PROTOCOLO

PRUEBA DE LOMBRICES-MERCURIO A 14 DAS

Duracin: 14 das
Temperatura: 20 C
Ciclo: 24 horas.
Exposicin de luz.
Contenedores: Frascos de vidrio
Cantidad optima de muestra de suelo: 1000 g
Cantidad requerida por rplica: 200-250 g
Humedad del suelo: 35-45%
Organismo prueba Eisenia andrei o foetida
Edad del organismo: Menor de tres meses (clitelada)
Nmero de organismos por rplica: 5
Nmero de rplicas: 3
pH suelo: 5-7 rango aceptable.
Parmetros a calcular: Supervivencia, alteraciones morfolgicas.
Control positivo: cloruro de mercurio.
Control negativo: suelo limpio no contaminado

Materiales
Contaminante ->Mercurio: lo podemos encontrar en estado lquido a temperatura
ambiente, es voltil y tiene una alta capacidad para formar compuestos orgnicos
e inorgnicos. Al reaccionar en algunos ambientes se transforma en metil mercurio
un gran neurotxico que se acumula por medio de la cadena trfica. Una de las
principales fuentes de contaminacin por mercurio son los desprendimientos o
desgastes de la corteza terrestre de forma natural y la erosin causada por el
hombre en procesos industriales. El mercurio nunca desaparece del ambiente por
lo que representa una gran amenaza hacia este medio. Al encontrarlo de forma
natural en estado lquido las concentraciones del contaminante sern medidas en
ml/L.
Suelo ->Tierra negra: Es parte superficial de la corteza terrestre, biolgicamente
activa, proviene de la desintegracin o degradacin fsica o qumica de rocas y
residuos de actividades de los seres vivos que se viven sobre ella. Se caracteriza por
su color negro debido a la gran cantidad de carbono que contiene. Se encuentra

principalmente en las partes altas de los suelos con actividad orgnica. Los
elementos orgnicos que componen el humus son muy estables, es decir, su grado de
descomposicin es tan elevado que ya no se descomponen ms y no sufren
transformaciones considerables. Utilizaremos 400 g de tierra por frasco de vidrio.
Bioindicadores lombrices: Son los animales ms comunes en los suelos y
cumplen funciones como el mejoramiento de la aireacin, infiltracin y distribucin
del agua; mezcal de las fracciones orgnicas con las minerales y produccin de
un compuesto que mejora la estructura edfica y la formacin de compuestos
hmicos. El nmero de lombrices a probar recomendado es 10, pero ya que es la
primera vez que se realizar un procedimiento de este tipo el total de
bioindicadores (lombrices) que utilizaremos sern 30.
Balanza analtica es una balanza de laboratorio diseada para medir pequeas
masas, en este caso utilizaremos una digital, que puede llegar a medir hasta la
diezmilsima de gramo: 0,0001 g o 0,1 mg, en el laboratorio de la universidad
encontramos una con 3 cifras despus del punto.
Pipetas En estas pruebas las utilizaremos para transvasar pequeas porciones
de mercurio lquido; el tubo, lo llenaremos como se hace comnmente por succin
en el laboratorio encontramos pipetas de 2,3 y 5mL
Probetas las probetas las utilizaremos en caso de que la medida de mercurio sea
ms alta y no podamos hacer uso de las pipetas pero en este ensayo las
concentraciones de mililitro por litro son muy pequeas.
Frascos de vidrio Utilizaremos 3 tarros de virio pues es el material ptimo para
realizar este procedimiento en estos frascos se encontrarn las lombrices con 3
concentraciones diferentes de mercurio (liquido).

