Bioquimica II

Manual practico de bioqumica II
UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MEXICO

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UNIVERSIDAD DEL VALLE DE MXICO

PROGRAMA DE ESTUDIOS DE LICENCIATURA
NOMBRE DE LA ASIGNATURA: BIOQUMICA II
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PRESENTACIN.
El plan general del manual contempla la referencia a los fundamentos

tericos de la qumica y metabolismo de las sustancias en estudio. Dado que
el estudiante deber presentar un protocolo y un informe para cada prctica,
se describe el anlisis en una manera lo ms completa posible, con el
nimo de que el estudiante tenga un margen amplio de independencia, y
facilitar el desarrollo de competencias en el mismo. Se da un enfoque
acerca de la finalidad del anlisis, con lo que se pretende reforzar la
enseanza de la materia.
Rubricas de evaluacin para prcticas :
Aspectos Observados Calificacin
Expresa de manera clara, las conclusiones realizadas por el

equipo, producto de sus reflexiones acerca del tema en estudio.
Utilizar correctamente el material para la realizacin de la

prctica.
Disposicin para promover una conversacin para el

mejoramiento del manejo en los trminos equivalentes al para
resolver problemas.
Valora el trabajo en equipo.
Entrega de un reporte en tiempo y forma.
Puntos Totales
Puntaje 0 = no hay evidencia, (no existe, no est claramente identificada o no hay una justificacin).
Puntaje 1= evidencia dbil, (inexacta, falla en comprensin, justificacin insuficiente).
Puntaje 2= evidencia fuerte, (exacta y claramente indica comprensin e integracin de contenidos a lo largo de cierto
perodo de tiempo o de todo un curve. Las opiniones y postura son claramente apoyadas por hechos referenciados).
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Prctica 1.
DETERMINACIN DE GLUCOSA EN SANGRE TOTAL (Enfoque alimento-energa)
Conceptos.
Glucemia
Metabolismo
Energa
ATP
Alimento
Introduccin.
La glucosa es el proveedor de energa ms importante del organismo junto con los
cidos grasos y los cuerpos cetnicos.
El principal aporte proviene del intestino (glucosa alimentaria), el hgado y los riones.
En los animales superiores el metabolismo de los carbohidratos est sujeto a
mecanismos de regulacin complejos en los que participan las hormonas, los
metabolitos y las coenzimas.
El cerebro, la mdula suprarrenal y los eritrocitos son los que ms dependen del
suministro continuo de glucosa, por que no disponen de ninguna reserva importante
de la misma.
El sistema nervioso requiere de aproximadamente 150 g de glucosa al da para
realizar sus funciones normales. La principal funcin bioqumica de la glucosa es
la de proporcionar energa para los procesos de la vida. El adenosn trifosfato (ATP)
es la fuente de energa universal para las reacciones biolgicas. La oxidacin de la
glucosa por las vas glucoltica y del cido ctrico es la fuente principal de energa
para la biosntesis del ATP.
El exceso de glucosa es almacenado en las clulas como el polmero
para demandas posteriores de energa.
glucgeno
El papel de la insulina es desviar la glucosa extracelular

a
los
sitios
de
almacenamiento intracelular en
la
forma de
macromolculas
(como el glucgeno, lpidos y protenas). Es as que la glucosa es almacenada
en tiempos de abundancia para los momentos de necesidad. Algunos minutos
despus de la ingesta de una comida, los niveles de insulina sangunea aumentan.
La glucosa y los aminocidos de la dieta tales como la leucina, isoleucina y
lisina, son estimulantes potentes de las clulas beta del pncreas haciendo que stas
segreguen insulina. La mayor parte de las clulas perifricas responden al aumento
de la glucosa sangunea con un aumento rpido del transporte de la glucosa
dentro de las clulas. De esta manera, los niveles de glucosa sangunea
aumentan solamente de un 20% a un 40% en los individuos no-diabticos. Sin
embargo, aproximadamente el 80% de la entrada de glucosa no es insulino
dependiente, ya que el cerebro, los glbulos rojos, el hgado y los intestinos no
requieren de insulina para la entrada creciente de glucosa cuando est presente
glucosa sangunea elevada. El msculo es el tejido dependiente de insulina ms
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importante. Los niveles crecientes de insulina y glucosa sanguneas inhiben

la liplisis as como a aproximadamente el 60% de la liberacin normal de glucosa
heptica.
Se han realizado estudios del comportamiento de la glucosa en sangre en sujetos
normales en la cual se puede observar que a los 30 a 60 minutos
posteriores a la ingesta de alimentos la concentracin de
glucosa alcanza su
concentracin mxima y a las dos horas vuelve a su estado basal .
Algunos minutos despus de la ingesta de una comida, los niveles de insulina
sangunea aumentan.
Las concentraciones de glucosa en el suero son aproximadamente 15% ms altas que
las concentraciones de glucosa en la sangre total esto es debido a que la
gluclisis contina en los eritrocitos.
El uso del glucmetro es de mucha utilidad en el autocontrol de pacientes
diabticos, lo que ayuda a medir una glucosa en sangre casual.
El valor calrico total diario de los alimentos deber ser entre 25 y 30
Kcal/Kg/da, para las
personas sedentarias y de 30 a 40 Kcal/Kg/da para
una persona fsicamente activa o que realiza ejercicio de manera regular.
Objetivos
Que el estudiante comprenda el metabolismo de la glucosa en sujetos
sanos
en diferentes condiciones metablicas.
Que el estudiante corrobore los cambios de glucosa que ocurren despus
de la ingesta de alimentos.
Que el alumno sea capaz de analizar e interpretar los resultados obtenidos a
partir de la determinacin de glucosa en sangre total.
Material y mtodos.
Dos sujetos sanos sedentarios y dos horas mnimas de ayuno.

Dos sujetos con actividad fsica constante y dos horas mnimas de ayuno.
Glucmetros One Touch Ultra.
Tiras reactivas One Touch Ultra [Glucosa oxidasa (Aspergillus nger)].
Dispositivo de puncin.
Lancetas estriles con discos protectores One Touch UltraSoft.
Recipiente para material punzo cortante.
Recipiente para material biolgico-infeccioso.
Jabn para manos.
Torundas de algodn con alcohol
Material (alumnos)
Dietas:
a).-Rica en carbohidratos (X g. spaghetti).
b).- Dieta rica en lpidos (hamburguesa).
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Procedimiento.
1.- Dos sujetos que consumirn una dieta rica en carbohidratos.
2.- Dos sujetos que consumirn una dieta rica en protenas.
3.- A cada uno de los sujetos en cualquiera de las condiciones y consumo de
dietas se les determinar la concentracin de glucosa en sangre total por
medio de un glucmetro en los siguientes tiempos:
0 minutos (antes de ingerir los alimentos), 30 minutos, 60 minutos y 120 minutos,
despus de ingerir los alimentos. Usando un dispositivo electrnico.
4.- Con los datos obtenidos completar el cuadro y hacer una grfica de todas las
variantes en papel milimtrico.
Resultados
Se anotaran los valores en la siguiente tabla y despus se graficaran en papel
milimtrico.
Fecha
Nombre
Edad
Sedentarismo
Tipo de dieta
Tiempo (min.)
0
30
60
120
Sexo
Actividad Fsica
Glucosa (mg/dL)
Discusin.
El alumno explicar el comportamiento de las grficas, para las diferentes personas en
estudio y las diferentes dietas consumidas.
Cuestionario.
1.- Explique como afectan las dos diferentes tipos de dietas en los valores de
glucemia?
2.- Describa las posibles rutas metablicas involucradas despus del consumo de las
diferentes dietas?
3.- Una persona sedentaria y una persona con actividad fsica, tienen la misma
actividad metablica, explique?
4.- Qu es el metabolismo?
5.- Qu es catabolismo?
6.- Qu es anabolismo?
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Prctica 2
PRODUCCION DE ACIDO PURIVICO DURANTE LA FERMENTACION DE

