REPBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL

FRANCISCO DE MIRANDA
REA DE TECNOLOGA
DEPARTAMENTO DE QUMICA
QUMICA ANALTICA.

Mtodos pticos de Anlisis

Espectroscopia de Absorcin Molecular

Ing. Danibett Ramrez

Ing. Esp. Edgar Loaiza MSc.

Revisin Marzo de 2016

REPBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA

UNIVERSIDAD NACIONAL EXPERIMENTAL
FRANCISCO DE MIRANDA
REA DE TECNOLOGA
DEPARTAMENTO DE QUMICA
QUMICA ANALTICA.
MTODOS PTICOS DE ANLISIS

CONTENIDO:
1. Mtodos pticos de Anlisis: Definicin e Importancia.
2.-Radiacin

electromagntica,

Teora

Ondulatoria

Corpuscular,

Espectro

Electromagntico.
3. Absorcin molecular: Proceso de Absorcin de la Radiacin y Descripcin de la
Absorcin de la Radiacin.
4. Medida de la Absorcin: Transmitancia y Absorbancia
5. Aspectos Cuantitativos de las Mediciones de Absorcin: Deduccin de la Ley de Beer.
6. Limitaciones Reales, Qumicas e Instrumentales de la Ley de Beer
7. Aplicaciones de La Ley de Beer.
8. Curva de Calibracin

1. Mtodos pticos de Anlisis

Se basan en la medicin de luz y otras formas de radiacin electromagntica. Desde hace
muchos aos se ha usado el color como ayuda para reconocer las sustancias qumicas; al
reemplazar el ojo humano por otros detectores de radiacin se puede estudiar a absorcin
de sustancias, no solamente en la zona del espectro visible, sino tambin en ultravioleta e
infrarrojo.
As bien, se denominan mtodos espectroscpicos o espectrofotometra a la medicin de la
cantidad de energa radiante que absorbe un sistema qumico en funcin de la longitud de
onda de la radiacin, y a las mediciones a una determinada longitud de onda. Estos mtodos
tambin se clasifican de acuerdo con la regin del espectro electromagntico que se utiliza
para hacer la medicin. Estas regiones incluyen los rayos , X, ultravioleta (UV), visible,
infrarrojo (IR), las microondas y radiofrecuencias (RF).
La espectroscopia ha jugado un papel fundamental en el desarrollo de la teora atmica
moderna. Tambin ha aportado las herramientas que, posiblemente, son las que ms se
utilizan para elucidar estructuras moleculares, as como para identificar y obtener la
composicin cuantitativa y cualitativa de sustancias orgnicas e inorgnicas.
Las aplicaciones tambin incluyen al anlisis cuantitativo de muestras en Qumica
Ambiental, clnica, industrial y forense. Por ejemplo: en el campo medioambiental, los
mtodos para el anlisis de metales en aguas corrientes y residuales basados en la absorcin
de la radiacin UV/Visible son algunos de los mtodos analticos ms utilizados, por su
rapidez en comparacin con los mtodos clsicos.
La absorcin molecular tambin puede emplearse para el anlisis de contaminantes
aerotransportados significativos en el medio ambiente. A nivel clnico es una de las tcnicas
ms utilizadas en el anlisis de muestras, para determinar protenas totales en suero,
colesterol srico, cido rico, glucosa, etc. Tambin se utiliza en el anlisis de distintos
conjuntos de muestras industriales, entre ellas farmacuticas, de alimentos, pinturas, vidrios
y metales. Se aplica de forma sistemtica al anlisis de narcticos y otras drogas.

