SEGN FRAZIER (1982) :

Internacionalmente la tabla de interpretacin del TRAM se relaciona

con las siguientes recuentos de bacterias /mL.

TRAM (minutos)

No Bacterias
/mL.

< 30 minutos

20 - 30 millones

30 min - 2 horas

4 - 20 millones

2 - 6 horas

0,5 - 4 millones

> 6 horas

< 500.000

Como se puede ver en la tabla las variaciones pueden ser de nmero

de bacterias para determinado rango de variacin es muy variable, razn
por la cual la prueba a nivel mundial ha perdido aplicacin como elemento
para medir el nmero de bacterias.
A lo anterior se suma el hecho de que un gran nmero de bacterias que
hacen parte de la contaminacin de la leche durante el ordeo tienen
poca actividad reductora

del azul de metileno y los nmeros de

bacterias para un determinado TRAM se ven incrementado en forma muy

significativa, en aquellos ordeos donde las practicas de higiene son
deficientes.
Trabajos realizados para comprobar la tabla internacional de TRAM a dado
resultados muy diferentes en los pases de Latinoamrica como se muestra
en la siguiente tabla:
TRAM (minutos)
< 30 min
30 min - 1 hora

recto mesfilos aerobios (UFC)

> 600 millones
100 - 600 millones

1 - 2 horas

25 - 100 millones

2 - 3 horas

10 - 25 millones

3 - 4 horas

5 - 10 millones

4 - 5 horas

3 - 5 millones

5 - 6 horas

2 - 3 millones

6 - 7 horas

1.5 - 2 millones

7 - 8 horas

1 - 1.5 millones

8 - 9 horas

800.000 - 1 milln

Como se puede observar mientras que en la tabla internacional, 6 horas de

TRAM significan menos de 500.000, en nuestro medio ese mismo tiempo
corresponde aproximadamente a 2 millones de bacterias. Estas grandes
diferencias se originan en la diversidad de fuentes de contaminacin a que
se ve sometida la leche cuando fallan las prcticas de higiene y se
facilita la contaminacin con microorganismos provenientes del intestino de
los animales, que en general
comparativamente

con

tienen muy poca actividad

bacterias

de

reductora,

los gneros Streptococcus y

Lactobacillus que son habitantes normales de la glndula mamaria y que a

travs de ella pueden llegar a la leche.
Basados en la actividad metablica de los diferentes microorganismos que
pueden contaminar la leche, la prueba TRAM puede castigar leches que
tienen poca contaminacin ambiental pero con presencia de bacterias con
gran capacidad reductora, como las mencionadas, y de otra
favorecer

leches

con

alto

nmero

de

bacterias

parte

contaminantes

ambientales producto de ordeos antihiginicos pero que demoran mucho

en reducir el azul de metileno.

Otra razn para tener largo tiempo de TRAM frente a un alto nmero de
bacterias es, que la leche examinada contenga sustancias que inhiban el
crecimiento bacteriano, por ejemplo, preservantes qumicos o antibiticos,
compuestos que cuando se est haciendo el Recuento en Placa, por el
factor de dilucin a que se somete la muestra, pierden actividad o capacidad
inhibitoria.
El hecho de tener cortos tiempos de TRAM y Recuentos bajos de bacterias,
es posible cuando varias clulas bacterianas se encuentran agrupadas y
una Colonia (UFC) es el resultado de uno de estos grupos o de una sola
clula. Por esto en los recuentos de Bacterias Mesfilas se usa el trmino
Unidades Formadoras de Colonia (UFC). En la Prueba de TRAM el hecho
de que las bacterias estn agrupadas o separadas no influye porque
independientemente cada clula cumple su accin metablica.

De acuerdo a las investigaciones realizadas por los integrantes de

nuestro

grupo no estamos de acuerdo con el autor FRAZIER

(1982)

que nos indican que el azul de metileno es tambin

llamado reductasa debido a que la reductasa es una enzima que

no tiene influencia en la decoloracin del azul del metileno.
El verdadero principio para que el azul de metileno se descolore es
lo siguiente: el potencial de xido-reduccin (Eh) de la fresca
aireada es de +0,35 a + 0,40 voltios (350 a 450 milivoltios), el cual
se debe principalmente al contenido de oxgeno disuelto en el
producto. Si por cualquier causa ese oxgeno es separado, el Eh
disminuye Esto ocurre cuando los microorganismos crecen en la
leche y disminuyen el oxgeno. Si el nmero de microorganismos
es muy elevado, el consumo de oxgeno ser muy elevado y por
consiguiente el Eh caer rpidamente; si por lo contrario los
microorganismos son pocos, el Eh disminuir lentamente.
DAVILA (2006)menciona que tambin se debe tenerse en cuenta es

