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Orgnica

Gua de Prcticas de Biologa General

PRACTICA N 5
ACCIN DE AGENTES FSICOS SOBRE LOS MICROORGANISMOS
Es bien conocido que las actividades vitales de los organismos estn
condicionadas por su ambiente. Modificando fundamentalmente estos
factores, el organismo bien se adapta a las nuevas condiciones o en todo
caso muere; en esto est implicado la magnitud y el tipo de cambio
operado. Este es el aspecto en el que los microorganismos difieren de las
clulas de plantas superiores y animales.
El conocimiento de los factores fsicos que controlan la supervivencia y
multiplicacin de los microorganismos nos sirven como instrumento de
control de la actividad bacteriana para ser esta incrementada, disminuida
o destruida completamente.
El tipo de muerte bacteriana por agentes fsicos est relacionado al
nmero de bacterias sobrevivientes, lo que significa que el proceso de
desinfeccin no es repentino sino gradual, en el que el nmero de
microorganismos muertos por unidad de tiempo es mayor al principio y
mucho menor cuando la accin contina.
I.

EFECTO DE LA TEMPERATURA
Las bacterias son TIENEN capacidad de sobrevivencia amplia con lmites
de temperatura variable, su rango decrecer y ejercer sus actividades est
entre los 0 y 90C.
CONDICIONES QUE VARIAN LA MUERTE TRMICA:
1. Contenido DE AGUA DEL MEDIO: La muerte bacteriana se genera
por coagulacin de las protenas del protoplasma. Cuanto+es el %
de agua en el medio,-ser la T para matar la bacteria.
2. Contenido de agua de los organismos: A CANTIDAD - de agua, los
microorganismos se secan y se produce +resistencia a la
temperatura.
3. Concentracin de hidrogeniones: Lo microorganismos mueren
fcilmente en condiciones cidas o alcalinas, requirindose
temperaturas -menores que en medios neutros.
4. Composicin del medio: Los medios que contienen alta
concentracin de protenas + la temperatura requerida para
destruir bacterias, ya que las protenas forman una pelcula
alrededor de los microorganismos como medio de proteccin
indirecta ante situaciones desfavorables.

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5. Edad de las clulas: Las clulas viejas son ms resistentes que las
clulas jvenes a las condiciones adversas.

Objetivo:
-

Determinar la temperatura de muerte trmica de los

microorganismos estudiados tratados a 40 C y 65 C durante
diferentes intervalos de tiempo.

Determinar el nmero de microorganismos

resistentes al tratamiento trmico.

supervivientes

Materiales:
Cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus.
Procedimiento:
1. Dos cultivos de 24 horas de edad de E. coli y S. aureus crecidos en
Caldo Nutritivo se sometern a 40 C y 65 C.
2. Cada 0, 40, 80 y 100 minutos se coger 1 ml de cada uno los tubos que
contienen las cepas microbianas en ambas temperaturas y se sembrar
por el mtodo de difusin en el medio de cultivo Agar Nutritivo.
3. Rotular correctamente las placas Petri indicando el tratamiento y la
cepa microbiana.
4. Incubar a 28 C por 48 horas en posicin invertida.
5. Realizar el recuento de microorganismos en cada uno de los
tratamientos.
6. Resultados: Anotar los resultados en el siguiente cuadro:
Temperatu
ra

40 C
65 C

Tiempo
(min)

Crecimiento microbiano
(UFC/ml)
Escherichia Staphylococcus
coli
aureus

0
40
80
100
0
40
80
100
2

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7. Con los resultados obtenidos elaborar la curva de supervivencia de

microorganismos en papel milimetrado comparando el tiempo de
exposicin (eje X) y las UFC/ml (eje Y) para cada una de las
temperaturas evaluadas por microorganismos evaluado.
8. Con los resultados obtenidos halle el Tiempo de Reduccin decimal o
valor D en ambas temperaturas utilizando la siguiente frmula:

Donde:
Dt: Tiem en min para - el 90% el # de microorganismos de una
poblacin a una t dada.
x: Minutos a una determinada temperatura
No: n de clulas al inicio del tratamiento trmico
Nx: n de clulas supervivientes despus de un tratamiento

9. Interpretacin y Discusin de resultados. A partir de las curvas

graficadas indique los resultados obtenidos para cada una de las
variables estudiadas y explique los resultados obtenidos utilizando
bibliografa adecuada (artculos cientficos, libros).

