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Bacteriologa Clnica
Prctica No. 1
Mtodos Generales de Bacteriologa
Docente:
Q.F.B Dora Liliana Luna Vzquez
Equipo No. 4
Integrantes:
Arroyo Lira Arlette Guadalupe.
Rubio Ortiz Margarita.
Snchez Gonzlez Brigette.
8 Semestre Clnicos
RESULTADOS.
OBSERVACIONES.
Medios Inoculados.
Agar Sangre
Agar Saboraud
Agar MacConkey
Agar Sal-Manitol
Imagen
MacConkey
Observaciones
Los resultados observados fueron
bacilos gram positivos
Sangre
KLIGER
RM
VP
CITRATO DE
SIMMONS
MIO
Imagen
Observaciones
Apareci un vire color amarillo en el
fondo del tubo (K/A), lo que nos
indica que fue lactosa negativo y
glucosa positivo; adems de haber
produccin de acido sulfrico.
LIA
UREA
FAD
Imagen
Observaciones
DNAsa
Positiva
Sensibilidad a
Antibiticos
Polimixina = Resistente
Halo menor
Novobiocina = Sensible.
Halo mayor
DISCUSIN
Con base en el anlisis de resultados consideramos que las muestras problema
corresponden a S. aureus (tubo 4) y P. mirabilis (tubo 9), y a continuacin se
discute el porque:
S. aureus (tubo 4).
Las colonias utilizadas para las pruebas bioqumicas se tomaron del Agar MCK. Al
observar las reacciones de las pruebas bioqumicas utilizadas en esta practica y
comparar con la bibliografa encontramos que P. mirabilis produce los siguientes
resultados en:
CITRATO. Prueba utilizada para la identificacin de la familia
Enterobacteriaceae de microorganismos gram (-). En el cual se observo un viraje
azul, el cual indica que la prueba es positiva.
LIA. Produce un color anaranjado en todo el medio, debido a la
desaminacin de la lisina; este producto de color naranja se combina con el
indicador de pH prpura de bromocresol para producir un color rojo caracterstico
en el pico de flauta. Lo cual indica desaminacin positiva de la lisina, propiedad
caracterstica de Proteus y Providencia.
UREASA. El indicador del ion hidrogeno rojo de fenol demuestra la
produccin de ureasa por el genero Proteus, esta actividad enzimtica se utiliza
para diferenciar los microorganismos Proteus de otros miembros de la familia
Enterobacteriaceae. El resultado positivo se evidencio por el viraje a rosa
mexicano.
KLIGLER. Los sustratos metabolizados en esta prueba permiten
diferenciar gneros o especies de la familia Enterobacteriaceae. Se observo
precipitacin de H2S, propiedad distintiva de Proteus.
FAD. La actividad de fenilalanina desaminasa es caracterstica de todas las
especies de Proteus, adems de Morganella morganii y Providencia. Observamos
una coloracin verde en el pico de flauta despus de agregar el FeCl 3.
MIO.
Movilidad (M): permite saber si un microorganismo es mvil o inmvil, se
manifiesta, como en nuestro caso por turbidez producida por la migracin del
microorganismo desde la lnea de siembra. Adems de que es importante
remarcar el echo de que P. mirabilis es un bacilo, y la movilidad se da por medio
de uno o muchos flagelos, los cuales aparecen sobre todo entre los bacilos.
Indol (I): determina la capacidad de un microorganismo para separar Indol a partir
del triptfano; ayuda a la diferenciacin de especies, en nuestro caso en particular
nos ha sido de utilidad para establecer que el microorganismo problema es P.
mirabilis (-) y no otra especie de Proteus (+); ya que el resultado de nuestra
prueba fue negativo.
Ornitina (O): determina la capacidad de un microorganismo de descarboxilar un
aminocido para formar una amina con la resultante alcalinidad. Esta prueba sirve
para la diferenciacin de especies de Proteus al igual que la prueba del Indol, sin
embargo en esta prueba P. mirabilis es (+) como en nuestro caso y el resto de
Proteus son (-).
Tepic Nay. 21/Febrero/2008
RM/VP.
