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Princpio .
Colesterol + O2
Oxidase
Colest-4-en-ona + H2O2
Peroxidase
2 H2O2 + Fenol + 4-Aminoantipirina
Antipirilquinonimina + 4 H2O
Os steres de colesterol so hidrolisados pela colesterol esterase a
colesterol livre e cidos graxos. O colesterol livre oxidado pela colesterol
oxidase a colest-4-en-ona e perxido de hidrognio. Na presena de
peroxidase e perxido de hidrognio, o fenol e a 4-aminoantipirina so
oxidados formando a antipirilquinonimina que tem absortividade mxima
em 500 nm.
A intensidade da cor vermelha formada na reao final diretamente
proporcional concentrao do colesterol na amostra.
Portugus - Ref.: 76
Metodologia . Enzimtico-Trinder.
Reagentes
1. 1 - Reagente 1 - Armazenar entre 2 - 8 C.
Contm tampo 50 mmol/L, pH 7,0; fenol 24 mmol/L; colato de sdio
500 mmol/L; azida sdica 15 mmol/L; 4-aminoantipirina 500 mmol/L;
colesterol esterase 250 U/L, colesterol oxidase 250 U/L e peroxidase
1000 U/L .
Para preservar o desempenho, o reagente deve permanecer fora da
geladeira somente o tempo necessrio para se obter o volume a ser
utilizado. Evitar exposio luz solar direta.
2.
4. Cronmetro.
Influncias Pr-analticas .
Interferncias
Amostra
Deve ser criado um Procedimento Operacional Padro (POP) que
estabelea procedimentos adequados para colheita, preparao e
armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros devidos amostra
podem ser muito maiores que os erros ocorridos durante o procedimento
analtico.
De modo geral, a amostra de sangue pode ser obtida com ou sem jejum,
mas altamente recomendvel que todos os ensaios dos lpides
sanguneos, incluindo o colesterol, sejam realizados em amostras
colhidas em jejum. As vantagens da utilizao de amostras colhidas em
jejum so decorrentes da padronizao da colheita, pois permitem a
realizao da determinao de outros lpides que requerem o jejum e
minimizam a interferncia da lipemia ps prandial que est
freqentemente presente em amostras obtidas sem o jejum.
Usar soro. Anticoagulantes como citrato, oxalato ou EDTA produzem
resultados falsamente diminudos. O analito estvel 7 dias entre 2 - 8 C
e 6 meses a 20 C negativos6. Homogeneizar bem as amostras lipmicas
antes de iniciar a dosagem. No utilizar amostras fortemente
hemolisadas.
Como o volume de amostra pequeno, deve-se pipetar com cuidado para
minimizar a impreciso do sistema de medio.
Portugus - Ref.: 76
Procedimento
Ver observaes 1, 2 e 3
Tomar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir:
Branco
Amostra
Padro (N 2)
Reagente 1
Teste
Padro
0,01 mL
1,0 mL
0,01 mL
1,0 mL
1,0 mL
Clculos
Absorbncia do Teste
Colesterol (mg/dL) =
x 200
Absorbncia do Padro
Exemplo
Absorbncia do Teste = 0,290
Absorbncia do Padro = 0,345
0,290
Colesterol (mg/dL) =
x 200 = 168
0,345
Os valores abaixo
substituem os valores de referncia e foram determinados a partir de
dados epidemiolgicos tratados estatisticamente, que relacionam os
nveis do colesterol com a prevalncia de doena coronariana isqumica
(DCI).
Exemplo
200
Fator =
10
= 580
0,345
Calibrao
Rastreabilidade do Sistema
O padro rastrevel ao Standard Reference Material (SRM) 911 do
National Institute of Standards and Technology (NIST).
Calibraes manuais
Obter o fator de calibrao ao usar novo lote de reagentes ou quando o
controle interno da qualidade indicar.
Sistemas automticos
Branco de reagentes: gua deionizada ou destilada, ou soluo de
cloreto de sdio 150 mmol/L (0,85%);
Padres: usar calibradores proticos. As concentraes de
Colesterol nos calibradores da linha Calibra Labtest so rastreveis ao
SRM 1951 do NIST.
Intervalo de calibraes
Deve-se recalibrar o sistema nas seguintes situaes:
Calibrao de 2 ou 3 pontos ao mudar de lote;
Calibrao de 2 ou 3 pontos quando o controle interno da qualidade
indicar.
Linearidade
O resultado da medio linear at 500 mg/dL. Quando for obtido um
valor igual ou maior que 500 mg/dL, diluir a amostra com NaCl 150
mmol/L (0,85%), realizar nova medio e multiplicar o resultado pelo
fator de diluio. Diluir a amostra de tal modo que o valor encontrado se
situe entre 150 e 300 mg/dL. Sugerimos a verificao da linearidade
metodolgica e fotomtrica, no mnimo semestralmente, utilizando
amostras com valores at 500 mg/dL.
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Adultos
<200
200 - 239
240
<40
60
<100
100 - 129
130 - 159
160 - 189
190
Crianas e Adolescentes
Colesterol Total (mg/dL)
2 a 19 anos
Desejvel
Limtrofe
Elevado
<170
170 - 199
200
Desejvel
Desejvel
40
35
Desejvel
Limtrofe
Elevado
<110
110 - 129
130
11
Caractersticas do desempenho
N
10
10
10
Mdia
175
255
357
DP
2,69
3,08
4,23
CV (%)
1,5
1,2
1,2
N
10
10
10
Mdia
173
253
353
DP
4,23
5,77
8,46
Observaes
1.
CV (%)
2,4
2,2
2,1
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Referncias
1. Alain CA, Poon LS, Cahn CSG, Richmond W, Fu PC. Clin Chem
1974;20:470.
2. Bergmeyer HU. Methods of Enzymatic Analysis, 3 edio, Verlag
Chemie:Weinhein, 1984;8:141-8.
3. Bull Org Mond Sant. 1970;43:891.
4. Fredrickson DS, Levy RJ, Lee RS. New Engl J Med 1967; 276:24, 94,
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5. Good NE, Winger GD, Winter W, Connoly TN, Izawa S, Singh RMM.
Biochemistry 1966;5:467.
6. Rifai N, Warnick GR, Dominiczak MH. Handbook of lipoprotein testing.
AACC Press: Washington, 1997:75-97.
7. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott
Laboratories, Diagnostics Reagents Division, Scarborough, Canada,
1972.
8. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27:493501.
9. Leite PF, Martinez TLR, Halpern A, Cendoroglo MS, Novazzi JP, Fonseca
FAH, Dias JCA. Risco cardiovascular: fatores metablicos e
nutricionais: diagnstico e tratamento. So Paulo: Loyola, 1994. P.56.
Informaes ao consumidor
Apresentao
Produto
Colesterol
Liquiform
Referncia
76-2/100
76-2/250
Contedo
1
2 X 100 mL
1 X 5 mL
2 X 250 mL
1 X 5 mL
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