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II. ACCIN DE LA PRESIN OSMTICA

Este factor viene a ser la presin desbalanceada que da lugar a los
fenmenos de difusin y smosis, en una solucin donde hay diferencia
de concentraciones.
Si un organismo est inmerso en una solucin que tenga alta presin
osmtica, el agua saldr de la clula hasta que establezca un equilibrio
entre el interior y exterior celular lo que ocasionar que la membrana
citoplasmtica y el protoplasma se contraigan hacia el centro de la clula;
es entonces que la clula ha entrado en el proceso de crenacin.
Lo contrario ocurre cuando una clula est en un medio con baja presin
osmtica, el agua ingresar a la clula hasta establecer equilibrio en el
exterior celular, y si la diferencia de presin es grande la membrana
tender a explotar y se dir que la clula ha entrado en estado de
plasmlisis.
Objetivo:
-

Determinar la concentracin de NaCl que afecta el crecimiento

microbiano.

Material
-

Cepa de Escherichia coli de 24 horas de edad crecida en caldo

nutritivo

4 Placas con concentraciones crecientes de NaCl al 5%, 10%, 20% y

40% en medio base Agar Nutritivo.

1 placa con Agar Nutritivo.

Asa de siembra

Encendedor

Procedimiento
1. En las placas con diferentes concentraciones de NaCl, sembrar la
cepa de E. coli por el mtodo del estriado.
2. Repetir el paso anterior utilizando una placa con Agar Nutritivo que
contiene concentracin normal de NaCl.
3. Rotular las placas Petri con la cepa microbiana utilizada.
4. Incubar a 28C por 48Hrs.

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5. Comparar el crecimiento microbiano entre las placas que contienen

las diferentes concentraciones de NaCl y la placa con Agar Nutritivo
que contiene concentracin normal de NaCl.
6. Interpretacin y Discusin de resultados.

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ACCIN DE AGENTES QUMICOS SOBRE LOS MICROORGANISMOS

I.

EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE IONES HIDRGENO (pH) EN

LOS MICROORGANISMOS.
El efecto de distintas concentraciones de iones hidrgeno es considerado
con respecto a su capacidad para suprimir el crecimiento microbiano. Los
microorganismos se inocularn en un medio que es capaz de mantener el
crecimiento siempre y cuando el pH sea tolerable. La nica diferencia
entre las distintas probetas de medio de cultivo radica en el pH de los
caldos en cuestin. Se observar el crecimiento y se tendr conclusiones.
Para que estos resultados sean vlidos es preciso la observacin de todas
las probetas en un mismo tiempo.
Objetivo:
-

Determinar el efecto del pH en el crecimiento y desarrollo

microbiano.

Materiales
-

Cultivos de 24 horas de edad de Escherichia coli.

Tubos con caldo nutritivo estril previamente ajustados con HCl
1.0N y NaOH 1.0N a valores de pH de 3.0, 5.0, 7.0, 9.0 y 11.0 (1 de
cada una)

Procedimiento.
1. Inocule con una azada el cultivo de E. coli en cada uno de los tubos de
caldo nutritivo con distintos valores de pH.
2. Incube a 28 C y anote sus observaciones en trminos de la cantidad
de crecimiento al segundo y cuarto da. Emplee la siguiente escala:
+
= Poco crecimiento
++ = Regular Crecimiento
+++ = Crecimiento moderado
++++
= Abundante crecimiento
3. Anote sus resultados utilizando la siguiente tabla:
TABLA DE RESULTADOS
pH 3.0

pH 5.0

pH 7.0

E. coli

4. Interpretacin y Discusin de resultados.

pH 9.0

pH
11.0

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II. ACCIN DE LOS DESINFECTANTES Y ANTISPTICOS.

Objetivo
- Observar y comparar el efecto de los desinfectantes y antispticos
en el desarrollo microbiano.
Materiales
- Cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus.
- Medio de cultivo: Agar nutritivo
- Desinfectantes: Leja al 10%, cresol al 5%, Pinesol.
- Antispticos: Alcohol al 70%, agua oxigenada de 10 volmenes,
merthiolate, jabn medicado (Protex)
- Discos de papel filtro, pinzas, hisopos.
- Plumn indeleble.
Procedimiento
Agentes desinfectantes
1. Dividir la placa de Agar Nutritivo en 3 mitades utilizando plumn
indeleble.
2. A partir de un cultivo de 24 horas de edad de la cepa de E. coli coger
con un asa de kohle el inculo necesario y sembrarlo sobre la superficie
de cada parte de la placa de Agar Nutritivo.
3. Utilizando una pinza estril colocar un disco de papel filtro de 1.5 cm de
dimetro embebido en la solucin del desinfectante.
4. Realizar el mismo procedimiento para la cepa microbiana de S. aureus
5. Incubar las placas a 28C por 48 horas en posicin invertida.