LA GLUCOSA POR LA LEVADURA Y SU IDENTIFICACION
Conceptos.
Gluclisis
cido pirvico
Introduccin
La gluclisis es el proceso por el cual la glucosa se degrada a Etanol y CO2, y/ a
cido lctico dependiendo del organismo que lo efecte, como siendo en el primer
caso las levaduras las responsables.
Ambas rutas de fermentacin son similares hasta la formacin de piruvato,
manteniendo idnticas las etapas de conservacin de energa que conducen a la
formacin de ATP.
La gluclisis no solo es la ruta principal para el metabolismo de la glucosa que
conduce a la produccin de Acetil-Co-A y a su oxidacin en el ciclo del cido ctrico,
sino que tambin proporciona una va importante para metabolizar fructosa y galactosa
derivada de los alimentos. La caracterstica de la gluclisis de proporcionar ATP en
ausencia de oxgeno es de significado crtico biomdico, porque permite al msculo
esqueltico hacer un trabajo sumamente eficiente an cuando la oxidacin aerbica se
vuelva insuficiente, a la vez que los tejidos con capacidad glucoltica pueden sobrevivir
a episodios de anoxia. Inversamente el msculo cardaco, que est adaptado al
trabajo aerbico, tiene una capacidad glucoltica relativamente deficiente y
supervivencia escasa bajo condiciones de isquemia. Hay un nmero pequeo de
enfermedades en las que las enzimas del sistema glucoltico como por ejemplo la
piruvatocinasa muestran actividad deficiente; estas anomalas se manifiestan
principalmente como anemias hemolticas. En las clulas cancerosas que proliferan
con rapidez, la gluclisis procede a una velocidad mucho mayor que la requerida por el
ciclo del cido ctrico, por tanto, se produce ms piruvato que el puede ser
metabolizado. El resultado es una produccin excesiva del lactato, que favorece un
entorno local relativamente cido en el tumor, situacin que puede tener implicaciones
con ciertos tipos de teraputica contra el cncer. Tambin se produce acidosis lctica
por deficiencia de piruvato deshidrogenasa.1
Demostrar la formacin de cido pirvico durante la fermentacin de la glucosa
por levadura.
Producir e identificar cido pirvico a partir de glucosa.
Observar el comportamiento reaccionante del sistema.
Material y mtodos
Tubos de ensaye de 13 x 10
Tubos de centrifuga
Tripie, rejilla, anillo, mechero.
Bao mara.
Pipetas de 5 ml. graduadas.
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Centrifuga.
Vasos de precipitados de 250 y 600 ml.
Pinzas para tubos de ensaye.
Solucin de glucosa a diversas concentraciones 0.5, 1.0, 2.0%
Suspensin de levadura al 5 % en Na2HPO4 y KH2PO4 (18 hrs de fermentacin antes
de su utilizacin).
cido tricloroactico al 10%
Nitroprusiato de sodio.
2,4 dinitrofenil-hidracina.
Hidrxido de amonio concentrado.
Hidrxido de sodio 0.1N
Sulfato de amonio slido.
Nota: un da antes de la prctica llevar su levadura para fermentarla
Material (alumnos)
Levadura
Tcnicas
Formacin de Piruvato:
Marcar dos series de tubos de 3 cada una y adicionar 3 ml. de las soluciones de
glucosa a las diferentes concentraciones 0.5, 1.0, 2.0% a ambas series.
A una de las series de tubos adicionarles 3 ml. de suspensin de levadura con fosfatos
de sodio (0.213 g/100 ml) y marcarlos como A; y a la otra serie adicionarle 3 ml. de la
suspensin de levadura con fosfatos de potasio (0.09 g/100 ml) y marcarlos como B.
Colocar todos los tubos en bao mara a 37.C por 30 minutos y aadir posteriormente
a cada tubo 1 ml. de TCA al 10% mezclado vigorosamente y centrifugar a 2500 r.p.m.
por 10 minutos. Separar el sobrenadante y desechar el precipitado.
Identificacin de Piruvato:
Reaccin con nitroprusiato de sodio
En un tubo de ensaye colocar 1 ml. del sobrenadante obtenido y hervirlo.
Adicionarle 0.5 gr. de sulfato de amonio slido y agitar.
Agregar dos gotas del reactivo y mezclar vigorosamente y dejar deslizar por las
paredes del tubo unas gotas de hidrxido de amonio concentrado, hasta la formacin
de dos capas. La formacin de un anillo verde o azul en la interfase indica afirmativo
para la prueba. Repetir lo anterior para cada uno de los tubos de ambas series.
Reaccin con 2,4 dinitrofenil-hidracina.En un tubo de ensaye colocar 1 ml. del sobrenadante obtenido y adicionar 1 ml. del
reactivo, agitar con fuerza y pasar a otro tubo la mitad de la mezcla formada, y
adicionar 1 ml. de NaOH 0.1N. La aparicin de un color rojo indica prueba afirmativa.
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Repetir lo anterior para cada uno de los tubos de ambas series. Observar la coloracin
e intensidad de la misma en cada caso.
Resultados.
Explicar sus observaciones.
Cuestionario
1. Qu finalidad tiene adicionar a la suspensin de levadura Na2HPO4 y
KH2PO4?
2. Porqu deben estar los tubos en bao mara a 37C por 30 minutos.
3. Por qu se adiciona TCA al 10%?
4. Explique y esquematice las reacciones que intervienen en la gluclisis?
5. Esquematice la molcula de cido pirvico.
6. Cuntos enlaces fosfato de alta energa surgen en el catabolismo de la
glucosa? Tanto aerbica como anaerbicamente.
7. Esquematice y explique el ciclo de Cori.
8. Qu importancia tiene la glucosa en el trabajo muscular?
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Prctica 3.
ESTUDIO DEL BOMBEO DE PROTONES POR LEVADURAS; EFECTO DE LOS
INHIBIDORES DE LA CADENA DE TRANSPORTE DE ELECTRONES Y DE LOS
DESACOPLANTES.
Conceptos.
Cadena respiratoria
Introduccin.
Las levaduras Saccharomyces cerevisiae son organismos unicelulares que se
dividen por gemacin. En comn con otras clulas eucariontes, las levaduras tienen
un ncleo en donde reside la informacingentica de la clula, mitocondrias
en donde se lleva a cabo la sntesis de ATP y un retculo endoplsmico y aparato
de Golgi que se encargan de la sntesis de protenas cuya localizacin final
es la membrana plasmtica o el exterior. A nivel de la membrana plasmtica, las
levaduras tienen una ATPasa de H+ que acopla la hidrlisis del ATP con el
bombeo de protones hacia afuera de la clula. Esta protena es semejante
desde un punto de vista estructural y funcional a la ATPasa de Na+/K+ de las clulas
animales y, al igual que la bomba de sodio/potasio, se inhibe con concentraciones
micromolares de vanadato. Como resultado de la actividad de la ATPasa de H+ en la
levadura, se genera un gradiente electroqumico de protones que se utiliza para
impulsar el transporte de nutrientes al interior de la clula, proceso catalizado por
sistemas de transporte llamados simportadores o uniportadores. Para darse una idea
de la importancia de esta enzima enla economa celular y en la energizacin de la
membrana celular, basta decir que la ATPasa de H+ consume hasta un 25 % del ATP
que se sintetiza en la clula.
Adems de esta ATPasa de H de la membrana plasmtica, las levaduras tienen otra
bomba de protones en la membrana interna de las mitocondrias, la ATP sintasa,
que se encarga de la sntesis del ATP. En contraste con la enzima de membrana
plasmtica, el flujo de protones a travs de la ATP sintasa induce la sntesis de ATP.
Uno de los inhibidores ms efectivos de esta enzima es la oligomicina.
As, se puede proponer uno de los muchos ciclos en los que interviene el ATP en
la levadura: por un lado, el ATP se sintetiza en la mitocondria por medio de la ATP
sintasa, y a nivel de la membrana plasmtica, la ATPasa de H+ lo hidroliza para
bombear protones al exterior de la clula. El factor comn en ambos casos es un
flujo de protones a travs de la membrana.
Objetivos
Que el alumno relacione el consumo de glucosa con los cambios de pH

