Inmunologa General

Unidad 7
Linfocitos B y respuesta humoral

Dr. Enrique Ortega Soto

Departamento de Inmunologa, IIBiomedicas

ANTIGENOS
Antgeno : distintos libros de texto manejan definiciones diferentes:
Klein: un antgeno es una sustancia que activa (positiva o
negativamente) a los linfocitos mediante la interaccin con los sitios de
combinacin de los receptores de los linfocitos (TCR o BCR). La
activacin positiva resulta en la induccin de una respuesta inmune, la
activacin negativa resulta en no-respuesta (tolerancia). El tmino
inmungeno lo usa solo para enfatizar el papel de una sustancia dada
en la fase de induccin de la activacin linfocitaria.
Abbas: Antgeno: una molcula que se une al sitio activo de un
anticuerpo o a un TCR (esta definicin tambin incluira a un hapteno)
y define Inmungeno como un antgeno que induce una respuesta
inmune. No todos los antgenos son inmungenos.
Janeway: Cualquier sustancia que sea capaz de inducir una respuesta
inmune es un inmungeno. Un antgeno se define como cualquier
sustancia que se puede unir a un anticuerpo especfico.

Factores que influyen en la inmunogenicidad de un antgeno:

Naturaleza qumica: protenas son los inmunogenos ms eficientes. Los
polisacridos son de antigenicidad variable, pero pueden ser buenos antgenos.
Los lpidos, y los cidos nuclicos por si solos no son inmunognicos, pero es
posible encontrar anticuerpos que reconozcan a lpidos o a cidos nuclicos (LES)
Complejidad Qumica: En general, mayor complejidad = mayor inmunogenicidad.
Tamao: Para servir como inmunogeno una molcula debe pesar al menos 40005000. Para ser buen antgeno, debe pesar ms de 10,000. Los inmungenos ms
potentes pesan ms de 100,000.
Grado de extraeza: Normalmente, un individuo solo responde contra molculas
no-propias, y la respuesta es ms potente entre ms distinto sea el antgeno a
antgenos propios. P.ej: la colgena es poco antignica porque est muy
conservada entre distintas especias. En contraste, las molculas del MHC son
buenos antgenos porque son diferentes an entre individuos de la misma especie.
Ruta de administracin: En general, se requiere va parenteral (no oral). Influyen
tambin: la dosis, el esquema de inmunizacin (frecuencia), y el tiempo despus de
la inmunizacin en que se evala la respuesta.
Constitucin gentica del animal: Determina no solo el tipo de respuesta, sino
hasta si el individuo responder o no responder a cierto antgeno.
Los genes de respuesta inmune mejor caracterizados son los genes del MHC. La
causa de la falta de respuesta a cierto antgeno puede ser la ausencia de
receptores linfocitarios para ese antgeno o la falta de molculas de MHC
apropiadas para presentar ese antgeno.

Los antgenos tienen uno o varios determinantes

antignicos o eptopes, que se define como la regin de
la molcula de antgeno que hace contacto directamente
con el sitio de combinacin del anticuerpo o del TCR.
Los residuos de la molcula de antgeno que establecen
interacciones no covalentes con los residuos del sitio
activo del anticuerpo conforman el eptope.

La respuesta inmune adaptativa que induce un

inmunogeno (anticuerpos en suero, linfocitos T
efectores) sera la suma de respuestas inducidas por cada
uno de los epitopes a los cuales pueda responder el
individuo

De acuerdo a la posicin de los aminocidos que conforman el eptope

en la secuencia del antgeno, pueden distinguirse epitopes continuos o
lineales, y discontinuos o conformacionales

El sitio de combinacin del anticuerpo puede interactuar con el antgeno

en forma nativa. En cambio, el sitio de combinacin del TCR solo puede
interaccionar con complejos peptido-MHC, por lo tanto, los eptopes que
reconocen ambos tipos de receptores son distintos.

