Análisis de Criterios y Requisitos Internacionales para Determinar La Biocomparabilidad de Productos Que Contienen Eritropoyetina

FACULTAD DE QUMICA
ANLISIS DE CRITERIOS Y REQUISITOS

INTERNACIONALES PARA DETERMINAR LA
BIOCOMPARABILIDAD DE PRODUCTOS QUE
CONTIENEN ERITROPOYETINA
TRABAJO ESCRITO VA CURSOS DE EDUCACIN CONTINUA

QUE PARA OBTENER EL TTULO DE:
QUMICO FARMACUTICO BILOGO
PRESENTA:
JOS MIGUEL PADILLA VALDEZ
MXICO, D.F.
2015
1
JURADO ASIGNADO:
PRESIDENTE:
INS FUENTES NORIEGA.
VOCAL:
HELGI HELENE JUNG COOK.
SECRETARIO:
KENNETH RUBIO C ARRASCO.
1er. SUPLENTE:
ROBERTO CARLOS CAAS ALONSO.
2 SUPLENTE:
JORGE RAFAEL M ARTNEZ PENICHE.
SITIO DONDE SE DESARROLL EL TEMA:

UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO
FACULTAD DE QUMICA.
EDIFICIO D, DEPARTAMENTO DE EDUCACIN CONTINA.
CIRCUITO I NSTITUTOS , CIUDAD UNIVERSITARIA , CP. 04510.
ASESOR DEL TEMA:
___________________________
Dra. Helgi Helene Jung Cook.
SUSTENTANTE:
___________________________
Jos Miguel Padilla Valdez.
NDICE.
ABREVIATURAS..
1. INTRODUCCIN ..
2. OBJETIVOS ...
3. GENERALIDADES
3.1 Medicamentos Biotecnolgicos .
3.2 El Eritrocito
3.3 Eritropoyetina ...
10
3.4 Estructura Bioqumica de la Eritropoyetina .
11
3.5 Estructura Bioqumica del Receptor de la Eritropoyetina .
13
3.6 Vas de Sealizacin de la Eritropoyetina ...
14
3.7 Eritropoyetina Recombinante Humana
15
3.8 Tipos de rHuEPO y Agentes Estimuladores de la

Eritropoyetina
16
3.9 Medicamentos Biosimilares ...
21
3.10 Eritropoyetina Humana Recombinante Biosimilar
23
4. METODOLOGA
24
5. RESULTADOS ..
28
6. DISCUSIN
49
7. CONCLUSIONES ..
54
8. BIBLIOGRAFA ..
55
ABREVIATURAS
BFU-E
Unidad Eritroide Estimulante de la Eritroaceleracin.
CFU-E
Unidad formadora de Colonias Eritroctica.
CFU-GEMM
Unidad formadora de colonia Granulocito, Eritrocito, Megacariocito,

Monocito.
EPO
Eritropoyetina.
EPO-R
Receptor de Eritropoyetina.
FLT-3L
Ligando de la Tirosina Fetal 3.
GM-CSF
Factor Estimulante de colonias de Granulocitos y Monocitos.
Hb
Hemoglobina.
IL-3
Interleucina 3.
IL-4
Interleucina 4.
JAK2
Protena Janus Kinase 2.
rHuEPO
Eritropoyetina Recombinante Humana.
SAT
Protenas Transductoras y Activadoras de las seales de

Transduccin.
SCF
Factor de Clulas seminales.
TPO
Trombopoyetina.
1. INTRODUCCIN.
Los medicamentos obtenidos por biotecnologa constituyen una nueva perspectiva

y representan el futuro de la teraputica mdica en el tratamiento de
enfermedades crnicas. Entre los productos desarrollados mediante biotecnologa
se encuentran los frmacos constituidos por protenas expresadas y producidas
con mtodos de ingeniera gentica y tecnologa de recombinacin de ADN, pero
tambin anticuerpos monoclonales producidos por tecnologa de hibridacin,
vectores (virus, molculas lipdicas) para la transferencia gentica, fragmentos de
anticuerpos, molculas antisentido y vectores lipdicos para la formulacin de
frmacos. Los medicamentos biotecnolgicos reducen la mortalidad prematura,
disminuyen la morbilidad y, mejoran la calidad de vida de los pacientes.
El primer frmaco biotecnolgico que sali al mercado fue la insulina humana

recombinante en el ao de 1982. A principios del 2004, las patentes de la primera
generacin de medicamentos biotecnolgicos comenzaron a expirar, dejando las
puertas
abiertas
otros
fabricantes
para
producirlos.
Actualmente
se
comercializan en nuestro pas, una serie de medicamentos biotecnolgicos cuya

patente ha vencido, entre los cuales se encuentran: somatropina, interfern alfa2b, interfern beta-1a, interfern beta-1b, filgrastim, eritropoyetina, y
antgeno
VHB. Debido a los altos costos de los innovadores, estos son intercambiados en la
prctica clnica (por las copias), sin embargo, no se conoce con certeza si estos
productos cumplen con las caractersticas que avalen su comparabilidad. A la
fecha, se han publicado diferentes guas y procedimientos para llevar a cabo las
pruebas que garanticen la similitud entre el producto innovador y los productos de
entrada subsecuente.
2. OBJETIVO.
El objetivo del presente trabajo fue realizar una revisin de los criterios y requisitos
para evaluar la Biocomparabilidad de productos conteniendo eritropoyetina.
3. GENERALIDADES.
3.1 MEDICAMENTOS BIOTECNOLGICOS.
En la actualidad, la industria Farmacutica es uno de los sectores empresariales

ms
influyentes
del
mundo.
Se
encuentra
conformada
organizaciones pblicas y privadas enfocadas a realizar
por
numerosas
la investigacin, el
desarrollo, fabricacin y comercializacin de medicamentos para la prevencin o

tratamiento de las enfermedades humanas y animales. Existen diferentes
definiciones que se pueden utilizar para un medicamento, en nuestro pas la
definicin que se encuentra dentro del marco regulatorio de la Ley General de
Salud en su artculo 221 se refiere a un medicamento como:
Toda sustancia o mezcla de substancias de origen natural o sinttico que tenga
efecto teraputico, preventivo o rehabilitatorio, que se presente en forma
farmacutica y se identifique como tal por su actividad farmacolgica,
caractersticas fsicas, qumicas y biolgicas. Cuando un producto contenga
nutrimentos, ser considerado como medicamento, siempre que se trate de un
preparado que contenga de manera individual o asociada: vitaminas, minerales,
electrlitos, aminocidos o cidos grasos, en concentraciones superiores a las de
los alimentos naturales y adems se presente en alguna forma farmacutica
definida y la indicacin de uso contemple efectos teraputicos, preventivos
o rehabilitatorios (Ley General de Salud, 2013).
En base a lo establecido previamente se puede definir de forma general que un
medicamento es una sustancia teraputica que se utiliza para prevenir o tratar
6
enfermedades. Gracias a los avances realizados en las ltimas dcadas en el

campo de la biotecnologa hoy en da se cuenta con un nuevo tipo de
medicamentos, los medicamentos biotecnolgicos, a partir de los cuales se han
desarrollado nuevos tratamientos seguros y eficaces que han revolucionado el
campo de la medicina (Mikhail, A. 2013). En la actualidad ya se encuentran en el
mercado una gran variedad de medicamentos biotecnolgicos entre los cuales se
encuentran: las protenas recombinantes, los anticuerpos monoclonales, los
pptidos sintticos y los plsmidos, entre otros. Entre los ejemplos ms
destacados de medicamentos biotecnolgicos
que se utilizan actualmente se
pueden mencionar son: la eritropoyetina, indicada en el tratamiento de cuadros

anmicos, la insulina, indicada en el tratamiento de pacientes que padecen algn
tipo de diabetes y los interferones, empleados en el tratamiento de enfermedades
inflamatorias (Mikhail, A. 2013).
En nuestro pas dentro del marco regulatorio del Reglamento de Insumos para la
Salud (RIS) en su artculo 81 define a un medicamento Biotecnolgico como:
Toda substancia que haya sido producida por biotecnologa molecular, que tenga
efecto teraputico, preventivo o rehabilitatorio, que se presente en forma
farmacutica, que se identifique como tal por su actividad farmacolgica y
propiedades fsicas, qumicas y biolgicas (Reglamento de Insumos para la
Salud, 2012).
Los medicamentos biotecnolgicos se caracterizan por ser molculas grandes y
complejas que se obtienen por elaborados procesos de produccin en los cuales
el producto final es totalmente dependiente de cada una de las etapas del proceso
de fabricacin. Los medicamentos biotecnolgicos se obtienen empleando clulas
vivas, es decir, microorganismos o lneas celulares que han sido modificadas
genticamente para la produccin de una molcula deseada (Mikhail, A. 2013).
Como consecuencia, una de las caractersticas que resaltan
en este tipo de
medicamentos es la gran variabilidad que puede existir en el medicamento al

finalizar el proceso de fabricacin. Dicha variabilidad puede ocasionar alteraciones
clnicamente significativas en trminos de seguridad y eficacia del producto final, o
bien provocar una respuesta inmunitaria no deseada en el paciente.
7
Otra de las principales diferencias de estos nuevos medicamentos est

relacionada con el tamao de la molcula, la cual generalmente es mucho mayor
en los medicamentos biotecnolgicos (de 100 a 1000 veces mayor en algunos
casos).
Sin embargo,
la diferencia ms significativa
de este tipo de
medicamentos y que es causa de mltiples debates por los investigadores radica

en la estructura de la molcula. Debido a que de forma general estos
medicamentos son clasificados bioqumicamente como protenas (en algunos
casos pptidos), las caractersticas particulares de cada tipo de protena se
encuentran determinadas principalmente por dos factores de variacin, el primer
factor radica en la secuencia de aminocidos propia de la protena y el segundo
se atribuye a los diferentes plegamientos as como las configuraciones espaciales
que puede adquirir la molcula. Al combinar estos factores se puede obtener una
explicacin de la variabilidad
y la dificultad que pueden presentar estos
medicamentos al tratar de obtener las versiones genricas de los mismos.

La fabricacin de los medicamentos biotecnolgicos es un proceso muy exigente.
A continuacin se describen las etapas generales del proceso:
1. Produccin de la lnea celular maestra que contiene el gen que permite
fabricar la protena deseada.
2. Cultivo de grandes cantidades de clulas que producirn posteriormente la
protena deseada.
3. Aislamiento y purificacin de la protena.
4. Preparacin del tratamiento biolgico para su uso en paciente.
En cada paso de este proceso, es fundamental mantener el entorno especfico
que las clulas necesitan para seguir creciendo. Incluso los cambios sutiles
pueden afectar a las clulas y alterar las protenas que producen (Amgen, 2014).
Por este motivo, se necesitan controles estrictos para garantizar la calidad y la
reproducibilidad del producto final.
3.2 EL ERITROCITO.
El trmino anemia se refiere por lo general a un estado en el cual la sangre tiene

un nmero menor de glbulos rojos y hemoglobina de lo normal. Debido a lo
anterior, la sangre no tiene la capacidad de transportar la suficiente cantidad de
oxgeno a las clulas. En la actualidad se han descrito diversos tipos de anemias,
sin embargo las causas principales que provocan este padecimiento son: la falta
de produccin de glbulos rojos, un aumento en la velocidad de destruccin de
los glbulos rojos y un aumento en la prdida de glbulos rojos por algn tipo de
sangrado (Gua Breve Sobre la Anemia, 2011).
Los glbulos rojos o eritrocitos tienen como funcin principal transportar el oxgeno
desde los pulmones a los tejidos y eliminar el dixido de carbono como desecho
del metabolismo de las clulas (Alegre, A. 2005). Para lograrlo, los glbulos rojos
utilizan la protena hemoglobina (Hb), la cual ocupa una tercera parte del volumen
total de los mismos. Dicho de otra manera la misin de los hemates es proteger y
transportar la Hb para que sta pueda realizar su funcin respiratoria. Para ello,
tanto el ncleo como las estructuras citoplasmticas han sido reemplazadas por
una solucin concentrada de Hb, en la que tambin se encuentran enzimas,
encargadas de mantener un reducido metabolismo celular (Palomo, I. 2009). Al no
tener ncleo, el eritrocito no puede replicarse ni sintetizar nuevas protenas por lo
que los sistemas metablicos de los hemates se hacen progresivamente menos
activos con el tiempo, y las clulas se hacen ms frgiles, debido a lo anterior el
tiempo de vida de un eritrocito en circulacin sistmica es de aproximadamente
120 das (Palomo, I. 2009).
La eritropoyesis (formacin de eritrocitos), es el proceso que se lleva a cabo en la
mdula sea mediante el cual se generan los eritrocitos a partir de una clula
madre pluripotente o progenitora. Durante este proceso, los eritrocitos pasan a
travs de diferentes estadios de maduracin transformndose en clulas cada vez
ms especializadas, hasta alcanzar la circulacin sangunea (Palomo, I. 2009).
Los eritrocitos se desarrollan a partir de la clula madre mieloide multipotencial

(CFU-GEMM) bajo la influencia de distintas citocinas como: la hormona
eritropoyetina (EPO),
el factor estimulante de colonias de granulocitos y
monocitos (GM-CSF), la interleucina 3 (IL-3) y la interleucina 4 (IL-4). La clula

progenitora eritroctica sensible a la eritropoyetina (CFU-E), da origen al primer
precursor eritroctico reconocible el proeritroblasto (Palomo, I. 2009). El proceso
de maduracin y diferenciacin se encuentra caracterizado por: la sntesis
progresiva de hemoglobina, la reduccin del tamao nuclear y posteriormente la
expulsin del ncleo (como se observa en la figura 1) (Palomo, I. 2009). Es
importante mencionar que durante este proceso, la eritropoyetina (EPO) acta
como una de las principales citocinas reguladoras en el proceso de maduracin y
diferenciacin del eritrocito (Jelkmann, W. 2003).
FIGURA 1. Etapas de la Eritropoyesis. (Tomado de Cummings, Benjamin. 2001).
3.3 LA ERITROPOYETINA
La eritropoyetina (EPO) es una hormona glucoproteica de 30.4 kDa compuesta

por 165 aminocidos, la cual es secretada en respuesta a la hipoxia celular
(Jelkmann, W. 2011). Esta molcula es producida principalmente por las clulas
renales y en menor proporcin por clulas hepticas y acta como una de las
principales citocinas reguladoras de la eritropoyesis (Palomo, I. 2009). Como se ha
mencionado, la hipoxia es el principal estmulo para su produccin, sin embargo
algunas otras condiciones que desencadenan la produccin de la EPO son: la
disminucin de la hemoglobina en la sangre, la hipoglucemia, la disminucin de la
10
presin arterial, el aumento del calcio intracelular, la liberacin de insulina y las

altas temperaturas (Jelkmann, W. 2003).
La actividad principal de la EPO es controlar la produccin de clulas eritroides a

travs de la promocin de la sobrevivencia, proliferacin y diferenciacin de
progenitores eritroides en la mdula sea. En las clulas progenitoras eritroides
tempranas (BFU-E), la EPO acta como agente mitognico y promueve su
proliferacin, mientras que en progenitores eritroides tardos (CFU-E), acta como
agente de sobrevivencia (Miyajima, A. 1999). Es importante destacar que adems
de la EPO, existen otras citocinas como: interleucina 3 (IL-3), trombopoyetina
(TPO), ligando de la tirosina fetal 3 (FLT-3L) y el factor de clulas seminales (SCF)
que tambin participan en la eritropoyesis. Estas citocinas son capaces de actuar
de forma sinrgica
con la
EPO
y regular la proliferacin, diferenciacin y
sobrevivencia de clulas progenitoras y precursores eritroides (Oppenheim, J.