que las clasificaciones dadas no siempre son apropiadas ya que

existen otros factores que pueden afectar al tiempo de reduccin,
entre ellos, el tipo de microorganismos, el numero de leucocitos, el
tiempo de exposicin a la luz, la cantidad de oxigeno disuelto y la
tendencia de la leche a elevar los microorganismos hacia la
superficie a medida que se va separando la crema del tubo de
prueba. As es como ciertos microorganismos ( lactococcus lactis)
son ms activos en su capacidad reductoras que otros, mientras
que existen especies que son menos activas en ese sentido
(streptococcus

agalactiae,

bacillus

subtilis,

microorganismos

termodricos)

CONCLUSIONES

La calidad higinica de la leche ocupa en estos momentos una gran

prioridad, para las industrias lcticas, es por eso los productores deben
de producir su producto con el mas riguroso cuidado.
La utilizacin del TRAM, tiempo de reduccin del Azul de metileno, es un
mtodo practico de los tantos existentes y que nos facilitan para analizar
la calidad microbiolgica de nuestra leche.
Mediante nuestra prctica realizada para lograr una coloracin demoro
ms de 2 y media h; para virar del color azul al blanco, lo cual esto nos
da a conocer que nuestra leche analizada esta dentro del rango
permitido y lo cual si esta apto para el consumo humano.

 Logramos determinar una cantidad aproximada de microorganismos

existente en nuestra leche, lo cual nos permite garantizar que nuestro
producto est apto para el consumo humano.

. CUESTIONARIO
1. Cul es el fundamento bioqumico de la prueba de la decoloracin
del azul de metileno.
El verdadero principio para que el azul de metileno se descolore es lo
siguiente: el potencial de xido-reduccin (Eh) de la fresca aireada es de +0,35
a + 0,40 voltios (350 a 450 milivoltios), el cual se debe se debe principalmente
al contenido de oxgeno disuelto en el producto. Si por cualquier causa ese
oxgeno

es

separado,

el

Eh

disminuye

Esto

ocurre

cuando

los

microorganismos crecen en la leche y disminuyen el oxgeno. Si el nmero de

microorganismos es muy elevado, el consumo de oxgeno ser muy elevado y
por consiguiente el Eh caer rpidamente; si por lo contrario los
microorganismos son pocos, el Eh disminuir lentamente.
Permite teir el interior celular. Tie microorganismos procariticos (vivos o
muertos). Los eucariticos slo se tien si estn muertos. Algunas estructuras,
como los corpsculos metacromticos, se tien ms intensamente con este
colorante que el resto de la clula.

X.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
FRAZIER. W. 1992. Microbiologa de los Alimentos. 4ta edicin.
Editorial Acribia. Zaragoza HARRIGAN,

W.

1992.

Mtodos

de

Laboratorio en Microbiologa de los alimentos y productos. Lcteos.

3ra Edicin. Editorial Acribia. Zaragoza.
JAY. J.1994. Microbiologa Moderna de los Alimentos. 2da Edicin.
Editorial Acribia. Zaragoza.
MORENO M., M.; M. T., SILVA G. y CALDERON M., W. (2006). Gua de
Prcticas: Microbiologa General. Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo
Facultad de Ciencias Biolgicas. Lambayeque.
DAVILA FERNANDEZ, N. y HERNANDEZ GARCIA, J. M. (2006).
Mtodos de ensayos rpidos de deteccin de microorganismos en la
leche.

Links investigados

http://depa.pquim.unam.mx/amyd/archivero/materialdeapoyoparapruebasdeplat
aforma_1693.pdf
http://www.veterinaria.org/revistas/redvet/n070706/070603.pdf
http://www.unavarra.es/genmic/curso%20microbiologia
%20general/notas_de_microbiologia_de_los_al.htm
http://www.anmat.gov.ar/anmat/drvisapi.dll?
MIval=fna_show_monog&ID=AZUL_DE_METILENO
http://imb.usal.es/Practicas2/P2/Practicas2.pdf
http//:www.senasa.gob.pe/