producidos por las levaduras.
Que el alumno describa las vas por las cuales la glucosa genera los
cambios de pH.
Que el alumno interprete el efecto de los inhibidores y los

desacoplantes sobre la salida de protones.
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Material y mtodos.
Tres vasos de precipitado de 100 ml.
Pipetas de 5 y 10 ml.
Potencimetro.
Piceta para enjuagar el electrodo del potencimetro.
Levadura (Saccharomyces cerevisiae)
200 mg/ml.
Solucin de glucosa (10%) para una concentracin final de 1%.
Solucin de dinitrofenol 40 mmol/l en etanol.
Solucin de azida de sodio 400 mmol/l.
Agua destilada.
Mtodo
Experimento 1 (control)
1 .Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
2. Determinar el pH de la solucin y repetir la medicin dos veces ms con intervalos
de 3 minutos para obtener la lnea basal.
3. Adicionar 5 ml de glucosa a 10 %, agitar y medir el pH.
4. Determinar el pH de la solucin cada 5 minutos 4 veces, y luego cada 10 minutos
2 veces ms.
Experimento 2 (dinitrofenol)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.2 ml de la solucin de dinitrofenol 40 mmol/l,
concentracin final de 200 mol/l.
4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.
Experimento 3 (azida)
1. Diluir 5 ml de la levadura con 40 ml de agua destilada.
2. Aadir por decantacin (no pipetear) 0.5 ml de la solucin de azida de sodio
400 mmol/l, concentracin final de 5 mmol/l. Agitar con cuidado.
4. Esperar 5 minutos.
5. Repetir los pasos 3 y 4 del experimento control.
6. Registrar sus datos en la siguiente tabla.
Resultados
1. Hacer una grfica de cada uno de los experimentos; utilizar los valores de
las lecturas de pH contra tiempo.
2. Analizar el significado de los cambios de pH en
con dinitrofenol como desacoplante y con azida de sodio.
el
experimento
control,
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3. Hacer una relacin de las vas que producen estos cambios; tomar en cuenta
que las levaduras poseen una ATPasa de protones en la membrana mitocondrial que
se encarga de sintetizar ATP y que tienen otra ATPasa de protones en la membrana
NAD NADH ADP + Pi ATP Acetaldehdo plasmtica cuya funcin es similar a
labomba de Na /K en las clulas de los mamferos.
Cuestionario.
1. Cules son las fuentes de carbono que usa la levadura?
2. Cules son las vas metablicas que catabolizan a los carbohidratos?
3. En qu consisten la gluclisis y la fosforilacin oxidativa?
4. Cules son los productos finales del catabolismo de los carbohidratos en las
levaduras?
5. Cules son los
inhibidores de la cadena respiratoria de los sitios I, II y
III? Describa su efecto sobre el consumo de O2 y la sntesis del ATP.
6. Cul es el mecanismo por medio del cual los
protonforos desacopla la
fosforilacin oxidativa? Describa su efecto sobre el consumo de O2 y la sntesis
del ATP.
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Prctica 4
DEMOSTRACIN DE LA OXIDACIN QUMICA DE LA GLUCOSA
Conceptos
Oxigeno
pH.
Introduccin
La oxidacin de la glucosa por oxgeno, se ve
termodinmicamente a valores de pH altamente alcalinos.
favorecida
cintica
La velocidad de reaccin se encuentra limitada por el suministro de oxgeno el cual se

agota con rapidez en ausencia de agitacin.
El uso de un indicador redox, en este caso el azul de metileno, permite observar el
desarrollo de la reaccin. Cuando existe oxgeno presente en la solucin toma una
coloracin azul brillante; cuando el oxgeno se agota el indicador sufre una reduccin,
y la solucin se torna incolora.
El cambio de color observado puede repetirse al agitar peridicamente la solucin para
que esta absorba el oxgeno atmosfrico.
Qumicamente la oxidacin se define como la perdida de electrones y la reduccin
como la ganancia de ellos; esto queda ilustrado mediante la oxidacin del in ferroso a
frrico.
Fe2 + Fe3+ e
Consecuentemente, la oxidacin va siempre acompaada por la reduccin de un
aceptor de electrones. Este principio de oxidacin va siempre acompaada por la
reduccin de un aceptor de electrones.
Este principio de oxidacin-reduccin se aplica igualmente a los sistemas bioqumicos
y es un concepto importante en la comprensin de la naturaleza de la oxidacin
biolgica. Se puede apreciar que numerosas oxidaciones biolgicas pueden tener
lugar sin la participacin de oxgeno molecular, por ejemplo las deshidrogenaciones.
Aunque ciertas bacterias (anaerobias) sobreviven en ausencia de oxgeno, la vida de
los animales superiores depende en forma absoluta de su suministro.
El uso principal de ste es la respiracin, que podemos definir como el proceso por el
cual las clulas derivan energa, en forma de ATP, de la reaccin controlada del
hidrgeno con oxgeno para formar agua, adems el oxgeno molecular es incorporado
a una variedad de substratos por las enzimas designadas como oxigenasas; muchos
medicamentos, contaminantes ambientales y carcingenicos qumicos son
metabolizados por enzimas de esta clase, conocida como el sistema del citocromo. La
administracin de oxgeno puede salvar la vida de pacientes con insuficiencia
respiratoria o circulatoria. Adems, en un nmero pequeo de problemas clnicos, la
administracin de oxgeno a presiones altas ha probado ser valiosa. No obstante, la
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administracin momentnea o crnica del gas a presin alta puede causar

