Estudio de algunos factores que afectan el establecimiento de un mtodo

espectrofotomtrico
Objetivos
Observar el comportamiento de absorbencia que presenta algn analito
variando condiciondiciones en las que se encuentra a y as
Introduccin

Resultados
Resultados para la seleccin de tubos
Tabla No. 1. Seleccin de tubos comunes para usarlos como celdas
%T a 400
%T 400
Tubo No. nm.
Tubo No. nm
1
100
1 Blanco
2
94.2
2
23.9
3
94
3
23.7
4
94.4
4
23.9
5
94.5
5
23.2
6
94.5
6
23.1
7
94.4
7
23.9
8
94
8
23.5
9
95.1
9
23.6
10
94.5
10
23.5
11
94.4
11
23.7
12
94.3
12
23.9
13
94.7
13
23.8
14
94.5
14
23.6
15
94.5
15
23.8
Curva de calibracin
Para llenar los datos de la tabla nmero dos con respecto a los g/mL de

3+

Fe

se determino que:

En un sol 1M haban 55.8 g de

3+
Fe

Por tanto si la solucin empleada era de una concentracin de 0.00025 M

g
( 0.00025 M )=0.01395 g
( 55.8
1M )
A su vez esos 0.01395 g al ser molares se encuentran en un volumen de 1000
mL y se tomaron en la alcuota 0.05 ml, de manera que:

g
( 0.05 mL )=6.975 x 10
( 0.01395
1000 mL )

Donde finalmente esta cantidad se encontraba disuelta en un volumen final de

10 mL por tanto se dividi entre diez y para obtener la concentracin que se
pedia en g/mL se multiplic por los factores de conversin de g a g.

(6.975 x 10

10

(6.975 x 10

g
mL

) =6.975 x 10

g 1000 mg
mL
1g

)(

g
mL

g
g Fe
g Fe
=0.06975
0.07
)( 1000
)
1 mg
mL
mL

Tabla No. 2. Curva de calibracin de

3+
Tubo No.
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11

3+

Fe

por el mtodo de NHSCN

cia

Abs. Ajustada
por regresin
lineal.

0
0.014
0.035
0.058
0.104
0.179
0.378
0.604
0.703
0.952
1.200

0.013
0.023
0.038
0.0627
0.1126
0.1625
0.362
0.5615
0.761
0.9605
1.16

g
( mL
) Absorban

Fe
0
0.07
0.175
0.348
0.697
1.046
2.441
3.836
5.231
6.626
8.021

12
13

9.416
10.811

1.3594
1.5589

1.376
1.520

Ahora bien a partir de los datos de la absorbancia obtenida

experimentalmente, se construy una curva de calibracin para la obtencin
de la forma de recta que describiera este comportamiento.

2
1.5
Absorbancia

f(x) = 0.14x + 0.01

R = 1

1
0.5
0
0

10

12

Concentracin Fe (g/mL)

Grfica No. 1. Curva de calibracin de la concentracin de in frrico.

La forma de la ecuacin grficamente significa:

Absorbancia =0.013+0. 143(Conc .)

En base a el comportamiento descrito por la ecuacin anterior, se procedi a la
obtencin de la absorbancia ajustada por regresin lineal (tabla no. 2.)
empleando las concentraciones que debiesen haber sido las adicionadas de
manera que:
Ejemplo en tubo No. 4

Absorbancia =0.013+0. 143(Conc .)

