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CENTRO TECNOLGICO
DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA QUMICA E
ENGENHARIA DE ALIMENTOS
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ENGENHARIA QUMICA
Gisanara Dors
GISANARA DORS
AGRADECIMENTOS
SUMRIO
SUMRIO
3 Reviso Bibliogrfica................................................................................. 4
3.1 Introduo......................................................................................................... 4
3.2 Efluentes da indstria de produtos avcolas..................................................... 4
3.2.1 gua no abatedouro: procedncia e tratamento....................................... 6
3.2.2 Caractersticas do efluente do abatedouro ............................................... 7
3.3 Biodegradabilidade........................................................................................... 7
3.4 Lipdeos em guas residurias....................................................................... 11
3.5 Problemas relacionados aos elevados teores de lipdeos no tratamento
anaerbio de guas residurias ........................................................................... 13
3.6 Tratamento de guas residurias utilizando enzimas .................................... 16
3.7 Enzimas.......................................................................................................... 20
3.8 Lipases ........................................................................................................... 21
3.8.1 Fontes ..................................................................................................... 22
3.8.2 Caractersticas e propriedades ............................................................... 23
3.8.3 Reaes catalisadas pelas Lipases........................................................ 23
3.8.4 Fatores que interferem no processo de hidrlise.................................... 24
3.8.5 Aplicaes das Lpases .......................................................................... 27
3.8.5.1 Detergentes.................................................................................... 27
3.8.5.2 Indstria alimentcia ....................................................................... 28
3.8.5.3 Indstria farmacutica e qumica fina............................................. 28
3.8.5.4 Hidrlise de leos e graxas ............................................................ 28
3.8.5.5 Outras aplicaes........................................................................... 30
3.9 Tratamento de guas residurias com elevados teores de lipdeos utilizando
lipases .................................................................................................................. 30
SUMRIO
4 Material e Mtodos................................................................................... 33
4.1 Introduo....................................................................................................... 33
4.2 Material........................................................................................................... 33
4.2.1 Reagentes............................................................................................... 33
4.2.2 Enzimas .................................................................................................. 33
4.2.3 Substrato................................................................................................. 34
4.2.4 Inculo .................................................................................................... 34
4.3 Equipamentos................................................................................................. 34
4.4 Procedimentos Experimentais........................................................................ 34
4.4.1 Caracterizao fsico-qumica do efluente.............................................. 34
4.4.2 Caracterizao das propriedades fsico-qumicas das preparaes
enzimticas ...................................................................................................... 35
4.4.2.1 Determinao da atividade hidroltica ............................................ 35
4.4.2.2 Influncia do pH na atividade da enzima ....................................... 36
4.4.2.3 Influncia da temperatura na atividade da enzima......................... 36
4.4.3 Hidrlise e biodigesto do efluente......................................................... 36
4.5 Anlises .......................................................................................................... 39
4.5.1 Determinao da Demanda Qumica de Oxignio (DQO)...................... 39
4.5.2 Determinao do teor de cidos graxos livres........................................ 40
4.5.3 Determinao do ndice de acidez total.................................................. 40
4.5.4 Determinao do ndice de saponificao .............................................. 41
4.5.5 Determinao de amnia........................................................................ 41
4.5.6 Determinao da concentrao de leos e graxas................................. 42
4.5.7 Determinao da alcalinidade total......................................................... 42
4.5.8 Determinao da concentrao de glicerol............................................. 43
4.5.9 Determinao dos slidos suspensos totais........................................... 43
6 Concluso................................................................................................. 68
7 Sugestes ................................................................................................. 70
SUMRIO
LISTA DE TABELAS i
NDICE DE TABELAS
LISTA DE FIGURAS ii
NDICE DE FIGURAS
Figura 19. Produo de metano do efluente tratado com 0,35% (p/v) de enzima
LKM (Agitao - 100 rpm, 35C, 31 dias). ............................................................... 52
Figura 20. Produo de metano do efluente tratado com 0,10% (p/v) de enzima
LNU (Agitao - 100 rpm, 35C, 34 dias)................................................................. 55
Figura 21. Produo de metano do efluente tratado com 0,15% (p/v) de enzima
LNU (Agitao - 100 rpm, 35C, 34 dias)................................................................. 55
Figura 22. Produo de metano do efluente tratado com 0,20% (p/v) de enzima
LNU (Agitao - 100 rpm, 35C, 34 dias)................................................................. 55
Figura 23. Produo de metano do efluente tratado com 0,25% (p/v) de enzima
LNU (Agitao - 100 rpm, 35C, 29 dias)................................................................. 55
Figura 24. Produo de metano do efluente tratado com 0,30% (p/v) de enzima
LNU (Agitao - 100 rpm, 35C, 29 dias)................................................................. 55
Figura 25. Produo de metano do efluente tratado com 0,35% (p/v) de enzima
LNU (Agitao - 100 rpm, 35C, 29 dias)................................................................. 55
Figura 26. Enzima LNU precipitada durante os ensaios de biodegradabilidade..... 56
Figura 27. Volume de metano produzido pelas enzimas (a) LKM e (b) LNU nos
ensaios de biodegradabilidade. ............................................................................... 57
Figura 28. Velocidade mdia de produo de metano (a) Lodo (b) Efluente bruto. 59
Figura 29. Representao do perfil cintico dos testes de biodegradabilidade
utilizando a enzima LKM. ......................................................................................... 60
Figura 30. Representao do perfil cintico dos testes de biodegradabilidade
utilizando a enzima LNU. ......................................................................................... 61
Figura 31. Concentrao de cidos graxos livres ao final dos ensaios de
biodegradabilidade e velocidade final de gerao de metano para as lipases LNU
(a) e LKM (b). ........................................................................................................... 64
Figura 32. Quantidade de glicerol antes do inicio e ao final dos ensaios de
biodegradabilidade para as lipases LNU (a) e LKM (b). .......................................... 65
A.E.
A.T.