intoxicacin.
Objetivos
Demostrar la oxidacin qumica de la glucosa por el oxgeno, haciendo
uso de un indicador redox.
Observar in vitro el comportamiento de la glucosa e investigar
basndose en esto, lo que ocurre en los sistemas biolgicos.
Observar el comportamiento reaccionante del sistema.
Explicar sus observaciones y resultados.
Material y mtodos
Vaso de precipitado de 100 ml.
Esptula.
Agitador.
Papel pH
Glucosa en polvo.
NaOH (lentejas)
Azul de metileno.
Agua destilada.
Tcnicas
En el vaso de precipitado se coloca un volumen aproximado de 25 ml. de agua
destilada y se agrega una cantidad pequea de glucosa hasta disolverla, se aade una
cantidad igual de NaOH (lentejas) verificando que el pH de la solucin quede
altamente alcalino.
Se agrega ahora una cantidad mnima de indicador azul de metileno en polvo agitando
la solucin. La solucin toma una coloracin azul brillante porque la cantidad de
oxgeno presente es suficiente.
Detener la agitacin dejando reposar la solucin, observando el cambio de coloracin
de la misma.
Resultados
Repetir la operacin varias veces y anotar los resultados.
Cuestionario
1.
2.
3.
4.
Qu especies qumicas involucradas en la reaccin integran el par redox?

Escribe la reaccin qumica efectuada.
Escribe las estructuras qumicas de las especies redox involucradas.
Explica por qu? Se dice que la reaccin experimentada se ve favorecida a
un pH alcalino.
5. Qu destinos puede tener la glucosa?
6. A qu reacciones se les denomina exergnicas y cules endergnicas?
7. Cules son las dos principales formas de oxidacin de la glucosa?
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Practica 5.
REACCIONES OXIDO REDUCCIN EN LA FRACCIN MITOCONDRIAL DE RATA
Conceptos
Mitocondria
Sustrato
Producto
Oxido-reduccin
Introduccin.
Los alimentos que consumen las clulas animales frecuentemente son utilizados para
la formacin de nuevas molculas celulares, sin embargo, se sabe que otra parte de
de ellos es quemada por combustin con el oxigeno del medio para dar molculas de
CO2 y H2O. La finalidad de este proceso llamado respiracin es la obtencin de
molculas de alta energa (ATP) vitales para cualquier tipo de clulas. El sitio en el
cual se lleva acabo este proceso es la mitocondria, organelo relativamente fcil de
aislar en forma integra, por medio de la centrifugacin diferencial de macerados de
tejidos y demostrar su actividad respiratoria in vitro.
Para el aislamiento de este organelo, frecuente mente se tiene que trabajar a
temperaturas bajas, para evitar la destruccin de organelos, por la actividad de
hidrolasas.
Si el organelo se cultiva in vitro en presencia de un sustrato oxidable en un medio
adecuado, es capaz de utilizar el oxigeno del medio y producir molculas de CO2 y
agua.
Objetivo.
Verificara la actividad respiratoria en mitocondrias de hgado de rata, por medio
de un dispositivo sencillo en un tiempo de 3 horas.
Material y mtodos.
Solucin de sacarosa 0.25M,
Glutamato 10 mM pH 7.3
Solucin colorante verde janus
ter
Hielo
Tubos de ensayo de 6 ml
1 gradilla
Tubos de centrfuga
Mortero con pistilo
Matraz con tapn horadado
Tubo de vidrio
Cubre y porta objetos,
Pipetas pasteur
Vasos de precipitado 250 ml
Palangana para hielo
Embudo de plstico
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Gasas
Pipetas de10 ml, 5ml y 1 ml.
Probeta 250 ml.
Centrifuga
Microscopio
Balanza granataria
Mtodo
Parte 1.
Se requiere una rata alimentada con pellets, de purina para obtencin de hgado por
anestesia con ter. Todos los procedimientos se realizan en hielo.
Colocar 200 ml de sol. de sacarosa fra en un vaso de precipitado y pesarlo.
Obtener el hgado de rata rpidamente y ponerlo en el vaso de precipitado anterior.
Pesarlo. Y posteriormente, cortar el hgado en trozos sin sacarlo de la solucin.
Colocar el hgado poco a poco con la solucin en el mortero y macerarlo hasta
homogeneizarlo. (No rebasar mas de 7 minutos en este proceso)
Filtrar el homogeneizado con una gasa.
Colocar el filtrado en tubos de centrifuga y centrifugar durante 15 minutos a 3000 rpm.
Obtener el sobrenadante y centrifugar por 30 minutos a 5000 rpm.
Desechar el sobrenadante y resuspender el sedimento con 10 ml de sacarosa.
Centrifugar durante 15 minutos a 6000 rpm.
Desechar el sobrenadante y resuspender el sedimento con 1 ml de sacarosa. Unir los
sedimentos resuspendidos.
Colocar la muestra en el matraz y agregar 0.5 ml de la sol de glutamato y sellar
inmediatamente., colocando el tubo de vidrio doblado en forma de S colocando en su
interior agua tenida y marcando el nivel de la misma.
Tomar la lectura de desplazamiento de agua coloreada en el tubo y el tiempo desde
que se sello el matraz.
Parte 2
Realizar el mismo procedimiento del dispositivo colocando:
1 gramo de levadura, 5 g de azcar y 25 ml de agua destilada.
Resultados.
Comprar los datos obtenidos con la matriz mitocondrial y con la levadura.
Cuestionario.
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1.
2.
3.
4.
5.
6.
Qu es el ciclo de Krebs?
Defina una oxidacin.
Defina una reduccin.
Qu es la respiracin?
En qu estructura celular se encuentran las hidrolasas?
Qu sustancias son indispensables para que se realice la respiracin celular y
en que parte se encuentran las enzimas para este proceso?
7. Cual es el sustrato oxidante para ambas partes de la prctica?
8. Haga un esquema de la estructura mitocondial.
9. Explique brevemente el proceso mitocondrial de la respiracin celular.
10. Por qu se uso el hgado para esta prctica y no otro rgano?
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Prctica 6
ANLISIS CUANTITATIVO DE ENZIMAS

Conceptos
Catalizador: a la sustancia que, en un proceso llamado catlisis, modifica la velocidad
de una reaccin qumica
Introduccin.
Las enzimas cumplen las dos leyes comunes a todos los catalizadores: la primera es
que durante la reaccin no se alteran, y la segunda es que no desplazan la constante
de equilibrio para que se obtenga ms producto, sino que simplemente favorecen que
la misma cantidad de producto se obtenga en menos tiempo.
Las enzimas, a diferencia de los catalizadores no biolgicos, presentan una gran
especificidad, actan a temperatura ambiente y consiguen un aumento de la velocidad
de reaccin de un milln a un trilln de veces.
En toda reaccin qumica se produce una transformacin de unas sustancias iniciales,
denominadas reactivos o sustratos (S), en unas sustancias finales o productos (P).
Esta transformacin no se verifica directamente, ya que es necesario un paso
intermedio en el cual el reactivo se active, de forma que sus enlaces se debiliten y se
favorezca su ruptura.
Este paso intermedio recibe el nombre de complejo activado y requiere un aporte de
energa, generalmente en forma de calor, que se conoce como energa de activacin.
Las enzimas, una vez que han realizado la transformacin del sustrato o sustratos en
productos, se liberan rpidamente de ellos para permitir el acceso a otros sustratos.
Algunas enzimas no son activas hasta que sobre ellas actan otras enzimas o iones.
Estas enzimas se denominan zimgenos o proenzimas. Por ejemplo, el pepsingeno,
que el HCl transforma en pepsina.
En la cadena polipeptdica de una enzima se pueden distinguir tres tipos de
aminocidos:
Aminocidos estructurales, sin funcin dinmica.
Aminocidos de fijacin, encargados de establecer enlaces dbiles con el sustrato.
Constituyen el centro de fijacin de la enzima.
Aminocidos catalizadores, que se unen al sustrato mediante enlaces covalentes, de
forma que en dicho sustrato se debilita la estructura molecular favoreciendo su ruptura.
Constituyen el centro cataltico de la enzima.
Las enzimas alostricas suelen estar constituidas por varias subunidades o
protmeros. Cada protmero posee dos centros: un centro regulador y otro centro
cataltico o activo. Al unirse a este centro una molcula, el activador, modulador o
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ligando, la conformacin del protmero vara, haciendo funcional al centro cataltico.