Absorbancia =0.013+0.143 ( 0.348 )=0.0627

Empleando las 2 absorbancias obtenidas se prosigui a calcular la absorbancia

que produce la concentracin minima detectable mediante el uso de la
ecuacin

Y =YB+3 SB
Donde YB=a de nuestra ecuacin de la grafica obtenida anteriormente y SB la
desviacin de laresta de los blancos obtenidos.
Tabla No. 4 Valores para obtencin de absorbancia que produce la
concentracin mnima detectable
Abs.
Ajustada
(A)
0.013
0.023
0.038

P-A

(P-A)^2

1
2
3

Abs.
Prctica
(P)
0
0.014
0.035

-0.013
-0.009
-0.003

0.058

0.0627

-0.0047

0.104

0.1126

-0.0086

0.179

0.1625

0.0165

0.378

0.362

0.016

0.604

0.5615

0.0425

0.703

0.761

-0.058

10

0.952

0.9605

-0.0085

11

1.2

1.16

0.04

12

1.376

1.3594

0.0166

13

1.52

1.5589

-0.0389

0.000169
0.000081
9E-06
0.000022
09
7.396E05
0.000272
25
0.000256
0.001806
25
0.003364
7.225E05
0.0016
0.000275
56
0.001513
21
0.009514
57

Tubo No.

=
Para calcular la desviacin estndar se tiene que

S=

( P A )
n1

Entonces

S=

( P A )
n1

S=

0.00951457
=0.02815
131

Ahora como ya se conoce la desviacin estndar se procede a calcular la

absorbancia que produce la concentracin minima detectable

Y =YB+3 S B
Y =( 0.013 )+3 ( 0.02815 )=0.9745
Empleando esta absorbancia mnima se calcula la concentracin mnima con
ayuda de la forma de la ecuacin que arroj nuestra curva de calibracin.

Absorbancia =0.013+0.143(Conc .)
0.9745=0.013+ 0.143 ( Conc )
0.97450.013
g Fe
=( Conc . minima detectable )=6.72
0.143
mL

Ahora para calcular el LDD se tiene que

LDD=

3S
b

LDD=

3( 0.02815)
g Fe
=0.5905
0.143
mL

Mtodo de Ringbom para determinar el %Ep

El %T y la absortanciaen la tabala No. 3. Se realizo de la siguiente manera:
La Absorbancia pueda estar exprresada por la siguente frmula

A=2log ( %T )
Por tanto se despej el %T

A=2log ( %T )

2 A=log ( %T )
102 A =%T
Ejemplo de clculo para %T para el tubo No. 5
2 A

10

=%T

1020.1126=%T =77.16
Finalmente la Absortancia se obtiene de la resta de

Absortancia=100%T

Ejemplo para clculo de Absortancia para el Tubo No. 9

Absortancia=100%T
Absortancia=10017.34=82.66

Usando los datos de la tabla anterior

Tabla No. 3. Datos para aplicar el mtodo de Ringbom en la determinacin de

3+

Fe

por el mtodo del SCN

g
mL
Fe

3+
Tubo No.

( )

Log [

3+ Abs. 480

nm
Fe
]

1
2
3
4
5

0
0.07
0.175
0.348
0.697

-8
-1.1549
-0.7570
-0.4584
-0.1568

%T

Absortan
cia

97.05
94.84
91.62
86.56
77.16

2.95
5.16
8.38
13.44
22.84

ajustada
0.013
0.023
0.038
0.0627
0.1126

6
7
8
9
10
11
12
13

1.046
2.441
3.836
5.231
6.626
8.021
9.416
10.811

0.0195
0.3876
0.5839
0.7186
0.8213
0.9042
0.9739
1.0339

0.1625
0.362
0.5615
0.761
0.9605
1.16
1.3594
1.5589

68.79
43.45
27.45
17.34
10.95
6.92
4.37
2.76

31.21
56.55
72.55
82.66
89.05
93.08
95.63
97.24

Con ayuda de los datos de la Tabla No. 3. Se procedi a graficar lo siguiente:

120
100
80
60

Absortancia

40
20

-1.50

-1.00

-0.50

0
0.00

0.50

1.00

1.50

Log[Fe]

Grafica No. 2 Grafica de Ringbom para la determinacin de el % Ep.

