Practica 5

Espectrofotometra UV/Vis

equilibrio

qumico

cido base

Objetivos:
Determinar el del indicador
verde de
bromocresol por
sus espectros de absorcin en el visible y deducir el intervalo
puede usarse como indicador
del
punto final en

medicin
de
de en el
que
valoraciones

cido base.
Encontrar el punto isosbstico del
indicador
calidad del espectrofotmetro empleado.

para el

control

de

Preguntas previas:
1.- Consultar en el MERCK INDEX las propiedades qumicas, usos y toxicidades
del verde de bromocresol
3,3,5 ,5-Tetrabromo-m-cresolsulfonftalena
C21H14Br4O5S
PM: 698.05 g/mol
Riesgos especiales: Inflamable. En caso de incendio pueden formarse vapores
txicos. En caso de incendio pueden producirse: bromuro de hidrgeno,
sulfxidos. Equipo de proteccin especial para el personal de lucha contra
incendios: Permanencia en el rea de riesgo slo con ropa protectora adecuada
y con sistemas de respiracin artificiales e independientes del ambiente.
Referencias adicionales: Precipitar los vapores emergentes con agua. Evitar la
penetracin del agua de extincin en acuferos superficiales o subterrneos.
Usos:
Colorimtrico

2.- Elaborar el diagrama de = f(pH) para un par cido base de pka = 5.0.
Corroborar grficamente que para todo valor de pH se cumple que HA + A- =
1.

3.- Consultar en la bibliografa el intervalo de vire del verde de bromocresol.

Vire Amarillo : pH= 3.8, Azul : pH= 5.4
4.- De acuerdo a la
coloracin del
verde de
bromocresol en
forma
protonada y desprotonada, predecir el
intervalo
longitudes

de onda

dondese encontrar

La especie de cido HA que presenta una coloracin:

Se puede observar de 300 a 500 nm.

La especie de base A-

Se puede observar de 500 a 700 nm.

5.- Demostrar la ecuacin:

su
de

6.- Explicar por qu la relacin lleva a la determinacin del

Material y equipo:
-Bureta (25 ml)
- 7 Matraz aforado de 25ml
-1 matraz aforado de 50 ml
-1 pipeta de 4 ml
-Pinzas
-Soporte
-Tubo de ensaye
Para todo el grupo
Espectrofotmetro UV-VIS comercial, marca:_________________,
modelo:____________________
- Celda espectrofotmtrica, Estndar de 1 cm de longitud
pHmetro, marca:_________________,
modelo:____________________
Disolucin de
analito:
verde de
bromocresol F= 0.02 %(m/v).
Disolucin reguladoras de
los
niveles
de
acidez:
i.
HCL, F=0.1 M
ii.
NaOH, F=0.1 M
iii.
Solucion amortiguadora de acetatos, pH= 4.8 F= 0.1M
iv.
Solucion amortiguadora de boratos pH= 9.2 F= 0.05 M
- Disolucion amortiguadora de fuerza ionica NaCL F= 2 M
Metodologa:
La espectrofotometra UV-visible es una tcnica analtica que permite determinar
la concentracin de un compuesto en solucin. Se basa en que las molculas
absorben las radiaciones electromagnticas y a su vez que la cantidad de luz
absorbida depende de forma lineal de la concentracin. Para hacer este tipo de
medidas se emplea un espectrofotmetro, en el que se puede seleccionar la
longitud de onda de la luz que pasa por una solucin y medir la cantidad de luz
absorbida por la misma.

El fundamento de la espectroscopa se debe a la capacidad de las molculas para

absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV-visible.
Las longitudes de onda de las radiaciones que una molcula puede absorber y la
eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atmica y de las
condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza inica, constante dielctrica), por
lo que dicha tcnica constituye un valioso instrumento para la determinacin y
caracterizacin de biomolculas.
En espectroscopa el trmino luz no slo se aplica a la forma visible de radiacin
electromagntica, sino tambin a las formas UV e IR, que son invisibles. En
espectofotometra de absorbancia se utilizan las regiones del ultravioleta (UV
cercano, de 195-400 nm) y el visible (400-780 nm).
El espectro de absorcin es una representacin grfica que indica cantidad de luz
absorbida () a diferentes valores de .
A partir de una solucin diluida de un compuesto, cuya absorbancia mxima entra
dentro del rango de medida del espectrofotmetro, se ver el valor de absorbancia
a diferentes longitudes de onda frente a un blanco que contenga el disolvente de
la solucin de la muestra a caracterizar. A partir del espectro de absorcin se
obtendr el valor de al que el compuesto presenta la mayor absorbancia (max).
Dicho se utilizar a la hora de hacer determinaciones cualitativas y cuantitativas
del compuesto.
El espectro de absorcin de un cromforo depende, fundamentalmente, de la
estructura qumica de la molcula.
La

absorcin de la energa radiante de las molculas en

solucin
depende de la forma en que dichas molculas se encuentran en
equilibrio. En particular
para las
especies
que presentan
propiedades cido base
la
absorcin
de
la
luz
ser diferente
si
dicha especie
se
encuentra
protonada o no,
consecuentemente las
disoluciones de
especies
cido base
presentarn valores
de absorbancia
que dependern del
valor del
pH deequilibrio.
Los indicadores cido base son un ejemplo de la dependencia de
la
absorcin molecular de la luz y del pH de la disolucin ya que la forma
protonada del indicador presenta una coloracin y la forma desprotonada
presenta otra. La medicin de
la absorbancia, o pT ,a diferentes valores de pH
impuesto en disolucin permite deducir el valor de pKa del indicador y en
consecuencia el intervalo de pH til para que ste sea usado para indicar el punto
final de las valoraciones. Por otro lado hay que recordar que este fenmeno fue
empleado para determinar el pH de las disoluciones antes que el electrodo de
vidrio fuera desarrollado. De hecho, la determinacin espectrofotomtrica del pH
an se utiliza para calibrar electrodos selectivos
de
pH o en medios no
acuosos en los cuales dichos electrodos no
pueden
utilizarse. Por
supuesto este mtodo puede emplearse para determinar no solo el pKa de los
indicadores cido-base, sino el pKr de pares redox o complejos como es el

caso de la determinacin de Eo
de
citocromos mitocondriales y
cloroplsticos
en
bioqumica.
Otra aplicacin importante de
la absorcin y el equilibrio qumico consiste en
la determinacin
del punto isosbstico, es decir, la longitud de
onda a
la cual especie absorbe igual independientemente
de
su especiacin.
Este punto es
utilizado
en
bioqumica clnica
y
qumica
de
alimentos
como un
criterio
de
control
de
calidad
espectrofotomtrico.
Si una especie es capaz de absorber interviene en un equilibrio de cido- base, la
ley de Beer deja de cumplirse a menos que el pH y la fuerza inica se mantengan
constantes. En tales casos el pH debe ser ajustado al menos tres unidades por
arriba o por abajo del valor de pKa del cido monoprotico o se pude observar la
longitud de onda de un punto isosbestico, un punto isosbestico se da la longitud
de onda de un espectro de absorcin en la que las absortividades molares de
dos especies interconvertibles capaces de absorber radiacin son iguales.

Tcnica operatoria: Espectrofotometra de absorcin en el visible.

Procedimiento experimental
a) Preparacin de la muestra:
Preparar las
disoluciones
de acuerdo a
la siguiente
tabla
Tabla 1:

RESULTADOS

Tabla 1,
aforar a 25
ml

Obtener los
espectros de
absorcin

Determinar el
pH de
cada
disolucin