De esta forma, la enzima alostrica pasa de un estado inhibido (T) a un estado
cataltico o activo (R). La variacin en la conformacin de un protmero se transmite a
los otros protmeros asociados hacindolos activos, efecto que se denomina
transmisin alostrica.
La Catalasa
Es una enzima que se encuentra en las clulas de los tejidos animales y vegetales. La
funcin de esta enzima en los tejidos es necesaria por que durante al metabolismo
celular, se forma una molcula toxica que es el peroxido de hidrgeno, H2O2 (agua
oxigenada).
La existencia de catalasa en los tejidos animales, se aprovecha para utilizar el agua
oxigenada como desinfectante cuando se echa sobre una herida. Como muchas de las
bacterias patgenas son anaerobias (no puede vivir con oxigeno), mueren con el
desprendimiento de oxigeno que se produce cuando la catalasa de los tejidos acta
sobre el agua oxigenada.
La Peroxidasa
Es una enzima que cataliza la oxidacin de ciertos compuestos dadores de hidrgeno,
como fenoles (guayacol, pirogalol) y aminas aromticas (o-fenilendiamina) por medio
de perxidos. El sustrato oxidable ms usado es el guayacol, que es oxidado a un
complejo coloreado de tetraguayacol en presencia de peroxidasa.
Las enzimas peroxidasas (POXs) estn ampliamente distribuidas en animales, plantas
y microorganismos. stas presentan mltiples formas isoenzimticas que difieren tanto
en la secuencia de sus aminocidos como en sus propiedades qumicas. La POXs
esta involucrada en procesos fisiolgicos relevantes de las plantas superiores tales
como lignificacin, catabolismo de auxinas, resistencia a patgenos, como as tambin
en diversos mecanismos de respuesta a situaciones de estrs.
La demostracin citoqumica de esta enzima se basa en la accin oxidante de la
peroxidasa sobre el sustrato bencidina en presencia de perxido de hidrgeno,
formndose un color caf oscuro en el sitio de la actividad de la enzima. La reaccin
positiva se visualiza por la formacin de grnulos caf oscuro en el citoplasma de los
tejidos a analizar.
La Tirosinasa
La enzima responsable del pardeamiento enzimtico recibe el nombre de
polifenoloxidasa, fenolasa o tirosinasa, en este ltimo caso especialmente cuando se
hace referencia a animales, ya que en ellos la tirosina es el principal sustrato. Tambin
se ha utilizado el trmino cresolasa, aplicado a la enzima de vegetales. La
polifenoloxidasa tiene dos actividades enzimticas, una hidroxilando monofenoles
(cresolasa) y otra oxidando difenoles a quinonas (catecolasa). Dependiendo de la
fuente, la actividad cresolasa es mayor o menor, incluso inexistente en algunos
casos. En cambio, todas las enzimas tienen actividad catecolasa. La caracterstica
estructural ms importante de estas enzimas es la presencia en su centro activo de
dos tomos de cobre, unidos cada uno de ellos a tres histidinas, que se han
conservado a lo largo de la evolucin en todas las enzimas de este tipo, desde las
bacterias al hombre. En su entorno se sitan una serie de aminocidos hidrofbicos,
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_____________________________________________________________________
con anillos aromticos, que tambin son importantes en su actividad, para la unin de
los sustratos. Los sustratos de la reaccin pueden ser monofenoles o difenoles. La
tirosina es el sustrato principal de la polifenoloxidasa en los crustceos, y tambin se
encuentra presente en vegetales como la lechuga o en los championes. En los
vegetales, el sustrato ms extendido es probablemente el cido clorognico, en el que
el grupo fenlico se encuentra unido a un resto de azcar, que se encuentra, entre
otros, en manzanas, peras, melocotones, ciruelas, uvas, paltas y papas. Las
polifenoloxidasas son tambin en muchos casos capaces de oxidar aminas aromticas
para formar o-aminofenoles
Objetivo
Determinar la presencia de enzimas en productos de origen animal o vegetal
mediante reacciones qumicas especficas.
Identificar la accin de la catalasa, peroxidasa y tirosidasa.
Material y mtodos.
Tubos de ensayo
Gradilla
Varillas de vidrio
Mechero
Cocina elctrica
Rejilla de asbesto por cocina
Vasos de precipitado de 150 250 ml (12 unidades)
Pipetas
Rallador
Cronmetro
Embudo
Papel de filtro alimentario (para infusiones filtrantes)
Gasa
Mortero
Perxido de hidrgeno (Agua Oxigenada)
Material alumnos
Papa cruda.
Trocitos de tomate
Jugo de limn
Zanahoria
Carne cruda
Rbano
Mtodo.
Se utilizar la experimentacin directa, acompaada de la observacin y la deduccin.
1 Reconocimiento de la Catalasa
1. Formar una pila de tubo segn la muestra de tejidos vegetales con las que cuente.
2. Colocar las muestras de tejidos en cada tubo
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3. Aadir 5 ml de agua oxigenada al mismo tiempo