2001).
3.4 ESTRUCTURA BIOQUMICA DE LA EPO.
La EPO humana es una hormona que se encuentra conformada por dos partes. La
primera parte de esta hormona consta de 165 aminocidos, la cual es la
responsable de la unin al receptor de EPO (EPO-R) (Jelkmann, W. 2005). La
segunda corresponde a la parte glicosilada y constituye el 35 40 % de la
molcula. La funcin que desempean estos carbohidratos es de resaltar, ya que
mejoran la estabilidad y prolongan el tiempo de vida media de la EPO en la
circulacin sistmica (Alegre, A. 2005). La EPO es una Glicoprotena compuesta
por cuatro cadenas helicoidales unidas de forma antiparalela. Los carbohidratos
de esta molcula impiden la unin al EPO-R a travs de fuerzas electrostticas.
Adems, la abundancia en residuos de cido silico disminuye la afinidad por el
receptor, pero aumenta la actividad de la EPO al prolongar el tiempo de vida
media debido a que disminuye su degradacin.
11
La estructura terciaria de la protena se compone de 4 hlices- antiparalelas, con

dos puentes disulfuro que se establecen entre cuatro cistenas (Alegre, A. 2005).
La EPO humana se encuentra glicosilada en cuatro lugares distintos a lo largo
de la secuencia de aminocidos. Como se observa en la figura 2, existen tres NGlicosilaciones en Asp24, 38, 83 y una O-Glicosilacin en Ser126 de la cadena
de aminocidos (Jelkmann, W. 2005). Es importante destacar que el nmero de
glicosilaciones
y la
cantidad
de
carbohidratos
afectan
las
propiedades
farmacocinticas de la misma en condiciones fisiolgicas.
Seala las N- Glicosilaciones.
Seala las O-Glicosilaciones.
FIGURA 2. Patrn de Glicosilacin de la EPO. Se muestran los sitios de glicosilacin en la

cadena de aminocidos de la EPO (Danishefsky, Samuel. 2013).
El contenido de carbohidratos de la molcula de EPO es del 35%. Los

carbohidratos de la glicoprotena son principalmente cido silico (11 %), hexosas,
N-Acetilglucosamina, N-acetilgalactosamina y cido N-acetilneuramnico.
12
La estructura y composicin de los carbohidratos de la molcula de EPO son

importantes para el mantenimiento de la hormona en circulacin. El cido silico
es necesario para el mantenimiento de la actividad biolgica in vivo. La remocin
qumica o enzimtica del cido silico, desialacin, expone un residuo
galactoslico en la molcula que puede entonces ligarse rpidamente a receptores
de galactosa en los hepatocitos, lo que determina su metabolismo casi inmediato
en el hgado.
La glicosilacin de la EPO tambin es necesaria para el transporte plasmtico de
la hormona y para el paso de la misma desde la sangre a la mdula sea a travs
de las clulas endoteliales de la barrera sangre-mdula sea.
La molcula de EPO humana posee 4 cistenas ligadas por puentes internos de
disulfuro entre las cistenas 29-33 y 7-161, cuya conservacin es necesaria para el
mantenimiento de la actividad biolgica. En tal sentido, la alquilacin de los grupos
sulfhidrilos produce una prdida irreversible de la actividad eritropoytica.
3.5 ESTRUCTURA BIOQUMICA DEL RECEPTOR DE EPO.
El receptor de la eritropoyetina (EPO-R)
es un homodmero, por lo que se
encuentra conformado por dos cadenas de glicoprotenas de 484 aminocidos

cada una de ellas, las dos sub-unidades del EPO-R se unen a una sola molcula
de EPO para poder ser activados (Alegre, A. 2005). El EPO-R se expresa
principalmente en las membranas de clulas inmaduras, se encuentra en mayor
proporcin en las clulas progenitoras eritroides como CFU-E y BFU-E.
Este
receptor pertenece a la familia de receptores de citocinas tipo 1, los receptores de

dicha familia se caracterizan por estar conformados por tres secciones bien
diferenciadas: una porcin extracelular, una regin transmembranal y finalmente
una porcin intracelular (Jelkmann, W. 2005), las partes del receptor se muestran
en la figura 3. La regin extracelular es la responsable de la dimerizacin de las
dos molculas del receptor tras activarse con la unin de la EPO. La regin
transmembranal se encuentra involucrada en la formacin de dmeros y
multmeros constitutivamente activos. Finalmente la regin intracelular se
encuentra involucrada en las distintas vas de sealizacin (Alegre, A. 2005).
13
FIGURA 3. Estructura del EPO-R. Se muestran la regin extracelular en color verde, la regin
transmembranal en color morado y la regin intracelular en color violeta
(Tomado de Brines & Cerami, 2005).
3.6 VIAS DE SEALIZACIN DE LA EPO.
Para que la EPO pueda llevar a cabo sus funciones en la maduracin de las
clulas progenitoras eritroides, es necesario que se una a su receptor especfico
(EPO-R). Como consecuencia de la unin de la EPO a su receptor
se
desencadenarn una serie de cambios a nivel molecular. En primer lugar el

EPO-R sufre un cambio conformacional y la formacin de un dmero estable en la
superficie de la clula (Alegre, A. 2005). Posteriormente, las protenas cinasas
JAK2 (Janus kinase 2) que se encuentran asociadas a cada unidad del receptor
en la regin citoplasmtica se activan por transfosforilacin. La fosforilacin de las
protenas JAK2 les permite fosforilar posteriormente a los residuos de tirosina
presentes en la regin citoplasmtica del EPO-R (Jelkmann, W. 2003). En estos
residuos fosforilados se crean sitios de unin a los cuales se les pueden unir
distintas molculas que desencadenarn las distintas vas de sealizacin (como
se observa en la figura 4), una de las vas que se activa tras la unin de la EPO a
su receptor especfico es la va JACK/STAT (Alegre, A. 2005).
14
FIGURA 4. Principales vas de la sealizacin activadas por la unin de la EPO a su receptor.

Se muestran las vas JACK/STAT, MAPK y PI3K/AKT (Tomado de Jelkmann, W. 2005).
En la activacin de la va JACK/STAT las protenas STAT (protenas

Transductoras y Activadoras de las seales de Transcripcin) se unen a los
residuos de tirosina fosforilada, para que posteriormente estas protenas STAT
sean fosforiladas por las protenas JACK, tras esta fosforilacin las protenas
STAT se dimerizan para que posteriormente se puedan translocar al ncleo de la
clula en donde activan la transcripcin de los genes relacionados con la
proliferacin y la diferenciacin eritroide (Valle Mendiola & Soto Cruz, 2005).
3.7 ERITROPOYETINA RECOMBINANTE HUMANA.
Hoy en da gracias a los distintos avances en al campo de la biologa molecular

y otras disciplinas de la ciencia, el ser humano cuenta con una gran variedad de
medicamentos biotecnolgicos que han revolucionado las opciones teraputicas
para un gran nmero de padecimientos que no contaban con opciones de
tratamiento en el pasado. Entre los medicamentos biotecnolgicos ms
destacados
de los ltimos 25 aos
figura
la
eritropoyetina recombinante
15
humana (rHuEPO), la cual es ampliamente utilizada en el mundo (Garca, F.

2011).
En 1977
Miyake y colaboradores purificaron a partir de orina humana a la
molcula de la EPO (Miyake, K, Kung, & Goldwasser, 1977), lo que permiti

dilucidar la secuencia de aminocidos y la clonacin del gen que posteriormente
fue expresado en clulas CHO (del ingls Chinese Hamster Ovary cells) dando
como resultado la rHuEPO (Fu Ken, Siddney, Chi Hweling, & Jeffrey, 1985).
Posteriormente, Eschbach y col. publicaron el primer ensayo clnico, demostrando
una correccin en la anemia causada por la insuficiencia renal terminal (IRT)
mediante la utilizacin de EPO humana recombinante (rHuEPO). Desde entonces,
se estableci la utilidad de la terapia con rHuEPO para mejorar otras anemias
asociadas diversos padecimientos como: La falla renal crnica, distintos tipos de
cncer, enfermedades autoinmunes, VIH, Hepatitis C, entre otras (Jelkmann, W.
2003). Es importante sealar que hoy en da en los casos de anemias severas la
rHuEPO es utilizada para incrementar los niveles de eritrocitos y evitar de esta
forma el riesgo de contraer posibles infecciones post- transfusionales y mejorar la
calidad de vida del paciente (Jelkmann, W. 2003).
3.8 TIPOS DE rHuEPO Y AGENTES ESTIMULADORES DE LA ERITOPOYETINA.
De acuerdo a la Organizacin Mundial de la Salud (OMS) es necesario asignar

una Denominacin Comn Internacional (DCI, tambin llamado INN por sus siglas
en Ingles) para nombrar a las sustancias
biolgicas o biotecnolgicas (World
Health Organization, 2008). La raz utilizada para designar a los factores

biolgicos tipo eritropoyetina es: poetin. Esta raz debe ser designada a todas las
Eritropoyetinas que tengan la misma secuencia de aminocidos que la
Eritropoyetina Humana. Adems, se debe designar una letra griega para denotar
una diferencia en el patrn de glicosilacin entre las eritropoyetinas (ej. Epoetin
alfa, Epoetin beta). Finalmente, si existe una diferencia en la secuencia de
aminocidos en comparacin con la Eritropoyetina Humana se debe utilizar un
prefijo distinto en la raz del nombre principal (ej. Darbepoetina) (WHO, 2008).
16
Desde su aprobacin por la FDA en 1989 la rHuEPO y los agentes estimuladores

de eritropoyetina (ESA, Erythropoietin Stimulating Agents) se han convertido en
un estndar en el tratamiento de la anemia causada por la deficiencia en la
produccin de la EPO (Hayat, Dhiren , & Moro O , 2008) como es el caso de los
pacientes que sufren una enfermedad renal crnica.
Las primeras eritropoyetinas recombinantes humanas que estuvieron disponibles
en el mercado fueron la Epoetin-alfa y la Epoetin-beta hace ya aproximadamente
25 aos. En ambos casos la secuencia de aminocidos es exactamente igual, sin
embargo la diferencia principal entre ellas radica en el patrn de glicosilacin
(Casadevall, N. 2009), debido a esta diferencia los tiempos de vida media entre la
Epoetin-alfa y la Epoetin-beta mostraron ser distintos en cada caso.
La mayor desventaja de estas eritropoyetinas radic en el tiempo de vida media
corto en circulacin sistmica, de 6 a 8 horas, por lo que era necesario administrar
una
inyeccin
Posteriormente,
dos o
tres veces por semana
(Macdougall,
C.
2008).
se desarrollaron la Epoetinomega y la Epoetin-delta, la
diferencia en este tipo de eritropoyetinas en comparacin con la Epoetin-alfa y la

Epoetin-beta radic en la lnea celular utilizada para su produccin (tabla 1). De
forma general al conjunto de estas eritropoyetinas se les denomin de primera
generacin, a pesar de que se utilizaron lneas celulares distintas para su
produccin, estas eritropoyetinas
presentaban 2 cosas en comn, la misma
secuencia de 165 aminocidos que la eritropoyetina endgena y un tiempo de vida

media corto en circulacin sistmica (Macdougall, C. 2008).
Posteriormente, las empresas farmacuticas se enfocaron en desarrollar nuevos
tipos de eritropoyetinas que presentaran un mayor tiempo de vida media en
circulacin sistmica, disminuyendo as la necesidad de varias administraciones
en los pacientes.
La siguiente generacin de eritropoyetinas tuvo como objetivo el desarrollo de
eritropoyetinas con una mayor duracin en circulacin sistmica. Darbepoetin alfa
se catalog como una eritropoyetina de segunda generacin, ya que se
caracteriz por triplicar el tiempo de vida media en circulacin sistmica. Para
lograrlo se adicionaron cinco aminocidos a la secuencia original de la
17
eritropoyetina endgena permitiendo as dos sitios de N-glicosilaciones adicionales

en la molcula lo cual dio como resultado un incremento significativo en el tiempo
de vida media (Macdougall, C. 2008).
La tercera generacin de eritropoyetinas se encuentra representada por el
Activador Continuo del Receptor de la Eritropoyetina (CERA, Continuos
Erythropoietin Receptor Activator), cuyo nombre comercial es Mircera , su
caracterstica principal radica en la adicin de una cadena de metoxipolietilenglicol a la secuencia de aminocidos de la Epoetin-beta (Lys
45
o Lys
52
(Thieme & Hemmersbach, 2010). Debido a esta adicin se increment el tamao

de la molcula de 30 kDa
60 kDa, adems se observ un incremento
significativo en el tiempo de vida media, aproximadamente de 130 horas,

permitiendo as reducir el esquema de dosificacin a una sola administracin del
medicamento cada dos semanas (Thieme & Hemmersbach, 2010).
18
TABLA1. Tipos de Eritropoyetinas recombinantes Humanas y Eritropoyetinas Biosimilares