AG
cidos Graxos
AGCL
AOV
BRS
Ci
CDQO
DBO
DG
Diacilglicerdeos
DQO
EDTA
ICEPA
IUBMB
LKM
LNU
Lipase Nuclear
ma
MG
Monoacilglicerdeos
MM
SST
SSV
TG
Triacilglicerdeos
UASB
Volume (L)
RESUMO v
RESUMO
ABSTRACT vii
ABSTRACT
INTRODUO - 1
1 Introduo
A atividade avcola no Brasil tem se desenvolvido satisfatoriamente nos
ltimos anos e isso pode ser comprovado pelos nmeros do setor. Em setembro de
2005, as exportaes brasileiras de carne de frango in natura totalizaram 247,725
mil toneladas, volume que representou aumento de cerca de 18% sobre o mesmo
ms de 2004. No mesmo perodo, a avicultura disponibilizou para o mercado
interno 538,6 mil toneladas de carne de frango e a produo total foi de 786 mil
toneladas. Estima-se que at o final de 2005 a produo total alcance 6,3 milhes
de toneladas, 5,5% a mais que o produzido no ano de 2004 (AVISITE, 2005). O
estado de Santa Catarina destaca-se no mercado de abate de aves no Brasil e at
o ms de agosto de 2005 foram abatidos 454,10 milhes de cabeas de aves,
segundo dados do ICEPA, 2005.
O processo de abate e industrializao de frangos gera subprodutos que,
se mal destinados ou processados, se constituem em potenciais poluentes
ambientais. O processamento e/ou tratamento dos resduos e efluentes do
abatedouro tem sido uma das grandes preocupaes da indstria avcola,
principalmente em decorrncia das restries que o mercado consumidor vem
impondo as questes de meio ambiente e da sua reutilizao (SROKA et al.,
2004).
Estes resduos lquidos so ricos especialmente em protenas e lipdeos
(AMANTE et al., 1999), os quais so os principais responsveis pelas alteraes
dos parmetros de controle ambiental como pH, slidos totais, demanda
bioqumica de oxignio (DBO), demanda qumica de oxignio (DQO), entre outros
(PEREIRA, 2004). Os lipdeos contidos nesses efluentes, alm de representarem
uma perda industrial importante, interferem negativamente nos Sistemas de
Tratamento de Efluentes.
INTRODUO - 2
OBJETIVO - 3
2 Objetivos
2.1 OBJETIVO GERAL
Estudar remoo de gorduras dos resduos gerados por indstrias avcolas
utilizando lipases pancreticas.
REVISO BIBLIOGRFICA - 4
3 Reviso Bibliogrfica
3.1 INTRODUO
Este captulo tem como objetivo fundamentar conceitos tericos utilizados
neste
trabalho.
Nesta
reviso
bibliogrfica
so
citados
vrios
trabalhos
ambiental
muito
destes
produtos
residuais
poderiam
ser
REVISO BIBLIOGRFICA - 5
REVISO BIBLIOGRFICA - 6
consiste em utilizar lipases para promover a reao de hidrlise por via seqencial
dos grupos acila no glicerdeo (HARALDSSON, 1991 apud PEREIRA, 2004). A
aplicao desta tcnica permite a reduo do tempo de residncia hidrulico e
conseqentemente do volume do reator, pois acelera a velocidade de hidrlise de
gorduras, alm de evitar problema de colmatao e entupimento do leito de lodo
em reatores anaerbios do tipo de fluxo ascendente.
Recepo
Sacrifcio
Escalda / Depenamento
Eviscerao
Resfriamento
Classificao e empacotamento
gua de limpeza.
Limpeza da planta
gua de limpeza.
REVISO BIBLIOGRFICA - 7
3.3 BIODEGRADABILIDADE
O objetivo principal da biodegradabilidade avaliar o potencial de
REVISO BIBLIOGRFICA - 8
recomendaes
importantes
devem
ser
consideradas:
-1
REVISO BIBLIOGRFICA - 9
dos fatores mais importantes a ser mantido para se obter uma boa eficincia do
processo. Na digesto anaerbia, a faixa de pH timo o resultado das diversas
reaes que ocorrem no processo. O pH no digestor funo do contedo de CO2
no gs, da concentrao de cidos volteis, alm da prpria alcalinidade da
matria prima. As bactrias envolvidas no processo de fermentao so altamente
sensveis s mudanas no pH do meio (pH na soluo do digestor). Sua queda
revela um acmulo de intermedirios cidos num nvel superior ao tolerado pela
capacidade tampo do meio, o que pode ser resultado de um desequilbrio entre a
produo e o consumo dessas substncias, decorrente da falta de equilbrio entre
as populaes. Segundo Batista (1981 apud CETESB, 2003) a faixa de operao
dos digestores em pH entre 6.0 e 8.0, tendo como ponto timo pH 7.0 7.2. Fora
destes limites, a digesto pode realizar-se, mas com menor eficincia. As possveis
causas de variao do pH em um digestor e suas possveis correes se resumem
na Tabela 2.
Tabela 2. Razes da variao do pH em um digestor anaerbio e sua possvel
correo.
Condio
Possveis razes
Correes
Velocidade de alimentao
demasiadamente rpida.
Reduzir a velocidade de
alimentao. Adicionar
amonaco.
Estabilizar a temperatura.
Formao de espuma.
Eliminar espuma.
Eliminar espuma.
Material demasiadamente
alcalino.
Demasiado bsico
Fonte: CETESB, 2003.
Agitao:
permite
melhorar
produtividade
assegurando
boa
REVISO BIBLIOGRFICA - 10
tampo, sendo por isso importante para a preveno de quedas de pH. Existem
diversas espcies qumicas que conferem alcalinidade ao meio: bicarbonato, sais
de cidos volteis e outros (SOARES & ZAIAT, 2005).
