Trminos empleados en cromatografa

Analito:
es la sustancia que se va a separar durante la cromatografa.
Cromatografa Analtica:
se emplea para determinar la existencia y posiblemente tambin la concentracin de un
analito en una muestra.
Fase enlazada:
es una fase estacionaria que se une de forma covalente a las partculas de soporte o a las
paredes internas de la columna.
Cromatograma:
Es el resultado grafico de la cromatografa
Cromatgrafo:
es el equipo que permite una separacin sofisticada
Efluente:
es la fase mvil que atraviesa la columna.
Tiempo de retencin:
es el tiempo caracterstico que tarda un analito particular en pasar a travs del sistema
Muestra:
es la materia que va hacer analizada en la cromatografa.
Soluto:
es cada uno de los componentes de la muestra que va a ser separado.
Disolvente:
es toda sustancia capaz de solubilizar a otra, y especialmente la fase liquida mvil en
cromatografa de lquidos.
Tipos de Cromatografa liquida
El Mecanismo De Separacin puede Ser:

CROMATOGRAFA DE REPARTO LIQUIDO-LIQUIDO:

Es un disolvente que se mantiene en su sitio por adsorcin sobre la superficie de
las partculas del empaquetamiento. Se usa con antibiticos, sedantes, esteroides
y analgsicos
CROMATOGRAFA DE ABSORCIN O LQUIDO SOLIDO:
En esta la especie de Analito se absorbe en la superficie de un empaquetamiento
polar. Se usa en separacin de compuestos organicos no polares

CROMATOGRAFA DE INTERCAMBIODE IONES O IONICA :

En este proceso los iones son intercambiados por los iones de una
disolucin que se ha puesto en contacto con el slido. y hay de dos
tipos.
-Cromatografa Inica basada en supresores: la columna de
intercambio de iones va seguida de una columna supresora, que
convierte el eluyente inico en una especie no inica, la cual no
interfiere en la deteccin conducto mtrica de los iones del analito.

- Cromatografa de intercambio inico de columna sencilla: los iones del

analito se separan en el intercambiador inico de baja capacidad por medio de
un eluyente de baja fuerza inica.

CROMATROGRAFIA DE EXCLUSION MOLECULAR O DE GEL:

aplicable a especies de alto peso molecular.
CROMATOGRAFA DE AFINIDAD:
Consiste en enlazar de manera covalente un reactivo
CROMATOGRFIA LIQUIDA DE ALTA RESOLUCION

Se introdujo Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones

Tipos de Cromatografa liquida de alta resolucin

Cromatografa de Fase Normal:

Esta tcnica utiliza una base estacionaria polar y una fase mvil apolar, y se
utiliza cuando el compuesto de inters es bastante polar.

Cromatografa de Reversa:
Consiste en una fase estacionaria apolar y una fase mvil de polaridad
moderada. es tan utilizada que a menudo se lo denomina HPLC sin ninguna
especificacin adicional
Componentes de un Cromatgrafo Lquido

Sistema de datos
Detectores
Columna
Sistema de suministro de la fase mvil
Sistema de bombeo de la fase mvil
Inyectores
Pre columnas

Fase mvil
La fase mvil es un lquido que fluye a travs de una columna que contiene a la fase
fija. A la hora de trabajar con la fase mvil se toma en consideracin lo siguiente:
1.
2.
3.
4.

Para la HPLC hay que utilizar reactivos de alto grado de pureza.

La fase mvil no ha de tener partculas
Hay que eliminar el aire disuelto en la fase mvil
la fase mvil se puede desgasificar con helio.

Elucin Isocrtica:
Se usan cuando la mezcla a separar no es muy compleja
Elucin por Gradiente:
el sistema de bombas en una elucin por gradiente es ms complejo pues requiere
mezclar solventes, pero se obtiene una mejor resolucin
SISTEMA DE SUMINISTROS DE LA FASE MOVIL
Sirve para desgasificar y eliminar partculas en suspensin de los disolventes que
interfieren formando burbujas en los sistemas de deteccin.
SISTEMA DE BOMBEO :
Se usan bombas para impulsar a la fase mvil, deben cumplir los siguientes
requisitos:
Deben vencer altas presiones.

Proporcionar caudales estables entre 0,1 y 10mL/min.

Deben estar libres de pulsaciones y tener volmenes muertos

pequeos.

Deben estar construidas de materiales resistentes a la presin y a las

agresiones qumicas.

Fcil manejo y mantenimiento.

resistencia a la corrosin por diversos disolventes

TIPO DE BOMBAS

Bombas recprocas

Bombas de jeringa o desplazamiento

Bombas neumticas o de presin constante

Inyectores
Son los encargados de introducir la muestra en la cabeza de la columna de
forma reproducible y adecuada.
EXISTEN DOS TIPOS DE INYECCTORES
Septum:
Inyecta la muestra mediante una jeringa.
Bucle de muestreo:
Este dispositivo normalmente se encuentra integrado en el equipo
cromatogrfico

Fase estacionaria
Puede ser almina, slice o resinas de intercambio inico.
COLUMNAS
Las columnas de cromatografa lquida se elaboran con tubo de acero
inoxidable a veces tubos de vidrio.
El empaquetamiento ms comn en la cromatografa liquida se prepara con
partculas de slice.
PRECOLUMNAS
Estas se colocan delante de la columna analtica para extraer partculas y
contaminantes del disolvente y prolongar as la vida de la columna analtica
TIPOS DE RELLENOS DE COLUMNAS

En cromatografa de lquidos se han utilizado dos tipos bsicos de

rellenos

Pelicular: consiste en bolas de vidrio o de polmero, no porosas y esfricas

con unos dimetros caractersticos de 30 a 40 m
Partcula porosa: estn formados por micropartculas porosas con
dimetros entre 3 y 10 m
DETECTORES
Los ms usados liquida se basan en la absorcin de radiacin ultravioleta o
visible
DETECTORES comnmente usados en HPLC

UV/Vis
Fluorescencia
ndice de refraccin
Detectores Electroqumicos
Dispersin de luz
Espectrometra de masas
Ventajas de HPLC

Su velocidad de anlisis que permite que la mayor parte de las

separaciones se consigan significativamente en tiempos menores a 1
hora
Resultados cuantitativos
Amplio espectro de aplicaciones

Desventajas de HPLC

Pequea capacidad, no pudindose hacer purificaciones a gran escala

instrumentacin costosa.
Elevado costo de operacin
Experiencia indispensable