La activacin de
los linfocitos B
naive lleva a la
proliferacin de la
clona y la
diferenciacion
hacia clulas
plasmticas
secretoras de
anicuerpos y
clulas de
memoria

Agregacin de BCR
por antgeno

Activacin de
cinasas de tirosina y
otras enzimas

Eventos bioquimicos
Intracelulares

Activacin de
factores de
transcripcin

El entrecruzamiento del BCR por antgeno induce varias respuestas

funcionales en el linfocito B que lo preparan para recibir la segunda
seal. Cuando el entrecruzamiento es vasto, el linfocito B puede no
requerir ayuda de linfocitos T (antigenos T-independientes)

El tipo de citocinas producidas

por el linfocito T cooperador
determina el subtipo de
anticuerpos producidos por la
clona de linfocitos B (switch de
isotipo)

Las funciones efectoras de los anticuerpos (algunas dependen del isotipo)

Despes de una respuesta primaria, permanecen linfocitos B

de memoria, asi como clulas plasmticas, cuyos tiempos de
vida media son largos (aos?), proveyendo clulas especficas
capaces de responde rpidamente a un nuevo estmulo por el
mismo antgeno.

ESTRUCTURA DE LOS ANTICUERPOS:

Todas las molculas de anticuerpos
comparten la misma estructura bsica, pero
muestran una gran variabilidad en las
regiones que reconocen al antgeno
La estructura bsica de los anticuerpos
contiene dos cadenas pesadas idnticas
unidas entre s por puentes disulfuro (~ 50
o 70 kDa) y dos cadenas ligeras (~ 25 kDa)
idnticas entre s, cada cadena ligera se
une a una pesada por un puente disulfuro.
Tanto las cadenas pesadas como las ligeras
contienen una regin o dominio variable
(extremo amino terminal) y regiones o
dominios constantes (extremo carboxilo
terminal). Los dominios variables de
ambas cadenas forman el sitio de
reconocimiento antignico, y los dominios
constantes son los responsables de las
propiedades funcionales (efectoras) de las
distintas clases (isotipos) de las
inmunoglobulinas

Tanto las cadenas pesadas como

las cadenas ligeras contienen una
serie de unidades homlogas, de
aprox 110 aminocidos c/u, que se
pliegan independientemente una de
otra, en una estructura globular
caracterstica llamada DOMINIO DE
INMUNOGLOBULINA (Ig domain).
Cada dominio de inmunoglobulina
tiene dos capas de cadenas plegadas, cada capa est
compuesta de 3-5 tiras
antiparalelas de cadena
polipeptdica. Estas dos capas
estn dispuestas una encima de la
otra, y entre ellas hay un puente
disulfuro. Las tiras estn
conectadas entre s por asas con
estructura de -hlice. Estas asas
son de longitud y composicin
variable.

Inmunoglobulinas y TCRs

Relacion estructura-funcion en la
molcula de Immunoglobulina
Unin del
antgeno

Unin del complemento

unin a receptores
para Fc (FcRs)
Transfencia a
traves de la
placenta

Las inmunoglobulinas de todos los isotipos pueden existir como proteinas de

membrana y como proteinas solubles

B Cell Antigen Receptor (BcR)

Ig- Ig-

Ig- Ig-

IgG
Estructura: Todas las IgGs son monmeros (7S). Las subclases
difieren en el nmero de puentes disulfuro y la longitud de la regin
de la bisagra. En el humano hay 4 subclases: IgG1, IgG2, IgG3 e
IgG4. En el ratn: IgG1, IgG2a, IgG2b e IgG3.

IgG1, IgG2, IgG4

IgG3

IgG
Propiedades:
La ms abundante en el suero, 75% de los anticueros sricos
son IgG
La ms abundante en espacios extravasculares
Es la nica clase de Ig que atraviesa la placenta. La
transferencia es mediada por un receptor en clulas de la
placenta. No todas las clases atraviesan en el mismo grado,
IgG2 casi no atraviesa.
Fija complemento. Diferencias entre subclases. IgG4 es la
menos activa
Unin a clulas: Macrfagos, monocitos, neutrfilos y algunos
linfocitos tienen receptores para la region Fc de la IgG (FcR).
La unin de complejos Ag-IgG a las clulas induce:
internalizacin, fagocitosis, activacin de funciones efectoras
(ADCC, estallido respiratorio) secrecin de citocinas,
inmunoregulacin.