REVISO BIBLIOGRFICA - 11
REVISO BIBLIOGRFICA - 12
Domstico
40 100
Matadouros e avcolas
Acima de 500
Laticnios
4.680
Restaurantes
98
Azeite de oliva
16.000
Sorvetes
845
leo Vegetal
Mamona Arroz
Soja
Octanico
Decanico
Lurico
Mirstico
0,1
3,7
3,1
Palmtico
16,9
10,5
1,2
17,5
25,1
29,1
25,2
Esterico
2,7
3,2
1,0
1,3
22,7
18,9
5,9
Olico
61,9
22,3
3,3
39,9
39,8
44
40,5
Linolico
14,8
54,5
3,6
39,1
2,6
0,3
18,4
Linolnico
0,6
8,3
0,2
0,3
0,7
Ricinoleico
89,2
Dihidroesterico
1,4
0,4
0,2
0,3
1,8
1,4
0,5
Eicosenico
Boi
Gordura animal
Porco Frango
Oliva
REVISO BIBLIOGRFICA - 13
REVISO BIBLIOGRFICA - 14
REVISO BIBLIOGRFICA - 15
de
bactrias
hidrolticas-fermentativas,
acetognicas
produtoras
de
REVISO BIBLIOGRFICA - 16
REVISO BIBLIOGRFICA - 17
poluentes;
REVISO BIBLIOGRFICA - 18
Poluentes e efluentes
Indstrias de tintas.
(Trichoderma viride)
Ciandio.
Ciandio.
Polifosfatase e Fosfotransferase
Protease
Ciandio.
Naftaleno-dioxigenase
Remoo de naftaleno.
REVISO BIBLIOGRFICA - 19
(Pancretica PL250)
(Penicillium P4)
(Penicillium restrictum)
(Yarrowia lipolytica)
(Anicetobacter sp.)
(Candida rugosa)
(pncreas de porco)
(Trametes versicolor)
(Panus triginus)
(Phanerochaete flavido-alba)
Peroxidase de soja
REVISO BIBLIOGRFICA - 20
3.7 ENZIMAS
As enzimas, conhecidas industrialmente como biocatalisadores, so em sua
maioria protenas, formadas por longas cadeias de aminocidos com ligaes
peptdicas, com exceo de um pequeno grupo de molculas de RNA com
propriedades catalticas. A maioria das enzimas sintetizadas por clulas so retidas
para funes intracelulares. As enzimas extracelulares so subseqentemente
secretadas para fora dos limites da membrana celular. Enzimas esto presentes
em todas as clulas vivas, onde exercem as funes vitais de controle dos
processos de transformao dos nutrientes em energia e em material celular. Alm
disto, participam dos processos de quebra de nutrientes complexos em
substncias mais simples. (ZANOTTO, 2003).
De acordo com Sharma et al. (2001) quase 4000 enzimas so conhecidas,
e destas, aproximadamente 200 so utilizadas comercialmente, sendo que a
maioria de origem microbiana. A demanda mundial de enzimas satisfeita por 12
produtores principais e por 400 fornecedores menores. Ao redor de 60% da fonte
total de enzimas industriais so produzidas na Europa. Em torno de 75% de todas
as enzimas industriais (incluindo as lipases) so de ao hidroltica. Segundo a
Novozymes (2005) o mercado mundial de enzimas gira em torno de US$ 2,4
bilhes, com um crescimento mdio anual entre 4 e 5%.
A classificao da Unio Internacional de Bioqumica e Biologia Molecular
(IUBMB) divide as reaes catalisadas por enzimas em seis grupos principais, nas
quais esto inclusas subclasses de acordo com o tipo de reao catalisada. A
Tabela 6 apresenta esta classificao.
REVISO BIBLIOGRFICA - 21
Funo cataltica
Subclasses
Desidrogenases
1 - Oxidorredutases
Oxidases
Hidrogenases
Peroxidases
2 - Transferases
Metiltransferases
Transaminases
Carboidrases
3 - Hidrolases
Esterases
Lipases
Fosfatases
Proteases
4 - Liases
Descarboxilases
Cetocidolises
Hidratases
Racemases
5 - Isomerases
Isomerases
Mutases
6 - Ligases
Sintetases
por
processos
de
fermentao
usando
vrias
espcies
de
3.8 LIPASES
As lipases (glicerol ster hidrolases, E.C. 3.1.1.3) compreendem um grupo
de enzimas hidrolticas que atuam geralmente na interface orgnica aquosa,
catalisando a hidrlise de ligaes ster - carboxlicas presentes em acilgliceris
para liberar cidos orgnicos e glicerol (JAEGER et al., 1994 apud LEAL, 2000).
Esta definio exclui as enzimas que agem em steres solveis em gua
(esterases) ou que hidrolisam outros lipdeos (acilidrolases, colesterolesterase,
REVISO BIBLIOGRFICA - 22
3.8.1 Fontes
As lipases so comumente encontradas na natureza, podendo ser obtidas a
partir de fontes animais, vegetais e microbianas. Suas caractersticas diferem em
funo de sua origem e das formas empregadas para a sua obteno (LEAL,
2000). Do ponto de vista econmico e industrial, os microrganismos so preferveis
a as lipases de fontes animais e plantas, devido ao alto custo do seu isolamento
(NASCIMENTO et al., 2004).
Na Tabela 7 apresenta as fontes, principais origens e mtodos de obteno
de enzimas.
Tabela 7. Obteno industrial de enzimas.
Fonte
Origens
Mtodo de obteno
Vegetais
Triturao de tecidos
Animais
Triturao de tecidos
Microrganismos
REVISO BIBLIOGRFICA - 23
Enantiosseletivas.
REVISO BIBLIOGRFICA - 24
REVISO BIBLIOGRFICA - 25
REVISO BIBLIOGRFICA - 26
REVISO BIBLIOGRFICA - 27
3.8.5.1 Detergentes
Os detergentes so caracterizados por serem compostos que possuem em
sua estrutura uma poro hidroflica e uma hidrofbica. Os sais dos cidos graxos
tm na cadeia hidrocarbonada a poro hidrofbica e na carboxila dissociada
(carga negativa neutralizada por sdio ou potssio), a poro hidroflica (SANTOS,
2005). A ao de limpar e a habilidade de emulsificar de um detergente dependem
de sua capacidade de formar partculas de leo estveis e reduzir a tenso
interfacial, facilitando a penetrao da gua.