( Modificado de Thieme D. 2010 ).
DENOMINACIN
COMN
INTERNACIONAL
TIEMPO DE
VIDA MEDIA
NOMBRE
COMERCIAL
COMPAA
FARMACUTICA
LNEA
CELULAR
t ( Horas )
Primera Generacin
Epoetin-alfa.
Epoetin-beta.
Epoetin-omega.
Epoetin-delta.
Epogen.
Procrit.
Eprex.
IV: 4 - 13.
IV: 4 - 13.
IV: 4 - 6.
Amgen.
Ortho Biotech.
Janssen-Ortho.
Recormon.
NeoRecormon
IV: 4 - 12.
SC: 13 - 28.
Boehringer
Mannheim.
Roche.
EpoMax.
Elanex.
Epomega.
Repotina.
Dynepo.
CHO
CHO-DN2-33
Elanex
Pharmaceuticals.
SC: 23 - 33
IV: 7 - 20.
SC: 18 - 20.
BHK
Baxter
Shire
Pharmaceuticals
Human
Fibrosarcoma
cell Line HT1080
Segunda Generacin
Darbepoetin
Alfa.
Aranesp
IV: aprox. 25
SC: 27 - 89
Amgen
CHO
Tercera Generacin
Continuous
Erythropoietin
Receptor
Activator
(CERA)
Mircera.
IV: 134 65
SC: 139 69
CHO
Roche
BHK: Baby Hamster Kidney cells. CHO: Chinese Hamster Ovary cells.
IV: Administracin Intravenosa. SC: Administracin Sub-Cutnea.
19
TABLA1. (Continuacin) Tipos de Eritropoyetinas recombinantes Humanas y Eritropoyetinas

Biosimilares
( Modificado de Thieme D. 2010 ).
DENOMINACIN
COMN
INTERNACIONAL
NOMBRE
COMERCIAL
TIEMPO DE
VIDA MEDIA
COMPAA
FARMACUTICA
LNEA
CELULAR
t ( Horas )
BIOSIMILARES
Epoetin-alfa
HX575.
Binocrit.
IV: 4 5
SC: aprox. 24
Medice Arzneimittel
Putter.
IV: 4 6
SC: aprox. 24
Sandoz GmbH.
Epoetin alfa
Hexal.
IV: 4 6
SC: aprox. 24
Hexal Biotech.
Retacrit
IV: 4 6
SC: aprox. 24
Hospira.
Epobel
IV: 4 6
SC: aprox. 24
Epoetin-zeta
SB309
Abseamed.
CHO
STADA
BHK: Baby Hamster Kidney cells. CHO: Chinese Hamster Ovary cells.
IV: Administracin Intravenosa. SC: Administracin Sub-Cutnea.
20
3.9 MEDICAMENTOS BIOSIMILARES.
Desde la aprobacin de la insulina humana recombinante en 1982 se ha

observado un incremento en la aceptacin de un nmero mayor de medicamentos
biolgicos por parte de las distintas entidades regulatorias como los son la EMA y
la FDA
( Mikhail & Farouk, 2013). Durante los ltimos aos muchas de las
patentes de estos medicamentos biolgicos han expirado o en su defecto estn

prximas a expirar, lo que ha permitido la apertura de un nuevo mercado a
muchas industrias farmacuticas en cuanto a la manufactura y comercializacin de
las versiones similares de estos medicamentos biolgicos ( Mikhail & Farouk,
2013).
Estos medicamentos se describen en forma general como Medicamentos
Biosimilares
como
son
llamados
en
nuestro
pas
Medicamentos
Biocomparables (en el presente trabajo se describirn como biosimilares). De

acuerdo con la EMA se define a un medicamento biosimilar como:
Un medicamento biosimilar es un medicamento biolgico que se desarrolla para
que sea similar a un medicamento biolgico ya existente (el medicamento de
referencia). Los biosimilares no son iguales a los genricos, que tienen
estructuras qumicas ms simples y se consideran idnticos a sus medicamentos
de referencia. El principio activo de un biosimilar y su medicamento de referencia
es esencialmente la misma sustancia biolgica, aunque existen ligeras diferencias
debido a la complejidad de su naturaleza y a los mtodos de produccin
(European Medicines Agency, 2012).
En la prctica clnica la introduccin de los medicamentos biosimilares ha
permitido a los pacientes el acceso a nuevas terapias que anteriormente tenan
un muy alto costo. Sin embargo, de acuerdo a los expertos en el tema y a la
definicin previa, los medicamentos biosimilares no son exactamente iguales a los
innovadores que se han utilizado como referencia, esto debido al complejo
proceso de produccin que involucra mltiples etapas y factores que hacen
imposible reproducir las molculas con la misma exactitud ( Mikhail & Farouk,
2013), lo que ha causado gran polmica respecto al uso de los mismos.
21
Adems de las mltiples etapas en los procesos de produccin, se debe resaltar la

gran variabilidad que puede existir en estos medicamentos al tratarse de un
proceso llevado a cabo en un modelo biolgico. Por lo anterior los expertos se
cuestionan si estas versiones
de medicamentos biosimilares son capaces de
cumplir con el perfil de seguridad, eficacia y calidad que deben de cumplir los
medicamentos genricos de sntesis tradicional para su aprobacin por parte de
las Entidades Regulatorias.
Uno de los temas ms debatidos por las distintas autoridades sanitarias y los
diversos investigadores a nivel mundial sobre el uso de los medicamentos
biosimilares es la inmunogenicidad. El concepto de inmunogenicidad se define
como la capacidad de un compuesto (ej. una protena) para inducir una
respuesta inmune (ej. anticuerpos anti-medicamentos). Las consecuencias de
estas respuestas inmunolgicas pueden ser variadas y a menudo impredecibles.
Se han descrito diversas reacciones que van desde la disminucin en la eficacia
del medicamento, hasta la induccin del sistema inmunolgico para lo formacin
de anticuerpos especficos que neutralicen a la molcula teraputica en cuestin o
en el peor de los casos que neutralicen la molcula nativa/endgena del paciente
(Schellekens, H. 2009). Un ejemplo de lo anterior fue reportado en 1998 cuando
debido a una reformulacin de la Epoetin-alfa (Eprex) se observ un incremento
en el nmero de pacientes con dao renal, que desarrollaron aplasia pura de la
serie roja (eritroblastopenia) debido a que desarrollaron anticuerpos anti
eritropoyetina (Bennett, C. 2005). Los cambios involucrados en la formulacin
fueron dos, en primer lugar se cambi la va de administracin de intravenosa a
subcutnea y en segundo lugar se cambi a la Albmina srica humana por
Polisorbato 80 como estabilizador (Schellekens, H. 2006).
Los factores que pueden desencadenar inmunogenicidad en un paciente pueden
estar relacionados a: los cambios en la estructura de la molcula, cambios en la
secuencia de los aminocidos, cambios en la secuencia de glicosilacin,
impurezas y contaminantes en el medicamento, e incluso las condiciones de
transporte y almacenamiento del producto final. En cuanto a los factores
relacionados con los pacientes es importante mencionar: la va de administracin,
22
el rgimen de dosificacin, la duracin del tratamiento, as como el padecimiento a

tratar del paciente (Schellekens, H. 2009).
3.10 ERITROPOYETINA HUMANA RECOMBINANTE BIOSIMILAR.
A finales del ao 2007 las primeras eritropoyetinas biosimilares Epoetin-alfa

(HX575) y Epoetin-zeta (SB309) fueron aprobadas por la Agencia Europea de
Medicamentos (EMA). Para evaluar la comparabilidad de estas versiones
biosimilares
se
realizaron
estudios
preclnicos,
farmacocinticos,
farmacodinmicos, as como ensayos clnicos fase 3 para evaluar la seguridad y

eficacia de los mismos. Los estudios realizados
le permitieron a la EMA
determinar la similitud entre las versiones biosimilares y el medicamento

innovador. Sin embargo, los investigadores sealan que los mrgenes para
evaluar la equivalencia de las versiones biosimilares son muy amplios, por lo que
no sera posible discriminar las diferencias en la seguridad y la eficacia de estos
medicamentos.
Debido a que la inmunogenicidad, es un criterio muy importante para la evaluacin
de la seguridad de los medicamentos biocomparables, adems de los reportes de
Aplasia Pura de la Serie Roja vinculados con la reformulacin de la Epoetin-alfa
(Eprex), los investigadores se cuestionan seriamente si los requerimientos
establecidos por las distintas
entidades regulatorias son los adecuados para
garantizar la seguridad, eficacia y calidad de las eritropoyetinas biosimilares.
23
4. INVESTIGACIN REALIZADA. METODOLOGA.
La metodologa a seguir fue la siguiente:
Se llev a cabo una bsqueda de las guas publicadas por la FDA,

Health Canada, OMS y Mxico, as como las establecidas por la EMA
para determinar la biosimilitud de productos conteniendo eritropoyetina.
En caso de que no existieran guas especficas para eritropoyetina, se

revisaron las guas generales para la evaluacin de productos biosimilares.
La revisin consisti en los criterios Fisicoqumicos, Estudios Preclnicos y

Estudios Clnicos requeridos para determinar la biosimilitud.
Posteriormente se llev a cabo la comparacin entre ellas.
Las guas revisadas para el presente trabajo fueron las siguientes:
1) European Medicines Agency (EMA):
Guideline on similar biological medicinal products. (CHMP/437/04 Rev 1).
Guideline on Similar Biological Medicinal Products containing Biotechnology

derived
Proteins
as
Active
Substance:
Quality
Issues.
(EMA/CHMP/BWP/247713/2012).
Guideline on non-clinical and clinical development of similar biological

medicinal products containing recombinant erythropoietins (Revision).
(EMEA/CHMP/BMWP/301636/2008).
Guideline
on
immunogenicity
assessment
of
biotechnology-derived
therapeutic proteins. (EMEA/CHMP/BMWP/ 14327/2006).
Specifications: Test procedures and acceptance criteria for new drug

biotechnological/biological products. Q6B. (CPMP/ICH/365/96).
24
Note for guidance on toxicokinetics: A guidance for assessing systemic

exposure in toxicological studies. S3A. (CPMP/ICH/384/95).
Note for guidance on repeated dose toxicity. (CPMP/SWP/1042/99).
Note for guidance on non-clinical local tolerance testing of medicinal

products. (CPMP/SWP/2145/00).
2) Food and Drug Administration (FDA):
Guidance
for
Biosimilarity
Industry,
Scientific
Considerations
in
Demonstrating
to a Reference Product. U.S. Department of health and
Human Services, Food and Drug Administration, April 2015.
Guidance for Industry, Quality Considerations in Demonstrating Biosimilarity

of a Therapeutic Protein Product to a Reference Product. U.S. Department
of health and Human Services, Food and Drug Administration, April 2015.
Guidance for Industry, Immunogenicity Assessment for Therapeutic Protein

Products. U.S. Department of health and Human Services, Food and Drug
Administration, August 2014).

Preclinical safety evaluation of biotechnology-derived pharmaceuticals.

S6(R1). (CPMP/ICH/302/95).
Guidance
for
Industry,
Statistical
Approaches
to
Establishing
Bioequivalence. U.S. Department of health and Human Services, Food and

Drug Administration, January 2001.
25
3) Health Canada:
Guidance for Sponsors: Information and Submission Requirements for

Subsequent Entry Biologics (SEBs). Health Canada, March 2010.

Preclinical safety evaluation of biotechnology-derived pharmaceuticals. S6

(R1). (CPMP/ICH/302/95).
Pharmacovigilance planning. E2E (CPMP/ICH/5716/03).
4) Expert Committee on Biological Standardization (OMS):
Guidelines on Evaluation of similar biotherapeutic products (SBPs). WHO

Expert Committee on Biological Standardization, WHO Technical Report
Series No. 977, 2013.
Preclinical safety evaluation of biotechnology-derived pharmaceuticals. S6

(R1). (CPMP/ICH/302/95).
Choice of control group and related issues in clinical trials (E10). Geneva,
International Conference on Harmonisation of Technical Requirements for
Registration of Pharmaceuticals for Human Use, 2000.
Statistical principles for clinical trials (E9). Geneva, International Conference

on Harmonisation of Technical Requirements for Registration of
Pharmaceuticals for Human Use, 1998.
Pharmacovigilance planning. E2E (CPMP/ICH/5716/03).
26
5) En el caso de Mxico se consultaron:
Ley General de Salud, publicada en el Diario Oficial de la Federacin,

ltima reforma 04 de Diciembre de 2013.
Reglamento de Insumos para la Salud, publicado en el Diario Oficial de la

Federacin, ltima reforma 09 de Octubre de 2012.
Reglamento de la Ley General de Salud en materia de investigacin para la

Salud, publicado en el Diario Oficial de la Federacin el 06 de Enero de
1987.
Reglamento Interior del Comit de Molculas Nuevas, publicado en el

Diario Oficial de la Federacin, ltima reforma 23 de Abril de 2012.
Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-2013, Buenas prcticas de

fabricacin de medicamentos, publicada en el Diario Oficial de la
Federacin el 22 de Julio de 2013.
Norma Oficial Mexicana NOM-177-SSA1-2013, Que establece las pruebas

y procedimientos para demostrar que un medicamento es intercambiable.
Requisitos a que deben sujetarse los Terceros Autorizados que realicen las
pruebas de intercambiabilidad. Requisitos para realizar los estudios de
biocomparabilidad. Requisitos a que deben sujetarse los Terceros
Autorizados, Centros de Investigacin o Instituciones Hospitalarias que
realicen las pruebas de biocomparabilidad, publicada en el Diario Oficial de
la Federacin el 20 de Septiembre de 2013.
Norma Oficial Mexicana NOM-220-SSA1-2012, Instalacin y operacin de

la Farmacovigilancia, publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 07
de Enero de 2013.
Norma
Oficial
Mexicana
NOM-257-SSA1-2014,
En
materia
de
Medicamentos Biotecnolgicos, publicada en el Diario Oficial de la