4. Cronometrar el tiempo de reaccin de cada muestra
5. Ir observando la mayor o menor actividad, segn el tejido con el que se realice la
experiencia
6. Identificar al ms reactivo
7. Realizar esquemas de las observaciones.
2 Desnaturalizacin de la Catalasa
Mediante esta experiencia vamos a ver una propiedad fundamental de protenas, que
es la desnaturalizacin. Ya que la catalasa qumicamente es una protena, podemos
desnaturalizarla al someterla a altas temperaturas. Al perder la estructura terciaria,
perder tambin la funcin y como consecuencia su funcin cataltica, por lo que no
podr descomponer el agua oxigenada y no se observara ningn tipo de reaccin
cuando hagamos la experiencia anterior con muestras de tejidos hervidos.
3 Determinacin de la Peroxidasa
3.1 Prueba de la Bencidina:
1. Aadir a un ml de extracto acuoso filtrado de rbano 5 gotas de solucin alcohlica
de bencidina.
2. Agregar dos gotas de peroxido de hidrgeno al 0.5% y agitar suavemente.
3. Anotar los resultados.
3.2 Prueba del Pirogalol:
1. Utilizando un rallador rallar la papa fresca sobre un mortero limpio.
2. Tomar una pequea cantidad de la papa rallada sin exprimir y colocarla en un tubo
de ensayo.
3. Aadir un ml. de pirogalol al 1% y 2 gotas de perxido de hidrgeno al 2%.
4. Observar la aparicin de un precipitado. Anotar los resultados.
4 Determinacin de la Tirosinasa
1. Rallar una papa fresca y exprimirla a travs de una gasa doble e inmediatamente
filtrar el extracto en un embudo.
2. Vaciar a un tubo de ensayo un ml. del extracto y aadir 3 gotas de solucin de
tirosina.
3. Agitar el contenido del tubo y luego colocarlo en bao de agua caliente a 40C.
4. Cada dos minutos agitar el tubo de ensayo para que el lquido tenga mejor contacto
con el oxigeno del aire.
5. Observar y anotar los cambios de coloracin de la mezcla reaccionante.
Resultados
Describir lo encontrado en la experiencia realizada.
Cuestionario
1. Describa la importancia de las enzimas en el metabolismo celular.
2. Por qu los tejidos tienen diferentes tipos de enzimas para su metabolismo?
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_____________________________________________________________________
Practica 7
SEGUIMIENTO DE LOS EFECTOS DE DIFERENTES DIETAS SOBRE EL
METABOLISMO DE RATAS.
Concepto
Dieta
Nutricin
Desequilibrio metablico
Introduccin
La nutricin es la base de la propia existencia. Todos los sistemas vivos necesitan de
los alimentos y sus nutrimentos contenidos para poder garantizar funciones vitales. El
metabolismo es la funcin biolgica ms importante, fuera de la cual no se puede
hablar de existencia de vida. La alimentacin, la nutricin y el metabolismo
representan los pilares de una vida sana. Todas las enfermedades tienen un
componente metablico, por lo que son susceptibles de modificaciones beneficiosas o
perjudiciales por medio de manipulaciones alimentarias y nutricionales. Estos
elementos el mdico prctico no las domina, por lo que no puede aplicarlas para
mejorar sus resultados. Recomendamos la enseanza de la ciencia de la alimentacin
y nutricin en toda su integralidad dentro del proceso salud enfermedad.
En esencia, todos los sistemas vivos utilizan los mismos glcidos, lpidos, aminocidos
y los mismos nucletidos para construir sus macromolculas especficas y satisfacer
sus necesidades metablicas. Los ciclos metablicos de los seres vivos siguen las
mismas etapas, o comprenden reacciones alternativas que llevan a productos
similares.
Objetivo
Se identificar los efectos que producen diferentes tipos de alimentos en el
metabolismo de la rata
Se analizaran algunos productos metabolitos que se originan durante los
diferentes procesos metablicos en la rata por el consumo de diferentes alimentos.
Se analizar metabolitamente las alteraciones que producen una dieta mal
equilibrada.
Material y mtodo.
8 ratas de 200g
Diferentes procedimientos para medir y cuantificar:

Curva de tolerancia a la glucosa,
Curva de tolerancia a la insulina
cidos grasos libres
Triglicridos
Protenas totales
Urea
cido rico
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Glucogeno heptico
Grasa abdominal.
Procedimientos.
Administracin de la dieta.
Se formaran 4 grupos de 2 ratas cada uno para administrarles las siguientes dietas.
Dieta Control. Dieta comercial para roedores.
Dieta alta en grasas. La dieta comercial se enriquece con 30% de grasa de
cerdo.
Dieta alta en carbohidratos. La dieta comercial se enriquece con 30% de
azcar comercial.
Dieta alta en proteinas. La dieta comercial se enriquece con 30% protena de
huevo.
La dieta se administrara por 5 semanas antes de empezar las mediciones.
Al final del tratamiento se pesaran las organismos y se obtendran muestras de sangre
de la cola, para obtener plasma para la cuantificacion de metabolitos.
Se sacrificar el animal para cuantificar el contenido de glucogeno heptico y grasa
abdominal.
Tcnicas.
Mtodos usados.
Peso de los animales, y tejidos.
Se realiz utilizando balanzas analtica y semianaltica.
Toma de muestras de sangre.
Las muestras de sangre de la cola de las ratas se hicieron por un corte en la

punta de la misma. Para la obtencin de suero se colect la sangre en tubos y
se centrifugaron a 3500 rpm/15 min, a 2 C. Congelndolos a 20 C hasta
sus anlisis
Toma de muestras de tejido.
Los animales fueron sacrificados con eter; la toma de tejidos como hgado y grasa se
realiz inmediatamente despus del sacrificio del animal, obtenindolas en hielo seco
y congelndolas a 20 C hasta sus anlisis y peso.
Concentraciones sangunea de glucosa
La concentracin de Glu se determin empleando el mtodo del glucmetro. Se

coloc una gota de sangre directamente sobre la tira reactiva, marca OPTIUM
XCEED (Optium MediSense, Abbot Laboratorios, USA).
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_____________________________________________________________________
Mediciones protenas, urea, cido rico, cidos grasos

libres (Biuret).
Se midiran las concentraciones en suero por un mtodo enzimticocolorimtrico (Randox), (NEFA: Wako, Texas USA)
Mediciones de glucgeno heptico.
Se cuantificara por extraccin por etanol mtodo gavimtrico (Clark 1966).

Tomando el peso del rgano y lavndolo al chorro del agua, se corta en
pedazos pequeos para colocarlos en un mortero previamente sumergido en
hielo, se le aade cido tricloroactico al 10%, en proporcin de 1ml / gramo
de tejido, y se macera hasta formar una pasta homognea.
Se centrifuga el homogeneizado durante 5 minutos a 2000 rpm. y decanta el
liquido sobrenadante.
Se aaden dos volmenes de etanol 96 por volumen de sobrenadante. Se
agita la mezcla y se dej en reposo hasta que flocule el glucgeno, aadiendo
un poco de cloruro de sodio y colocndolo en bao Mara a 37 C. Se
centrifuga a 2000 rpm por 3 minutos.
Se desecha el sobrenadante y se resuspende el precipitado con 5 ml de agua
destilada, se reprecipita con dos volmenes de etanol absoluto, se centrifuga a
2000 rpm por 3 minutos.
Se decanta y se resuspende con la menor cantidad de alcohol absoluto (1-2 ml) y se
pasa a un vidrio de reloj, para dejar que se seque, por diferencia de peso del vidrio de
reloj se cuantifica el contenido de glucgeno por g de tejido
Mtodo para la realizacin de la curva de tolerancia a la

glucosa.
Se tomaron las muestras de sangre de la cola de la rata en condiciones
basales, posteriormente se administr por va intraperitoneal 3 g/kg de peso
corporal de una solucin al 30% de glucosa y las muestras de sangre se
colectaron en los tiempos 15, 30, 60 y 120 minutos despus de la
administracin (Gelardi et al. 1991). Se midi la glucemia en sangre y los
niveles de Ins en suero.
Medicin de la glucosa en sangre despus de la

administracin de insulina por va intraperitoneal (curva de
tolerancia a la insulina).
Se tomaron las muestras de sangre de la cola de la rata en condiciones
basales, posteriormente a los tiempos, 30, 60, 120 y 180 minutos despus de
la administracin de una solucin de 0.5 unidades de insulina (Eli Lilly,
Mxico) por kg de peso por va intraperitoneal (Masuzaki et al. 2001). Se midi
la glucemia en sangre y los niveles de glucagon y corticosterona en suero.
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Resultados.
Registre los resultados y grafique en papel milimtrico valores de glucemia contra
tiempo. Para las curvas de tolerancia a al glucosa e insulina.
Tiempo (min.)
0
30
60
120
Glucosa (mg/dL)
Registre los datos de los otros parmetros medidos.