IgA
Estructura: La IgA srica es un monmero pero la IgA que se
encuentra en las secreciones es un dmero , que se mantiene
unido en su extremo carboxilo terminal por una cadena J y otra
protena llamada el componente secetor. El componente secretor
es producido por las clulas epiteliales, y se une a la IgA dimrica
cuando sta es transportada a travs del epitelio hacia la
superficie exterior. El componente secretor es un fragmento del
receptor para Ig polimrico, que trasporta a la IgA a travs de las
clulas. El componente secretor ayuda a la IgA a ser transportada
a travs de las mucosas y la proteje de ataque proteoltico

Comp. secretor

Cad J

Origen de componente secretor de la

sIgA

IgA
Funciones:
La segunda ms abundante en suero
La principal clase presente en las secreciones (lgrimas, saliva,
calostro, moco). Es importante para la inmunidad local en
mucosas.
Normalmente no fija complmento, a menos que sea agregada
Puede unirse a varios tipos celulares a travs de un receptor
especfico (FcR), expresado en polimorfonucleares y algunos
linfocitos.

IgM
Estructura:
Normalmente existe como pentmero (19S) pero tambin puede
existir como monmero. En su forma pentamrica todas las
cadenas pesadas son idnticas y todas las ligeras son idnticas..
La valencia es tericamente de 10. Tiene un dominio extra en la
cadena pesada (CH4), y tiene otra cadena protica (cadena J) unida
covalentemente a travs de puentes S-S.
Esta cadena mantiene la estructura pentamrica.
Cadena J

CH4

IgM
Funciones:
La tercera ms abundante en el suero
La primera Ig hecha por el feto y la primera Ig que fabrica una
clula B cuando es estimulada por el antgeno.
A consecuencia de ser pentmero, es muy efectiva en la fijacin
de complemento. Muy efectiva para mediar lisis de
microorganismos, y para mediar la opsonizacin por
complemento.
Buen anticuerpo aglutinante. La IgM es muy efectiva para
formar agregados de microorganismos para su eliminacin.
Ig de superficie de linfocitos B.
La IgM de membrana es monmero y no tiene la cadena J. Tiene
20 aminocidos ms en la porcin carboxilo terminal de la
cadena pesada a travs de los cuales se une a la membrana.
Funciona como receptor para antgeno de linfocitos B. En la
membrana se asocia a otras protenas llamadas Ig e Ig, las
cuales participan en la transduccin de la seal.

IgD
Estructura:
Solo existe como monmero

Cola

Propiedades:
Se encuentra en muy bajas concentraciones en suero. Se
desconoce si cumple alguna funcin la IgD srica.
Se encuentra principalmente en la superficie de linfocitos B en los
que funciona como receptor para antgeno. La IgD de membrana
tiene aminocidos extra en el extremo carboxilo terminal para
insertarse en la membrana. Se asocia en membrana a molculas Ig
e Ig.
No fija complemento

IgE
Estructura:
La IgE es un monmero, y tiene un dominio extra en la regin
constante de la cadena pesada

CH4

IgE
Propiedades:
Es la Inmunoglobulina menos abundante en el suero.
Se une con gran afinidad a los receptores FcRI de basfilos y clulas
cebadas an antes de interaccionar con el antgeno.
Involucrada en las reacciones alrgicas. Como consecuencia de su unin
a basfilos y clulas cebadas, las sensibiliza y cuando el alergeno
(antgeno) entra en contacto con la clula, la unin del alergeno a la IgE
induce la liberacin de varios mediadores (histamina, serotonina, PGs,
etc.) que provocan la respuesta alrgica.
Tiene un rol en infecciones por parsitos helmintos. Los niveles de IgE
suben en infecciones por parasitos. Los eosinfilos tienen receptores
para IgE (FcRII) y la unin del eosinfilo a helmintos recubiertos de IgE
provocan la muerte del parsito.
No fija complemento

Inmunoglobulinas y TCRs

Expresin de los genes de inmunoglobulinas y

Receptores de linfocitos T
Cada individuo sintetiza un nmero enorme de
inmunoglobulinas (anticuerpos) diferentes, para asegurar
que puede tener una respuesta especfica contra
virtualmente cualquier antgeno.
La secuencia de aminocidos de los anticuerpos, como de
cualquier otra protena, est codificada en el genoma
(DNA). Para evitar la utilizacin de una cantidad inmensa de
DNA para codificar todos los posibles anticuerpos, el
sistema inmune utiliza mecanismos de RECOMBINACIN
GENETICA, por medio de los cuales puede sintetizar, a
partir de un nmero relativamente pequeo de genes, un
nmero ms grande de anticuerpos diferentes.