Federacin el Jueves 11 de diciembre de 2014.
27
6. RESULTADOS.
En la tabla 2 se presenta un cuadro comparativo de los criterios y requisitos para

evaluar la biocomparabilidad de los productos biotecnolgicos conteniendo
eritropoyetina, los cuales se subdividieron en:
1) El anlisis comparativo a travs de la caracterizacin estructural y fisicoqumica
de los medicamentos.
2) Los estudios Pre-clnicos in vitro/ in vivo para la evaluacin de los parmetros
PK, PD, toxicocintica e inmunogenicidad.
3) Los Ensayos Clnicos, en los cuales se describen las pruebas necesarias para
la evaluacin de los parmetros PK, PD, y de eficacia en humanos, as como la
inmunogenicidad.
4) El plan de Farmacovigilancia para monitorear las posibles reacciones Adversas
del medicamento (RAMs).
28
Tabla 2. CUADRO COMPARATIVO DE LOS CRITERIOS Y REQUISITOS PARA EVALUAR LA BIOCOMPARABILIDAD DE LOS PRODUCTOS QUE
CONTENGAN EPO.
Comunidad Europea
(EMA)
Similar Biological Medicinal
Product.
(Biosimilar)
Canad (Health Canada).
ENTIDADES REGULATORIAS.
OMS Expert Committee on
Estados Unidos de Amrica
Biological Standardization
(FDA)
NOMBRE ESTABLECIDO.
Medicamento Biolgico de
Medicamento Biolgico
entrada Subsecuente.
Biosimilar
(SEB)
(Biosimilar)
Similar Biotherapeutic Products

(SBPs)
Mxico (COFEPRIS).
Medicamento
Biotecnolgico Innovador.
(Biocomparable)
GUA PRINCIPAL
Guideline on Non-clinical
and Clinical Development
of similar biological
medicinal products
containing recombinant
erythropoietins.
ESPECFICA
Information And
Submission Requierements
for Subsequent Entry
Biologics(SEBs)
Scientific Considerations in
Demonstrating Biosimilarity
to a Reference Product
Guidance for Industry
Guidelines on evaluation of
similar biotherapeutic
products (SBPs).
Norma Oficial Mexicana

NOM-177-SSA1-2013
GENERAL
GENERAL
GENERAL
GENERAL
a) REQUISITOS PREVIOS AL ESTUDIO DE BIOSIMILITUD.

1) CARACTERIZACIN FISICOQUMICA.
1. CARACTERIZACIN.
Las pruebas necesarias para
realizar el anlisis comparativo
son:
1. CARACTERIZACIN.
La caracterizacin se llevar a cabo
mediante los requisitos
establecidos en la gua:
1. ANLISIS ESTRUCTURAL/
CARACTERIZACIN FISICOQUMICA.
Los patrocinadores deben llevar a

cabo una amplia caracterizacin
estructural tanto del producto
1. CARACTERIZACIN.
Realizar una caracterizacin
fisicoqumica exhaustiva del RBP
(Referencia) y del SBP (Prueba)
1. CARACTERIZACIN
Se debern evaluar las siguientes
caractersticas de los medicamentos
biotecnolgicos, las que debern ser
29
CONTENGAN EPO (Continuacin).
Composicin de
Aminocidos.
Secuencia Amino- y
Carboxi- terminal.
Mapeo de Pptidos.
(Determinacin de la estructura
primaria).
Determinacin de Grupos
SH y puentes Disulfuro.
Determinacin de la
estructura secundaria y
terciaria.
Caracterizacin de hidratos
de Carbono.
ICH Q6B Test Procedures and

Acceptance Criteria for
Biotechnological/biological Products
La caracterizacin del SEB y el
medicamento biolgico de
referencia se llevar a cabo
mediante la determinacin de:
Anlisis estructural de Nglicanos.

Anlisis estructural de Oglicanos.
c. Silico.
2. PROPIEDADES FSICAS.
2. PROPIEDADES FSICAS.
Para el desarrollo del anlisis
comparativo se deben
determinar las siguientes
propiedades del principio activo
de ambos medicamentos
biolgicos:
Peso Molecular.
Estado de agregacin.
Punto de Fusin.
Patrn de Isoformas.
Patrn electrofortico.
La determinacin de las
propiedades
fisicoqumicas.
La actividad biolgica.
Propiedades
Inmunoqumicas.
Determinacin de pureza
e impurezas,
contaminantes.
Los criterios de
aceptacin deben ser
establecidos y
justificados.
Peso o tamao Molecular.

Patrn de Isoformas.
Coeficiente de extincin
(o absortividad molar).
Patrones electroforticos.
Perfiles espectroscpicos.
Patrones de cromatografa
lquida.
Propiedades Inmunoqumicas
Pureza e impurezas.
propuesto y el producto de referencia

en varios lotes representativos.
En general, las pruebas de
caracterizacin incluyen la
determinacin de:
La Estructuras primaria (la

secuencia de aminocidos).
Las estructuras de orden
superior, incluidas, y la
estructura cuaternaria,
terciaria y secundaria
(incluyendo la agregacin).
Modificaciones
enzimticas
postraduccionales.
Glicosilacin.
Fosforilacin.
Desamidacin.
Oxidacin de
protenas.
Modificaciones qumicas
intencionales.
Sitios de
PEGilacin.
Adems para la caracterizacin se

debe de tomar en cuenta:
1.1 Sistema de expresin.
1.2 Proceso De Manufactura.
1.3 Evaluacin de las propiedades
fisicoqumicas.
La Evaluacin de las propiedades
Fisicoqumicas se llevar a cabo De
acuerdo a la ICH Q6B.
utilizando las tcnicas bioqumicas,

biolgicas y analticas apropiadas. Es
necesario proporcionar para el
principio activo:
Estructura primaria.
Estructuras de Orden
superior.
Modificaciones posttraduccionales (incluyendo,
pero no limitado a,
glicoformas).
Actividad biolgica.
Pureza /impurezas.
Propiedades
Inmunoqumicas.
Si se encuentran diferencias entre el

SBP y el RBP, su impacto potencial
en la seguridad y eficacia de debe ser
evaluado.
El conocimiento de las limitaciones de
cada tcnica de anlisis utilizados
para caracterizar el producto (por
ejemplo, lmites de sensibilidad, poder
de resolucin) debe ser valorado al
determinar la similitud.
La medicin de atributos de calidad
en los estudios de caracterizacin no
requieren necesariamente el uso de
ensayos validados, pero los ensayos
deben ser cientficamente slidos y
calificados. Estos deben proporcionar
resultados que sean significativos y
fiables.
comparables:
Identidad.
Estructura.
Contenido de cido silico.
Modificaciones posttraduccionales.
Punto isoelctrico.
Glicosilacin.
Actividad biolgica
2. CALIDAD.
Se debern demostrar en el
medicamento biocomparable las
siguientes caractersticas de pureza y
estabilidad:
Ausencia de otras protenas

adems de la de inters. Ser
necesario demostrar una pureza
no menor del 95 %.
Cuantificacin de impurezas
relacionadas al producto.
Presencia de protena modificada
qumicamente (oxidacin,
desaminacin, glicacin, etc.) o
variantes, como puede ser
agregados o productos de
protelisis del producto de inters.
Cuantificacin de impurezas
relacionadas al proceso. ADN
residual, protenas de hospedero,
endotoxinas, agentes biolgicos
endgenos o adventicios,
substancias utilizadas en la
30
Punto
Isoelctrico.
3. ACTIVIDAD BIOLGICA.
Se deben incluir una evaluacin
de las propiedades biolgicas
como un paso esencial en el
perfil de caracterizacin por
medio de:
Ensayos de unin a
receptor
(in vitro / in vivo).
Ensayos de Actividad
biolgica.
(in vitro / in vivo).
La caracterizacin del medicamento

biosimilar el medicamento biolgico
de referencia se llevar a cabo
mediante la determinacin de:
La actividad biolgica debe ser

proporcionada por el fabricante.
Los ejemplos de procedimientos
utilizados para medir la actividad
biolgica incluyen:
Ensayos biolgicos de origen

animal, que miden la
respuesta biolgica de un
organismo para el producto.
Ensayos biolgicos a nivel
celular, que determinen la
respuesta bioqumica o
fisiolgica a nivel celular.
La determinacin de las
propiedades fisicoqumicas.
La actividad biolgica.
Propiedades
Inmunoqumicas.
Determinacin de pureza e
impurezas, contaminantes.
Los criterios de aceptacin
deben ser establecidos y
justificados.
1.3.1 Propiedades Fsicas.
Peso o tamao Molecular.

Patrn de Isoformas.
Coeficiente de extincin
(o absortividad molar).
Patrones electroforticos.
Patrones de cromatografa
lquida.
Propiedades Inmunoqumicas
Pureza e impurezas.
1.3.2 Actividad Biolgica.

proporcionada por el fabricante. Los
ejemplos de procedimientos
utilizados para medir la actividad
biolgica incluyen:
produccin, como inductores,

inhibidores de proteasas u otros
contaminantes potenciales.
Es necesario realizar un ensayo

biolgico relevante (s) con
precisin y exactitud apropiada
para confirmar que no hay
diferencia funcional significativa
entre el SBP y el RBP.
Debido a que la potencia es la medida

cuantitativa de la actividad biolgica,
un ensayo de potencia validado debe
ser parte de la caracterizacin del
SBP y RBP. Los resultados de la
prueba de potencia deben ser
proporcionados y expresados en
unidades de actividad.
3. ESTABILIDAD.
Se realizarn estudios de estabilidad
en tiempo real, estabilidad acelerada y
pruebas de estrs. Debern utilizarse
contenedores representativos del que
se utilizar para el almacenamiento del
biofrmaco y el medicamento
biotecnolgico durante su manufactura
y comercializacin.
Se debern presentar las

especificaciones, mtodos de
anlisis y certificados analticos de
manera comparativa realizados a
3 lotes del medicamento
biotecnolgico no innovador
versus 3 lotes del medicamento
biotecnolgico de referencia.
En el caso de que se utilicen
mtodos no farmacopeicos
debern presentar la validacin
correspondiente de acuerdo a la
NOM-177-SSA1-2013.
La validacin de los mtodos
debern considerar por lo menos
los siguientes parmetros:
linealidad, precisin, LOD/LOQ,
robustez, especificidad,
comparacin de lote a lote y
estabilidad.
31
Ensayos biolgicos de origen

animal, que miden la respuesta
biolgica de un organismo para
el producto.
Ensayos biolgicos a nivel
celular, que determinen la
respuesta bioqumica o
fisiolgica a nivel celular.
1.4 Ensayos de funcionalidad.

1.5 Afinidad por el receptor /
Propiedades Inmunoqumicas.
Para algunas sustancias
farmacuticas o productos de drogas,
puede necesitar ser examinado
utilizando procedimientos
inmunoqumicos, por ejemplo ICH
Q6B.
ELISA.
Western-Blot.
1.6 Impurezas.
1.7 Producto de referencia /
Estndares de referencia. (ICH
Q6B)
Una evaluacin fisicoqumica y

biolgica a fondo se debe de
desarrollar del producto de
referencia que proporcione una
base de informacin necesaria
para justificar la dependencia
32
de ciertos conocimientos
cientficos existentes sobre el
producto de referencia.
1.8 Producto Terminado ICH Q8
(R2).
1.9 Estabilidad. ICH Q5C, ICH Q1A
(R2).
b) REQUISITOS PARA EL ESTUDIO DE BIOSIMILITUD.

Comunidad Europea
(EMA)
1. ESTUDIOS
FARMACOLGICOS.
1. GENERALIDADES.
Estudios In vitro
Se deben realizar los estudios
comparativos entre el
medicamento biolgico similar y
el medicamento biolgico de
referencia:
Ensayos de unin a
receptor (in vitro / in vivo,
Lnea celular
eritroleucmica humana).
Ensayos de Actividad
biolgica. (in vitro / in vivo).
Ensayos de Proliferacin
De acuerdo a lo establecido
en la (ICH S6 R1), los estudios
pre-clnicos deben de
considerar:
Seleccin de una especie
relevante.
Edad.
Estado Fisiolgica.
Estabilidad del material a
probar en las condiciones
normales de uso.
Se debe de establecer la dosis, va

de administracin y rgimen de
dosificacin.
2) ESTUDIOS PRE-CLNICOS
(FDA)
1. GENERALIDADES.
De acuerdo a lo establecido en la
(ICH S6 R1), los estudios pre-clnicos
deben de considerar:
Seleccin de una especie

relevante.
Edad.
Estado Fisiolgica.
Estabilidad del material a probar
en las condiciones normales de
uso.
Se debe de establecer la dosis, va

de administracin y rgimen de
Mxico (COFEPRIS).
1. ESTUDIOS FARMACOLGICOS.
1. GENERALIDADES.
Previamente a los estudios preclnicos es necesario demostrar un

alto grado de similitud molecular entre
la SBP y el RBP debera reducir
significativamente la necesidad de
estudios no clnicos.
El Comit de Molculas Nuevas previa

consulta al Subcomit de Evaluacin
de Productos Biotecnolgicos evaluar
los protocolos preclnicos (caso por
caso) y podr solicitar la extensin de
pruebas preclnicas cuando as lo
considere pertinente para productos
nacionales.
En el diseo apropiado del estudio

pre-clnico se debe de tomar en
cuenta la gua: (ICH S6 R1).
2. Estudios in vitro.
Se deben realizar estudios de unin al
Los mtodos y tcnicas analticas

empleadas deben validarse con los
parmetros de validacin que
demuestren que cumplen con el
propsito para el cual fueron
diseados.
Se deber realizar el anlisis de
33
celular. (por medio de una
Lnea celular
eritroleucmica humana).
dosificacin.
2. FARMACODINAMIA /
ACTIVIDAD BIOLGICA.
(ESTUDIOS IN VITRO)
Estudios In vivo
Los efectos eritrognicos del
medicamento biolgico similar y
el medicamento de referencia
deben compararse
cuantitativamente en un ensayo
animal apropiado, como por
ejemplo:
El ensayo en ratones
policitmicos.
El ensayo en ratones
normocitmicos.
2. ESTUDIOS
TOXICOLGICOS.
2.1 Estudio de toxicidad de

dosis repetida.
2.1.1 Seleccin de un
modelo Animal. (Estudios In
vivo).
2.1.2 Nmero / Gnero de
los Animales.
2.1.3 Administracin y
seleccin de la dosis
Se deben de utilizar lneas

celulares in vitro derivadas de
clulas de mamferos para:
Predecir aspectos especficos

de la actividad in vivo.
Evaluar cuantitativamente la
sensibilidad relativa del
biofrmaco en diversas
especies incluyendo a la
especie humana.
La actividad farmacolgica de los

productos de protena debe ser
evaluados in vitro y en ensayos
funcionales in vivo.
a) En ensayos in vitro pueden incluir,
pero no se limitan a:
b) Ensayos in vivo pueden incluir
Estos estudios deben disearse

para evaluar:
La Afinidad por el receptor.