En la grfica anterior se observa una lnea de tendencia la cual describe el
intervalo de experimento donde hay un comportamiento lineal. Para conocer la
pendiente de dicha tendencia se aplico la frmula de la pendiente(m) que dice
que:

m=

( y 2 y 1)
( x 2x 1)

Y se usaron los datos donde se observo este comportamiento lineal (tubos 7 y

8)

m=

(72.5556.55)
=81.5
(0.58390.3876)

Con todos los datos previamente calculados se calcul el %Ep

El cual estaba dado por la ecuacin de:

%Ep=

2.303
x 100
m

Y tendramos que el %Ep obtenido fue de:

%Ep=

2.303
x 100=2.82
81.5

Efecto de tiempo en la estabilidad del color

Tabla No. 4 Estabilidad del color respecto al tiempo
Tiempo
(min)
0
30
60
90
120

Abs. 480
nm.
0.532
0.467
0.442
0.422
0.395

0.6
0.55
0.5
Absorbancia

0.45
0.4
0.35
0

20

40

60

80

Tiempo (min)

Grafica No. 3. Estabilidad del color respecto al tiempo

Efecto de la concentracin del cromgeno

100

120

140

Para los clculos de la concentracin se realizo un procedimiento parecido al

de la tabla No.3.
Tabla No. 5. Efecto de la concentracin de SCN en la determinacin de Fe
Tubo No.

SCN
(g/mL)

1
2

87

232

870

2900

5800

8700

11600

14500

Fe
SCN/Fe
(g/mL)

Blanco
20.78853
4.185
05
55.43608
4.185
12
207.8853
4.185
05
692.9510
4.185
16
1385.902
4.185
03
2078.853
4.185
05
2771.804
4.185
06
3464.755
4.185
08

Abs 480
nm.
0.156
0.234
0.362
0.528
0.613
0.66
0.703
0.724

0.8
0.7
0.6
0.5
Absorbancia

0.4
0.3
0.2
0.1
0
0

500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000

[SCN]/[Fe]

Grfica No. 4. Efecto de Concentracin de SCN

Efecto del pH en el desarrollo de color de la reacciom entre el Fe y el SCN

Tabla No. 6. Efecto de pH

Tubo No. pH
1
2
3
4
5
6

Abs 480
nm.
Blanco
1
0.818
1
0.893
2
0.893
7
0.022
8
0.021

1
0.9
0.8
0.7
0.6
Absorbancia

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0

pH

Grafica No. 5. Efecto de pH sobre la absorbancia

Efecto de algunos aniones sobre la absorbancia absoluta

Tabla No. 7. Efecto de algunos aniones en la reaccin Fe-SCN

Anin
Fluoruro
Oxalato
Tartrato
Fosfato

480 nm
Abs.
Abs
Inicial
Final
0.865
0.423
0.872
0.175
0.853
0.838
0.855
0.801

1
0.9
0.8
0.7
0.6
Abs. Inicial

0.5

Abs Final

0.4
0.3
0.2
0.1
0

Fluoruro

Oxalato

Tartrato

Fosfato

Grafica No. 6. Comparativa de absorbancias obtenidas antes y despus de

adicionar los aniones.
Parmetros ptimos para el mtodo del sulfocionuro de amonio para
determinar fierro frrico
Tabla No. 8. Condiciones otimas para la dterminacin de Fe con NHSCN
Parmetro
pH
Tiempo
Concentracin de SCN
Limites de concentracin con %Ep
mnimo
Aniones que interfieren
Limite de deteccion del mtodo

Valor ptimo

Discusion
En cuento a los primeros resultados de la eleccin de tubos comunes para su
uso como celdas es importante tomar en cuenta que las celdas o cubetas
idealmente estas debiesen ser completamente transparentes a todas las
longitudes de onda debido a que la absorbancia de la muestra esta
cirteamnete influenciada por el de el paso ptico a travez de la superficie de la
celda , en otras palabras, la radiacin incidida no debiese ser alterada por la
superficie de el materia el cual este siendo atravesado, en su defecto como
todo esta alejado de la idealidad, al buscar superficies pticas equivalentes se
espera que si existiese difraccin producida en los tubos seleccionado,s esta

