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INFORME DE PRACTICA: Genero BRUCELLAS

CURSO:

MICROBIOLOGIA

SEMESTRE ACADMICO:

2015-II(VI CICLO)

UNIDAD:

ALUMNA:

VERA CARBAJAL, ANGELA YOHANA COD. 20112005

DOCENTES:
Dra Celinda Usquiano Marquez
Dra Yolanda Soto Caceres
Dra Jessica Perleche Garca
Lic. Blga. Sonia Fiestas Purizaca
Lic. Blgo. Oscar Curo Fanning

FECHA DE PRESENTACION:

UNIVERSIDAD PARTICULAR DE CHICLAYO

PIMENTEL, 27 DE OCTUBRE DEL 2015

INTRODUCCIN

Los microorganismos a diferencia de las plantas no son capaces de crear materia orgnica a
partir de elementos inorgnicos, por eso, han de nutrirse a expensa del medio en que se
encuentren, y de ah que en el interior de estos ocurran una serie de reacciones de
sntesis y de descomposicin de sustancias orgnicas, las cuales reciben el nombre
de metabolismo. A partir de estas caractersticas metablicas se realizan pruebas obtenidas
para la identificacin de microorganismos y productos obtenidos de la relacin
microorganismo-medio. Otro de los aspectos importantes de la realizacin de estas pruebas,
es que a partir de estas ayudan a dar una respuesta ante la posible contaminacin de los
alimentos por medio de microorganismos patgenos. Las tcnicas de bioqumica han
proporcionado una herramienta til para la deteccin directa de los microorganismos
contaminantes. La identificacin bacteriana se puede realizar por medio de una serie de
anlisis que necesitan de diferentes cultivos y procedimientos para llegar a identificar las
especies bacterianas que contaminan los alimentos o las aguas. A continuacin, se
desarrollan diferentes tcnicas para la identificacin de algunos microorganismos y productos
obtenidos en la relacin ya mencionada, microorganismo-medio.

MICROBIOLOGA

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OBJETIVOS
-Realizar y analizar las diferentes tcnicas de identificacin bacteriana.
-Observar e interpretar el mewtabolismo de bacteriano

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CONCLUSIONES
-Las pruebas bioqumicas convencionales, generalmente determinan la actividades una va
metablica (conjunto de reacciones qumicas) a partir de un sustrato que se incorpora en un
medio de cultivo y que la bacteria al crecer transforma o no.
-A partir de las pruebas bioqumicas de identificacin bacteriana, mediante estndares
establecidos, podemos conocer que bacteria tenemos en una muestra problema
basndonos en sus reacciones metablicas las cuales son caractersticas de cada
microorganismo.
Son funciones especficas del metabolismo:
Obtencin de energa para los procesos celulares.
Conversin de los compuestos nutritivos en precursores de los componentescelulares.
Organizacin de esas macromolculas en polmeros.
Formacin y degradacin de
funcionesespecializadas de la clula

PROCEDIMIENTO

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las

biomolculas

necesarias

para

las

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A. DEGRADACIN DE GLUCOSA, LACTOSA, SACAROSA, PRODUCCIN DE
GAS E H2S en medio Agar TSI: (Triple Azcar,
Hierro)
Medio empleado para la diferenciacin de enterobacterias en base a la
fermentacin de los hidratos de
Carbono glucosa, sacarosa y lactosa y a la produccin de cido sulfdrico
Muestra: Cultivos Bacterianos
Medio de Cultivo: TSI
Procedimiento:
Rotular los tubos con medio de TSI
Coger una asa de siembra en punta y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger un cultivo bacteriano y sembrar por picadura en el fondo y estra en la
superficie del medio TSI flameando la boca del tubo.
Incubar a 37C por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e interpretacin del TSI:
a) La degradacin de los azcares con formacin de cido (acidez positiva) se
manifiesta por un cambio de color del indicador Rojo de fenol que hace virar
-

el color del medio de anaranjado rojizo a amarillo, en caso de acidez y se

simboliza con la letra A,

o por un viraje del medio de anaranjado rojizo a rojo intenso en caso de

alcalinizacin (alcalinidad positiva) y se simboliza con la letra K.

b) La presencia de gas se manifiesta por el resquebrajamiento del medio (Gas

positivo). Se simboliza segn su intensidad de 1+ a 3+.
c) Produccin de H2S: El tiosulfato es reducido por algunos grmenes a cido
sulfhidrco, el cual reacciona con la sal frrica produciendo sulfuro de hierro que
se manifiesta por un precipitado negro en el medio (H2S positivo). Se
simboliza de acuerdo a su intensidad de 1+ a 3+.
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d) Lectura:
-

Pico alcalino/fondo alcalino (NN): No hay fermentacin de azcares.

