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21/08/2012

Produccin de
Bioinsecticidas

Microbiologa Aplicada Ao 2012

Definicin de bioinsecticida

Es la reduccin de la densidad o de las actividades


productoras de enfermedades de un patgeno o parsito,
en su estado durmiente o activo, lograda de manera
natural o a travs de la manipulacin del ambiente, del
hospedero o de antagonistas del patgeno o plaga que se
quiere controlar.

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21/08/2012

Caractersticas de bioinsecticidas

Alta virulencia, que cause infecciones agudas en el husped


Alta capacidad para transmitirse.
Elevada persistencia en el campo
Capacidad para producirse masivamente en forma eficiente y
econmica.
Espectro de huspedes limitado
Alto grado de bioseguridad, tanto hacia el medio ambiente
como hacia al hombre y los animales domsticos y silvestres.
Larga vida de anaquel
Capacidad

para

aplicarse

en

el

campo

con

equipo

convencional.
Entre otras
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Insectos

Definicin: Artrpodos mandibulados y antenados, cuyo cuerpo


est dividido en cabeza, trax y abdomen. Aparato bucal con
mandbulas, maxilas y labio. Trax 3-segmentado, llevando cada
segmento un par de patas y los dos posteriores con o sin alas.
Sistema respiratorio formado por estigmas y trqueas. De sexos
separados. Sufren metamorfosis ms o menos acentuadas. Se
encuentran en todos los ambientes: hdrico, terrestre y areo.
http://es.wikipedia.org/ wiki/Insecto

Metamorfosis: Es la transformacin morfolgica y fisiolgica que


presentan los insectos desde la formacin del huevo hasta llegar
al estado adulto.
Metamorfosis incompleta

Metamorfosis completa

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Bioinsecticidas bacterianos

Pseudomanaceae (tucuras, polilla


de la cera, gusano de seda y
gusanos blancos)

Bacterias no
esporulantes

Streptococcaceae (polilla de la cera)

Enterobacteriaceae (Lepidpteros y
Ortpteros)

Bacterias
esporulantes

Bacillaceae

Clostridium

Bacillus

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Bioinsecticidas bacterianos

Bacillus thuringiensis
Gram positiva.
Aerbica.
Portadora

natural

de

protenas

insecticidas

codificadas en plmidos.
Hbitat: Suelo, superficie de plantas, insectos y
granos almacenados.
Representa aproximadamente un 2% del mercado total de
insecticidas (Bravo et al., 2011).
Los productos basados en Bt abarcan el 75 % del mercado
mundial de bioinsecticidas (Khedher et al., 2011).
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Bioinsecticidas bacterianos

Clasificacin de toxinas Cry

Segn la similitud de la secuencia


aminoacdica

70 GRUPOS
(Cry 1- Cry 70)

Clases
Subclases

Crickmore, N., Zeigler, D.R., Schnepf, E., Van Rie, J., Lereclus, D., Baum, J., Bravo, A., Dean, D.H.,
2012. Bacillus thuringiensis toxin nomenclature.
http://www.lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt
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Bioinsecticidas bacterianos

Toxinas Vip (Protenas insecticidas vegetativas)

Producidas por algunas cepas de Bt

Por lo menos 3

Vip 1
Vip 2
Vip3a

Colepteros
Lepidpteros

Crickmore, N., Zeigler, D.R., Schnepf, E., Van Rie, J., Lereclus, D., Baum, J., Bravo, A., Dean,
D.H., 2012. Bacillus thuringiensis toxin nomenclature.
http://www.lifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt
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Bioinsecticidas bacterianos

Bacillus thuringiensis var. Aizawai


Bacillus

thuringiensis

var.

tenebrionis

Bacillus thuringiensis var. kurstaki


Bacillus thuringiensis var. israelensis

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Bioinsecticidas bacterianos

Estructura de esporangios de bacilos


Bti

Btk

Cristal
Esporo

Esporo

Cristal

Bs

Esporo
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Bioinsecticidas bacterianos

Modo de accin:

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Bioinsecticidas bacterianos

Bacillus thuringiensis var. kurstaki


Es, por excelencia, la cepa utilizada para el control de insectos
lepidpteros que actan como plagas agrcolas y forestales.
Produce un cristal bipiramidal, que incluye las protenas Cry 1 Aa,
Cry 1 Ab, Cry 1Ac, Cry 2 Aa y Cry 2 Ab.
Cry 1 es una protoxina de 130 kDa de peso molecular, que es capaz
de producir un fragmento activo N-terminal de 65 kDa contra insectos
lepidpteros.
El peso de la protoxina Cry 2 es de aproximadamente 70 kDa y el
peso de la toxina activa se aproxima tambin a 65 kDa.
El Bacillus thuringiensis var. israelensis (Bti) produce toxinas que
son activas contra larvas de dpteros. Los cristales estn compuestos
por polipptidos con los siguientes pesos moleculares: 27 kDa (Cyt A);
58 kDa (Cry IVC), 70 kDa (Cry IVD), 128 kDa (Cry IVB) y 134 kDa (Cry
IVA).
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Bioinsecticidas bacterianos