Rojo de metilo (RM): determina la capacidad de un microorganismo para producir
y mantener estables los productos finales cidos a partir de la fermentacin de la
glucosa. Esta prueba aporta caractersticas valiosas para la identificacin de
especies que producen cidos fuertes a partir de glucosa. Todos los miembros de
las Enterobacteriaceae, son por definicin, fermentadores de la glucosa, y ya que
P. mirabilis pertenece a las Enterobacteriaceae nuestro resultado positivo es
congruente con lo propuesto en la bibliografa.
Voges-Proskauer: esta prueba determina la capacidad de algunos
microorganismos para producir un producto final neutro, acetona, a partir de la
fermentacin de la glucosa. Y puesto que la prueba de rojo de metilo (produccin
de cidos) resulto positiva, nuestro resultado negativo en VP es congruente, ya
que debido a que se inoculo en el mismo tubo y slo se reparti en dos porciones
para realizar estas pruebas independientemente, no podemos tener ambos
resultados positivos.
CONCLUSINES
Con base en el anlisis de resultados y la bibliografa consultada concluimos que
los microorganismos presentes en las muestras corresponden a S. aureus y P.
mirabilis
Adems, pudimos reafirmar que conocer los fundamentos de los medios de
cultivo, la tincin Gram y las pruebas bioqumicas nos ayudan a la correcta
identificacin y caracterizacin de microorganismos presentes en una muestra
problema.
Estos microorganismos tienen importancia clnica ya que S. aureus es una
bacteria que se encuentra en la piel y fosas nasales de las personas sanas, causa
gran variedad de infecciones, desde infecciones menores de la piel y abscesos
cutneos hasta enfermedades que pueden poner en peligro la vida como
neumona, meningitis, endocarditis, sndrome del shock toxico (SST) y sepsis. P.
mirabilis es un patgenos responsables de muchas infecciones del tracto urinario,
produciendo las infecciones de tipo oportunista.
CUESTIONARIO
1.- explica el fundamento de los medios empleados en esta prctica.
AGAR SAL MANITOL Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta
concentracin salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol
acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla
brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de
una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un medio sin
exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la
coagulasa.
Tepic Nay. 21/Febrero/2008
El gas incoloro H2S reacciona con una sal fuerte de hierro, el citrato de amonio
frrico, para producir un precipitado negro insoluble de sulfato ferroso metalico. La
produccin de H2S se detecta cuando el gas entra en contacto con ciertos
metales, como plomo, hierro o bismuto y forma de estos sulfuros de estos
metales.
ROJO DE METILO
Es un indicador de pH con un intervalo de viraje entre 6,0 (amarillo) y 4,4 (rojo),
que se utiliza para visualizar la produccin de cidos por la va de fermentacin
cido mixta.
El acetil-metil-carbinol (o acetona) es un producto intermediario en la produccin
de butanodiol. En medio alcalino y en presencia de oxgeno la acetona es oxidada
a diacetilo. Este se revela en presencia de alfa-naftol dando un color rojo-fucsia.
VOGES PROSKAVER
Esta reaccin se basa en la deteccin del acetilmetilcarbinol (acetona) un
producto final neutro derivado del metabolismo de la glucosa. Esta es
metabolizada en cido pirvico, intermediario clave en la gluclisis.
A partir del cido piruvico, una bacteria puede seguir muchas vas. La produccin
de acetona es uno de los ciclos para la degradacin de la glucosa en las
bacterias.
Una molcula de acetona se forma por la descarboxilacin de dos molculas de
cido pirvico, la acetona es una etapa intermediaria en la conversin en 2,3butanediol.
CITRATO DE SIMMONS
Sirve para determinar si un organismo es capaz de utilizar citrato como nica
fuente de carbono y compuestos amoniacales como nica fuente de nitrgeno en
su metabolismo, Slo las bacterias capaces de metabolizar el citrato podrn
multiplicarse en este medio y liberarn iones amonio lo que, junto con la
eliminacin del citrato (cido), generar una fuerte basificacin del medio que ser
aparente por un cambio de color del indicador de pH, de verde a azul.
