Prctica #3

Laboratorio de Inmunologa

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Prctica #3
Fagocitosis
Objetivo
Que el alumno pueda ver el mecanismo de la fagocitosis mediante la utilizacin
de un frotis sanguneo, as como pueda identificar las diferentes etapas de la
fagocitosis y aplicar los conocimientos tericos en casos de dao tisular,
traumas o invasin de mltiples microorganismos o sustancias.

Introduccin
Los fagocitos son uno de los tipos de clulas de defensa del organismo humano
y de muchos otros animales, para que se pueda entender la importancia de
estas pequeas clulas, slo en un litro de sangre existen 6000 millones de
fagocitos claro que para comprender como realmente tienen un papel
fundamental para nuestra supervivencia, es saber que son y principalmente
como actan para protegernos.
La fagocitosis es un mecanismo bsico de defensa presente en la mayora de
las
especies.
En
los
mamferos est a cargo de
clulas
especializadas,
principalmente
los
polimorfonucleares
neutrfilos y los macrfagos.
Los primeros son clulas
sanguneas circulantes que
se ponen en contacto con el
material a fagocitar a travs
de la respuesta inflamatoria.
Los macrfagos provienen de
monocitos circulantes o bien
estn
distribuidos
estratgicamente
en
los
tejidos. Ambos presentan diferencias en su
Figura 1. Mecanismo de la
poder fagoctico.
fagocitosis
Los polimorfonucleares neutrfilos son especialmente efectivos durante el
inicio de infecciones por bacterias extracelulares Gram positivas y Gram
negativas. Los macrfagos participan en etapas ms tardas de la inflamacin
fagocitando bacterias y restos celulares. Son importantes en la defensa ante
bacterias intracelulares y generalmente actan en concomitancia con
respuestas inmunes adaptativas.
La fagocitosis por polimorfonucleares neutrfilos se inicia a raiz del contacto de

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esta clula con factores quimiotcticos endgenos o elaborados por
microorganismos (N-formilpptidos)(1). Esta unin permite la migracin
direccional del fagocito hacia el agente injuriante y activa el metabolismo
oxidativo celular. El reconocimiento y contacto con material a ser fagocitado
est mediado por opsoninas que pueden ser anticuerpos o el fragmento C3b
del complemento (2). La unin de la opsonina con la membrana celular gatilla
la formacin de vacuolas fagocticas y activa la enzima NADPH oxidasa la cual
comienza a generar radicales libres tales como anin superxido, ion hidroxilo
y perxido de hidrgeno. Esto sucede cuando se est formando el fagosoma
(3). Posteriormente, se produce la fusin del fagosoma con lisosomas celulares
constituyndose el fagolisosoma (4). Al vertir su contenido al fagosoma, estos
organelos aportan mieloperoxidasa que genera hipoclorito o hipoyodito a partir
del perxido de hidrgeno. El anin superxido, el ion hidroxilo, el perxido de
hidrgeno y el hipoclorito son parte de los mecanismos bactericidas oxgenodependientes. Actan sobre la membrana bacteriana produciendo peroxidacin
de lpidos, rompimiento de protenas de membrana y de uniones disulfuro entre
ellas y la formacin de uniones cruzadas entre lpidos.
Los grnulos especficos y azurfilos de los polimorfonucleares aportan tambin
diversas protenas con capacidad bacteriosttica y bactericida. Entre las
primeras se encuentran la lisozima que ataca la murena de la pared
bacteriana y la lactoferrina que priva a las bacterias de un elemento esencial
para su vida cual es el fierro. Los grnulos azurfilos aportan las protenas
catinicas microbicidas CAP 57 y CAP 37 que rompen la membrana externa de
bacterias gram-negativas. Adems, vierten al fagosoma las enzimas
proteolticas catepsina G y elastasa as como la lisozima. Este grupo de
elementos microbicidas conforman los mecanismos bactericidas oxgenoindependientes. Finalmente, las enzimas hidrolticas de los lisosomas digieren a
los microrganismos muertos (5). Durante la fagocitosis se produce
frecuentemente liberacin de enzimas lisosmicas (6) tales como las proteasas
neutras las que contribuyen a la fluidificacin de la matriz extracelular.
Asimismo aporta mediadores qumicos de la inflamacin tales como las
protenas catinicas. Estos mediadores aumentan la permeabilidad vascular en
forma directa o induciendo la liberacin de histamina en la clula cebada.
Tambin son quimiotcticos para monocitos e inhiben el movimiento de otros
neutrfilos
y
eosinfilos.
La fagocitosis por macrfagos es similar a la descrita para polimorfonucleares
neutrfilos difiriendo de esta en que carecen de mieloperoxidasa. A diferencia
de los polimorfonucleares, los macrfagos cumplen una labor fundamental en
la respuesta inmune adaptativa al ser clulas presentadoras de antgeno.

Materiales y Reactivos
Listar materiales
Material para toma de muestra
sangunea (tubo lila)
1 tubo de ensaye 12x75 (con tapn)
Incubadora o bao mara (37C)

Listar reactivos
Tincin Wright-Giemsa
Aceite de inmersin
Muestra

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Centrfuga
Portaobjetos
Microscopio
Mechero de alcohol
Asa para inoculacin de aro
Pipetas transfer

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Cepa de S. epidermidis

Procedimiento

En un tubo de ensaye,
agregar 0.5 mL de
sangre EDTA.

Esteriliza
r el asa.

Cep
a
Inocular con
la cepa.

Incubar a
37C
5
minutos

Observar al microscopio
usando el objetivo 100x
con aceite de inmersin.

Teir con WrightGiemsa.

25
minutos

Hacer un extendido de la
sangre.

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Teir con WrightGiemsa.

Resultados y Observaciones
Hacer un extendido de la
sangre.

Observar al microscopio
usando el objetivo 100x
con aceite de inmersin.

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