La ocupacin por el receptor.
Evaluacin de la actividad
biolgica.
Proliferacin Celular.
Sensibilidad en otras
especies.
Ensayos biolgicos.
Ensayos de unin.
Ensayos de cintica de la
enzimtica.
El uso de modelos
animales que posean la
enfermedad para evaluar
los efectos funcionales
(Ensayos de Funcionalidad)
sobre los marcadores
farmacodinmicos.
Ensayos en animales.
1.1 Ensayos de Funcionalidad.
Se pueden utilizar ensayos

funcionales para proporcionar
evidencia adicional de que la
actividad biolgica, el
mecanismo de accin y la
potencia del producto propuesto
son muy similares a las del
receptor o ensayos basados en

clulas (por ejemplo, clulas de
proliferacin o ensayos de
citotoxicidad) para establecer la
comparabilidad de la actividad
biolgica / farmacodinmica del SBS
y del RBP.
Estos datos son por lo general ya est
disponible a partir de los ensayos
biolgicos descritos en la parte de la
calidad.
estructura superior empleando mtodos

analticos que permitan conocer la
estructura tridimensional e integridad
qumica, a saber:
3. Estudios in vivo.
Se deben realizar estudios en una
especie animal conocida, en la que se
ha demostrado que el RBP posee una
actividad farmacodinmica y
toxicolgica, adems se debe
considerar evaluar:
La actividad biolgica /
farmacodinmico relevante para
la aplicacin clnica. Si la
actividad es factible, biolgica
puede evaluarse como parte del
estudio de toxicidad por
administracin de dosis
repetidas (descrito ms
adelante).
Plegamiento.
Estabilidad termodinmica.
Tamao.
Modificaciones
postraduccionales.
Isoformas.
Variantes de carga
(oxidaciones, de
amidaciones,
isomerizaciones, entre otras).
Masa absoluta.
2. PRUEBAS DE SEGURIDAD.
Se realizarn para definir los efectos
toxicolgicos y farmacolgicos previos
a los estudios en humanos a travs del
desarrollo del estudio clnico. Los
estudios de seguridad preclnica deben
considerar:
2.1 Eleccin de una especie
relevante.
2.2 Estudios Toxicolgicos.
Se deben realizar estudios de dosis
nica que puedan generar datos tiles
para describir la relacin de dosis para
toxicidad sistmica y local.
34
2.1.4 Toxicocintica
Se debe de incorporar la
evaluacin Toxicocintica al
diseo del estudio de dosis
repetidas de acuerdo con la
gua:
Note for guidance on
toxicokinetics: A guidance for
assessing systemic exposure
in toxicological studies (ICH
S3A).
3. SELECCIN DE UN MODELO
ANIMAL. (ESTUDIOS IN VIVO).
2.1.5 Inmunogenicidad.
Se debe de realizar la medicin
de anticuerpos asociados con la
administracin de
medicamentos biotecnolgicos
cuando se lleven a cabo estudios
de toxicidad de dosis repetidas
de acuerdo a la gua:
Guideline on immunogenicity
assessment of biotechnologyderived therapeutic proteins,
EMEA/CHMP/BMWP/14327/200
6).
2.1.5.1 Monitoreo Terminal.
Se debe de realizar una autopsia
de todos los animales
involucrados en el estudio as
como el anlisis histopatolgico
de los distintos rganos de
La cual debe expresar el

receptor especfico para el
cual el material es
farmacolgicamente activo.
Cuando no existan especies
relevantes, el uso de animales
transgnicos pertinentes que
expresan el receptor humano
o el uso de protenas
homlogas debe ser
considerado.
4. INMUNOGENICIDAD.
Se debe de realizar la
medicin de anticuerpos
asociados con la
administracin de
cuando se lleven a cabo
estudios de toxicidad de dosis
repetidas.
Las respuestas de anticuerpos
deben caracterizarse, se debe
determinar el ttulo de
anticuerpos, y caracterizar el
tipo de anticuerpo (como
neutralizante o no
neutralizante).
Se debe determinar los
2. FARMACODINAMIA / ACTIVIDAD
BIOLGICA. (Estudios In vitro)
Se deben de utilizar lneas celulares
in vitro derivadas de clulas de
mamferos para predecir aspectos
especficos de la actividad in vivo y
para evaluar cuantitativamente la
sensibilidad relativa del biofrmaco
en diversas especies incluyendo a la
especie humana. Estos estudios
deben disearse para evaluar:
La Afinidad por el receptor.

La ocupacin por el receptor.
Evaluacin de la actividad
biolgica.
Proliferacin Celular.
Sensibilidad en otras especies.
2.1 Seleccin de un modelo
Animal. (Estudios In vivo).
La evaluacin de seguridad
deben incluir el uso de las
especies relevante. La cual debe
expresar el receptor especfico
para el cual el material es
farmacolgicamente activo. Las
tcnicas para determinar una
especie relevante son:
4. Estudios Toxicolgicos.
Los estudios de Toxicidad se
determinarn en al menos un estudio
de toxicidad de dosis repetidas en
una especie relevante. Las
determinaciones toxicocinticas
deben incluir:
Determinacin y caracterizacin
de anticuerpos.
Ttulo de anticuerpos.
Reactividad Cruzada con
protenas homlogas.
Capacidad neutralizante del
producto.
La duracin de los estudios debe
de ser lo suficiente para detectar
las diferentes respuestas de
toxicidad del SBP y RBP.
Dependiendo de la va de
administracin, la tolerancia local
debe ser evaluada. Si es factible, esta
evaluacin se puede realizar como
parte del estudio de toxicidad.
Los estudios correspondientes a:

toxicologa reproductiva,
genotoxicidad y carcinogenicidad
no son requisitos en las pruebas
pre-clnicas para el SBP.
Cuando sea posible, los estudios

de dosis nica deben incluir
toxicocintica.
Para los biotecnolgicos que
inducen efectos farmacolgicos y
toxicolgicos prolongados, un
grupo de animales debe ser
monitoreado hasta que se
demuestre la reversibilidad.
La duracin de los estudios de
dosis repetida debe basarse en la
duracin de la exposicin clnica
pretendida y la indicacin para la
enfermedad. La duracin
reportada de los estudios debe
estar tcnicamente justificada para
permitir la deteccin de diferencias
relevantes en la toxicidad y
respuestas inmunes entre el
M.B.B. y el M.B. de referencia.
Si los resultados de los estudios
mencionados no son suficientes,
se deben incluir observaciones
relevantes en el mismo estudio
toxicolgico de dosis repetida,
incluyendo, tolerabilidad local.
Slo se requerirn reportes de
otros estudios toxicolgicos como
seguridad farmacolgica,
toxicologa reproductiva,
mutagnesis y carcinognesis
para la evaluacin de M.B.B., si
los resultados de los estudios de
dosis repetida as lo requieren.
Si los estudios preclnicos
emplean OGM deben efectuarse
en concordancia con las
35
acuerdo a la gua:
efectos de los anticuerpos

sobre los parmetros PK y
PD, efectos adversos,
activacin del complemento, la
aparicin de efectos txicos.
Note for guidance on repeated

dose toxicity.
(CPMP/SWP/1042/99).
5. FARMACOCINTICA Y
TOXICOCINTICA.
2.2 Ensayos de Tolerancia.

La evaluacin de la tolerancia se
debe de desarrollar previamente
a los estudios clnicos. Estos
estudios se deben de desarrollar
de acuerdo a los establecido en
la gua:
Note for guidance on non-clinical
local tolerance testing of
medicinal products"
(CPMP/SWP/2145/00).
Se sugiere realizar los estudios:
Farmacocinticos de dosis
mltiples.
Toxicocinticos.
Estudios de distribucin
Tisular.
5.1 Estudio de toxicidad de dosis

repetida.
Se debe realizar al menos un
estudio de toxicidad de dosis
repetida, incluyendo la
caracterizacin de los parmetros
toxicocinticos, realizados en una
especie relevante, dicho estudio
debe de contener:
Se debe seleccionar una

especie animal relevante.
El rgimen de dosificacin, la
ruta de administracin y la
dosis deben reflejar el uso o la
exposicin clnica prevista.
Cuando sea posible, los
Ensayos inmunoqumicos.
Pruebas funcionales.
Cuando no existan especies
relevantes, el uso de animales
transgnicos pertinentes que
expresan el receptor humano o
el uso de protenas homlogas
debe ser considerado.
De acuerdo a lo establecido en la
gua de armonizacin (ICH S6 R1),
los estudios complementarios a la
etapa pre-clnica se describen a
continuacin:
5. INMUNOGENICIDAD.
2.2 Nmero / Gnero de los

Animales.
El nmero de animales se debe
seleccionar debe tener en
consideracin:
Debe existir una relacin entre el

nmero de animales y la
capacidad de detectar posibles
eventos txicos.
Ambos gneros en general
deben ser utilizados o presentar
las justificaciones por omisiones
especficas.
2.3 Administracin y seleccin de

la dosis.
La va y frecuencia de
administracin deben estar tan
cerca como sea posible al
propuesto para uso clnico.
El uso de otras vas de

administracin de
cuando se lleven a cabo estudios
de toxicidad de dosis repetidas.
anticuerpos, y caracterizar el tipo
de anticuerpo (como
neutralizante o no neutralizante).
Se debe determinar los efectos
de los anticuerpos sobre los
parmetros PK y PD, efectos
adversos, activacin del
complemento, la aparicin de
efectos txicos.
La deteccin de anticuerpos no
debe ser el nico criterio para la
terminacin anticipada de un
estudio de seguridad preclnica o
modificacin en la duracin del
estudio de diseo a menos que
la respuesta inmune neutralice
los efectos farmacolgicos y / o
toxicolgicas del medicamento
disposiciones jurdicas aplicables.
2.3 Pruebas de actividad biolgica.

evaluada mediante ensayos in vitro o
in vivo que puedan demostrar efectos
del producto relacionados con la
actividad biolgica descrita, stos
deben considerar:
La seleccin de biomarcadores de
acuerdo a su relevancia, a fin de
demostrar la eficacia teraputica
del producto tanto en el diseo
como en el desarrollo del estudio
preclnico.
El empleo de lneas celulares,
derivadas de mamferos, para
predecir aspectos especficos de
la actividad in vivo y para obtener
cuantitativamente la sensibilidad
relativa de varias especies
(incluyendo el humano). Estos
estudios deben determinar:
La ocupacin del
receptor.
la afinidad por el
receptor y los efectos
farmacolgicos.
As como para ayudar
en la seleccin de una
especie animal
apropiada para ms
estudios farmacolgicos
36
estudios deben incluir

toxicocintica.
La duracin del estudio debe
ser lo suficientemente larga
para determinar las
diferencias en la toxicidad o
en la respuesta inmunolgica
entre el SEB y el frmaco
biolgico de referencia.
dosis repetidas se debe basar
en la duracin prevista de la
exposicin clnica e indicacin
de la enfermedad.
Otros estudios toxicolgicos,
incluyendo farmacologa de
seguridad, toxicologa
reproductiva, mutagnesis y
estudios de carcinogenicidad
NO SE REQUIEREN al menos
que se encuentre justificado
en los resultados de los
estudios toxicolgicos de dosis
repetidas.
administracin puede ser

aceptable si la va de
administracin limita la
biodisponibilidad.
Se debe considerar la
Farmacocintica y la
biodisponibilidad del producto en
la especie que se utiliza.
Los niveles de dosificacin
deben ser seleccionados para
proporcionar informacin sobre
una relacin dosis-respuesta,
incluyendo una dosis txica y un
nivel de efecto adverso no
observado.
Para justificar la seleccin de
dosis alta, se debe considerar a
los efectos fisiolgicos/
farmacolgicos esperados, la
disponibilidad de material de
prueba adecuado, y el uso
clnico previsto.
2.4 Inmunogenicidad.

administracin de
cuando se lleven a cabo
estudios de toxicidad de dosis
repetidas.
anticuerpos, y caracterizar el
en una gran proporcin de los

animales.
La induccin de la formacin de
anticuerpos en animales no es
predictivo de un potencial para la
formacin de anticuerpos en
seres humanos.
Las reacciones inflamatorias en
el sitio de la inyeccin pueden
ser indicativos de una respuesta
estimuladora.
6. Farmacocintica y
Toxicocintica.
y toxicolgicos in vivo.
Los efectos directos
sobre el fenotipo celular,
la proliferacin,
activacin celular y la
unin a molculas
blanco.
La inmunogenicidad en animales
se realizar slo en estudios de
toxicidad a dosis repetidas con la
finalidad de ayudar a la
interpretacin de estos estudios y
slo cuando se demuestre la
relevancia de la especie.
Es difcil establecer directrices

uniformes para los estudios
farmacocinticos de los productos
farmacuticos derivados de la
biotecnologa. Se sugiere realizar
estudios:
mltiples.
Toxicocinticos.
Estudios de distribucin Tisular.
Los estudios farmacocinticos deben,

siempre que sea posible, utilizar los
preparados que sean representativos
para las pruebas de toxicidad y su
uso clnico, y emplear una va de
administracin que sea relevante para
los estudios clnicos previstos.
37
tipo de anticuerpo (como

neutralizante o no neutralizante).
Se debe determinar los efectos
de los anticuerpos sobre los
parmetros PK y PD, efectos
adversos, activacin del
complemento, la aparicin de
efectos txicos.
3. EVALUACIN DE LA
EXPOSICIN.
3.1 Farmacocintica y
Toxicocintica.
7. Estudio de toxicidad de dosis

repetida.
Se debe realizar al menos un estudio
de toxicidad de dosis repetida,
incluyendo la caracterizacin de los
parmetros toxicocinticos, realizados
en una especie relevante, dicho
estudio debe de contener:
Es difcil establecer directrices

uniformes para los estudios
farmacocinticos de los productos
farmacuticos derivados de la
biotecnologa. Se sugiere realizar
estudios:
mltiples.
Toxicocinticos.
Estudios de distribucin Tisular.