Aplique una prueba estadstica para comparar los grupos en estudio.
Cuestionario.
1. Describa las posibles causas hormonales por lo cual se presenta la
intolerancia a la glucosa?
2. Metabolitamente como se presenta la intolerancia a la glucosa?
3. Cules son los rganos encargados de conservar concentraciones constantes
de glucosa y glucgeno.
4. Enumere las glndulas endocrinas que intervienen en el equilibrio entre el
glucgeno heptico y la glucosa sangunea.
5. Escriba la formula estructural del glucgeno.
6. Por qu es importante que el animal al que se le va a extraer el hgado est
vivo en ese momento?
7. En qu? Ocasiones las concentraciones de glucgeno heptico son elevadas
sin que haya dao heptico.
8. Tiene fundamento el que se consuman muchos carbohidratos en los casos de
patologa heptica.
9. Cul es la fuente ms importante de glucosa endgena?
10. En cules tejidos se realiza la va de la pentosa fosfato y para que se utiliza
sta va?
11. Mencione las concentraciones de glucgeno en los diferentes sitios orgnicos
donde se encuentra.
12. Patolgicamente cmo Se comporta la concentracin de glucgeno en un
hgado cirrtico?
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Practica 8.
LAS RUTAS METABLICAS
Introduccin.
La degradacin de la glucosa es realizada por el proceso de gluclisis en el citoplasma
por la accin del ADP obteniendo acido Pirvico, De acuerdo a las circunstancias
puede realizarse dos procesos:
1.- Sin oxigeno obtenemos el proceso de fermentacin con la obtencin de etanol o
acido lactico.
2.- Con oxigeno pasando al ciclo de Krebs obteniendo diferentes sustancia, la cual se
realiza en las mitocondrias.
La gluclisis:
Comienza con una molcula de glucosa. En este proceso, primero se invierte energa
por transferencia de un grupo fosfato desde una molcula de ATP, una por cada paso,
a la molcula de azcar. La molcula de 6 carbonos luego se escinde y, de all en
adelante, la secuencia produce energa. En cierto momento se reduce una molcula
de NAD+ a NADH e H+ almacenndose parte de la energa producida por la oxidacin
del gliceraldehdo fosfato. En los pasos finales las molculas de ADP toman energa
del sistema, fosforilndose a ATP.
Glucosa+2ATP+4ADP+2Pi+2NAD =>
2cido pirvico+2ADP+4ATP+2NADH+2H+2H2O
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_____________________________________________________________________
De esta forma, una molcula de glucosa se convierte en dos molculas de cido

pirvico. La ganancia neta, la energa recuperada, es dos molculas de ATP y dos
molculas de NADH por molcula de glucosa. Las dos molculas de cido pirvico
contienen todava una gran parte de la energa que se encontraba almacenada en la
molcula de glucosa original. La serie de reacciones que constituyen la gluclisis se
lleva a cabo virtualmente en todas las clulas vivas, desde las clulas procariticas
hasta las clulas eucariticas de nuestros propios cuerpos.
Las vias aerobicas - respiracin:
En el curso de la respiracin, las molculas de tres carbonos de cido pirvico
producido por la gluclisis son degradadas a grupos acetilo de dos carbonos, que
luego entran al ciclo de Krebs. En una serie de reacciones en el ciclo de Krebs, el
grupo acetilo de dos carbonos es oxidado completamente a dixido de carbono. En el
curso de la oxidacin de cada grupo acetilo se reducen cuatro aceptores de electrones
(tres NAD+ y un FAD) y se forma otra molcula de ATP.
El ciclo de krebs
En el ciclo de Krebs. Los carbonos donados por el grupo acetilo se oxidan a dixido de
carbono y los electrones pasan a los transportadores de electrones. Lo mismo que en
la gluclisis, en cada paso interviene una enzima especfica. La coenzima A es el nexo
entre la oxidacin del cido pirvico y el ciclo de Krebs. A modo de resumen: en el
ciclo de Krebs se producen una molcula de ATP, tres molculas de NADH y una
molcula de FADH2 que representan la produccin de energa de este ciclo. Se
necesitan dos vueltas del ciclo para completar la oxidacin de una molcula de
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_____________________________________________________________________
glucosa. As, el rendimiento energtico total del ciclo de Krebs para una molcula de
glucosa es dos molculas de ATP, seis molculas de NADH y dos molculas de
FADH. La etapa final de la respiracin es el transporte terminal de electrones, que
involucra a una cadena de transportadores de electrones y enzimas embutidas en la
membrana interna de la mitocondria. A lo largo de esta serie de transportadores de
electrones, los electrones de alta energa transportados por el NADH de la gluclisis y
por el NADH y el FADH2 del ciclo de Krebs van "cuesta abajo" hasta el oxgeno. En
tres puntos de su pasaje a lo largo de toda la cadena de transporte de electrones, se
desprenden grandes cantidades de energa libre que impulsan el bombeo de protones
(iones H+) hacia el exterior de la matriz mitocondrial. Esto crea un gradiente
electroqumico a travs de la membrana interna de la mitocondria. Cuando los
protones pasan a travs del complejo de ATP sintetasa, a medida que vuelven a fluir a
favor del gradiente electroqumico al interior de la matriz, la energa liberada se utiliza
para formar molculas de ATP a partir de ADP y fosfato inorgnico. Este mecanismo,
en virtud del cual se lleva a cabo la fosforilacin oxidativa, se conoce como
acoplamiento quimiosmtico.
En esta representacin de la cadena respiratoria, las molculas que se indican: flavina
mononucletido (FMN), coenzima Q (CoQ) y los citocromos b, c, a y a3, son los
principales transportadores de electrones de la cadena. Al menos otras nueve
molculas transportadoras funcionan como intermediarias adems de las que se
muestran aqu. Los electrones transportados por la NADH entran en la cadena cuando
son transferidos a la FMN, que entonces se reduce (azul). Casi instantneamente, el
FMN cede los electrones al CoQ. El FMN vuelve as a su forma oxidada (naranja), listo
para recibir otro par de electrones, y la CoQ se reduce. CoQ entonces pasa los
electrones al siguiente aceptor, y vuelve a su forma oxidada. El proceso se repite en
sentido descendente. Los electrones, al pasar por la cadena respiratoria, van saltando
a niveles energticos sucesivamente inferiores. Los electrones que son transportados
por el FADH2 se encuentran en un nivel energtico ligeramente inferior que los del
NADH. En consecuencia, entran en la cadena de transporte ms abajo, a la altura de
la CoQ. Los electrones finalmente son aceptados por el oxgeno, que se combina con
protones (iones hidrgeno) en solucin, y forman agua.
Los electrones que son transportados por el FADH2 se encuentran en un nivel
energtico ligeramente inferior que los del NADH. En consecuencia, entran en la
cadena de transporte ms abajo, a la altura de la CoQ. Los electrones finalmente son
aceptados por el oxgeno, que se combina con protones (iones hidrgeno) en solucin,
para formar agua.
Las vas anaerobias: En ausencia de oxgeno, el cido pirvico puede seguir una de
varias vas llamadas anaerbicas. Veremos brevemente dos de las vas anaerbicas
ms interesantes. El cido pirvico puede convertirse en etanol (alcohol etlico) o en
uno de varios cidos orgnicos diferentes, de los cuales el cido lctico es el ms
comn.
En el primer paso de la gluclisis se desprende dixido de carbono. En el segundo, se
oxida el NADH y se reduce el acetaldehdo. La mayor parte de la energa qumica de
la glucosa permanece en el alcohol, que es el producto final de la secuencia. Sin
embargo, regenerando NAD+, estos pasos permiten que la gluclisis contine, con su
pequeo, pero en algunos casos vitalmente necesarios, rendimiento de ATP.
____________________________________________________________________27

