UNIVERSIDAD INCA GARCILASO DE LA VEGA

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

TEMA

CINETICA ENZIMATICA

ASIGNATURA

BIOQUIMICA II

DOCENTE

MARLON PADILLA HUARI

ALUMNA

DIANA CULQUICONDOR

CICLO

VII

TURNO

NOCHE

2015

PRACTICA N 3

CINETICA ENZIMTICA
1) MARCO TEORICO
La cintica enzimtica estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas. Estos estudios proporcionan informacin directa acerca del mecanismo de
la reaccin cataltica y de la especifidad del enzima.
La velocidad de una reaccin catalizada por un enzima puede medirse con relativa
facilidad, ya que en muchos casos no es necesario purificar o aislar el enzima. La
medida se realiza siempre en las condiciones ptimas de pH, temperatura,
presencia de cofactores, etc, y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato.
En estas condiciones, la velocidad de reaccin observada es la velocidad mxima
(Vmax). La velocidad puede determinarse bien midiendo la aparicin de los productos o
la desaparicin de los reactivos.
Al seguir la velocidad de aparicin de producto (o de desaparicin del sustrato) en
funcin del tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la reaccin, o
simplemente, la cintica de la reaccin. A medida que la reaccin transcurre, la
velocidad de acumulacin del producto va disminuyendo porque se va consumiendo
el sustrato de la reaccin. Para evitar esta complicacin se procede a medir la
velocidad inicial de la reaccin (v0). La velocidad inicial de la reaccin es igual a la
pendiente de la curva de avance a tiempo cero. De esta forma, la medida de v 0 se
realiza antes de que se consuma el 10% del total del sustrato, de forma que pueda
considerarse la [S] como esencialmente constante a lo largo del experimento.
Adems, en estas condiciones no es necesario considerar la reaccin inversa, ya
que la cantidad de producto formada es tan pequea que la reaccin inversa apenas
ocurre. De esta
forma
se
simplifican
enormemente
las
ecuaciones
de
velocidad.

2) OBJETIVOS
Determinar los factores que regulan la cintica enzimtica
Determinar el pH, la concentracin optima de la Enzima, temperatura que
obtienen.
3) MATERIALES
Vasos precipitados
10 tubos de ensayo
Gradilla
Reactivos: Lugol

4) PARTE EXPERIMENTAL
4.1 PREPARACION DE LA AMILASA SALIVAL

Enjuagar la boca 2
veces con agua
destila
Tomar 20 ml de
agua (D) y
mantenerlos por 1
o 2 minutos

4.2 VELOCIDAD DE LA REACCION VS CONCENTRACIN ENZIMTICA

Amilasa

1/10

1mL Amil. +
9 H2 O

1/20

1mL T1 +
9 H 2O

1/40

1/80

1mL T2 +
9 H 2O

1mL T3 +
9 H 2O

1/16
0

1mL T4 +
9 H 2O

OBSERVACIN
El Tubo n 1 lleva mayor concentracin de AMILASA en comparacin de los
dems tubos de ensayo, debido a que se diluye cada vez ms de un tubo a
otro.
CONCLUSIN

La concentracin de la amilasa salival disminuye del tubo n1 al tubo n 5.

4.3 VELOCIDAD DE LA REACCION VS TEMPERATURA

Amilasa 1 mL
Hervir 5` a 100C

Tubo 1
X
X

Tubo 2
X

Tubo 3
X

Bao hielo 5`
Almidn 4 mL
BM a 38C x 15`
BM en hielo x 15`

El tubo n 1 con Amilasa

llevar a hervir por 5`

Agregar 4ml de
Almidn
Luego llevar a BM X 15

El tubo n 2 con Amilasa

llevar a hervir por 5`

X
X

X
X

X
X
X

Llevar a BM por
15`

El tubo n 3 con Amilasa

llevar a bao de hielo por 5`

Agregar 4mL de
Almidn
Luego nuevamente
a bao de hielo 5`

Resultados

OBSERVACIN
TUBO N 1
La amilasa se desanaturaliza por accin del calor de la Temperatura. Por lo tanto el
almidn no es hidrolizado y el lugol lo reconoce.
TUBO N 2
El lugol no reconoce el Almidn por que la Enzima lo ha hidrolizado.
TUBO N3
El hielo inactiva a la Amilasa, pero no la desnaturaliza.

4.4 VELOCIDAD DE LA REACCION VS pH

Amilasa 1 mL
HCl 10% - X gotas
NaOH 10% - X gotas
Almidn

Tubo 1
X
X

Tubo 2
X

Tubo 3
X

X
X

BM 38% x 15`

En c/ tubo 1mL de Amilasa

Tubo n1: Xgotas de HCl
10%
Tubo n2: Xgotas de NaOH
10%

Llevar a BM
por 15`

2
1

OBSERVACIN

TUBO N1: vira a color azulado.

TUBO N2: vira a color amarillento.
TUBO N3: se torna transparente.

DISCUSIN

CONCLUSIN
TUBO N1: El HCl desnaturaliza la enzima, por ello el almidn es reconocido por
el lugol.

TUBO N2: La amilasa hidroliza al almidn, por ello el lugol no lo reconoce. El pH

es casi neutro: 6,5. La temperatura influye en la reaccin.

TUBO N3: El NaOH inactiva a la Amilasa y bloquea al sustrato. Es decir retrasa

la reaccin de la Enzima.