Sustrato slido
Produccin
Industrial

Cultivos Sumergidos
Seleccin del medio de
cultivo

Aspectos
crticos

Oxigenacin del cultivo


Sedimentacin
Recuperacin
del producto

Filtracin
Centrifugacin
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Bioinsecticidas virales

Los miembros de la familia Baculoviridae constituyen un


grupo de virus patgenos que son infecciosos para
artrpodos.
-baculovirus
Flia
Baculoviridae

4 Gneros

-baculovirus
-baculovirus
-baculovirus

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Bioinsecticidas virales

Poliedro

Nucleocpside

Virin

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Bioinsecticidas virales

In vivo
Produccin
Industrial

In vitro

In vitro

Cultivos estacionarios
STR
Air lift
Cultivos en
Columnas
suspensin agitados
de burbujeo

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Produccin in vitro
CLULAS DE
INSECTO
SISTEMA Y ESTRATEGIA
DE CULTIVO
BVs

PARMETROS DE
INFECCIN:
MOI - ICD

MEDIO DE
CULTIVO

Oxigenacin del cultivo


Mtodo de agitacin empleado
Susceptibilidad a contaminaciones

OBs

BVs

Bioinsecticidas virales

Ejemplos de -baculovirus registrados para uso insecticida

Claus, J.; Gioria, V.; Micheloud,G.; Visnovsky, G. (2012). Production of insecticidal baculoviruses in insect cell
cultures: potential and limitations 127-152, En: "Insecticides / Book 2", ISBN 979-953-307-666-8

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Formulaciones

Una formulacin es la mezcla de un pesticida


(biolgico o no) con uno o varios ingredientes
que ayudan a mejorar su accin.
Mejorar la aplicacin.
Contribuir a mejorar la vida til del producto.
Persistencia.
Atraccin a la plaga.
Humectacin/adherencia a la planta.

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La potencia de un producto se define en


Unidades Txicas Internacionales (UTI/mg). Se
obtiene mediante la frmula:

Potencia = CL50(referencia)*15,000
CL50 (producto a evaluar)
CL50 : Concentracin letal necesaria para
obtener el 50% de mortalidad larval en 24 horas
de exposicin.
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Almacenamiento
Las condiciones son variables de acuerdo al patgeno a
considerar.
Temperaturas bajas.
Evitar la exposicin a la luz solar.
Las formulaciones
mantenerse secas.

en

polvo

deben

Las formulaciones con nemtodos deben


mantenerse en un ambiente hmedo.

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Cmo se aplican?

La tecnologa de aplicacin vara


patgeno en cuestin.

de acuerdo al

Aplicacin area.
Aplicacin terrestre.
Aplicacin terrestre con explosivo
Aplicacin con mochila.
Aplicacin con rociadores

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Referencias

Brar et al. (2006). Recent advances in downstream processing and formulations of Bacillus
thuringiensis based biopesticides. Process Biochemistry 41: 323342.
Bravo et al. (2011). Bacillus thuringiensis: A story of a successful bioinsecticide. Insect Biochemistry
and Molecular Biology 41: 423-431.
Caballero, P, Lpez-Ferber, M. y Williams, T. Eds.: Los baculovirus y sus aplicaciones como
bioinsecticidas en el control biolgico de plagas. Agro-publi y Universidad de Navarra, Espaa. pp.
257-313.
Farrera et. al. (1998). Carbon:nitrogen ratio interacts with initial concentration of total solids on
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Technol. 40: 614-622.
Khedher et al. (2011). Improvementof Bacillus thuringiensis bioinsecticide production by sporeless
and sporulating strains using response surface methodology. New Biotechnology 00(00):1-8.
Micheloud, G., et al. (2009) Production of occlusion bodies of Anticarsia gemmatalis multiple
nucleopolyhedrovirus in serum-free suspension cultures of the saUFL-AG-286 cell line: Influence of
infection conditions and statistical optimization. Journal of Virological Methods 162: 258266.
Micheloud G. et al. (2011) Production of the Anticarsia gemmatalis multiple nucleopolyhedrovirus in
serum-free suspension cultures of the saUFL-AG-286 cell line in stirred reactor and airlift reactor.
Journal of Virological Methods 178: 106116.
Milne et al. (2008) Purification of Vip3Aa from Bacillus thuringiensis HD-1 and its contribution to
toxicity of HD-1 to spruce budworm (Choristoneura fumiferana) and gypsy moth (Lymantria dispar)
(Lepidoptera). Journal of Invertebrate Pathology 99: 66172.
Moreira et al.(2007) Optimization of the Bacillus thuringiensis var. kurstaki HD-1 -endotoxins
production by using experimental mixture design and artificial neural networks. Biochemical
Engineering Journal 35: 4855
Moscardi, F. (1999) Assessment of the application of baculoviruses for control of Lepidoptera. Annu.
Rev. Entomol. 44: 257-289.
Rukmini, V., et al. (2000) Bacillus thuringiensis crystal -endotoxin: role of proteases in the conversion
of protoxin to toxin. Biochimie 82: 109-116.
Seifinejad A.et al. (2008) Characterization of Lepidoptera-active cry and vip genes in Iranian Bacillus
thuringiensis strain collection. Biological Control 44: 216226.
*Diseo estadstico de experimentos

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