As lipases utilizadas em detergentes so selecionadas a fim de satisfazer
as seguintes exigncias: ter uma baixa especificidade em relao ao substrato, isto
, uma habilidade de hidrolisar gorduras de vrias composies, habilidade de
suportar as condies de lavagem relativamente severas (pH 10-11, 30-60 C),
habilidade de resistir a surfactantes e enzimas que so ingredientes importantes na
formulao de detergentes (SHARMA et al., 2001).
As principais razes do interesse crescente do uso de enzimas, utilizadas
como aditivo nas formulaes de novos detergentes, situa-se basicamente na
possibilidade e eliminar manchas de gorduras nas baixas temperaturas de lavagem
e conseguir a reduo do consumo de surfactantes por razes ambientais
(TATARA et al., 1985 apud LEAL, 2000).
As projees indicam que combinaes variadas de misturas de enzimas
venham a substituir, cada vez mais, os ingredientes menos aceitveis do ponto de
vista ambiental, nas formulaes de detergentes. Um exemplo est na fabricao
de detergentes de mquinas de lavar louas automticas, no mercado europeu. A
substituio de muitos dos ingredientes que agrediam o meio ambiente por
enzimas tornou possvel manuteno do mesmo desempenho (OLIVEIRA, et al.,
2004).
REVISO BIBLIOGRFICA - 28
REVISO BIBLIOGRFICA - 29
Efeito utilizado
Produto
Alimentcio
Laticnio
Panificao
Melhoramento do sabor /
qualidade, prolongamento do
tempo de prateleira.
Confeitos e bolos.
Bebidas
Melhoramento do aroma e
acelerao da fermentao,
por remoo de lipdeos.
Bebidas alcolicas
Processamento de
derivados do ovo
Melhoramento da qualidade do
ovo por hidrlise dos lipdeos
Maionese, molhos e
cremes.
Processamento de carne e
peixe
Desenvolvimento de aroma e
remoo de excesso de
gorduras
Produtos embutidos
Processamento de leos
Transesterificao de leos
naturais. Hidrlise de leos
(cidos graxos, DG e MG).
leos e gorduras
modificadas (substitutos da
manteiga de cacau)
Qumica fina
Sntese de steres
steres
Detergentes
Detergentes
Farmacutico
Digestivos
Analtico
Anlise de triglicerdeos no
sangue
Diagnstico
Cosmtico
Remoo de lipdeos
Cosmticos em geral
Curtume
Produtos de couro
Diversos
Decomposio e remoo de
substncias oleosas
Limpeza de tubulao,
tratamento de efluentes.
Qumico
REVISO BIBLIOGRFICA - 30
REVISO BIBLIOGRFICA - 31
REVISO BIBLIOGRFICA - 32
MATERIAL E MTODOS - 33
4 Material e Mtodos
4.1 INTRODUO
Neste captulo esto apresentados o material e os mtodos utilizados, bem
como a descrio dos procedimentos laboratoriais realizados durante a fase
experimental deste trabalho. Os procedimentos experimentais relacionados a este
trabalho
foram
desenvolvidos
no
Laboratrio
de
Engenharia
Bioqumica
4.2 MATERIAL
4.2.1 Reagentes
Os reagentes utilizados foram de grau analtico, adquirido das empresas
Nuclear, Synth, Quimex, Colleman e Vetec. Dentre esses, podem ser citados:
4.2.2 Enzimas
Foram utilizadas preparaes enzimticas comerciais de origem animal:
MATERIAL E MTODOS - 34
4.2.3 Substrato
Como substratos foram usados:
4.2.4 Inculo
O inculo utilizado foi obtido de reatores de manta de lodo com fluxo
ascendente (UASB), utilizado para o tratamento de esgoto domstico, pela
Companhia de Saneamento bsico do Estado de Santa Catarina (CASAN), na
cidade de Florianpolis, e posteriormente foi estocado em recipientes plsticos
armazenados a 20C.
4.3 EQUIPAMENTOS
Dentre os equipamentos utilizados podemos citar:
Banho Maria modelo Dubnoff digital NT 232, fabricado por Nova Tcnica
para dosagens de atividade enzimtica e testes de biodegradabilidade.
MATERIAL E MTODOS - 35
A.E. (moles.min 1 ) =
VE .C E .t
Onde: CKOH = concentrao da soluo de KOH (M);
(4.1)
MATERIAL E MTODOS - 36
MATERIAL E MTODOS - 37
vazamentos de soda custica que est presente no frasco Duran invertido, ponto 3.
Aps passar pelo frasco de segurana o biogs borbulhado no frasco Duran, que
contm uma soluo de NaOH 5%, fazendo com que o CO2 que est presente no
biogs reaja com a soda custica. Desta maneira o CO2 eliminado do biogs
restando apenas o CH4, que fica retido na parte superior do frasco Duran invertido.
medida que o metano vai sendo acumulado no sistema a soda custica vai
sendo deslocada para o frasco de coleta, ponto 4. Com auxilio de uma proveta, em
determinados perodos de tempo este volume era quantificado, representando a
produo de metano.
MATERIAL E MTODOS - 38
C DQOi C DQOf
Eficincia de remoo =
C DQOi
(4.3)
dV 1 Vi + 1 Vi Vi Vi 1
+
=
dt
2 t
t i t i 1
t
i+1 i
(4.4)
MATERIAL E MTODOS - 39
MATERIAL E MTODOS - 40
)=
V .C
KOH
.MM
cidos graxos
(4.5)
ma
)=
V .C
NaOH
.MM
KOH
.10 3
ma
(4.6)
MATERIAL E MTODOS - 41
)=
V .C
HCl
.MM
KOH
.10 3
ma
(4.7)
Onde: V = diferena entre os volumes do HCl gastos nas duas titulaes (L);
CHCl = concentrao de HCl (M);
ma = massa da amostra (g);
MMKOH = massa molecular do KOH (g.mol-1).