El metabolismo del citrato comprende una condensacin de acetilo con la
coenzima A y oxalacetato para entrar al ciclo de Krebs. Tambin el desdoblamiento
del citrato comprende un sistema enzimtico sin la intervencin de la CoA. Esta
enzima se denomina citritasa o citrato desmolasa, la enzima requiere un catin
bivalente para su actividad, que s suministrado por el Mg o Mn. Se pens que la
descomposicin inicial del citrato daba oxalacetato y acetato. Sin embargo, se
considera que el oxalacetato y el acetato son intermediarios en el metabolismo del
citrato.
Citrato
Oxalacetato + acetato
Piruvato + CO2
Los productos obtenidos del metabolismo del citrato dependen del pH del medio.
Si el pH aumenta, se producen mas acetato y formato, con una disminucin de la
produccin de lactato y CO2. Por encima de pH 7 no hay produccin de lactato y
los productos son:
Citrato
Reaccin
Interpretacin
Enturbiamiento del
Agar.
Hay movilidad
No hay movilidad
Azul (alcalino)
Descarboxila ornitina
No descarboxila
Rojo (anillos)
Indol (+)
Amarillo (anillos)
Indol ( - )
INDOL
El triptfano es un aminocido constituyente de muchas peptonas, y
particularmente de la triptena, que puede ser oxidado por algunas bacterias para
formar indol. En el proceso interviene un conjunto de enzimas llamadas
triptofanasa. El indol producido se combina con el aldehido del reactivo de Kovacs
o de Erlich, para originar un compuesto de color rojo. Las cepas mviles pueden
apreciarse en este medio, por la turbidez que producen alrededor de la puncin de
siembra, mientras que aquellas cepas productoras de sulfhdrico se distinguen por
la formacin de un precipitado negro de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato
siempre que el medio se mantenga a un pH mayor a 7.2.
LIA
Esta prueba permite diferenciar los microorganimos que producen
descarboxilacin o desaminacin de la lisina. Se pude detectar ademas la
produccion de SH2 y es ms sensible que el TSI para la deteccin de S 2H. Es muy
utilizado par descartar Salmonella de aislamientos primaros. Proteus y providencia
producen un color nararanjado en todo el medio debido a la desaminacion de la
lisina; este producto de color naranja se combina con el indicador de pH purpura
de bromocresol para producir un color rojo caracterstico en el pico de flauta
(aerobiosis). Sin embargo, aun no se conoce cual es el compuesto formado
responsables del desarrollo del color rojo.
Interpretacin de resultados
Reaccin
Interpretacin
Azul (alcalino)
Hay movilidad
Rojo
No hay movilidad
Engrecimiento
Descarboxila ornitina
No descarboxila
Fondo Amarillo y
Tendido prpura
Descarboxilacin de lisina
UREA
Determinar la capacidad de un microorganismo de hidrolizar la urea en dos
molculas de amoniaco por la accin de la enzima ureasa, conla resultante
alcalinidad.El sustrato urea , una diamina del acido carbnico, a menudo se
designa como una carbamida. Todas las amidas son hidrolizadas con la
facilidad. La urea es hidrolizada por una enzima especfica, la ureasa (o urea
amidohidrolasa), para dar dos molculas de amoniaco. En solucion , laurea se
hidroliza carbono de amonio como producto final.La ureasa es una importante
enzima microbiana relacionada con la descomposicin de los compuestos
orgnicos. El pH optimo para la actividad de la ureasa es de 7.
FAD +
Esta prueba determina la capacidad de un organismo para desaminar el
aminocido fenilalanina en cido fenilpirvico por su actividad enzimtica de
fenilalanina desaminasa, con la consiguiente acidez resultante. Esta actividad
enzimtica es caracterstica de todas las especies del gnero Proteus y del grupo
Providencia por lo que se usa para separar ambos gneros de otras
enterobacterias
El aminocido fenilalanina sufre la desaminacin oxidativa catalizada por un
aminocido oxidasa, una flavoprotena, para producir el cido cetnico, cido
fenilpiruvico. La desaminacin oxidativa da como resultado la extraccin del grupo
amino del aminocido para formar un doble enlace alfa-cetoacido y libre de NH 3.