Cada una de las cadenas de los anticuerpos, no est codificada

en el DNA genmico como una secuencia (un gen). Ms bien,
cada cadena est codificada en varios segmentos genticos,
los cuales se RECOMBINAN para dar origen a la secuencia
codificadora completa. Es decir, en el DNA genmico no existe
una secuencia que codifique para cada uno de los anticuerpos
que el individuo puede sintetizar. Estas secuencias se van
generando por recombinaciones que van ocurriendo de una
manera ordenada y ligadas al proceso de maduracin de los
linfocitos B.

El dominio variable de una cadena pesada se codifica

por la unin de tres segmentos de DNA, llamados
segmentos VH (variable) DH (diversity) y JH (joining). Un
segmento gentico distinto codifica para los dominios
constantes (C, C1, C1, C2, etc).

El dominio variable de una cadena pesada se codifica por la unin

de tres segmentos de DNA, llamados segmentos VH (variable) DH
(diversity) y JH (joining). Un segmento gentico distinto codifica para
los dominios constantes (C, C1, C1, C2, etc).
De igual manera, la regin variable de la cadena ligera se codifica
por dos segmentos genticos, VL y JL, que son distintos a los
usados para la cadena pesada.
El DNA de cada clula del organismo contiene mltiples segmentos
V, D, y J para las cadenas pesadas y ligeras.

Los mecanismos de recombinacin de estos genes ocurren

solo en los linfocitos B, siguiendo un orden preciso:
En una etapa de su diferenciacin, en el linfocito B ocurre el
primer rearreglo, unindose alguno de los segmentos D con
alguno de los segmentos J de la cadena pesada. El
segmento DJ generado se une entonces a alguno de los
segmentos VH. La unidad VDJ generada codificar para la
regin variable de la cadena pesada, esta unidad queda
cercana a los genes que codifican para las regiones
constantes, C y C
El mismo tipo de rearreglos ocurre para los genes de la
cadena ligera. Un segmento V se une a un segmento J,
creando la unidad VJ, la cual queda prxima a la regin
que codifica el dominio constante de la cadena ligera.

En cada clona de linfocitos, los segmentos V D y J rearreglados son

diferentes, y con la variabilidad obtenida en las uniones y la adicion de
N/P nucleotidos, ocasionan que cada clona de linfocitos exprese un
dominio variable diferente . Esto ocurre tanto en las cadenas pesadas
como en las ligeras. Por lo tanto, la especificidad de el receptor de
cada clona de linfocitos es diferente a la de otras clonas

Generacin de la diversidad de anticuerpos.

Varios mecanismos contribuyen a la generacin de la
diversidad de la especificidad de los anticuerpos:
Multiples genes para las regiones variables de las cadenas
pesadas y ligeras (V,D,J), las cuales pueden combinarse
entre s en distintas combinaciones (hasta donde
sabemos, esto ocurre al azar.) De esta manera, el nmero
terico mximo de combinaciones diferentes es el
producto del nmero de genes V, por el nmero de genes
J, por el nmero de genes D (cadenas pesadas), y para
las ligeras, el producto de V x J. Adems, cualquier
combinacin VDJ de la cadena pesada se puede
combinar con cuanquier combinacin de la cadena ligera,
de modo que la diversidad es el producto de ambos
mximos.

Junctional diversity. Otra contribucin a la diversidad viene del

hecho de que durante las uniones de los segmentos V con
D, D con J y V con J, pueden aadirse o eliminarse
nucletidos en la unin, alterando as la secuencia de
aminocidos. Esto trae como consecuencia que la regin
CDR3 sea la que muestra mayor variabilidad, pues esta
regin incluye los sitios de recombinacin de los genes V D
J.
Despus de la estimulacin antignica, ocurre la
hipermutacin somtica, en las secuencias que codifican
para el dominio variable de las cadenas de Ig. Aunque estas
mutaciones ocurren al azar, la presencia de antgeno
selecciona a las clonas que generan anticuerpos con
afinidades mayores por el antgeno. A esto se debe el
fenmeno de maduracin de la afinidad que se observa en
las respuestas de anticuerpos a la imunizacin.