2. Radiacin electromagntica
Es una forma de energa que se transmite por el espacio a velocidades muy altas. La
radiacin electromagntica puede describirse como una onda que tiene propiedades de
longitud de onda, frecuencia, velocidad y amplitud. Esta teora ondulatoria no explica
satisfactoriamente los procesos asociados con la absorcin y la emisin de energa radiante.
Para entender estos procesos es ms conveniente considerar la radiacin electromagntica
como ondas de partculas o paquetes discretos llamados fotones o cuantos. Estas dos
concepciones de la radiacin, como partcula y como onda, no son excluyentes entre s,
sino ms bien complementarias, ya que la energa de un fotn es directamente proporcional
a su frecuencia. Como puede verse en la siguiente ecuacin:
E=h =h c/=h c

Donde h es la constante de Planck (6.63*10-34 J s). A diferencia de la longitud de onda , el

nmero de onda y la frecuencia son directamente proporcionales a la energa E de un
fotn.
La radiacin electromagntica transporta energa de un punto a otro, esta radiacin se
mueve a la velocidad de la luz (siendo la luz un tipo de radiacin electromagntica).
Las ondas de radiacin electromagntica se componen de crestas y valles
(convencionalmente las primeras hacia arriba y las segundas hacia abajo). La distancia
entre dos crestas o valles se denomina longitud de onda (). La frecuencia de la onda esta
determinada por las veces que ella corta la lnea de base en la unidad de tiempo (casi
siempre medida en segundos), esta frecuencia es tan importante que las propiedades de la
radiacin dependen de ella y est dada en Hertz. La amplitud de onda esta definida por la
distancia que separa el pico de la cresta o valle de la lnea de base (A). La energa que
transporta la onda es proporcional al cuadrado de la amplitud. La unidad de medida para
expresar semejantes distancias tan pequeas es el nanmetro (10 -9 metros).

La luz visible, es decir las ondas electromagnticas para las cuales el ojo humano esta
adaptado, se encuentran entre longitudes de onda entre los 400 nm (violeta) y 700 nm
(rojo). Como lo predijeron las ecuaciones de Maxwell existen longitudes de onda por
encima y por debajo de estos limites. Estas formas de "luz invisible" se han encontrado y
organizado de acuerdo a sus longitudes de onda en el espectro electromagntico.
Espectro Electromagntico
La frecuencia y la longitud de onda de la radiacin electromagntica pueden variar dentro
de muchas rdenes de magnitud. Por comodidad, esta radiacin se divide en regiones
distintas (espectro), segn el tipo de transicin atmica o molecular que produce la

absorcin o la emisin de protones. El espectro electromagntico abarca un intervalo muy

amplio de energas (frecuencias) y, por tanto, de longitudes de onda.

Obsrvese que la regin visible, que percibe el ojo, es solo una mnima parte de todo el
espectro.
Luz Visible. Isaac Newton fue el primero en descomponer la luz visible blanca del Sol en
sus componentes mediante la utilizacin de un prisma. La luz blanca est constituida por la
combinacin de ondas que tienen energas semejantes sin que alguna predomine sobre las
otras. La radiacin visible va desde 384x1012 hasta 769x1012 hz. Las frecuencias mas bajas
de la luz visible (longitud de onda larga) se perciben como rojas y las de mas alta
frecuencia (longitud corta) aparecen violetas.
Muchas fuentes de luz, como el Sol, emiten luz blanca. Esta luz es una mezcla de varios
colores: cuando pasa por un prisma, se divide formando un espectro. El prisma desva
(refracta) ms o menos la luz de diferentes colores. La luz roja es la menos refractada, y la
violeta la ms refractada.

La luz tiene un efecto importante en muchos compuestos qumicos. Las plantas, por
ejemplo, emplean la luz solar para llevar a cabo la fotosntesis, y la exposicin a la luz de
determinados compuestos de plata hace que se oscurezcan en presencia de otros
compuestos qumicos, caracterstica empleada en la fotografa.
Por qu una solucin roja es roja?
Una solucin como la de Fe(SCN)2+ es roja no porque el complejo aada radiacin roja
al disolvente, sino porque absorbe el color verde de la radiacin blanca y transmite el
componente rojo que no ha sido alterado.