sea la misma en todos, por eso se buscaron los mismo tipos de tubos con las
mismas dimensiones (mismos dimetros). En los tubos seleccionados se
encontr que no existi una variacin importante en la transmitacia que
presentaba cada tubo seleccionado, los valores encontrados de absorbancia
para cada tubo se encontraban alrededor del 94 %T por tanto al existir esat
poca variacin se acepto que los tubos seleccionados posean superficies
pticas equivalente y adems de eso las mismas dimensiones o muy parecidas
dimensiones de dimetro interno.
En la curva de calibracin se desarrollo el procedimiento para determinar que
tan sensible era el mtodo y se obtuvo que la cantidad mnima detectada es de
0.59 microgramos de Fe por mililitro, no obstante, que el instrumento detecte
esta cantidad de analito significa que pueda ser cuantificada con veracidad en
el resultado.Para poder saber la concentracion mas baja del analito que puede
determinarse con presicion y exactitud aceptables se realizaron los mtodos
matematicos y se obtuvo que esta cantidad minima corresponde a 6.72
microgramos, Este resultado se encuntra localizado en lso puntos inermedis de
la curva de calibracin de manera que se acepta que se esta siguiendo le ley
de Beer en esta reaccin pues en los puntos intermedios tendre menor error.
DE acuerdo a los resultados obtenidos parael %Ep se obtuvo que fue de 2.82%
el cual un porcentaje aceptado pues lo mximo axeptado es el 5%, pero este
porcentaje quiere decir que
En el efecto de el tiempo en la estabilidad de color se realizaron medidas de
absorbancia cada 30 minutos, entonctres cada lectura que existi una
tendencia a la disminucin de la absorbancia regstrada, ta comportamiento nos
indica que no hay una buena establidad de el color por la reaccin formad, este
comportamiento puede atrubirse a la reversibilidad de la reaccin por una
inestabiliadd completa en la molecula. Por tanto se determino que seria
predferible leer la coloracin durante los primeros minutos debido a que fue
donde se obtuvo una mayor absorbancia.
En lso resultaods obtenidos por la variacin de la concentracion primeramente
se observo un comportamiento lineal que despus la pendiente de dicho
comportamiento se fue reduciendo, el por que de esto se explica en que la ley
de Beer es ideal para poder describir la absrocion de soluciones las cules no
tengan un alto contenido de uestra, debido a que la absrocion que presentan
estos analitos se ven afectadas por la distrubucion de las moleculas de manera
que si hay muchas molecuas interactuando, la interaccion interferira en la
capacidad de absrobcionde cada molecula disminuyndola y esto a su vez se
refleja en una desviacin a la ley de Beer.Cabe mencionar que este efecto no
solo se refere a grandes concentraciones de el analito si no tambin incluye
que existan altas concentraciones de alguna otra especie.

Con respecto el efecto de pH observado en el experimento se

https://books.google.com.mx/books?
id=yVYn7_MoaAIC&printsec=frontcover&dq=superficies+opticas+equivalentes
+espectrofotometro&hl=es&sa=X&ved=0CC0Q6AEwAGoVChMIha75p7XyAIVREomCh04bwpx#v=onepage&q&f=false
https://books.google.com.mx/books?
id=rQ8VC8_pMyQC&pg=PA250&dq=superficies+opticas+equivalentes&hl=es&
sa=X&ved=0CCMQ6AEwAGoVChMIp_a_8vDXyAIVyAmCh1Akgw7#v=onepage&q=superficies%20opticas%20equivalentes&f=false
http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2001184/lecciones/Cap10/01_01
_01.htm
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Documento_de_Apoyo:_Precision_e
n_espectrofotometria_2598.pdf
http://biblioteca.usac.edu.gt/tesis/08/08_0979_Q.pdf
http://www.saber.ula.ve/bitstream/123456789/23867/1/articulo2.pdf
http://repositorio.utp.edu.co/dspace/bitstream/11059/2080/1/628162S211.pdf
http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/scan/030351/030351-04.pdf