Para o clculo da massa molecular dos cidos graxos utilizou-se a Equao
4.8 (HORTWIZ, 1980 apud SINGHAL & KULKARNI, 1990):
MM cido graxo(g.mol 1 ) =
56000
12,67
IS
(4.8)
MATERIAL E MTODOS - 42
A.T . (mgCaCO3 .L ) =
V .C
H 2 SO 4
MM
CaCO3
.10
amostra
(4.9)
MATERIAL E MTODOS - 43
% Glicerol ( g glicerol .g 1 ) =
MM
Glicerol
NaOH
(V V )
(4.10)
MATERIAL E MTODOS - 44
RESULTADOS E DISCUSSO - 45
5 Resultados e Discusso
5.1. CARACTERIZAO FSICO-QUMICA DO EFLUENTE
Abatedouros e indstrias de processamento de carnes so processos
realizados em vrios estgios onde cada etapa gera resduos com diferentes
caractersticas. Os efluentes deste tipo de indstria contm uma grande variedade
e quantidade de contaminantes, caracterizadas principalmente por uma mistura
complexa de lipdeos, substncias proticas, elevadas cargas orgnicas e alta
concentrao de slidos em suspenso. As caractersticas de todo efluente do
abatedouro variam consideravelmente com o tempo por causa da descontinuidade
do processo e so provenientes do processo de abate e dos processos de lavagem
de pisos e equipamentos.
A caracterizao do efluente proveniente do frigorfico Macedo Koerich foi
realizada de acordo com as metodologias descritas no item 4.5, cujos resultados
encontram-se descritos na Tabela 9. O efluente utilizado foi coletado no tanque de
equalizao da Estao de Tratamento de Efluentes da indstria.
O valor encontrado para o ndice de saponificao (125,24 mg KOH.g-1) se
encontra abaixo do valor obtido por Pereira (2004) (188,60 mg KOH.g-1), que
utilizou efluente da mesma indstria. Segundo Pereira (2004) o ndice de
saponificao comprova a presena de composto insaturado que de extrema
importncia no clculo da massa molecular mdia dos cidos graxos presentes no
efluente. Desta forma atravs da Equao 4.8 calculou-se a massa molecular
mdia, obtendo um valor de 434,47 g.mol-1.
A alcalinidade total representa a soma da alcalinidade advinda dos cidos
graxos volteis e dos bicarbonatos. Para resduos com pH em torno de 5.0, a
alcalinidade total constituda basicamente por sais derivados de cidos graxos
volteis (LEITE, et al., 2004), neste caso a alcalinidade foi de 73 mgCaCO3.L-1 em
RESULTADOS E DISCUSSO - 46
Resultados
6.5
Pereira, 2004
6.2
40,4
30
73,0
75,1
6720*
3930
7,1
17,4
125,24
188,6
434,47
318,3
2005*
4830
1,01
0,92
3,1
5,4
-1
RESULTADOS E DISCUSSO - 47
4000
3500
3500
-1
3000
2500
2000
1500
1000
500
4500
Atividade (U.mg )
-1
Atividade (U.mg )
5000
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
6
10
pH
10
pH
Figura 7. Influncia do pH na atividade hidroltica das lipases (a) LKM e (b) LNU
(Substrato - azeite de oliva, 37C, Agitao - 100 rpm).
Pereira (2004) trabalhou com as mesmas enzimas e alcanou atividades
mximas de 4606 U.mg-1 e 3992 U.mg-1, para a LKM e LNU, respectivamente, em
pH 8.0 para ambas. importante salientar que este autor utilizou s um tipo de
substrato, o azeite de oliva.
Na Figura 8, podemos observar o comportamento das preparaes
enzimticas, em relao ao pH, utilizando como substrato o efluente bruto. A
enzima LNU atingiu uma atividade mxima de 220 U.mg-1 em pH igual a 7.5 e a
LKM apresentou uma atividade mxima de 580 U.mg-1 em pH 7.0.
RESULTADOS E DISCUSSO - 48
700
700
600
500
500
Atividade U.mg
-1
600
-1
Atividade (U.mg )
400
300
200
100
400
300
200
100
0
5,5
6,0
6,5
7,0
7,5
8,0
8,5
0
5,5
6,0
6,5
pH
7,0
7,5
8,0
8,5
pH
Figura 8. Influncia do pH na atividade hidroltica das lipases (a) LKM e (b) LNU
(Substrato - efluente bruto, 37C, Agitao - 100 rpm).
Analisando a influncia de diferentes substratos sobre a atividade das
enzimas podemos verificar atravs das Figuras 7 e 8 que a enzima LNU
apresentou comportamento semelhante para os dois substratos, enquanto que a
enzima LKM apresentou um patamar entre o pH 6.5 e 8.0 quando se utilizou o
azeite de oliva como substrato. Quanto atividade, para os ensaios realizados com
o azeite de oliva como substrato, obtiveram-se valores bem superiores quando
comparados com os resultados alcanados utilizando-se o efluente como
substrato. O detalhamento dos resultados est apresentado no Apndice E.1.
RESULTADOS E DISCUSSO - 49
temperatura de 37C, utilizando como substrato o azeite de oliva, como pode ser
visto na Figura 9. (Apndice E.2). Pereira (2004) observou uma temperatura tima
de 45C para LKM e 37C para a LNU, com atividades mximas de 4606 U.mg-1 e
3992 U.mg-1, respectivamente.
5000
5000
4500
4000
4000
3500
3500
-1
Atividade (U.mg )
-1
Atividade (U.mg )
4500
3000
2500
2000
1500
1000
500
3000
2500
2000
1500
1000
500
0
25
30
35
40
45
50
55
60
65
25
30
35
Temperatura (C)
40
45
50
55
60
65
Temperatura (C)
Figura 9. Influncia da temperatura na atividade hidroltica das lipases (a) LKM e (b)
LNU (Substrato - azeite de oliva, 37C, Agitao - 100 rpm).