_____________________________________________________________________
Pasos por los cuales el cido pirvico, formado en la gluclisis, se convierte

anaerbicamente en etanol.
El cido lctico se forma a partir del cido pirvico, por accin de una variedad de
microorganismos y tambin por algunas clulas animales cuando el O2 es escaso o
est ausente.
Reaccin enzimtica que produce cido lctico anaerbicamente a partir de cido

pirvico en las clulas musculares.
En el curso de esta reaccin, el NADH se oxida y el cido pirvico se reduce. Las
molculas de NAD+ producidas en esta reaccin se reciclan en la secuencia
glucoltica. Sin este reciclado, la gluclisis no puede seguir adelante. La acumulacin
de cido lctico da como resultado dolor y fatiga muscular.
Otras vas catablicas y anablicas:
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_____________________________________________________________________
La mayora de los organismos no se alimentan directamente de glucosa. Otros

alimentos son degradados y convertidos a molculas que pueden entrar en esta va
central.Dado que muchas de estas sustancias, como las protenas y los lpidos,
pueden degradarse y entrar en la va central, se puede suponer que es posible el
proceso inverso, o sea, que los distintos intermediarios de la gluclisis y del ciclo de
Krebs pueden servir como precursores para la biosntesis. Y as es. Sin embargo, las
vas biosintticas, aunque son semejantes a las catablicas, se diferencian de ellas.
Hay enzimas diferentes que controlan los pasos y hay varios pasos crticos del
anabolismo que difieren de los de los procesos catablicos.
Para que ocurran las reacciones de las vas catablica y anablica debe haber un
suministro constante de molculas orgnicas que puedan ser degradadas para
producir energa y deben estar presentes molculas que sern los ladrillos de
construccin. Sin el suministro de estas molculas, las vas metablicas dejan de
funcionar y la vida del organismo finaliza. Las clulas hetertrofas (incluyendo a las
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_____________________________________________________________________
clulas hetertrofas de los vegetales, tales como las clulas de las races) dependen
de fuentes externas, especficamente de clulas auttrofas, para obtener las
molculas orgnicas que son esenciales para la vida. Las clulas auttrofas, por el
contrario, son capaces de sintetizar monosacridos a partir de molculas inorgnicas
simples y de una fuente externa de energa. Luego, estos monosacridos se utilizan
no slo para suministrar energa, sino tambin como sillares de construccin para la
variedad de molculas orgnicas que se sintetizan en las vas anablicas. Las clulas
auttrofas ms importantes, sin lugar a dudas, son las clulas fotosintticas de las
algas y las plantas que capturan la energa de la luz solar y la utilizan para sintetizar
las molculas de monosacridos de las cuales depende la vida en este planeta.
Objetivo
Reconocer la degradacin de la glucosa, dando por consiguiente el proceso de
la gluclisis y respiracin (ciclo de Krebs).
Materiales y mtodos
Matraz
Tapon de jebe con dos agujeros.
Vasos precipitados 150 250 ml (12)
pHmetro
Bureta
Varilla
Matraz aforado de 50 ml
pipeta graduada de 5,0 ml
pipeta graduada de 1,0 ml
Tubo de ensayo (12)
Gradilla
Termmetros
Agua destilada
Hidroxido de sodio
Levadura
Azul de metileno
Buffer Fosfato
Enzimas
Material alumnos.
Azcar o Uvas borgoa / Italia
Hgado de res.
Vela
Aceite comn
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Mtodo.
Se utilizar la experimentacin directa, acompaada de la observacin y la
deduccin.
1 Prctica 1
1. Realizar un macerado del hgado con ayuda del mortero, con una
adecuada cantidad de agua destilada.
2. Separar el extracto.
3. Sobre el extracto se coloca 10 ml. de buffer fosfato y 5 ml. de cloruro
de sodio al 10%.
4. Se coloca 6 ml. De extracto en tubos de ensayo.
5. Se aade 2 ml. De una solucin de azul de metileno. Mantenga un
tubo a 37C y otro a temperatura ambiente.
6. Luego observe el cambio de color del indicador y vuelva a incubar.
Repetir dos veces. Repetir el experimento dando condiciones de
anaerobiosis parcial con el aceite y anaerobiosis total con la vela.
2 Prctica 2
1. Armar los instrumentos como el diseo:
Preparacin de un fermento sin aire.
fermento con aire
Preparacin
de
un
2. Aplicar en cada envase un caldo de cultivo conformado por:

Azcar 200 g.
Agua 500 ml.
Levadura 50 gr.
3. Controlar los parmetros de pH, temperatura, acidez.
4. Por espacio de 6 das
5. Apreciar los resultados y analizar llenando la siguiente tabla:
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_____________________________________________________________________
Dia/ fecha
Inicial:
Horas de
monitoreo
pH
Acidez
% azcar
Apariencia
del caldo
Observaciones
Hora:
24
24
12
12
12
12
12
12
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
8
Resultados
Describir lo encontrado en la experiencia realizada.
Cuestionario.
1. Por qu el cido pirvico se convierte en cido lctico slo para volver a
convertirse en cido pirvico?
2. Cmo extraen energa de las grasas o de las protenas?
____________________________________________________________________32

_____________________________________________________________________
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Mdica Panamericana.
11. Lehninger Albert L. Bioqumica. Ediciones Omega. Espaa.1980.
12. MODIFICACIN a la Norma Oficial Mexicana NOM-015-SSA2-1994, Para la
prevencin, tratamiento y control de la diabetes. Listado de Normas
Oficiales Mexicanas de la Secretara de Salud
13. NORMA OFICIAL MEXICANA, NOM-015-SSA2-1994, Para la prevencin,
tratamiento y control de la diabetes mellitus en la atencin primaria. Listado
de Normas Oficiales Mexicanas de la Secretara de Salud.
14. Principios de bioqumica de Lehninger. Nelson, D.L y Cox; M.M. Edit. Omega.
2005
15. Smith, C; Marks, A. D. & Lieberman, M. (2005). Marks Basic Madical
Biochemestry. 2a Edicin. Ed. Lippincott Williams & Wilkins.
16. Treseler
Kathleen
Morrison;
Laboratorio clnico y
pruebas de diagnstico; 3 ed; trad. Dr. Jorge Mrigo; ed. El manual
moderno; Mxico, D.F, 1998.
____________________________________________________________________33

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