La tabla de abajo muestra la relacin entre el color de la luz absorbida y el color

complementario transmitido para algunas regiones del espectro visible:
Intervalo de longitudes de
Color de la luz absorbida
Color complementario
onda
trasmitido
400-435
435-480
480-490
490-500
500-560
560-580
580-595
595-650
650-750

Violeta
Azul
Azul-Verde
Verde-Azul
Verde
Amarillo verdoso
Amarillo
Anaranjado
Rojo

Amarillo-Verdoso
Amarillo
Anaranjado
Rojo
Prpura
Violeta
Azul
Azul verdoso
Verde-Azul

Rayos infrarrojos. La radiacin infrarroja fue descubierta por el astrnomo William

Herschel (1738-1822) en 1800, al medir una zona ms caliente ms all de la zona roja del
espectro visible. La radiacin infrarroja se localiza en el espectro entre 3x10 11 hz. Hasta
aproximadamente los 4x1014 Hz. La banda infrarroja se divide en tres secciones de acuerdo
a su distancia a la zona visible: prxima (780 - 2500 nm), intermedia (2500 - 50000 nm) y
lejana (50000 - 1mm). Toda molcula que tenga un temperatura superior al cero absoluto (273 K) emite rayos infrarrojos y su cantidad esta directamente relacionada con la
temperatura del objeto.
Los rayos infrarrojos se utilizan para obtener imgenes de objetos lejanos ocultos por la
bruma atmosfrica, que dispersa la luz visible pero no la radiacin infrarroja. En
astronoma se utilizan los rayos infrarrojos para estudiar determinadas estrellas y nebulosas.
Dispositivos infrarrojos como los empleados durante la II Guerra Mundial permiten ver
objetos en la oscuridad. Estos instrumentos consisten bsicamente en una lmpara que
emite un haz de rayos infrarrojos, a veces denominados luz negra, y un telescopio que
recibe la radiacin reflejada por el objeto y la convierte en una imagen visible.
Microondas. La regin de las microondas se encuentra entre los 10 9 hasta
aproximadamente 3x1011 Hz (con longitud de onda entre 30 cm a 1 mm). Las microondas
tienen muchas aplicaciones: radio y televisin, radares, meteorologa, comunicaciones va
satlite, medicin de distancias, investigacin de las propiedades de la materia o cocinado
de alimentos.
Los hornos de microondas funcionan excitando las molculas de agua de los alimentos, lo
que hace que vibren y produzcan calor. Las microondas entran a travs de aberturas
practicadas en la parte superior de la cavidad de coccin, donde un agitador las dispersa de
forma homognea por todo el horno. Las microondas no pueden penetrar en un recipiente
de metal para calentar la comida, pero s atraviesan los recipientes no metlicos. La
exposicin a las microondas es peligrosa cuando se producen densidades elevadas de
radiacin. Puede provocar quemaduras, cataratas, daos al sistema nervioso y esterilidad.
Ondas de Radio. Heinrich Hertz (1857-1894), en el ao de 1887, consigui detectar ondas
de radio que tenan una longitud del orden de un metro. La regin de ondas de radio se

