluir y afirmar ciertos enunciados:

Si bien es cierto que el mtodo de la electroforesis viene hacer un

tcnica que detecta los fragmentos de ADN o sitios donde han ocurrido
procesos incompletos de la replicacin del ADN, sin embargo no
podemos afirmar a ciencia cierta que esta tcnica es 100 % segura en
poder explicar que la causa fundamental de una mala duplicacin del
ADN u otras aberraciones como la mutacin o la formacin de micro
nuclolos en la mitosis sea producto de la interaccin del acetato de
plomo con el mismo material gentico, ya que para llegar a una
afirmacin mucho ms acertada deberamos tomar en cuenta la
expresin genotpica de los genes, es all donde podemos apreciar
claramente los efectos de este contaminante txico, pero vindolo desde
un punto de vista preventivo la tcnica electrofortica tienen criterios
favorables para poder ser usada.

Ahora con respecto a nuestro presente trabajo concluimos que los datos
obtenidos siguieron o se encuentran en los mismos parmetros tericos,
sin embargo como mencionabas lneas a tras debemos considerar que
los datos obtenidos tienen un cierto grado de incertidumbre ya que no
podemos descartar que en el momento de hacer el trabajo mecnico
para poder liberar el material gentico hayamos fragmentado a este, y
teniendo en consecuencia rompimiento mecnico de cadenas simples o
de bajo peso molecular, el cual pudieron alterar nuestros resultados con
un insignificante grado de error.
CUESTIONARIO

1. Por qu los xenobiticos afectan la integridad del ADN?

Traavick menciono lo siguiente Existe xenobioticos con propiedades y
actividades biolgicas que hacen pensar que existen por lo menos dos tipos
diferentes de impactos posibles sobre el destino del ecosistema. Algunos
xenobiotico pueden actuar como mutgenos. Los mutgenos pueden hacer que
el ADN desnudo se escape o se libere con su secuencia o estructura
cambiada. Esto a su vez puede influir en la capacidad de clulas y organismos
de asimilar ADN, la transferencia horizontal y el establecimiento a largo plazo
en los ecosistemas de formas que son totalmente impredecibles para nosotros.
Se ha sabido de casos los que han ocurrido cambios menores en una
secuencia de ADN que altera el expectro de un elemento gentico transferible a
de un husped
Como ya se ha comentado en otros temas, muchos Xbs (en su mayora
carcingenos) actan en el organismo mediante la formacin de especies
reactivas de oxgeno (ROS) o a travs de la formacin de aductos con las
protenas y con el ADN. La formacin de aductos requiere la existencia de
grupos electroflicos (deficientes en electrones) en el Xb ( carcingeno) y de
centros nucleoflicos (ricos en electrones) tales como grupos amino, sulfhidrilo,
hidroxilo, presentes en otras molculas (protenas, ARN y ADN). Estos aductos
distorsionan la estructura de las protenas y/o cidos nucleicos y, por tanto, su
funcin o replicacin en su caso. En el caso del ADN, normalmente el dao
producido puede ser reparado, pero si no lo es, se introduce una base
inapropiada en la nueva cadena de ADN, lo que originara una mutacin.

REFERENCIAS:
1. Bautista, F. (1999). Introduccin al estudio de la contaminacin del suelo
por metales pesados. Universidad Autnoma de Yucatn, Mxico. 2235p
2. M. Somma, M. Querci (2008): Electroforesis en gel de agarosa; Anlisis
de la Presencia de Organismos Genticamente Modificados en Muestras
de
Alimentos
extrado
(09-06-2015)
de:
http://gmocrl.jrc.ec.europa.eu/capacitybuilding/manuals/Manual%20ES/Sesi
%C3%B3n5.pdf
3. Schwarzenbach R.P., Gschwend P.M. e Imboden D.M. (1993).
Reacciones transformaciones biolgicas. En: Ambiental Qumica
Orgnica. pp. 491-494. Publicacin Wiley-Interscience E.E.U.A
4. Noris E., M. Robinso A.,Prez A.. (2012). Niveles de plomo y dao en el
ADN en nios con trastornos del espectro autista. Instituto Nacional de
Higiene, Epidemiologa y Microbiologa, 1, 2.
5. Bocanegra, M., Alfaro, C., & Garcia, F. (. (2012). Sorcion de plomo por
cultivos vegetales in vitro con diferente grado de adaptacin a la sequa.
Universidad Autnoma de San Luis de Potos, 1, 217-223.
6. Posso, D. (2009). ELECTROFORESIS DEL ADN EN GELES DE
AGAROSA.
Disponible
en:
http://www.ivic.gob.ve/ecologia/ueg/formatos/Electroforesis%20de
%20ADN%20en%20geles%20de%20agarosa.pdf
7. Mnckeberg, F. (2002). La Amenaza del Plomo. Creces, 1, 1.
8. Lerda, A. (1992). Anyons: La mecnica cuntica de partculas con
estadsticas fraccionarios (Vol. 14). Springer Science y Business Media.
9. Olea, N., Fernndez, M. F., & Martn-Olmedo, P. (2001). Disruptores
endocrinos: el caso particular de los xenobiticos estrognicos. I
Estrgenos naturales.
10. Alexanian, R., Barlogie, B., & Fritsche, H. (1985). Beta2 microglobulin in
multiple myeloma. American journal of hematology, 20(4), 345-351.
11. Muoz, N (2007). Determinacin de plomo y cadmio en hierbas
medicinales.
Disponible
en:
http://www.ub.edu.ar/investigaciones/tesinas/275_Tesina%20Munoz.pdf
12. Traavik, T. (2000) peligro del ADN desnudo y el cido Nucleico Libre pp
29-31 . Inform a la Direccin de Gestin de la Naturaleza, Noruega