Caracterstica de bacterias no fermentadoras.

Pico alcalino/fondo Amarillo (K/A) : Glucosa fermentada,

Ni lactosa ni sacarosa

fermentadas.
-

Pico alcalino/fondo Amarillo y negro (K/A/H 2S +): Glucosa fermentada, Ni lactosa,

ni sacarosa fermentadas,
produccin de cido sulfhdrico.

Pico Amarillo/fondo Amarillo ( A/A/H2S - ): Glucosa y lactosa y/o sacarosa

fermentadas. H2S : Negativo.

B. DESCARBOXILACION DE LA LISINA en medio agar LIA:

Esta

prueba

permite

diferenciar

los

microorganismos

que

producen

descarboxilacin o desaminacin de la lisina. Se puede detectar adems la

produccin de H2S y es ms sensible que el TSI para la deteccin H2S
Es muy utilizado para descartar Salmonella de aislamientos primaros.
Muestra: Cultivos Bacterianos
Medio de Cultivo: LIA
Procedimiento:
Rotular los tubos con medio de LIA
Coger una asa de siembra en punta y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger un cultivo bacteriano sembrar tanto por por picadura central en el
taco como por estra sobre la superficie inclinada.
Incubar a 37C por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e interpretacin del Agar LIA:

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La Lisina puede ser descarboxilada (Descarboxilacin) por microorganismos
LD positivas, que la transforman en la amina cadaverina, esto produce un
viraje del indicador Prpura de bromocresol a un color violeta intenso.
Se simboliza con la letra K.
Puesto que la descarboxilacin solo tiene lugar en un medio cido (pH
inferior a 6) es necesario que se produzca previamente la acidificacin del
medio de cultivo por fermentacin de la glucosa.
Los microorganismo LD negativos, pero fermentadores de la glucosa,
producen un viraje al amarillo de la totalidad del medio de cultivo. Se
simboliza con la letra A. La incubacin prolongada puede ocasionar una
alcalinizacin en la zona de la superficie del medio de cultivo y en
consecuencia, se produce un viraje al violeta. La produccin de H 2S produce
una coloracin negra debido al sulfuro de hierro producido.

C. DESAMINACIN DE LA LISINA en medio Agar LIA:

Las cepas del grupo Proteus y Providencia, con excepcin de algunas
cepas de Proteus morganii, desaminan la Lisina a cido alfa-cetocarbnico
formando compuestos pardorojizos en la superficie del medio con la sal de
hierro y bajo la influencia del oxgeno. Se simboliza con la letra R.

D. PRUEBA DE MOVILIDAD, HIDROGENO SULFURADO Y PRODUCCIN DE

INDOL en Medio de cultivo: Agar SIM
El medio SIM es un medio semislido destinado a verificar la movilidad,
produccin de indol y de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo. Es til para
diferenciar miembros de la familia Enterobacteriaceae.
Procedimiento:
Rotular los tubos con medio SIM
Coger una asa de siembra en punta y flamear al rojo vivo deja enfriar
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Coger un cultivo bacteriano sembrar por picadura central en la columna
vertical del medio
Incubar a 37C por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e Interpretacin:
La motilidad se pone de manifiesto por la turbidez difusa del medio de
cultivo alrededor del canal de la picadura. La no motilidad se caracteriza
por el crecimiento producido exclusivamente a lo largo de dicho canal.
La formacin de H2S se reconoce por el ennegrecimiento de la zona de
crecimiento.
La produccin de Indol pone de manifiesto la presencia de la Enzima
Triptofanasa que degradar el triptofano y liberar al medio Indol que se
combina con el aldehido (paradimetilbenzaldehido) presente en el reactivo
de Kovacs, si hay indol se formar un anillo rojo en la superficie.