ruta de administracin y la dosis
deben reflejar el uso o la
Cuando sea posible, los estudios
deben incluir toxicocintica.
La duracin del estudio debe ser
lo suficientemente larga para
determinar las diferencias en la
toxicidad o en la respuesta
inmunolgica entre el SEB y el
frmaco biolgico de referencia.
dosis repetidas se debe basar en
la duracin prevista de la
exposicin clnica e indicacin de
la enfermedad.
estudios de carcinogenicidad NO
38
3.2 Estudio de toxicidad de dosis
repetida.
Se debe realizar al menos un estudio
de toxicidad de dosis repetida,
incluyendo la caracterizacin de los
parmetros toxicocinticos,
realizados en una especie relevante,
dicho estudio debe de contener:
SE REQUIEREN al menos que

se encuentre justificado en los
resultados de los estudios
toxicolgicos de dosis repetidas.

ruta de administracin y la dosis
deben reflejar el uso o la
Cuando sea posible, esos
estudios deben incluir
toxicocintica.
La duracin del estudio debe
ser lo suficientemente larga
para determinar las diferencias
en la toxicidad o en la respuesta
inmunolgica entre el
medicamento biosimilar y el
dosis repetidas se debe basar
en la duracin prevista de la
exposicin clnica e indicacin
de la enfermedad.
estudios de carcinogenicidad
39
NO SE REQUIEREN al menos
que se encuentre justificado en
los resultados de los estudios
toxicolgicos de dosis repetidas.
3) ESTUDIOS CLNICOS
Comunidad Europea
(EMA)
1. ESTUDIOS
FARMACOCINTICOS.
Se debe realizar un estudio
cruzado del medicamento
biolgico similar y del
medicamento biolgico de
referencia.
Se debe de administrar una

sola dosis.
Se debe de evaluar la va
subcutnea (SC) y la va
intravascular (IV).
El estudio se debe realizar
en voluntarios sanos.
La dosis seleccionada se
debe de encontrar en la
parte SENSIBLE de la
curva dosis-respuesta.
Se considerar como
parmetro farmacocintico
primario al rea bajo la
curva (AUC) y como

(FDA)

Mxico (COFEPRIS).
1. ESTUDIOS
FARMACOCINTICOS.
1. GENERALIDADES.
1. ESTUDIOS
FARMACOCINTICOS.
1. GENERALIDADES.
Los estudios farmacocinticos en

general, se deben realizar para las
vas de administracin solicitadas y la
dosis se debe encontrar dentro del
rango de dosis teraputicas
recomendadas para el RBP.
Para la realizacin de los estudios

clnicos el patrocinador debe presentar
toda la informacin con respecto a la
caracterizacin fisicoqumica, estudios
preclnicos de los productos bajo
estudio y dems documentos, as como
la informacin necesaria para la
elaboracin del protocolo clnico.
Evaluacin de la absorcin,
distribucin, metabolismo y
eliminacin en una poblacin
de pacientes/voluntarios
sanos, debidamente
justificado.
El diseo de los estudios
farmacocinticos comparativos
(por ejemplo, un estudio
cruzado frente al estudio
paralelo) debe seguir los
siguientes factores a
consideracin:
Tiempo de vida media.
Linealidad de los parmetros
PK.
Condiciones y enfermedades
a tratar.
Va de administracin.
Condiciones para las cuales el
El patrocinador de un producto
propuesto debe presentar la
informacin a la FDA que demuestre
que :
No hay diferencias clnicamente

significativas entre el producto
biolgico y el producto de
referencia en cuanto a la
seguridad, pureza y potencia del
producto.
Como una cuestin cientfica, la FDA

espera que el patrocinador lleve a
cabo los estudios referentes a:
PK humana comparada.
Estudios PD (si hay una

medida pertinente PD).
Una evaluacin de la
inmunogenicidad clnica.
La comparacin farmacocintica de
la SBP y la RBP debe incluir:
Absorcin /
biodisponibilidad.
Eliminacin (aclaramiento).
Tiempo de vida media.
Para evaluar los parmetros PK es

necesario realizar un estudio cruzado
con los siguientes caractersticas:
Dosis nica.
Poblacin Homognea.
Misma va de
Los Estudios clnicos deben tener

adems de lo que indique la Secretara
de Salud:
Estudios de Eficacia.
Inmunogenicidad.
Reporte de eventos
Adversos.
Reporte comparativo de
Farmacocintica, Toxicologa
y Tolerabilidad.
40
parmetros secundarios a la
concentracin mxima
(Cmax) y el tiempo de vida
media (t1/2) o en su defecto
al Cl / F.
Los mrgenes de
equivalencia deben de ser
definidos a priori y estos
deben de estar
debidamente justificados.
Las diferencias en los t1/2
para la administracin
subcutnea (SC) e
Intravascular (IV) y la
dependencia de la dosis en
cuanto a la velocidad de la
eliminacin de la epoetina
deben tenerse en cuenta al
momento de disear estos
estudios.
2. ESTUDIOS
FARMACODINMICOS.
Los estudios
Farmacodinmicos deben
de ser evaluados
preferentemente como parte
del estudio farmacocintico
comparativo.
La dosis seleccionada se
debe de encontrar en la
parte lineal ascendente de
la curva dosis-respuesta.
En los estudios de una sola
dosis, se considerar al
recuento de reticulocitos
como marcador
2. ESTUDIOS CLNICOS
COMPARATIVOS.
SEB est aplicando.

La Dosis utilizada en los estudios
PK debe de estar dentro del rango
de dosificacin teraputico
especificado en la monografa del
producto del frmaco biolgico de
referencia.
2. ESTUDIOS
FARMACODINMICOS.
Los parmetros investigados

en los estudios
farmacodinmicos (PD) deben
ser clnicamente relevantes y
los marcadores indirectos
deben ser validados
clnicamente.
Evaluar el efecto del
medicamento en un periodo
de tiempo, lo cual se puede
combinar con:
a) Estudios farmacocinticos.
b) Estudios de eficacia clnica que
evalen la naturaleza, la severidad
y la frecuencia de los efectos
adversos y deben evaluar la
inmunogenicidad.
Como una cuestin cientfica, ser

necesario un estudio clnico
comparativo para apoyar la
demostracin de la biosimilitud si hay
incertidumbre residual sobre si hay
diferencias clnicamente significativas
entre el producto propuesto y el
producto de referencia basado en:
La caracterizacin
estructural y funcional.
La experimentacin con
animales.
Datos PK y PD en
humanos.
La evaluacin de la
3. ESTUDIOS CLNICOS.
Un estudio clnico comparativo para
un programa de desarrollo biosimilar
debe de:
Tener en cuenta la naturaleza y el
grado de incertidumbre residual que
permanece sobre biosimilitud basado
en datos generados a partir de:
La caracterizacin
estructural y funcional de
la experimentacin con
Administracin.
Condiciones semejantes
para las cuales el SBP est
aplicando.
La Dosis utilizada en los estudios PK

debe de estar dentro del rango de
dosificacin teraputico especificado
en la monografa del producto del
2. ESTUDIOS
FARMACODINMICOS.
Los efectos farmacodinmicos deben
ser investigados en una poblacin
adecuada utilizando una dosis o
dosis dentro de la parte escarpada de
la curva dosis - respuesta con el fin
de maximizar la probabilidad de
detectar diferencias de potencial
entre el SBP y el RBP.
Tales estudios deben

proporcionar informacin til
sobre la relacin entre la dosis y
el efecto, sobre todo si lleva a
cabo a diferentes niveles de
dosis.
En muchos casos, los

parmetros farmacodinmicos
se investigan en el contexto de
los estudios farmacocinticos /
farmacodinmicos combinados
El diseo experimental, depender de

la naturaleza del biotecnolgico segn
aplique. En caso de requerirse un
diseo diferente a stos, se debe
justificar cientficamente:
Estudios de Biocomparabilidad
Fase IA Seguridad Clnica Dosis
nica Creciente.
Fase IA Seguridad Clnica y de
PK/PD.
Fase III: Equivalencia Teraputica
y Seguridad Clnica.
2. ELABORACIN DEL PROTOCOLO

CLNICO.
Cada protocolo de un estudio clnico,
debe cumplir con lo sealado en la Ley
General de Salud, en el Reglamento de
la Ley General de Salud en Materia de
Investigacin para la Salud y debe ser
acorde al tipo de producto a evaluar y
pruebas requeridas de acuerdo a lo
sealado en el Reglamento de Insumos
para la Salud, cumpliendo con las BPC,
las BPL y dems disposiciones
jurdicas aplicables.
El Protocolo debe ser dictaminado por
el Comit de tica en Investigacin y
por el Comit de Investigacin, y
41
farmacodinmico para la
evaluacin de la actividad
de la eritropoyetina.
3. ESTUDIOS DE SEGURIDAD
CLNICA.
3.1 Ensayos de
inmunogenicidad.
3. ESTUDIOS CLNICOS DE
EFICACIA.
La similitud en la eficacia clnica
entre el medicamento biolgico
similar y el medicamento
biolgico de referencia debe de
ser demostrada mediante
ensayos clnicos aleatorizados
de grupos paralelos.
El estudio se debe realizar
por ambas vas de
administracin
(Intravascular, subcutnea),
mediante alguna de las
siguientes opciones:
Mediante la realizacin
de dos ensayos
clnicos separados.
Demostrar la eficacia
comparable para una
va de administracin
en un estudio clnico
comparativo y
proporcionar los datos
farmacocinticos y
farmacodinmicos a
una dosis nica y a
mltiples dosis en una
poblacin de estudio
La inmunogenicidad de los SEB

debe evaluarse mediante estudios
clnicos diseados adecuadamente,
teniendo en cuenta el impacto
potencial sobre la eficacia y la
seguridad.
Los mtodos de anlisis deben ser
validados y deben de ser capaces
de caracterizar el contenido de
anticuerpos (concentracin o ttulo),
as como el tipo de anticuerpos
formados, tales como los
anticuerpos neutralizantes y los
anticuerpos con reactividad
cruzada. Adems se deben de
evaluar el posible impacto de los
anticuerpos sobre la seguridad y
eficacia del medicamento.
animales.
PK humana y estudios de
PD.
La evaluacin de la
3.1 ESTUDIOS
FARMACOCINTICOS.
Diseo del estudio.
El diseo del estudio debe evaluar la

similitud de los parmetros PK y PD
para el desarrollo de productos
biosimilares por lo que se proponen:
Diseo Cruzado.
Estudio en Paralelo.
Diseo Cruzado
Estudio en Paralelo.
3. ESTUDIOS CONFIRMATORIOS
PK/PD.
Por lo general se requieren ensayos
clnicos para demostrar la eficacia
similar entre el SBP y el RBP.
En ciertos casos, sin embargo, un
estudio comparativo PK/PD puede
ser apropiado , siempre que:
Producto de Referencia.
Designado por la FDA.
Seleccin de la Dosis.
La dosis seleccionada debe ser la

ms sensible para detectar y evaluar
las diferencias en los perfiles de PK y
PD entre el producto biosimilar y el
Se deben seleccionar
Marcadores farmacodinmicos
en base a su relevancia clnica.
Las propiedades
farmacocinticas y
farmacodinmicas del RBP se
encuentren bien caracterizadas.
Al menos un marcador
farmacodinmico se encuentre
como un marcador ligado a la
eficacia.
La relacin entre la dosis /
exposicin, el marcador
relevante farmacodinmico y la
respuesta / eficacia del RBP se
encuentren bien establecidos.
La poblacin de estudio y la
dosis deben representar un
sistema de prueba que sea
conocido por ser sensible a las
diferencias de potencial entre el
SBP y el RBP.
autorizado por la Secretara.