extiende desde algunos Hertz hasta 109 Hz con longitudes de onda desde muchos
kilmetros hasta menos de 30 cm.
Las ondas de radio poseen un campo muy amplio de aplicacin, se utilizan no slo en la
radiodifusin, sino tambin en la telegrafa inalmbrica, la transmisin por telfono, la
televisin, el radar, los sistemas de navegacin y la comunicacin espacial, incluida la
comunicacin durante los rescates de emergencia (radio transistores y de onda corta),
emisiones internacionales (satlites) y hornos (microondas). Una onda de radio queda
definida por su longitud de onda (la distancia entre dos crestas consecutivas) o por su
frecuencia (el nmero de crestas que pasan por un punto durante un segundo). Las
longitudes de las ondas de radio van desde 100.000 m hasta 1 mm. Las frecuencias varan
de 3 kilohertzios a 300 gigahertzios.
Rayos X. Los rayos X fueron descubiertos de forma accidental en 1895 por el fsico alemn
Wilhelm Conrad Roentgen mientras estudiaba los rayos catdicos en un tubo de descarga
gaseosa de alto voltaje. A pesar de que el tubo estaba dentro de una caja de cartn negro,
Roentgen vio que una pantalla de platino-cianuro de bario, que casualmente estaba cerca,
emita luz fluorescente siempre que funcionaba el tubo, con una longitud de onda menor a
10 nm a los cuales debido a que no conoca su naturaleza las bautiz como X.
Los rayos X se emplean sobre todo en los campos de la investigacin cientfica, la industria
y la medicina.
El estudio de los rayos X ha desempeado un papel primordial en la fsica terica, sobre
todo en el desarrollo de la mecnica cuntica. Como herramienta de investigacin, los rayos
X han permitido confirmar experimentalmente las teoras cristalogrficas. Utilizando
mtodos de difraccin de rayos X es posible identificar las sustancias cristalinas y
determinar su estructura. Casi todos los conocimientos actuales en este campo se han
obtenido o verificado mediante anlisis con rayos X. Los mtodos de difraccin de rayos X
tambin pueden aplicarse a sustancias pulverizadas que, sin ser cristalinas, presentan alguna
regularidad en su estructura molecular. Mediante estos mtodos es posible identificar
sustancias qumicas y determinar el tamao de partculas ultramicroscpicas. Los
elementos qumicos y sus istopos pueden identificarse mediante espectroscopia de rayos
X, que determina las longitudes de onda de sus espectros de lneas caractersticos. Varios
elementos fueron descubiertos mediante el anlisis de espectros de rayos X.
Algunas aplicaciones recientes de los rayos X en la investigacin van adquiriendo cada vez
ms importancia. La microradiografa, por ejemplo, produce imgenes de alta resolucin
que pueden ampliarse considerablemente. Dos radiografas pueden combinarse en un
proyector para producir una imagen tridimensional llamada estreoradiograma.
Los rayos X han supuesto una herramienta vital en el diagnstico y tratamiento de las
enfermedades. Producidos mediante el bombardeo de un objetivo de volframio con
electrones de alta velocidad, los rayos X son absorbidos por los huesos y atraviesan los
tejidos blandos de los rganos internos. En una placa radiogrfica los huesos aparecen
blancos y los tejidos blandos grises. Mientras que los rayos X para diagnsticos
odontolgicos y mdicos son de baja intensidad, los rayos X de alta intensidad son capaces

de destruir los tejidos y se utilizan en el tratamiento del cncer. Las clulas cancerosas
caracterizadas por dividirse con mucha rapidez son especialmente vulnerables a los rayos
X.

Los rayos X tambin se emplean en la industria como herramienta de investigacin y para

realizar numerosos procesos de prueba. Son muy tiles para examinar objetos, por ejemplo
piezas metlicas, sin destruirlos.

Imagen de rayos X en la que se muestra una grieta en un intercambiador de calor de una

planta qumica. Esta tcnica no destructiva es una herramienta valiosa para poner de
manifiesto fisuras, grietas o fallos en los aparatos.
Radiacin Ultravioleta. Sus longitudes de onda se extienden entre 10 y 400 nm ms cortas
que las de la luz visible. La radiacin ultravioleta puede producirse artificialmente mediante
lmparas de arco; la de origen natural proviene principalmente del Sol.
La radiacin ultravioleta puede ser daina para los seres vivos, sobre todo cuando su
longitud de onda es baja. La radiacin ultravioleta con longitudes de onda inferiores a 300
nm se emplea para esterilizar superficies porque mata a las bacterias y los virus. En los
seres humanos, la exposicin a radiacin ultravioleta de longitudes de onda inferiores a los
310 nm puede producir quemaduras; una exposicin prolongada durante varios aos puede
provocar cncer de piel.
La atmsfera terrestre protege a los organismos vivos de la radiacin ultravioleta del Sol. Si
toda la radiacin ultravioleta procedente del Sol llegara a la superficie de la Tierra, acabara
probablemente con la mayor parte de la vida en el planeta. Afortunadamente, la capa de
ozono de la atmsfera absorbe casi toda la radiacin ultravioleta de baja longitud de onda y
gran parte de la de alta longitud de onda. Sin embargo, la radiacin ultravioleta no slo