J na Figura 10, onde temos o comportamento das lipases em relao
temperatura utilizando como substrato o efluente bruto, nota-se que a LKM
apresenta uma atividade mxima de 580 U.mg-1 em um intervalo de temperatura de
37C a 40 C; enquanto que a LNU a 45 C atingiu uma atividade mxima de 680
U.mg-1.
800
800
700
-1
-1
600
Atividade (U.mg )
600
Atividade (U.mg )
700
500
400
300
200
100
500
400
300
200
100
0
25
30
35
40
45
50
Temperatura (C)
55
60
65
25
30
35
40
45
50
55
60
65
Temperatura (C)
Figura 10. Influncia da temperatura na atividade hidroltica das lipases (a) LKM e (b)
LNU. (Substrato - efluente bruto, 37C, Agitao - 100 rpm).
RESULTADOS E DISCUSSO - 50
Propriedades catalticas
pH timo
Temperatura tima ( C)
LKM
8.0
LNU
7.0
Efluente
7.0
7.5
Azeite de oliva
37
37
37 - 40
45
Azeite de oliva
Efluente
RESULTADOS E DISCUSSO - 51
das
lipases.
Os
resultados
graficados
nas
curvas
dos
ensaios
de
1000
1000
800
800
600
400
200
0
600
400
200
200
400
600
800
Tempo (h)
200
400
600
800
Tempo (h)
RESULTADOS E DISCUSSO - 52
800
800
1000
1000
600
400
200
600
400
200
0
0
0
200
400
600
800
200
600
800
1000
1000
800
800
400
Tempo (h)
Tempo (h)
600
400
200
0
600
400
200
0
200
400
600
800
200
Tempo (h)
400
600
800
Tempo (h)
1000
1000
800
600
400
200
0
800
600
400
200
0
200
400
600
800
Tempo (h)
200
400
600
800
Tempo (h)
RESULTADOS E DISCUSSO - 53
comeamos
ter
uma
diminuio
na
produo
de
metano
RESULTADOS E DISCUSSO - 54
RESULTADOS E DISCUSSO - 55
1000
1400
1200
800
600
400
200
0
1000
800
600
400
200
0
200
400
600
800
200
800
1000
1000
800
600
1200
800
600
400
200
600
400
200
0
0
0
200
400
600
800
200
Tempo (h)
400
600
800
Tempo (h)
1200
1000
1000
800
400
Tempo (h)
Tempo (h)
800
600
400
200
600
400
200
0
0
200
400
600
800
Tempo (h)
200
400
600
800
Tempo (h)
RESULTADOS E DISCUSSO - 56
RESULTADOS E DISCUSSO - 57
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
1400
1200
1000
800
600
400
200
0
Figura 27. Volume de metano produzido pelas enzimas (a) LKM e (b) LNU nos
ensaios de biodegradabilidade.
Analisando a Figura 27 observamos que as duas enzimas, LKM e LNU, no
apresentaram uma variao considervel na produo de metano entre as
concentraes de enzimas testadas, ou seja, no se pode afirmar que existe uma
relao entre a concentrao de enzima e a produo de metano. A baixa
produo de metano da enzima LKM nas concentraes de 0,10%, 0,15% e 0,20%
(p/v) pode estar relacionada com o fato de que o lodo empregado como inculo
nos ensaios ter sido uma amostra diferente daquela utilizada nos demais ensaios
de biodegradabilidade.
Nos testes de biodegradabilidade anaerbia de guas residurias da
indstria de abate de frango, realizados por Pereira (2004), foram utilizadas
enzimas comerciais de fonte microbiana (Cndida rugosa - LCR) e de pncreas de
porco (LKM e LNU), no pr-tratamento (etapa de hidrlise) dessas guas
residurias, por um perodo de 12 horas, utilizando uma concentrao de 0,4%
(p/v) de enzima. O tempo dos ensaios de biodegradabilidade foi de 30 dias, a uma
RESULTADOS E DISCUSSO - 58
condies
aplicadas
ao
efluente
pr-tratado
enzimaticamente
foram
RESULTADOS E DISCUSSO - 59
Ajuste Exponencial
8
6
4
2
0
0
200
400
Tempo (h)
(a) Lodo.
600
800
-1
10
Ajuste Exponencial
0
0
200
400
600
Tempo (h)
Figura 28. Velocidade mdia de produo de metano (a) Lodo (b) Efluente bruto.
800
-1
10
-1
RESULTADOS E DISCUSSO - 60
Ajuste Exponencial
8
6
4
2
0
0
200
400
600
800
10
Ajuste Exponencial
8
6
4
2
0
0
-1
Ajuste Exponencial
8
6
4
2
0
0
200
400
600
800
Tempo (h)
10
-1
-1
6
4
2
0
400
200
600
Tempo (h)
Ajuste Exponencial
6
4
2
0
0
200
400
600
800
Tempo (h)
Ajuste Exponencial
800
600
-1
10
400
Tempo (h)
Tempo (h)
200
800
10
Ajuste Exponencial
8
6
4
2
0
0
200
400
600
800
Tempo (h)
8
6
4
2
0
0
200
400
10
Ajuste Exponencial
-1
Ajuste Exponencial
10
-1
RESULTADOS E DISCUSSO - 61
600
800
8
6
4
2
0
0
200
Tempo (h)
6
4
2
0
200
400
10
600
800
6
4
2
0
0
200
Tempo (h)
2
0
400
600
10
800
Ajuste Exponencial
-1
Tempo (h)
-1
200
600
Ajuste Exponencial
400
Tempo (h)
800
Ajuste Exponencial
-1
-1
Ajuste Exponencial
600
400
Tempo (h)
800
6
4
2
0
0
200
400
600
800
Tempo (h)
RESULTADOS E DISCUSSO - 62
0,15%
1,4292
6,3522
0,20%
1,2817
6,7218
0,25%
6,0005
7,6600
0,30%
7,1130
8,1296
0,35%
6,6982
6,4649
Mais uma vez podemos perceber o quanto o lodo utilizado como inculo
interfere na degradao do substrato, quando trocamos de inculo a produo de
metano aumentou e conseqentemente as velocidades de degradao do
substrato tambm aumentaram.
