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GENERALIDADES
TTULO:
1. PERSONAL INVESTIGADOR:
1.1.
1.2.
1.3.
1.4.
1.5.
Nombres y Apellidos
Departamento
Facultad
Categora
Nmero matrcula
2. ASESOR:
2.1. Apellidos y Nombres
2.2. Facultad
2.3. Escuela
:
: Ciencias Agroindustriales
: Ciencias Agropecuarias
: Bachiller (o exalumno)
:
:
:
:
Ciencias Agropecuarias
Ingeniera Agroindustrial
3. TIPO DE INVESTIGACIN:
5.1. De acuerdo a la orientacin
5.2. De acuerdo a la tcnica de contratacin
: Aplicada (o Bsica).
: Experimental (o Descriptiva).
MESES
1
Presentacin y sustentacin
X
X
DURACIN
: (en meses)
FECHA DE INICIO
FECHA DE TRMINO
:
:
9.
10.
RECURSOS
10.1
Personal:
Autor
Asesor
10.2
:
:
Locales :
Laboratorio Multifuncional, Laboratorio de Tecnologa de los Productos
Agroindustriales de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad
Nacional de Trujillo
10.3
Materiales y Equipos
Materiales:
Equipos:
11.
PRESUPUESTO:
FINANCIAMIENTO:
Propio
PLAN DE INVESTIGACIN
I.
Materiales
3.2.
Metodologa
Arracacha
Almidn
pH
Acidez
Contenido de slidos solubles
Contenido de humedad
% Almidn
Hidrlisis Enzimtica
Temperatura (C)
[ ] Sustrato (azcares)
[ ] Inculo (S. cerevisiae)
pH
Fermentacin
Bioetanol
Rendimiento de etanol (g
etanol/100 g de almidn)
Densidad
Grado alcohlico
Flujogramas de produccin
El flujograma debe ir titulado como una figura y luego cada operacin ser
descrita.
Marchas analticas resumidas y referenciadas en los anexos en su totalidad.
Ejemplo:
3.1.2.
3.1.3.
Descripcin de Procesos
La fibra separada fue lavada tres veces con el objeto de recuperar pequeas cantidades de almidn que
se hubiesen podido quedar en ella.
Sedimentado
La lechada obtenida fue sedimentada en un depsito (de acero) con la finalidad de obtener almidn, el
cual por gravedad cay al fondo del depsito formando una masa slida y compacta de color blanco, para
que despus de 2 horas se proceda a separarla del agua que se encuentra en la parte superior del
depsito.
Secado
El almidn hmedo obtenido de la etapa anterior, se procedi a secarlo a una temperatura de 50 C por
un tiempo de 6 horas, con la finalidad de obtener un almidn con poca humedad final (de 8 a 10%).
Molienda
El almidn seco pas a un proceso de molienda (en un molino mecnico), para uniformizar los granulos y
dejar una harina suave.
Tamizado
Luego el almidn se tamiz (tamiz de malla N 100) con la finalidad de eliminar residuos de fibra y obtener
un producto de caractersticas homogneas.
Envasado
Finalmente el almidn se pes y luego se envas en un frasco de vidrio estril, a fin de evitar la
contaminacin por agentes fsicos, qumicos y microbiolgicos, quedando listo para su posterior uso.
3.2.3 Proceso de Obtencin de Bioetanol
La obtencin del Bioetanol para el presente trabajo se realiz siguiendo el proceso que se detalla a
continuacin y en la figura 11.
Hidrlisis Enzimtica
El almidn de arracacha fue diluido con agua destilada a una concentracin de 15 % (p/v) de almidn en
el biorreactor de tanque agitado utilizado para la etapa de hidrlisis (Figura 12), el cual tenia una
capacidad de 1.5 litros; posteriormente, el almidn se llev a ebullicin (95C) para gelatinizar los granulos
de almidn; el gelatinizado se enfri a 90C, estando ste a un pH de 7.0 se aadi la enzima a-amilasa
(BIALFA T), adems se le agreg iones de Ca ++ en cantidades de 400 mg/L para activar el funcionamiento
de dicha enzima, luego se dejo que la enzima trabaje a estas condiciones durante 60 minutos. Una vez
terminada esta primera fase de la hidrlisis, se pas al proceso de sacarificacin utilizando la enzima
glucoamilasa (GLUCOZYME), la cual trabaj a una temperatura de 55 C y un pH de 4.5 el mismo que fue
ajustado utilizando HCl 1.0 N, teniendo estas condiciones se controlo para esta enzima un tiempo de
hidrlisis de 48 horas. Luego de todo esto se da por finalizada la etapa de hidrlisis.
Figura 12. Esquema del equipo experimental utilizado para la hidrlisis enzimtica.
Inactivacin de Enzimas
El hidrolizado obtenido fue sometido nuevamente a ebullicin por espacio de 5 minutos para poder
inactivar las enzimas presentes en el medio.
Fermentacin Alcohlica
Se realiz esta etapa segn los rangos de las variables de concentracin de inoculo (Saccharomyces
Cerevisiae CECT 1319), concentracin de sustrato (glucosa), pH y temperatura de fermentacin,
establecidos para nuestro estudio (figura 09).