tiene efectos perniciosos; gran parte de la vitamina D que las personas y los animales
necesitan para mantenerse sanos se produce cuando la piel es irradiada por rayos
ultravioleta.
Rayos Gamma. Se localizan en la parte del espectro que tiene las longitudes de onda mas
pequeas entre 10 y 0.01 nm. Los rayos gamma (fotones de alta energa) son emitidos por
el ncleo de un tomo tras sufrir una desintegracin radiactiva. La energa del rayo gamma
(generalmente similar a la de los rayos X de alta energa) corresponde a la diferencia de
energas entre el ncleo original y los productos de la desintegracin. Cada istopo
radiactivo emite rayos gamma con una energa caracterstica.
Los espectros de rayos gamma son tiles para el anlisis por activacin de neutrones. En
esta tcnica, se irradia una muestra con neutrones en un reactor nuclear; la muestra se
vuelve radiactiva y emite rayos gamma. Los espectros de estos rayos gamma sirven para
identificar cantidades minsculas de determinados elementos qumicos en la muestra. Esta
tcnica se emplea en investigaciones policiales, junto con formas ms convencionales de
espectroscopia.

3. Espectroscopia de Absorcin molecular. Histricamente, los primeros estudios

espectroscpicos se hicieron caracterizando la emisin de luz visible procedente del sol,
llamas, o sales aadidas a las llamas. Sin embargo, la Espectroscopia de Absorcin, es la
tcnica ms importante de las que se utiliza en la espectroscopia analtica actual. La
determinacin de la concentracin de analito gracias a su absorcin de la radiacin visible o
ultravioleta es uno de los mtodos analticos cuantitativos ms utilizados. Una de las
razones de su popularidad es que muchos compuestos orgnicos e inorgnicos poseen
fuertes bandas de absorcin en la regin UV/Vis del espectro electromagntico. Adems, en
muchas ocasiones, los analitos que no absorben radiacin UV/Vis, o que slo la absorben
en escasa medida, pueden unirse qumicamente a una especie que s lo haga.
3.1. Proceso de Absorcin de la Radiacin
En la espectroscopia de absorcin, un haz de radiacin electromagntica pasa a travs de la
muestra. Gran parte de esta radiacin se trasmite sin que pierda intensidad. Sin embargo
con determinadas frecuencias, la intensidad de la radiacin sufre una atenuacin, proceso al
que se denomina absorcin. Para que el analito absorba radiacin debe cumplir dos
requisitos generales. El primero es que debe haber un mecanismo que permita la interaccin
entre el campo elctrico o magntico de radiacin y el analito. En el caso de la radiacin
ultravioleta y visible, esta interaccin afecta a la energa electrnica de los electrones de

valencia, al sufrir un cambio en su configuracin. En la absorbancia de la radiacin