El Comit de Molculas Nuevas previa
consulta al Subcomit de Evaluacin
de Productos Biotecnolgicos, evaluar
los protocolos clnicos de
biocomparabilidad (caso por caso) y
podr solicitar la extensin de pruebas
clnicas cuando as lo considere
pertinente.
Para la elaboracin del protocolo se
debe incluir la participacin de personal
estadstico (clculo de tamao de
muestra, pruebas estadsticas de
biocomparabilidad, etc.).
3. ESTUDIOS FARMACOCINTICOS.
(General)
Se podrn realizar estudios de

una sola dosis o de dosis mltiple.
Los intervalos de aceptacin para

cualquier parmetro
farmacocintico se deben basar
en el criterio clnico, tomando en
cuenta toda la informacin
disponible de eficacia y seguridad
en los productos de referencia y
de prueba.
42
sensible a la
administracin de la
eritropoyetina.
Se recomienda como
poblacin de estudio aquellos
pacientes que padezcan
anemia renal (anemia asociada
a la enfermedad renal crnica)
sin alguna otra complicacin
mayor que puedan poner en
peligro relevante la respuesta
al tratamiento con
eritropoyetina.
Poblacin de Estudio.
Los estudios PK y PD deben llevarse

a cabo en voluntarios sanos si el
producto se puede administrar de
forma segura a esta poblacin.
Los estudios de farmacologa clnica
debern realizarse en los pacientes
cuando la seguridad o
consideraciones ticas impidan la
participacin de voluntarios sanos en
los estudios o si los marcadores PD
slo sera relevante en los pacientes
con la condicin o enfermedad.
Determinaciones
Farmacocinticas (PK).
4. ESTUDIOS FARMACODINMICOS.
(General)
La similitud de la Eficacia entre el

SBP y el RBP se debe demostrar
a travs de un ensayo clnico
aleatorizado y controlado.
Seleccionar los biomarcadores

farmacodinmicos con base en la
relevancia que tengan para demostrar
la eficacia teraputica del producto.
Los principios de tales ensayos se

establecen en las directrices ICH
relevantes:
La duracin y el diseo de los estudios

deben de ser justificados, los estudios
combinados de
farmacocintica/farmacodinamia
pueden dar informacin til sobre la
relacin entre la exposicin y el efecto.
Va de Administracin.
Los estudios PK y PD deben llevarse

a cabo utilizando la misma va de
administracin para el producto
biolgico propuesto y el producto de
referencia.
EFICACIA.
Choice of control group and

related issues in clinical trials
(E10). Geneva, International
Conference on Harmonisation
of Technical Requirements for
Registration of
Pharmaceuticals for Human
Use, 2000.
Statistical principles for
clinical trials (E9). Geneva,
International Conference on
Harmonisation of Technical
Requirements for Registration
of Pharmaceuticals for Human
Use, 1998.
EFICACIA
Se debe de realizar un estudio
administrando el medicamento
biocomparable y el medicamento de
referencia en pacientes con anemia
renal.
Determinar Cmax y la exposicin total

(AUC) en un fluido biolgico
relevante.
43
5. SEGURIDAD.
Determinaciones
Farmacodinmicas (PD).
Las Determinaciones PD se
determinarn mediante una medida
PD que refleje el mecanismo de
accin del frmaco, siempre y cuando
la medida PD tenga una amplia gama
dinmica en el rango de
concentraciones de frmaco
obtenidos durante el estudio PK.
En esos casos, ser necesaria una
evaluacin completa de la seguridad y
de la inmunogenicidad.
Los datos de seguridad deben ser

preferiblemente comparativos.
Los datos de seguridad obtenidos a
partir de los ensayos clnicos se
deben enfocar principalmente en
detectar reacciones adversas
frecuentes y a corto.
Estos datos son por lo general
suficientes para la pre-licencia, pero
es necesario un plan de seguridad
clnica del SBP para la fase de postcomercializacin.
En los casos en que exista una

correlacin significativa entre los
resultados de los perfiles PK y PD y la
eficacia clnica, los resultados del
perfil PK/PD puede hacer un
estudio de eficacia comparativa
innecesario.
Comparacin estadstica de
los datos PK y PD.
Se debe de realizar de acuerdo a lo

establecido en la gua :
Guidance for Industry, Statistical
Approaches to Establishing
Bioequivalence.
44
4) ENSAYOS CLNICOS DE
INMUNOGENICIDAD.
La FDA recomienda el uso de un
diseo paralelo comparativo en
pacientes sin tratamiento previo para
evaluacin general de la
inmunogenicidad. La evaluacin
general inmunogenicidad debe
considerar:
La naturaleza de la respuesta
inmune (por ejemplo, anafilaxis,
anticuerpos neutralizantes).
La relevancia clnica y la
gravedad de las consecuencias
(por ejemplo, la prdida de
eficacia de los efectos adversos
teraputicos y otros para salvar
vidas).
La incidencia de la respuesta
inmune.
La poblacin en estudio.
Como una cuestin cientfica, un

promotor debe evaluar los siguientes
parmetros de anticuerpos en la
evaluacin de la inmunogenicidad
clnica:
Ttulo de anticuerpos, la
especificidad, la distribucin de
isotipo correspondiente, curso
temporal del desarrollo, la
persistencia, la desaparicin, el
impacto en la PK, y la asociacin
con secuelas clnicas.
45
4) ESTUDIOS COMPLEMENTARIOS
Comunidad Europea
(EMA)
Estados Unidos de
Amrica (FDA)
1. ESTUDIOS DE SEGURIDAD
CLNICA.
1. PLAN DE
FARMACOVIGILANCIA
1. CONSIDERACIONES DE
MONITOREO POSTCOMERCIALIZACIN.
1.1 Inmunogenicidad.
Los datos comparativos de

seguridad de los ensayos
de eficacia en general son
suficientes para
proporcionar una base de
datos adecuada de
seguridad antes de la
comercializacin del
medicamento.
El solicitante deber
presentar al menos 12
meses de datos de
inmunogenicidad previa
autorizacin. Los principios
de la evaluacin de la
inmunogenicidad se llevarn
a cabo de acuerdo a la gua:
Guideline on immunogenicity
assessment of biotechnologyderived therapeutic proteins
(EMEA/CHMP/BMWP/
14327/2006).
Es necesario el uso de un
mtodo validado altamente
sensible para la deteccin
de anticuerpos, este mtodo
debe de ser capaz de
Se debe desarrollar un Plan de

Gestin de Riesgo, el cual
describe la informacin de
seguridad del medicamento,
adems describe el plan de
farmacovigilancia.
3. REQUISITOS POSTERIORES A
LA COMERCIALIZACIN.
Reaccin adversa al
medicamento (RAM)
Presentacin de informes.
Se requieren los informes de las
RAMs posteriores a la
comercializacin de acuerdo con la
seccin C.01.016 del Reglamento
de Productos Alimenticios y
Farmacuticos: cualquier RAM
grave que se informe exige al
fabricante de ese medicamento
presentar toda la informacin con
respecto a dicho informe dentro de
El Control de la seguridad
posterior a la comercializacin
debe primero tener en cuenta:
Las preocupaciones de
seguridad y eficacia
particulares asociadas con el
uso del producto de
referencia y su clase.
La condicin especfica de
uso y poblacin de
pacientes.
La exposicin del paciente
en el programa de desarrollo
de biosimilares.

1. PLAN DE FARMACOVIGILANCIA.
1. ENSAYOS DE INMUNOGENICIDAD.
La respuesta inmune a un bioteraputico
est influenciada por muchos factores
incluyendo la naturaleza de la sustancia
farmacolgica, a productos y procesos
relacionados impurezas, excipientes y
estabilidad del producto, va de
administracin, dosificacin rgimen, y el
paciente, factores de enfermedades y / o
relacionadas con el tratamiento.
La inmunogenicidad de un bioteraputico
siempre debe ser investigado en los
seres humanos ya que los datos de
animales son por lo general no son
predictivos de la respuesta inmune en los
seres humanos.
2. CONSULTA CON FDA

.
Formal Meetings Between the
FDA and Biosimilar Biological
Product Sponsors or
Applicants.
En caso de una eficacia similar se

demuestre en los estudios PK/PD,
todava sern necesarios datos de
inmunogenicidad en la poblacin
objetivo.
El fabricante tendr que justificar su

estrategia de pruebas de anticuerpos
incluyendo:
La FDA normalmente debe

proporcionar informacin
sobre una base de caso por
caso de los componentes de
Mxico (COFEPRIS).
La seleccin de las pruebas.
La farmacovigilancia, debe cubrir los

requisitos establecidos en la Ley
General de Salud, en el Reglamento de
Insumos para la Salud y en la NOM220-SSA1-2012.
La Farmacovigilancia se llevar a cabo
empleando:
Mtodo
de
notificacin
espontnea.
Mtodo de farmacovigilancia
intensiva.
Mtodo de notificacin en
investigacin clnica.
La farmacovigilancia se realizar a
travs del anlisis de la siguiente
informacin:
Estudios clnicos fases I a IV.

Reporte peridico de seguridad.
Informe de seguridad en Mxico.
Reportes de seguridad de
estudios clnicos.
Generacin de seales.
Bases de datos epidemiolgicas.
Planes de manejo de riesgos.
46
detectar la respuesta
inmune temprana y la
respuesta inmune tarda.
Los anticuerpos detectados
necesitan una
caracterizacin adicional
incluyendo su potencial de
neutralizacin.
La base de datos referente a la

inmunogenicidad debe de incluir
un nmero suficiente de
pacientes con anemia renal
tratados por la va subcutnea
(SC).
2. PLAN DE
FARMACOVIGILANCIA
Dentro del procedimiento de
autorizacin, el solicitante deber
presentar un plan de
farmacovigilancia de acuerdo
con la legislacin de la Unin
Europea actual y las Guas de
Farmacovigilancia
correspondientes.
El plan de farmacovigilancia
se debe desarrollar de
acuerdo a la gua: Note for
Guidance on planning
pharmacovigilance
activities (ICH E2E).
un programa de desarrollo
de un producto propuesto.
los 15 das despus de recibir la

informacin.
Informes Peridicos de
Seguridad (PSUR).
Se deben presentar como se
discute en el PvP. La periodicidad
de presentacin de los PSUR debe
ser coherente con las directrices
ICH (ICH E2E) para nuevos
productos o como lo determine el
Ministro sobre la aprobacin.
La FDA recomienda a los

patrocinadores utilizar un
enfoque paso a paso para
establecer la totalidad de la
evidencia que soporta una
demostracin de biosimilitud.
La FDA tambin aconseja a
los patrocinadores presentar
sus planes de desarrollo de
productos y establecer un
calendario de hitos que
servirn como puntos de
referencia para las futuras
discusiones con la Agencia.
Evaluacin y caracterizacin de
los ensayos.
La identificacin de los tiempos
de muestreo apropiados.
Se debe de incluyendo la lnea
de base.
Los volmenes de muestra y el
procesamiento de la muestra.
La seleccin de mtodos
estadsticos para el anlisis.
Los Anticuerpos detectados deben de

ser caracterizados y se debe de evaluar
sus posibles implicaciones clnicas para
la seguridad, la eficacia y la
farmacocintica del medicamento.
2. PLAN DE FARMACOVIGILANCIA
El fabricante deber presentar un pliego
de condiciones de seguridad y el plan de
farmacovigilancia en el momento de
presentacin de la solicitud de
autorizacin de comercializacin.
El plan de farmacovigilancia se debe de
realizar de acuerdo con lo establecido en
la gua de armonizacin ICH E2E
Pharmacovigilance planning.
El plan de farmacovigilancia debe

describir las actividades posteriores a la
comercializacin y los mtodos basados
en la especificacin de seguridad.
47
3. AMPLIACIN DE LA
INDICACIN.
Debido a que el mecanismo de
accin de la eritropoyetina es el
mismo para todas las
indicaciones aprobadas
actualmente y slo hay un
receptor conocido de la
eritropoyetina, la demostracin
de la eficacia y la seguridad en
la anemia renal permitir la
extrapolacin a otras
indicaciones del medicamento de
referencia con la misma va de
administracin.
48
6. DISCUSIN
Durante la revisin de los requisitos necesarios para evaluar la biocomparabilidad

de los productos que contienen EPO en las diferentes regulaciones se encontr
que la nica agencia regulatoria que cuentan con una gua especfica para evaluar
este producto es la EMA.
Los dems pases cuentan con guas generales para la caracterizacin
fisicoqumica, las pruebas preclnicas y las pruebas clnicas que avalen su
biocomparabilidad.
Al revisar los requisitos necesarios en la evaluacin de la biocomparabilidad de
los productos en las diferentes guas internacionales, se encontr que:
La etapa medular en la evaluacin de la biocomparabilidad es la caracterizacin
fisicoqumica de los medicamentos biotecnolgicos. Debido a la naturaleza del
proceso de fabricacin de estos medicamentos, es necesario que mediante la
caracterizacin fisicoqumica se demuestre que el medicamento biocomparable
sea altamente comparable al medicamento biolgico innovador.
La EMA, a travs de la gua: Guideline on similar biological medicinal products
containing biotechnology-derived proteins as active substance: quality issues,
describe de una forma ms especfica las pruebas necesarias para evaluar la
caracterizacin estructural, las propiedades fisicoqumicas y la actividad biolgica
de la EPO. Las pruebas requeridas por la EMA se basan especficamente en
caracterizar ampliamente la estructura primaria, secundaria y terciaria de la
protena as como las propiedades fisicoqumicas. Adems, la EMA describe las
pruebas especficas para evaluar las modificaciones post-traduccionales
de la
protena como la caracterizacin de carbohidratos, la determinacin de puentes

disulfuro, la cantidad de cido silico y el patrn de glicosilacin de la protena. La
evaluacin del patrn de glicosilacin y la cantidad de cido silico es de resaltar
ya
que
estas
propiedades
afectan
drsticamente
las
caractersticas
farmacocinticas de la EPO.
49
En cuanto a los ensayos de actividad biolgica, estos son necesarios para

complementar la caracterizacin, la EMA es concreta al establecer que los
ensayos de unin al receptor, proliferacin celular y ensayos de actividad se
realicen en una lnea celular especfica, que es la lnea celular eritroleucmica
humana.
Por su parte, la FDA y Canad se basan en la gua de Armonizacin ICH Q6B:
Test Procedures and Acceptance Criteria for Biotechnological/biological products.
Aunque la gua es de carcter general para los productos biotecnolgicos, en ella
se resalta la importancia de la caracterizacin de los mismos. De forma similar que
la EMA, en esta gua se especifica que es necesario evaluar tres aspectos
principales del medicamento biotecnolgico: La caracterizacin estructural, las
propiedades fisicoqumicas y la actividad biolgica. En esta gua se describe la
necesidad de evaluar: la secuencia de aminocidos, modificaciones posttraduccionales, actividad biolgica, determinacin de puentes disulfuro y patrn de
glicosilacin. Sin embargo, debido al carcter general de la gua, ser necesario
evaluar que pruebas son aplicables al medicamento biotecnolgico en cuestin.
De igual forma la COFEPRIS y la OMS, se enfocan en evaluar los tres aspectos
de la caracterizacin, sin embargo se observa que la cantidad de pruebas a
realizar es menor en comparacin con la EMA y la ICH Q6B. Esto es de resaltar,
ya que en las guas se establece la necesidad de una ampla caracterizacin del
medicamento biolgico, entre mayor sea la caracterizacin, se tendr mayor
confiabilidad en la realizacin y evaluacin de los estudios pre-clnicos, clnicos y
de seguridad, estudios necesarios para evaluar la similitud en cuanto la seguridad
y eficacia del medicamento biosimilar.
50
Estudios Preclnicos.
En la realizacin de los estudios preclnicos en las guas de forma general se
establece la necesidad de evaluar in vitro / in vivo
los parmetros PK, PD,
toxicocintica e inmunogenicidad.
En este aspecto, la EMA establece que la evaluacin in vitro se debe de realizar
en una lnea celular especfica, la lnea celular eritroleucmica, y los estudios in
vivo se realicen en ratones normocitmicos o policitmicos. De esta forma, se
busca evaluar de una forma ms especfica a la EPO y complementar el perfil de
caracterizacin de la misma.
En el caso de las guas ICH Q6B, WHO y la NOM-177, para la evaluacin de los
estudios in vitro es necesario una lnea celular derivada de mamferos que exprese
el receptor especfico, y para la evaluacin de los estudios in vivo ser necesario
evaluarlos en una especie relevante, la cual debe de reunir ciertas caractersticas
dependiendo de la gua consultada y del medicamento biolgico a evaluar.
Todas las guas requieren que se lleven a cabo estudios de toxicidad en animales
en dosis repetidas, incluyendo la prueba de inmunogenicidad. En el caso de la
EMA, la evaluacin de la inmunogenicidad se realiza a travs de la gua:
Guideline
on immunogenicity assessment of biotechnology-derived therapeutic
proteins (EMEA/CHMP/BMWP/ 14327/2006). La FDA y Canad requieren

tambin de pruebas de toxicidad a dosis repetidas as como la prueba de
inmunogenicidad, mediante la medicin y caracterizacin de anticuerpos. En el
caso de Mxico, se requiere llevar a cabo estudios de toxicocintica, seguridad
farmacolgica e inmunogenicidad.
51
Estudios Clnicos.
a) Estudios de Farmacocintica.
Al hacer la comparacin de los requisitos de los estudios clnicos, se encontr que:
Todas las guas requieren de un estudio fase 1 de farmacocintica y
farmacodinamia. En el caso de la EMA, para la eritropoyetina en particular, se
requiere que el estudio sea cruzado, dosis nica, balanceado, en voluntarios
sanos, midiendo los parmetros: rea
Bajo la curva (AUC)
como parmetro
primario y a concentracin plasmtica mxima (Cmax) y vida media de eliminacin