Las muestras preparadas para la fermentacin alcohlica se llevaron a cabo en matraces de vidrio como
reactores con una capacidad de 500 mL de la cual se us solamente 300 mL de muestra (<75% de su
capacidad), las muestras se fermentaron sin agitacin (estticos). Se coloc dentro de un ambiente
donde podamos controlar la temperatura de fermentacin; las cuales consistan en unas estufas de
programacin automtica que trabajan con una temperatura mnima de 20 C y que adems de esto
cuentan con ventilacin para mantener temperaturas menores a la temperatura ambiente (Figura 13). El
tiempo de fermentacin alcohlica para todas las muestras de nuestro experimento fue de 48 horas,
debido a que al transcurrido este tiempo ya no hubo burbujeo dentro de las muestras (liberacin de CO 2),
esto quiere decir que tampoco hubo consumo de sustrato (glucosa).
Figura 13. Esquema del equipo experimental utilizado para la fermentacin alcohlica.
Destilacin
Luego se procedi a la destilacin de la solucin para recuperar el alcohol producido durante la
fermentacin, mediante un destilador simple (Figura 14); aprovechando que el etanol tiene un punto de
ebullicin menor (78.3C) que el agua (100C), la mezcla se calent hasta que el alcohol empez subir a
la parte superior del destilador, donde lo esperaba el condensador que vuelve a enfriar a la solucin para
luego terminar esta en una perilla de recojo. Luego medimos el volumen del destilado, su densidad, el
grado alcohlico del destilado y el rendimiento final de cada una de las muestras.
Se utiliz un DCCR fraccionado de 24-1 con 4 puntos centrales. Es un planeamiento que nos ofreci
informacin en cuanto a la importancia de los efectos sobre la respuesta y si el intervalo o rango escogido
del estudio fue el ms adecuada, y an, en qu direccin debimos seguir el prximo planeamiento.
La tabla 6 presenta los niveles y los correspondientes valores superiores e inferiores originales utilizados
en el planeamiento 24-1.
Tabla 6. Valores superiores e inferiores de las variables independientes utilizadas para la primera
etapa.
Nivel
Concen
tracin
-1
2
0
5
+1
8
14
3.5
24
4.5
28.5
5.5
33
de
Inoculo (%)
Concen
tracin
de
Sustrato (%)
pH
Temper
atura (C)
Esta estrategia nos permiti reducir el nmero de ensayos que hubiese sido necesario en un DCCR
(Diseo Compuesto Central - Rotacional) completo. Esta opcin es muy importante pues nos permiti
evaluar los efectos de las variables principales con la misma seguridad en relacin a un planeamiento
compuesto con los 16 ensayos.
En la tabla 7 se presenta el diseo factorial 24-1 para la variable respuesta.
Tabla 7. Valores codificados para la variable respuesta (Rendimiento de Bioetanol).
oncentr
oncentr
acin
acin
de
de
inculo
sustrato
(%)
(%)
R
en
di
emperat
mi
ura
ent
o
(
g
eta
nol
/
10
0g
al
1
+
1
1
+
1
1
+
1
1
+
1
1
1
+
1
+
1
1
1
+
1
+
1
1
4
1
4
1
4
1
4
1
1
1
1
+
1
+
1
+
1
+
1
3
.
5
3
.
5
3
.
5
3
.
5
5
.
5
5
.
5
5
.
5
5
.
5
mi
1
3
3
3
2
4
+
1
3
3
2
4
2
4
+
1
3
3
2
5
1
4
9
8
.
5
2
8
5
2
5
2
Los valores reales de las variables independientes (Concentracin de Inculo, oncentracin de Sustrato,
pH y Temperatura) y los resultados de la respuesta (Rendimiento de Bioetanol) se ingresaron al programa
estadstico STATISTICA 6.0 para ver los efectos de cada variable en la respuesta, se analiz el valor-p
"significancia" (Tabla 8).
Tabla .8 Anlisis de los efectos de las variables.
E
f.
E
.E.
C-
C+
95%
95%
Media
[ ] de
Inoculo
[ ] de
Sustrato
pH
Temp
eratura (C)
Este anlisis permiti definir las variables que tienen efecto significativo sobre el rendimiento de bioetanol.
3.2.5.2 Segunda Etapa (Optimizacin Final)
Para buscar optimizar el rendimiento de Bioetanol en funcin de las variables significativas de la primera
etapa, se utiliz un Diseo Compuesto Central Rotable (DCCR) 2 k, incluido 2xk puntos xiales y un nmero
arbitrario de puntos centrales (4 en este trabajo), donde k es el nmero de variables (Tabla 9).
Tabla 9. Valores de a (cdigo del axial) segn el nmero de variables.
Donde:
Tabla 11. Valores codificados y reales para la variable respuesta (Rendimiento de Bioetanol).
Finalmente se construyeron superficies de respuesta para definir las regiones de inters y buscar el
mximo del rendimiento de bioetanol de almidn de arracacha morada.
3.2.7 Confirmacin Experimental de la Condiciones Optimizadas
Se realiz una corrida experimental con valores ptimos de las variables de fermentacin para comprobar
que tan lejos o cerca se encuentran de los valores reales.