infrarroja lo que se produce es una alteracin de la energa vibratoria de un enlace qumico.
El segundo requisito es que la energa de radiacin electromagntica debe ser exactamente
igual a la diferencia de energa E, entre dos de los estados de energa cuantizados del
analito.
De este modo cuando exista el paso de un haz de luz a travs de un medio ira acompaado
de un proceso de absorcin de la radiacin electromagntica. Cuando un tomo, ion o
molcula absorbe un fotn la energa aadida produce una alteracin de estado, se dice
entonces que la especie esta excitada. La excitacin puede implicar uno de los siguientes
procesos:
1. Transicin de un electrn a un nivel mayor de energa.
2. Cambio en el modo de vibracin molecular
3. Cambio en el modo de rotacin.
Las energas requeridas para estas transiciones varan considerablemente. En general, la
promocin de e- a niveles superiores, requiere mayores energas de radiacin que las
necesarias para provocar cambios vibracionales. Anlogamente, las alteraciones en el modo
rotacional requieren las energas ms bajas de todas. Por ejemplo: Las regiones del espectro
cuyas energas son capaces de producir cambios rotacionales son microondas e infrarrojo
lejano, los cambios vibracionales (infrarrojo cercano y visible) y los cambios de niveles de
los electrones (visible, UV y X).
3.2. Descripcin de la Absorcin de la Radiacin
La absorcin de la radiacin por un sistema puede ser descrita por medio de una
representacin de absorcin como funcin de la longitud de onda, tal grafica se conoce
como espectro de absorcin, el cual es nico para una especie dada, como consecuencia los
espectros de absorcin son frecuentemente utilizados para fines de identificacin
cualitativa, particularmente para la regin infrarroja.
La atenuacin de la radiacin depende de la concentracin de las molculas que la absorben
y de la distancia que recorre el rayo en el medio absorbente. Como ya se ha dicho, cuando
la luz atraviesa una solucin de analito, la intensidad de la radiacin disminuye como
consecuencia de la excitacin del analito. Cuanto mayor sea la trayectoria del rayo en la
solucin de analito de una concentracin dada, habr ms especies que absorban la
radiacin y la atenuacin ser mayor.
La figura muestra un diagrama de la atenuacin que experimenta un haz paralelo de
radiacin monocromtica cuando pasa por una solucin absorbente de espesor b en cm y c
en moles por litro. Debido a las interacciones que suceden entre los fotones y las partculas
absorbentes la energa radiante del rayo P0 hasta P

b
FUENTE P0

DETECTOR

Solucin
Absorbente de
concentracin c
La Transmitancia T de la solucin, es la fraccin de radiacin incidente que trasmite la
solucin.
P
T
P0
La transmitancia se expresa a menudo como porcentaje:

%T

P
*100
P0

La absorbancia A de una solucin esta relacionada con la la transmitancia de forma

logartmica:
P
A Lg 0 LgT
P
La mayor parte de los trabajos analticos se realizan con soluciones de manera que vamos a
desarrollar la relacin que existe entre la concentracin de la solucin y su capacidad de
absorber radiacin.

4. Medida de la Absorcin: Transmitancia y Absorbancia

La transmitancia y la absorbancia se miden en un instrumento llamado espectrofotmetro,
la solucin del analito se debe contener en algn recipiente transparente, tubo o celda.

Perdidas por
reflexin
en las interfases
Perdidas por
dispersin
en la solucin
Rayo
em ergente,
Pe

Rayo incidente,
Pi

Perdidas por
reflexin
en las interfases

Como se ve en la representacin, ocurre reflexin en las interfases: aire-pared, tanto como

en la pared-solucin. La atenuacin del haz resultante es sustancial. Adems, la atenuacin
de un haz puede ocurrir por dispersin de las molculas grandes y a veces por absorcin de
las paredes del recipiente. Para compensar estos efectos, la potencia del haz transmitido por
la solucin del analito es comparada comnmente con la potencia del haz transmitido por
una celda idntica que contiene solamente solvente. Una absorbancia experimental que se
aproxima mucho a la absorbancia verdadera se obtiene con la ecuacin.

A exp erimental A real

A Lg

P0
P
Lg dicolvente
P
Psolucin

Los espectrofotmetros, estn a menudo, equipados con un dispositivo que tiene una escala
lineal que se extiende de 0 a 100%. De manera de hacer tal instrumento de lectura directa
en porcentaje de transmitancia, se efectan dos ajustes preliminares, llamados 0%T y
100%T. El ajuste del 0%T se lleva a cabo mediante un cierre mecnico del detector. El
ajuste de 100%T se hace con el cierre abierto y el solvente en el camino de la luz.
Normalmente el solvente est contenido en una celda que es casi idntica a las que
contienen las muestras. Cuando la celda del solvente es reemplazada por la celda que
contiene la muestra, la escala da la transmitancia porcentual.
Los instrumentos actuales poseen un sistema electrnico que realiza la operacin
matemtica y da la respuesta directamente absorbancia. Tambin hay que hacer una
calibracin previa con el solvente o blanco.