5.3.5.1 pH
Na Tabela 12 podemos acompanhar a variao do pH entre o incio e o fim
dos testes de biodegradabilidade. Analisando os dados do pH, constata-se que os
RESULTADOS E DISCUSSO - 63
LKM
30 Dias
7.21
0 Dia
7.69
LNU
30 Dias
6.96
0,10%
0 Dia
7.29
0,15%
7.55
7.27
7.55
6.96
0,20%
7.44
7.14
6.90
7.01
0,25%
7.60
7.35
6.97
7.27
0,30%
7.40
7.45
6.92
7.34
0,35%
6.89
7.48
6.91
7.38
Lodo
0 Dia
8.20
30 Dias
8.35
Efluente bruto
6.97
7.49
RESULTADOS E DISCUSSO - 64
-1
Apndice F.1.
9
-1
8
7
6
5
4
3
2
1
0
0,10%
0,15%
0,20%
0,25%
0,30%
0,35%
-1
7
6
5
4
3
2
1
0
0,10%
0,15%
0,20%
0,25%
0,30%
0,35%
RESULTADOS E DISCUSSO - 65
0,35
% Glicerol (g/g)
0,30
0,25
0,20
0,15
0,10
0,05
0,00
0,10%
0,15%
0,20%
0,25%
0,30%
0,35%
0,40
0,35
% Glicerol (g/g)
0,30
0,25
0,20
0,15
0,10
0,05
0,00
0,10%
0,15%
0,20%
0,25%
0,30%
0,35%
RESULTADOS E DISCUSSO - 66
5.3.5.3 DQO
O principal parmetro para avaliar se um tratamento foi eficiente ou no a
eficincia da remoo de matria orgnica, que neste trabalho foi quantificada em
termos de DQO. Para os testes realizados com o lodo e o efluente bruto, obteve-se
uma remoo de 38,04% e 31,57%, respectivamente. Podemos observar, atravs
dos resultados apresentados na Tabela 13, que o uso de enzimas no tratamento
de efluentes com altos teores de lipdios bastante eficiente em termos de
remoo de DQO (Apndice F.3).
Tabela 13. Eficincia de remoo de DQO.
Concentrao de lipase (p/v)
0,10%
0,15%
79,55
91,92
0,20%
61,33
88,16
0,25%
69,66
88,67
0,30%
82,65
92,03
0,35%
83,21
95,02
Lodo
38,04
Efluente bruto
31,57
RESULTADOS E DISCUSSO - 67
simultaneamente.
Esta nova forma de implementar o tratamento enzimtico em efluentes com
elevados teores de gordura faz com que este tipo de tratamento em escala
industrial seja menos dispendioso.
O fato de que as enzimas utilizadas apresentam grau de pureza limitado e
de ambas serem produzidas por empresas nacionais torna o processo ainda mais
atraente.
A produo de biogs realizando as etapas de hidrlise e biodigesto foi
superior quando comparada com os trabalhos realizados por Pereira (2004), que
obteve de 523 mL 7 mL para a LKM e 510 mL 22 mL para a LNU de metano,
utilizando uma concentrao de 0,4% (p/v) de enzima. Em outro trabalho, Mendes
(2004), conseguiu um volume de 445 mL 29 mL de metano para uma hidrlise de
12 horas e 437 mL de metano para uma hidrlise de 24 horas. importante
salientar que estes autores realizaram as etapas de hidrlise e biodigesto de
maneira seqencial. O aproveitamento deste biogs como insumo energtico
uma opo para uma reduo de custos.
CONCLUSO - 68
6 Concluso
O objetivo principal deste trabalho foi estudar remoo de gorduras dos
resduos gerados por indstrias avcolas utilizando lipases pancreticas em
diferentes concentraes. Da anlise e discusso dos resultados obtidos pode-se
concluir que:
realizao
dos
ensaios
de
biodegradabilidade
hidrlise
CONCLUSO - 69
SUGESTES - 70
7 Sugestes
Para dar continuidade aos estudos que envolvem o tratamento enzimtico e
anaerbio de efluentes com elevados teores de gordura provenientes da indstria
frigorfica avcola, sugere-se:
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 71
8 Referncias Bibliogrficas
AITKEN, M. D. (1993). Waste treatment applications of enzymes: Opportunities and
obstacles. The Chemical Engineering Journal, v.52, p. 49-58.
AMANTE, E.R.; CASTILHO JR, A.B.; KANZAWA, A.; ENSSLIN, L.; MURAKI, M.
(1999). Um panorama da tecnologia limpa na indstria de frangos. Sociedade
Brasileira de Cincia e Tecnologia de Alimentos, SBCTA, v. 33, n. 1, p. 16-21.
APHA; AWWA; WPCF. (1995). Standard Methods for Examination of Water and
Wastewater, 19th edition, New York.
AVISITE. 2005: ano de avaliao da maturidade do setor. 2005. Disponvel em
www.avisite.com.br/economia/default.asp. Acesso em: 10/11/2005.
BATISTA, L.F. (1981). Manual Tcnico Construo e Operao de Biodigestores.
Empresa Brasileira de Assistncia Tcnica e Extenso Rural, Braslia, CDU 620.97
(20). 54 p.
BON, E. P. S. & PEREIRA JR., N. (1999). Tecnologia Enzimtica, Editado pelo
Enzitec. 113p.
