Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas

Departamento de Bioqumica
Curso prctico de Mtodos de anlisis
Separacin de una mezcla de azul de metileno y fluorescena usando
cromatografa por adsorcin
Simn Martnez Luis ngel
Gpo: 5QV1 Secc: 2
INTRODUCCIN
La caracterstica que distingue a la cromatografa de la mayora de los
mtodos fsicos y qumicos de separacin, es que se ponen en contacto
dos fases mutuamente inmiscibles. La fase estacionaria y la mvil. Una
muestra que se introduce en la fase mvil es transportada a lo largo de
la columna que contiene una fase estacionaria distribuida. Las especies
de la muestra experimentan interacciones repetidas (repartos) entre la
fase mvil y la fase estacionaria. Cuando ambas fases se han escogido
en forma apropiada los componentes de la muestra se separan
gradualmente en bandas en la fase mvil. Al final del proceso los
componentes separados emergen en orden creciente de interaccin con
la fase estacionaria. El componente menos retardado emerge primero, el
retenido ms fuertemente eluye al ltimo. El reparto entre las fases
aprovecha las diferencias entre las propiedades fsicas y/o qumicas de
los componentes de la muestra. Los componentes adyacentes (picos) se
separan cuando el pico que sale despus es retardado lo suficiente para
impedir la sobre posicin con el pico que emergi antes.
Una amplia gama de seleccin de materiales para las fases mvil y
estacionaria, permite separar molculas que difieren muy poco en sus
propiedades fsicas y qumicas. En un sentido amplio, la distribucin de
un soluto entre dos fases es el resultado del balance de fuerzas entre las
molculas del soluto y las molculas de cada fase. Refleja la atraccin o
repulsin relativas que presentan las molculas o iones de las fases
competidoras por el soluto y entre s. Estas fuerzas pueden ser de
naturaleza polar, proviniendo de momentos dipolares permanentes o
inducidos, o pueden deberse a fuerzas de dispersin del tipo London.
Cromatografa de adsorcin
La fase estacionaria es un slido en el que los componentes de la
muestra son adsorbidos. La fase mvil puede ser un lquido
(cromatografa lquido-slido) o un gas (cromatografa gas-slido); los
componentes se distribuyen entre dos fases a travs de la combinacin
de los procesos de adsorcin y desorcin. La cromatografa de capa fina
(TLC) es un ejemplo especial de cromatografa por adsorcin en la cual
la fase estacionaria es un plano, en la forma de un soporte slido en un
plato inerte.
OBJETIVOS

a) Aplicar la tcnica de cromatografa por adsorcin para la

separacin de dos colorantes
b) Comprobara la separacin con base en el perfil de elucin

RESULTADOS
Volumen
A493.
de
elucin.
3
-0.006
6
-0.006
9
0.268
12
0.217
15
0.045
18
0.023
21
0.008
24
0.009
27
0.001
30
-0.004
33
-0.006
36
-0.004
39
-0.004
42
-0.003
45
-0.005
48
-0.007
51
-0.004
54
0.000
57
0.003
60
0.002
63
1.685
66
2.105
69
0.902
72
0.331
75
0.114
78
0.063
81
0.042
84
0.031
87
0.032
90
0.032

A668.
0.001
0.001
2.525
2.225
0.860
0.391
0.205
0.117
0.070
0.031
0.036
0.025
0.023
0.021
0.009
0.008
0.010
0.008
0.007
0.007
0.005
0.003
0.010
0.011
0.010
0.012
0.021
0.010
0.007
0.009

Perfil de elucin
1

0.95

0.9
0.8
0.71

0.7
0.6
Absorbancia

0.5

A493

0.4

A650

0.3
0.2
0.1
0
0

10

20

30

40

50

60

70

80

Volumen de elucin (mL)

Grafica 1.- Perfil de elucin con las absorbancias de 493nm y 650nm

DISCUCIN
Una cromatografa como vimos esta conformada por tres elementos
indispensables y que adems caracterizan a la cromatografa y difencia
de los dems mtodos de separacin son el Eluyente o fase mvil (en
nuestro caso H2O y NaOH), una fase estacionaria (Alumina) y por ultimo
pero no menos importante el soporte, quien contiene a la fase
estacionaria y fase mvil.
En la grafica 1 podemos observar en el eje de las abscisas el volumen de
elucin que utilizamos y en el eje de las ordenadas, se encuentra el
valor que corresponde a la absorbancia a 493nm con el blanco de agua y
tambin la absorbancia a 650nm en el cual usamos como fase mvil
NaoH. Como se muestra en la grafica 1, el azul de metileno sali en
mayor concentracin en el tubo 3 (9mL) el volumen de elucin para el
azul de metileno es de 9mL, en el cual se uso agua destilada como fase
mvil, el azul de metileno es a fin al agua puesto que es soluble en agua
permitiendo que se vaya junto con el eluyente (agua) y la fluorescena
en el tubo 19 (57mL) por otro lado la fluorescena tambin es
hidrosoluble con la diferencia que tiene mayor afinidad con la fase
estacionaria adems de que la fluorescena se prepara y se diluye con
NaOH, por ende para eluir a la fluorescena se utilizo como eluyente a el
NaOH quien logro eluir completamente a la Fluorescena. Esto nos da un
indicio de que como ambos picos estn bastante alejados podemos decir

que nuestro mtodo utilizado fue eficiente y como tampoco las

campanas no se traslapan fue realizado de manera satisfactoria.
Para explicar un poco mas como se lleva a cabo la cromatografa de
adsorcin debemos entender que es adsorcin, es aquella propiedad que
poseen algunas sustancias para fijar en su superficie ciertas molculas.
La adsorcin en nuestro caso la aprovechamos para retener en la fase
estacionaria las molculas de fluorescena aprovechando el fenmeno de
adsorcin y convirtiendo temporalmente a esta como el adsorbato, y asi
tenemos dos fases una solida (alumina y fluorescena) y una fase fluida.
Las interacciones que se dan entre el adsorbato y el adsorbente son del
tipo Van der Waals, para esto el adsorbente debe contar con una gran
superficie de contacto, entre mayor superficie ms numero de
interacciones y por lo tanto ms a fin a la fase estacionaria.

Por otra parte para poder invertir el orden de elucin de los colorantes
se podran hacer algunas modificaciones al mtodo y de esta manera
lograr invertir el orden. Al conocer las propiedades de las molculas
podemos simplemente cambiar el eluyente. Preparar la columna con
alumina e hidrxido de sodio, posteriormente agregar la mezcla y
comenzar a eluir con NaOH de esta forma quien va a eluir ser la
fluorescena y posteriormente cambiar a el agua entonces as lograra
eluir al Azul de metileno quien de esta forma saldr al final.
CONCLUSIN
Se logro separar a ambos colorantes a partir de una mezcla,
aprovechando sus propiedades que son afines a, ya sea fase mvil o
estacionaria, las fases.
Sin interferencias y de manera satisfactoria se obtuvo un buen resultado
que se aprecia en el perfil de elucin adems de que nos da a conocer el
volumen de elucin de cada colorante.
PREGUNTAS EXTRA
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Autor: Antoine De Saint-Exupry
BIBLIOGRAFA
W. F. Pickering. Qumica analtica moderna. Ed. Revert S. A. pp 601
M. Consuelo Jimnez. Qumica fsica para ingenieros qumicos. Ed. UPV.
Pp 161-171
Xavier E. C. 2000. Reciclaje de residuos ambientales. Espaa Ed. Das de
Santos S.A. pp 66-67
Castellan, G. W. 1974. Fisicoqumica. Mxico, pp 818