En un principio, es extrado el H + dando un aminocido y el H + se combina con el
CO2 para formar H2O, luego el iminoacido es hidrolizado en un cetoacido.
PRUEBA DE LA DESOXIRRIBONUCLEASA (DNasa)
Esta prueba se utiliza para determinar la capacidad de un microorganismo de
producir la enzima desoxirribonucleasa. Adems esta prueba es utilizada sobre
todo como una prueba suplementaria para identificar estafilococos patgenos.
Ayuda a identificar posibles cepas de Staphylococcus aureus, que no dan una
reaccin positiva definida a la prueba de la coagulasa.
La DNasa es una endonucleasa extracelular que es especfica para la
hidrlisis del DNA. La mayora de las DNasas bacterianas requieren cationes
divalentes para su actividad, los cuales por lo general son proporcionados por las
peptonas en el medio de crecimiento o de prueba. Los lmites de pH para la
actividad ptima de la enzima varan entre 5,5 y 8,5.
Las DNasas estn presentes en los extractos de una variedad de
microorganismos; sin embargo, las DNasas extracelulares se informan en unas
pocas especies bacterianas como S. aureus, estreptococos del grupo A,
Corynebacterium diphtheriae, Serratia marcescens, Pseudomonas aeruginosa,
especies de Bacillus y especies de Vibrio.
NOVOBIOCINA
La novobiocina es un antibitico activo por va oral. Se utiliza para el tratamiento
de infecciones por S.aureus y para el tratamiento de infecciones urinarias
resistentes a otros frmacos. La novobiocina es bacteristatica e interfiere con la
Tepic Nay. 21/Febrero/2008
sntesis de la pared bacteriana. Este frmaco se utiliza muy poco debido que su
uso est asociado a una alta incidencia de reacciones adversas y a que
frecuentemente emergen cepas resistentes.
POLIMIXINA
La polimixina B es un antibitico polipeptdico producido por una cepa de Bacillus
polymyxa. Su espectro de actividad se limita a las bacterias gram-negativas. Hoy
da, la polimixina B se utilizada raras veces debido a su potencial nefrotoxicidad
y/o neurotoxicidad. Prcticamente slo se utiliza por va oftlmica, tica o tpica en
combinacin con otros antibiticos (bacitracina, clindamicina o neomicina) o con
antiinflamatorios (hidrocortisona)
Mecanismo de accin: la polimixina B se fija a los fosfolpidos de las membranas
de las clulas bacterianas gram-negativas. Esta unin destruye las membranas
bacterianas mediante un efecto detergente, aumentando la permeabilidad de la
membrana lo que se traduce en la muerte celular. La polimixina B es bactericida
frente a la mayor parte de los grmenes gram-negativos aunque algunos Proteus y
Serratia pueden ser resistentes. Los microorganismos generalmente susceptibles
a la polimixina B son las Pseudomonas aeruginosa, Escherichia coli, Haemophilus
influenzae, Enterobacter aerogenes, y Klebsiella pneumoniae. La actividad in vivo
de la polimixina frente a la Pseudomonas aeruginosa es reducida por la presencia
de iones divalentes que interfieren con la unin del antibitico a la membrana
bacteriana
4.-en la tcnica empleada para la siembra en caja para aislamiento de
colonias, Por qu es importante quemar el asa entre cada estriacin?
La siembra por estra es, en general, el mtodo ms til de sembrar en placa. El
asa de cultivo se esteriliza e introduce en una suspensin, convenientemente
diluida, de organismos y se utiliza luego para hacer una serie de estras paralelas,
sobre una placa de agar previamente solidificado. El inocul se va diluyendo
progresivamente con cada estra sucesiva, de tal manera que si las estras
iniciales proporcionan un crecimiento confluente, a lo largo de las ltimas estras
se van desarrollando colonias bien aisladas.
As la importancia de esterilizar el asa en cada estriacin estriba en el
hecho de conseguir que en las ltimas estras se desarrollen colonias bien
aisladas.
5.- En casos se emplea la siembra masiva?
Para tener un crecimiento abundante de microorganismos y realizar las pruebas
de sensibilidad a antibiticos, ya que este mtodo de siembra permite observar
claramente la formacin de halos.
BIBLIOGRAFIA