(t1/2) como parmetros secundarios. Las guas de Canad y OMS requieren que
se determine la absorcin, distribucin metabolismo y eliminacin del producto a
comparar vs el producto innovador, mientras que la gua de Mxico no especifica
los parmetros a evaluar.
b) Estudios clnicos de eficacia.
Considerando que la farmacocintica no necesariamente est relacionada con la
eficacia, la mayor parte de las agencias regulatorias requieren que se lleve a cabo
un estudio clnico en el caso de productos biotecnolgicos. Un caso interesante
es la FDA, ya que en su gua establece que si existe un marcador
farmacodinmico, el estudio de Farmacocintico /Farmacodinmico en pacientes
o voluntarios, sera suficiente para el registro del medicamento biocomparable
siempre y cuando haya demostrado que sus propiedades fisicoqumicas han sido
exhaustivamente evaluadas.
En el caso de la EMA, la gua requiere de un estudio en paralelo en pacientes con
anemia renal sin alguna otra complicacin que pueda poner en riesgo la respuesta
al tratamiento con la eritropoyetina. La gua de Canad establece que el estudio
clnico deber ser un estudio de equivalencia teraputica, mientras que la OMS
requiere de un estudio clnico aleatorizado y controlado bajo las directrices de las
guas ICH E10 e ICH E9. En el caso de Mxico la gua establece realizar un
estudio administrando el medicamento biocomparable y el medicamento de
referencia en pacientes con anemia renal.
52
c) Inmunogenicidad.
Debido a que bioqumicamente la EPO est clasificada como una glicoprotena, el
sistema inmunitario es capaz de reconocerla como extraa y reaccionar en su
presencia, como por ejemplo el desarrollo de anticuerpos neutralizantes, etc. La
evaluacin de la inmunogenicidad es un punto fundamental en el perfil de
seguridad Clnica en la evaluacin de la EPO Biosimilar.
En este aspecto, al revisar
las guas correspondientes de las entidades
regulatorias consultadas en este trabajo (EMA, FDA, Health Canada, OMS y

COFEPRIS) es notorio que la evaluacin de la inmunogenicidad debe de
realizarse durante las diferentes etapas del estudio de biocomparabilidad, desde la
caracterizacin fisicoqumica, posteriormente los estudios pre-clnicos y clnicos, y
finalmente la monitorizacin de las posibles RAMs
a travs del
plan de
farmacovigilancia.
Para la evaluacin de la inmunogenicidad, la EMA emplea la gua: Guideline on
immunogenicity
assessment
of
(EMEA/CHMP/BMWP/ 14327/2006), en donde se
therapeutic
proteins
establecen los requisitos
especficos a evaluar en este aspecto. De acuerdo con esta gua no solo es

necesario contar con un mtodo validado capaz de detectar la respuesta
inmunolgica temprana y tarda, tambin ser necesario la caracterizacin y el
potencial de neutralizacin de los anticuerpos detectados de ser necesario. En el
caso de la FDA, esta se apoya en la gua: Immunogenicity Assessment for
Therapeutic Protein Products,
evaluando los siguientes parmetros: ttulo de
anticuerpos, especificidad, distribucin del isotipo correspondiente, curso temporal

de desarrollo y su impacto en la farmacocintica y su asociacin con secuelas
clnicas. En el caso de Canad, esta agencia solicita la evaluacin de los mismos
parmetros que la FDA. La OMS, establece que los anticuerpos detectados
debern ser caracterizados y se debe evaluar el impacto en la seguridad, eficacia
y farmacocintica del medicamento. Mxico no hace mencin de los parmetros
para evaluar la inmunogenicidad.
53
7. CONCLUSIONES.
La Eritropoyetina es una glicoprotena cida con una masa molecular de 30.4 kDa,
cuya estructura es compleja. Consta 165 aminocidos residuales que forman
cuatro cadenas anti-paralelas, dos -hlices y dos -hojas, adems cuenta con
dos intra-cadenas puentes disulfuro. La porcin de carbohidratos (40% de la
molcula) comprende tres N-glicanos y un O-glicano. Los N-glicanos tienen una
variedad de funciones, incluyendo la proteccin de la EPO de proteasas y la
modulacin de sus puentes receptores de afinidad.
Este biofrmaco forma parte fundamental en la terapia de pacientes con dao

renal para tratar o prevenir la anemia, por lo que es de suma importancia
garantizar que al cambiar de una marca por otra no se ponga en riesgo al
paciente.
La revisin bibliogrfica mostr que para demostrar la biocomparabilidad de los
productos conteniendo eritropoyetina, las agencias regulatorias requieren que se
realicen las siguientes pruebas para demostrar la biocomparabilidad:
a) Caracterizacin estructural y fisicoqumica.

b) Estudios preclnicos que incluyen: estudios de toxicologa, evaluacin de
unin a receptor y estudios de farmacocintica.
c) Estudios clnicos que incluyen: estudios de farmacocintica en voluntarios
sanos, estudios de farmacodinamia, estudios de eficacia en pacientes y
estudios de inmunogenicidad.
d) Estudios de farmacovigilancia.
Por la complejidad de estas molculas, se requiere contar
con
equipos
especializados y personal altamente calificado para llevar a cabo las diferentes

etapas de los estudios. Este conjunto de pruebas
permitir garantizar la
seguridad, calidad y eficacia de los productos del mercado nacional conteniendo

este biofrmaco.
54
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on
immunogenicity
assessment
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therapeutic proteins. (EMEA/CHMP/BMWP/ 14327/2006).

31. Specifications: Test procedures and acceptance criteria for new drug
32. Note for guidance on toxicokinetics: A guidance for assessing systemic
exposure in toxicological studies. S3A. (CPMP/ICH/384/95).
33. Note for guidance on repeated dose toxicity. (CPMP/SWP/1042/99).
34. Note for guidance on non-clinical local tolerance testing of medicinal
products. (CPMP/SWP/2145/00).
35. Guidance
for
Biosimilarity
Industry,
Scientific
Considerations
in
Demonstrating
to a Reference Product. U.S. Department of health and
Human Services, Food and Drug Administration, April 2015.

36. Guidance
for
Industry,
Quality
Considerations
in
Demonstrating
Biosimilarity of a Therapeutic Protein Product to a Reference Product. U.S.

Department of health and Human Services, Food and Drug Administration,
April 2015.
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Products. U.S. Department of health and Human Services, Food and Drug
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39. Preclinical safety evaluation of biotechnology-derived pharmaceuticals.
S6(R1). (CPMP/ICH/302/95).
40. Guidance
for
Industry,
Statistical
Approaches
to
Establishing
Bioequivalence. U.S. Department of health and Human Services, Food and

Drug Administration, January 2001.
41. Guidance for Sponsors: Information and Submission Requirements for
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48. Statistical principles for clinical trials (E9). Geneva, International Conference
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Harmonisation
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Requirements
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Registration
of
Pharmaceuticals for Human Use, 1998.

49. Pharmacovigilance planning. E2E (CPMP/ICH/5716/03).
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51. Reglamento de Insumos para la Salud, publicado en el Diario Oficial de la
52. Reglamento de la Ley General de Salud en materia de investigacin para la
Salud, publicado en el Diario Oficial de la Federacin el 06 de Enero de
1987.
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Diario Oficial de la Federacin, ltima reforma 23 de Abril de 2012.
54. Norma Oficial Mexicana NOM-059-SSA1-2013, Buenas prcticas de
fabricacin de medicamentos, publicada en el Diario Oficial de la
Federacin el 22 de Julio de 2013.
55. Norma Oficial Mexicana NOM-177-SSA1-2013, Que establece las pruebas
y procedimientos para demostrar que un medicamento es intercambiable.
Requisitos a que deben sujetarse los Terceros Autorizados que realicen las
pruebas de intercambiabilidad. Requisitos para realizar los estudios de
biocomparabilidad. Requisitos a que deben sujetarse los Terceros
Autorizados, Centros de Investigacin o Instituciones Hospitalarias que
realicen las pruebas de biocomparabilidad, publicada en el Diario Oficial de
la Federacin el 20 de Septiembre de 2013.
56. Norma Oficial Mexicana NOM-220-SSA1-2012, Instalacin y operacin de
la Farmacovigilancia, publicada en el Diario Oficial de la Federacin el 07
de Enero de 2013.
57. Norma
Oficial
Mexicana
NOM-257-SSA1-2014,
En
materia
de
Medicamentos Biotecnolgicos, publicada en el Diario Oficial de la

Federacin el Jueves 11 de diciembre de 2014.
59

Análisis de Criterios y Requisitos Internacionales para Determinar La Biocomparabilidad de Productos Que Contienen Eritropoyetina

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FACULTAD DE QUMICA

ANLISIS DE CRITERIOS Y REQUISITOS

TRABAJO ESCRITO VA CURSOS DE EDUCACIN CONTINUA

QUMICO FARMACUTICO BILOGO

JOS MIGUEL PADILLA VALDEZ

INS FUENTES NORIEGA.

HELGI HELENE JUNG COOK.

KENNETH RUBIO C ARRASCO.

ROBERTO CARLOS CAAS ALONSO.

JORGE RAFAEL M ARTNEZ PENICHE.

SITIO DONDE SE DESARROLL EL TEMA:

ASESOR DEL TEMA:

3.1 Medicamentos Biotecnolgicos .

3.3 Eritropoyetina ...

3.4 Estructura Bioqumica de la Eritropoyetina .

3.5 Estructura Bioqumica del Receptor de la Eritropoyetina .

3.6 Vas de Sealizacin de la Eritropoyetina ...

3.7 Eritropoyetina Recombinante Humana

3.8 Tipos de rHuEPO y Agentes Estimuladores de la

3.9 Medicamentos Biosimilares ...

3.10 Eritropoyetina Humana Recombinante Biosimilar

Unidad Eritroide Estimulante de la Eritroaceleracin.

Unidad formadora de Colonias Eritroctica.

Unidad formadora de colonia Granulocito, Eritrocito, Megacariocito,

Ligando de la Tirosina Fetal 3.

Factor Estimulante de colonias de Granulocitos y Monocitos.

Protena Janus Kinase 2.

Eritropoyetina Recombinante Humana.

Protenas Transductoras y Activadoras de las seales de

Factor de Clulas seminales.

Los medicamentos obtenidos por biotecnologa constituyen una nueva perspectiva

El primer frmaco biotecnolgico que sali al mercado fue la insulina humana

comercializan en nuestro pas, una serie de medicamentos biotecnolgicos cuya

3.1 MEDICAMENTOS BIOTECNOLGICOS.

En la actualidad, la industria Farmacutica es uno de los sectores empresariales

organizaciones pblicas y privadas enfocadas a realizar

desarrollo, fabricacin y comercializacin de medicamentos para la prevencin o

enfermedades. Gracias a los avances realizados en las ltimas dcadas en el

que se utilizan actualmente se

pueden mencionar son: la eritropoyetina, indicada en el tratamiento de cuadros

medicamentos es la gran variabilidad que puede existir en el medicamento al

Otra de las principales diferencias de estos nuevos medicamentos est

medicamentos y que es causa de mltiples debates por los investigadores radica

y la dificultad que pueden presentar estos

medicamentos al tratar de obtener las versiones genricas de los mismos.

El trmino anemia se refiere por lo general a un estado en el cual la sangre tiene

Los eritrocitos se desarrollan a partir de la clula madre mieloide multipotencial

el factor estimulante de colonias de granulocitos y

monocitos (GM-CSF), la interleucina 3 (IL-3) y la interleucina 4 (IL-4). La clula

FIGURA 1. Etapas de la Eritropoyesis. (Tomado de Cummings, Benjamin. 2001).

La eritropoyetina (EPO) es una hormona glucoproteica de 30.4 kDa compuesta

presin arterial, el aumento del calcio intracelular, la liberacin de insulina y las

La actividad principal de la EPO es controlar la produccin de clulas eritroides a

y regular la proliferacin, diferenciacin y

sobrevivencia de clulas progenitoras y precursores eritroides (Oppenheim, J.

3.4 ESTRUCTURA BIOQUMICA DE LA EPO.

La estructura terciaria de la protena se compone de 4 hlices- antiparalelas, con

farmacocinticas de la misma en condiciones fisiolgicas.

Seala las N- Glicosilaciones.

Seala las O-Glicosilaciones.

FIGURA 2. Patrn de Glicosilacin de la EPO. Se muestran los sitios de glicosilacin en la

El contenido de carbohidratos de la molcula de EPO es del 35%. Los

La estructura y composicin de los carbohidratos de la molcula de EPO son