1.
2.
3.

4.

Agentes Antispticos
Dividir la placa de Agar Nutritivo en 4 mitades.
Realizar el mismo procedimiento descrito para los agentes
desinfectantes y probar las cepas de E. coli y S. aureus.
Incube a 28 C por 48 horas y anote sus observaciones en trminos de
la cantidad de crecimiento. Emplee la siguiente escala:
+
= Poco crecimiento
++ = Regular Crecimiento
+++ = Crecimiento moderado
++++
= Abundante crecimiento
Resultados: Anote sus resultados utilizando la siguiente tabla:

Desinfe
ctante
Leja
Cresol
Pinesol

E. coli

Antispti
co

S.aureu
s
7

Alcohol al
70%
H2O2
Merthiolate
Jabn Protex

E. coli

S.aureu
s

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5. Interpretacin y Discusin de resultados.

PRUEBAS DE DIFERENCIACIN BIOQUMICA

El metabolismo es el conjunto de reacciones que ocurren en los seres
vivos, que incluye procesos de obtencin de energa, tales como,
descomposicin de molculas orgnicas en los quimitrofos (catabolismo)
o la captacin de luz para el caso de los fottrofos. Asimismo, se
encuentran las de sntesis de material celular a partir de nutrientes
esenciales (anabolismo).
Todas las reacciones metablicas son catalizadas por enzimas que en su
mayora son intracelulares aunque hay tambin extracelulares, sobre todo

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hidrolticas, que son liberadas por la clula para catalizar reacciones fuera
de esta.
Es posible conocer las caractersticas metablicas de los microorganismos
por su inoculacin en medios de cultivo con diversos sustratos que
puedan ser utilizados como fuentes de energa, carbono, donadores de
electrones, as como de otros nutrientes esenciales necesarios para su
crecimiento.
Existen numerosas pruebas bioqumicas con medios de cultivo
adicionados de indicadores de pH para detectar la produccin de cido o
lcali, con inhibidores selectivos como bilis, cianuro o con colorantes,
sulfuros, etc. que facilitan la determinacin de diferentes actividades
metablicas. La actividad que se evala con mayor frecuencia es:
capacidad para fermentar carbohidratos (glucosa, lactosa, sacarosa, etc.).
El desarrollo de pruebas bioqumicas es importante para la identificacin
de especies bacterianas que proliferan en el rea de alimentos, clnica y
ambiental capaces de crecer utilizando diferentes sustratos y por lo tanto
su potencial deterioro.
Objetivo
- Caracterizar a los microorganismos en funcin de su capacidad
fermentativa de diferentes carbohidratos.
Materiales
- Cepas de Escherichia coli y Staphylococcus aureus.
- Caldo Base Rojo de Fenol
- Carbohidratos: Glucosa, Sacarosa y Lactosa
- Pipetas estriles
- Plumn indeleble.
Procedimiento
1. Inocular 0.5 ml de cada cepa en una serie de tubos de caldo rojo fenol
con glucosa, lactosa, y sacarosa.
2. Incubar los tubos a 28C durante 48 horas.
3. Resultados: Determinar si hay crecimiento y cambios en el color del
indicador
Criterios de evaluacin:
Produccin de cido
Prueba positiva (+): color amarillo
Prueba negativa (-): color rojo
4. Interpretacin de resultados y Discusin.

CUESTIONARIO
1. De los microorganismos estudiados qu estructuras bacterianas le
confieren resistencia trmica? Por qu?
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2. Cul es el rango de temperatura en el cul los microorganismos crecen

y se multiplican rpidamente y en funcin de esto cul sera la
temperatura recomendada para la conservacin de los alimentos? Por
qu?
3. Qu cuidados debemos practicar frente a la cantidad de agua extra o
intra celular en posibles productos frescos a temperatura ambiente?
4. Qu ejemplos de aplicacin estn basados en la fisiologa de la presin
osmtica?
5. Cul es la razn de usar alcohol de 70?
6. En un proceso productivo de derivados de frutas, Cul sera el agente
contaminante principal? Cul sera su agente qumico de control? Qu
funcin cumplira este agente? Proponga un ejemplo.
7. Explique el efecto de los desinfectantes y antispticos en el desarrollo
microbiano.
8. De acuerdo a la capacidad fermentativa de los carbohidratos por las
bacterias estudiadas indique los alimentos que pueden ser
potencialmente deteriorados por esta actividad metablica. Por qu?
9. Defina:
Desinfectante
Antisptico
Bactericida
Bacteriosttico
Plasmlisis.

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