E. DEGRADACIN DEL CITRATO en medio Agar Citrato de Simons

Algunas enterobacterias tienen la capacidad de usar citrato como nica
fuente de carbono y energa
Finalidad: Determinar la utilizacin del citrato por bacterias como la nica
fuente de carbono.
Medio de cultivo: Agar Citrato de Simons
Procedimiento:
Rotular los tubos con medio CITRATO
Coger una asa de siembra en punta y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger un cultivo bacteriano sembrar por estra en la superficie del medio
Incubar a 37C por 24 hrs.
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Realizar la lectura
Lectura e interpreatcin
La degradacin del citrato como nica fuente de carbono origina la
alcalinizacin del medio.
Este aumento de pH se visualiza con el indicador azul de bromotimol que
vira a azul oscuro, dando una reaccin positiva (Citrato +) si el crecimiento
es visible; y como reaccin negativa (citrato -) si no cambia de color

F. DEGRADACION DE LA UREA
Evala en las bacterias la capacidad de utilizar la urea como fuente de
nitrgeno, mediante la enzima ureasa, que degrada la urea en dixido de
carbono y amoniaco. El amoniaco acta como fuente de nitrgeno y capta
protones, transformndose en amonio y alcalinizando el medio. Contiene rojo
fenol como indicador de pH, el cual vira el medio a fucsia cuando el pH se torna
alcalino.
Finalidad: Determinar la hidrlisis de la Urea por bacterias.
Medio de cultivo: Agar Urea de Christensen
Procedimiento:
Rotular los tubos con medio Urea
Coger una asa de siembra en punta y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger un cultivo bacteriano sembrar por estra en la superficie del medio
Incubar a 37C por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e Interpretacin de los resultados.
La positividad viene dada por una coloracin rosada o fucsia en el medio.
Ejm Proteus sp es positivo para la prueba

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G. AGAR Mc CONKEY :
El Agar Mc Conkey es un medio Slido, Diferencial y Selectivo para el
aislamiento de Enterobacterias
Permite diferenciar bacterias que fermentan o no, la lactosa en muestras
clnicas, de agua y alimentos.
Las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano,
Las sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de gran parte de la
flora Gram positiva.
Procedimiento:
Rotular las placas
Coger una asa de siembra en aro y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger con el asa un cultivo bacteriano sembrar por agotamiento en la
superficie del medio
Incubar a 37C por 24 hrs.
Realizar la lectura
Fundamento:

Por fermentacin de la lactosa, se producir cido lo que disminuye el pH

alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo
neutro), y darn al medio un aspecto rosceo con un halo turbio debido al
descenso del pH provocados por los cidos biliares en las colonias. Si por el
contrario son Lactosa (-) el medio se alcalinizar por el uso de la peptona y se
tornar amarillo o incoloro

Lectura e Interpretacin

Las colonias lactosa positivas son rojas o rosadas con un halo turbio debido al

descenso de pH

Las colonias Lactosa negativas son incoloras

H. Agar XLD :

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El Agar XLD (Xilosa Lisina Desoxicolato) es un medio selectivo y de
diferenciacin,

utilizado

para

el

aislamiento

diferenciacin

de

enterobacterias patgenas especialmente del gnero Salmonella, Shigella y

Providencia.
-

La xilosa se incorpora en el medio dado que la fermentan prcticamente

todos los entricos, excepto Shigella, y esta propiedad hace posible la
diferenciacin de dicha especie

La lisina se incluye para permitir la diferenciacin del grupo Salmonella de

los organismos no patgenos, dado que, sin lisina, Salmonella fermentara
rpidamente la xilosa y no se distinguira de las especies no patgenas.
Cuando la Salmonella agota el suministro de xilosa, la lisina es atacada
por la enzima lisina descarboxilasa, lo que genera un cambio a un pH
alcalino que imita la reaccin de Shigella.