CAIL, R. G.; BARFORD, J. P.; LICHACZ, R. (1986). Anaerobic digestion of wool
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CAMMAROTA, M. C.; TEIXEIRA, G. A.; FREIRE, D. M. G. (2001). Enzymatic
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CARVALHO, P. O.; CAMPOS, P. R. B.; DADDIO NOFFS, M.; OLIVEIRA, J. G.;
SHIMIZU, M. T.; SILVA, D. M. (2003). Aplicao de lipases microbianas na
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CASTRO, H.F.; MENDES, A.A.; SANTOS, J.C.; AGUIAR, C.L. (2004). Modificao
de leos e gorduras por biotransformao. Qumica Nova, v. 27, n. 1, p. 146-156.
CETESB (2003). Companhia de Tecnologia e Saneamento Ambiental & SMA-SP
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 72
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 73
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 74
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 75
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 76
em
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 77
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS - 78
APNDICES - 79
Apndices
APNDICE A - CARACTERSTICAS FSICO-QUMICAS DO EFLUENTE DA INDSTRIA
MACEDO KOERICH S/A SC
Parmetros analisados
Amostra 1
Amostra 2
Amostra 3
Amostra 4
Amostra 5
Amnia (mgNH3.L-1)
79.29
19.82
54.10
43
39.55
pH
6.35
6.63
6.63
7.11
7.54
26
0.10
0,40
<0.10
<0.10
2005
48.75
67.40
46.25
26.37
8390
131
174
119
104
8052
67
71
67.5
66
1966
80
87
85
63
6720
402
352.91
304.87
248
4434
374.46
310.80
250.56
169.48
1587
337.29
301.82
203.40
70.50
92.35
20.67
55.43
50.33
32.87
8.64
2.02
1.98
1.51
1.20
APNDICES - 80
Parmetros
pH
Slido sedimentvel (mL.L-1)
At 20
At 30
72
60
10
1,0
Fonte: Legislao Ambiental Bsica do Estado de Santa Catarina de maio de 1995, Lei N
5.795, Decreto N 14.250, que dispe de padres de emisso de efluentes lquidos no Art.
19.
APNDICES - 81
Cdigo: 50.1003.01-OR
APNDICES - 82
Tripsina (E.C.3.4.21.4)
Quimotripsina (E.C.3.4.21.1)
LIPASE
AMILASE
CONSERVAO:
Conservar em recipientes bem fechados, preferencialmente em temperaturas que
no venham exceder a 30C.
APLICAO TERAPUTICA:
A
pancretica, como:
favorece
condies
para
desenvolvimento
da
flora
glucidoltica
APNDICES - 83
(Farmacopia Brasileira,1988)
3. Lipdios:
(Farmacopia Europia,1997)
4. Atividade enzimtica:
(Farmacopia Europia,1997)
4.1
Amilase:
4.2
Lipase:
4.3
Protease:
5. Controle microbiolgico:
(Farmacopia Brasileira,1988)
5.1
Bactrias
5.2
Fungos e leveduras
5.3
Pseudomonas aeruginosa
Ausente
5.4
Staphylococcus aureus
Ausente
5.5
Escherichia coli
Ausente
5.6
Salmonella sp
Ausente
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS:
APNDICES - 84
Absorbncia
0,028
20
0,037
100
0,072
300
0,148
400
0,191
500
0,212
500
-1
(mg de O2.L )
400
300
200
Y = 2624X - 80,891
R = 0,9945
100
0
0,00
0,05
0,10
0,15
0,20
0,25
Absorbncia
-1
Absorbncia
16
0,045
14
0,238
10
0,443
15
0,638
(mg de NH4.L )
12
10
8
6
Y = 23,69461X - 0,32986
R = 0,99892
4
2
0
0,0
0,1
0,2
0,3
0,4
Absorbncia
0,5
0,6
0,7
APNDICES - 85
pH
6.0
6.5
2520
200
1746,67
140
7.0
2866,67
580
3913,33
180
7.5
3000
200
1720
220
8.0
3320
460
1440
160
9.0
2080
10.0
1920
Atividade (U.mg-1)
Lipase pancreatina
Lipase pancreatina
LKM
LNU
Azeite de oliva
Efluente
Azeite de oliva
Efluente
1440
280
786,67
320
35
1400
520
1080
340
37
3320
580
3913,33
220
40
1386,67
580
1013,33
220
45
1066,67
300
866,67
620
50
1800
340
840
280
55
460
400
60
1173,33
1000
APNDICES - 86
APNDICE F - ANLISES
Concentrao de
lipase (p/v)
30 Dias
0 Dia
30 Dias
0,10%
2,2449
2,2520
2,7952
2,4398
0,15%
2,4756
2,2878
3,3184
2,8248
0,20%
3,1002
2,9068
4,4637
3,6944
0,25%
4,3964
2,5489
4,0117
3,3359
0,30%
5,5344
2,2981
4,2409
3,1368
0,35%
6,1784
3,4966
5,7516
3,0271
F.2 - Glicerol
Concentrao de
lipase (p/v)
% Glicerol (g.g-1)
Lipase
Lipase
pancreatina
pancreatina
LNU
LKM
0 Dia
30 Dias
0 Dia
30 Dias
0,10%
0,1149
0,1796
0,1212
0,1782
0,15%
0,1145
0,1914
0,1616
0,1908
0,20%
0,1137
0,1644
0,1122
0,1533
0,25%
0,1435
0,2334
0,1393
0,1676
0,30%
0,1751
0,2349
0,1715
0,1890
0,35%
0,1762
0,2219
0,1632
0,2039
APNDICES - 87
F.3 - DQO
Concentrao de
lipase (p/v)
0,10%
660,53
266,93
949,17
109,49
0,15%
1132,85
240,69
1697,01
135,73
0,20%
485,91
188,21
1775,73
214,45
0,25%
1080,37
358,77
2025,01
227,57
0,30%
1539,57
266,93
2864,69
227,57
0,35%
1920,05
319,41
3271,41
161,97
Lodo
0 Dia
896,69
30 Dias
55,57
Efluente bruto
581,81
398,13