Mtodo
Para realizar la prueba con mercurio durante los 14 das planteados se debe tener en
cuenta que previamente la tierra debe estar en condiciones ptimas para el buen
desarrollo del ensayo con las lombrices algunas de estas son la temperatura que debe
estar en promedio de 11c durante las dos semanas, la humedad del suelo que debe ser
del45%, Las concentraciones de mercurio iniciales deben ser de 3 ppm mximo y por
ltimo su pH que debe ser bsico y situarse entre 6.5 y 7.
La prueba se realizar en recipientes de vidrio con una capacidad de 1000g mximo ya
que al utilizar el contaminante se requiere de un material un poco ms resistente que el
plstico, los frascos que se utilizarn se cubrirn entre las 2/3 partes de estos con los
diferentes materiales (tierra, contaminante, lombrices).
Se requieren cuatro rplicas del suelo a tratar, adems de un control negativo (suelo no
contaminado) y un control positivo (suelo con cloruro de mercurio ) para comprobar la
sensibilidad de las lombrices. El control negativo debe ser un suelo no contaminado y
con la misma textura que el suelo problema (suelo a tratar), al cual se le ajusta la
humedad de la misma forma en que se procedi para el suelo problema. Tambin se
puede utilizar como control negativo un suelo artificial.
La mortalidad en el suelo control no puede exceder el 10 %. El peso de las lombrices en
el suelo control no debe ser mayor del 20 %, en relacin con el peso inicial. Se debe
asegurar que las lombrices se encuentren saludables antes del experimento, ya qu
deben responder a los estmulos de tacto y escapar de la luz. Se debe conservar la

misma temperatura durante todo el experimento. Los resultados no se consideran

aceptables si en el control negativo, o sea sin compuestos txicos, la supervivencia es
menor del 90 %. Se debe probar la sensibilidad del organismo antes de la toma de
muestra de suelo con el control positivo. Las lombrices deben provenir de una misma
poblacin para evitar variaciones en los resultados de la prueba a realizar.

Las lombrices se emplean con frecuencia como organismos de prueba para evaluar la
toxicidad de los suelos. La especie de lombriz ms utilizada en las pruebas
estandarizadas es Eisenia andrei. Esta especie se distribuye naturalmente en casi todo el
hemisferio norte; es considerada un bioindicador de la calidad de los suelos, ya que solo
es capaz de desarrollarse y reproducirse en condiciones adecuadas de humedad (85 %),
temperatura (25 a 30 C), pH del suelo (6.5 a 7.5) y alimentacin (material orgnico
agropecuario, industrial y domstico). Adems, E. andrei es un organismo de fcil manejo
en el laboratorio, casi no contrae enfermedades, tiene un ciclo reproductivo corto (alcanza
su madurez sexual en aproximadamente 2 meses) y es extremadamente prolfica
(deposita cada 7 a 10 das una cpsula o huevo con un contenido que flucta de 2 a 20
embriones). Cuando est sexualmente madura, desarrolla una estructura sobre la
epidermis que se denomina clitelo, donde crecen los cocones o cpsulas en los cuales
uno o varios huevos son depositados. Posteriormente esta cpsula pasa hacia los
segmentos anteriores de la lombriz y es colocada en el suelo. Los juveniles se desarrollan
dentro de la cpsula y despus emergen de ella.
CONTROLES
CONTROL POSITIVO: Cloruro de mercurio
Txico de referencia (control positivo)
Reactivo en diluciones al 10%
El control positivo se usa como
referencia para establecer la
sensibilidad del organismo.
La exposicin de la lombriz a Cloruro de mercurio.
Para el control positivo se requieren por lo menos tres concentraciones
diferentes con cloruro de mercurio.
Caracterstic
as generales

Ingrediente activo: cloruro mercrio

Nombre comn (ISO-I): mercurous chloride, mercuric chloride.
Grupo qumico: inorgnico mercurial, clorado.
Nombres comerciales: Calomel, Club Root Control, Fungehex.
Frmula: Cl2Hg2*, HgCl2**
Accin: Biocida, fungicida, insecticida.
Estabilidad: se descompone levemente en la luz solar y lentamente
en condiciones acuosas.

D = P *F*C
D = Cantidad de cloruro de mercurio de referencia a aadir (mg)
P= Peso de la muestra (g)
F = Factor de conversin (1kg/1000g)
C = Concentracin del cloruro de mercurio en concentracin de agua
W = 1000 g C = 0.4 mg/kg
D = 0,4 mg de mercurio referente a 1000 gr de muestra de suelo.

Concentracin de cloruro de mercurio dosis letal vara entre 0,2 y 0,4

gramos, para control positivo.
El cloruro de mercurio (II) de masa molar 271.5 g/mol, soluble en agua,
(7.4 g/100 ml a 20C) para tratamiento.