Utiliza el desoxicolato de sodio como agente selectivo y, por consiguiente,

inhibe los microorganismos gram positivos

El tiosulfato y la sal de hierro revelan la formacin de cido sulfdrico por

la precipitacin de sulfuro de hierro produciendo un color negro en las
colonias.

Procedimiento:
Rotular las placas
Coger una asa de siembra en aro y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger con el asa un cultivo bacteriano sembrar por agotamiento en la
superficie del medio
Incubar a 37C por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e interpretacin:

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La degradacin de la xilosa, lactosa y sacarosa a cido produce un viraje al
color amarillo alrededor de las colonias por su indicador rojo de fenol
(Xilosas +)

Las bacterias que descarboxilan la lisina, produciendo cadaverina, se

reconocen por la presencia de un color rojo prpura, debido al aumento de pH,

alrededor de sus colonias (Xilosas -)

I. AGAR SS (SALMONELLA Y SHIGELLA) Empleo e Interpretacin:

Medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado para el aislamiento de
especies de Salmonella y Shigella a partir de muestras clnicas, heces y de
alimentos
El verde brillante, la bilis de buey y la elevada concentracin de tiosulfato y
de citrato inhiben considerablemente la flora acompaante, bacterias Gram
positivas, la mayora de bacterias Gram negativas
Con el tiosufato e iones de hierro se pone de manifiesto la formacin de
sulfuro por el ennegrecimiento de las correspondientes colonias. Las colonias
de coliformes quedan sealadas por la demostracin de la degradacin de
lactosa a cido, a cargo del indicador de pH Rojo de fenol
Procedimiento:
Rotular las placas
Coger una asa de siembra en aro y flamear al rojo vivo deja enfriar
Coger con el asa un cultivo bacteriano sembrar por agotamiento en la
superficie del medio
Incubar a 37C por 24 hrs.
Realizar la lectura
Lectura e interpretacin:
Las colonias de grmenes Lactosa + son rosadas hasta rojas
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Las colonias de grmenes lactosa negativas son incoloras

Las colonias de microorganismos formadoras de H 2S presentan un centro

negro.

CUESTIONARIO
Por qu es necesario ajustar el pH del medio?
El pH de los medios se ajusta en el momento de la fabricacin, sin embargo, la
calidad del agua utilizada para la hidratacin o la utilizacin de medios no
recientes pueden modificar este parmetro por lo que es aconsejable verificarlo y
reajustarlo si fuera necesario. Para la verificacin del pH, se debe medir una
muestra extrada del volumen total del medio preparado a 25C, tanto en medios
lquidos como slidos. En los casos donde se deba reajustar el pH, se puede utilizar
una solucin estril de cido clorhdrico (para acidificar el medio) o hidrxido
sdico (para basificar el medio). En medios slidos, el reajuste de pH debe ser
realizado antes de la solidificacin, por lo que ser necesario utilizar una muestra
del volumen total para la medicin a 25C y otra muestra a 45C para conocer el
volumen de cido clorhdrico o hidrxido sdico que hay que aadir en un volumen
conocido.
Para qu se aade el agar-agar? Qu cualidades tiene esta sustancia?
Se aaden para preparar medios de cultivo slidos y semislidos. El agar-agar es el
agente solidificante ms comn. El agar-agar es un polisacarido de galactosa y
galactomanano que se obtiene de las algas rojas (Echema, Gelidium, Gracilaria).
Contiene un 70% de agarosa y un 30% de agaropectina. El agar-agar es el agente
solidificante ms utilizado. Su composicin qumica es indefinida y solidifica con
mayor dificultad a medida que desciende el pH. Es insoluble en agua fra, pero se

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funde y solubiliza en agua hirviendo y solidifica a 45C. Forma geles transparentes
muy estables y es degradado por muy pocas bacterias.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

-METABOLISMO BACTERIANO. Consultada el 11/09/2015 Hora: 3:00 pm. URL

disponible en archivo PDF:
https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosmicrobiolo
gia/seimc-procedimientomicrobiologia37.pdf
-FISIOLOGA Y METABOLISMO BACTERIANO. Consultada el 11/09/2015 Hora: 3:00
pm. URL disponible en archivo PDF:
http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/FisiologiayMetabolismoBacteriano.pdf

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