5. Aspectos Cuantitativos de las Mediciones de Absorcin:

Deduccin de la Ley de Beer
Considere una celda con materia absorbente (slido, lquido o gas). Un haz de radiacin
monocromtica paralelo con intensidad P0 llega a la celda perpendicular a la superficie;
luego pasa a travs de la longitud b del material, que contiene n partculas absorbentes
(tomos, iones o molculas), la intensidad del haz disminuye a P como resultado de la
absorcin.

b
Po

Considere ahora una seccin transversal de la celda que tiene un rea S (X x Y) y un

espesor infinitesimal dx.

P
o

Px

S
dx
b

Donde:
Po: Haz monocromtico al bloque
b: longitud del bloque
: numero de tomos, iones o molculas
absorbentes
P: haz monocromtico que sale del bloque
S: rea de una seccin transversal
dx: espesor infinitesimal de la seccin
transversal
d: numero de partculas absorbentes en
S
dS: suma de reas de captura
dS/S: probabilidad de captura de un fotn
Px: haz monocromtico que entra a S
dPx: cantidad de radiacin absorbida
dPx/Px: fraccin absorbida en S

Dentro de esta seccin hay dn partculas absorbentes; asociada a cada partcula podemos
imaginar una superficie en que ocurrir la captura del fotn. Esto es, si un fotn alcanza una
de esas reas por casualidad, ocurrir inmediatamente la absorcin. El rea total de esas
superficies de captura dentro de la seccin se designa ds; la relacin del rea de captura al
rea total es ds/S. En un promedio estadstico, esta relacin representa la probabilidad para
la captura de fotones dentro de la seccin. La intensidad del haz que entra en la seccin, Px

es proporcional al nmero de fotones por cm2 y por segundo, y dPx representa la cantidad
removida por segundo dentro de la seccin, la fraccin absorbida es entonces -dPx/Px y esta
relacin tambin es la probabilidad promedio por captura. El trmino tiene signo negativo
para indicar que la intensidad del haz disminuye.
Recordemos que ds es la suma de las reas de captura para cada partcula dentro de la
seccin; puede ser por eso proporcional al nmero de partculas ds = adn; siendo dn el
nmero de partculas dentro de la seccin y a una constante de proporcionalidad, que se
puede llamar seccin transversal de captura.
Considerando las ecuaciones

dPx dS
dS dn dS= adn

Px
S

Sustituyendo dS queda
P

dPx a
dPx adn
a
P
Integrando de 0 a n
dn resolviendo Ln Px P n

0
Px
S
S
Px
s0
P0

( LnP LnP0 )

a
P a
n Entonces Ln n
S
P0 S

Luego de convertir los logaritmos a base 10 e invirtiendo la fraccin para cambiar de signo,
se obtiene:
P
a n
Lg 0
P 2,303 S
Siendo n el nmero total de partculas dentro del bloque. La seccin transversal S se puede
expresar en trminos del volumen del bloque en cm3 y su longitud b en cm, entonces S=V/b
Sustituyendo en la ecuacin anterior, da:

Lg

P0
a bn

P 2,303 V

Se nota que n/V tienes las unidades de concentracin (esto es nmero de partculas por
cm3), se puede convertir a moles por litro.
El nmero de moles es

n particulas
6,02 *10 23 particulas / mol

y c expresado en mol/L

n
1000cm3 / L
c
mol *
602 *10 23
V (cm3 )
Combinando:

P0 6,02 *10 23 abc

Lg

P
2,303 *1000
Finalmente, las constantes de esta ecuacin se pueden reunir en una nica constante:
Lg

P0
bc A
P

Absortividad y Absortividad Molar

La absorbancia es directamente proporcional a la longitud del camino b a travs de la
solucin y la concentracin c de la especie absorbente. Estas relaciones se dan como:
A a.b.c

Siendo a una constante de proporcionalidad llamada absortividad. La magnitud de

depender de las unidades empleadas para b y c. A menudo b es dada en trminos de cm y c
en gramos por litro, entonces la absortividad tiene unidades de Lg-1cm-1. Cuando la
concentracin se expresa en moles por litro y la longitud de la celda en centmetros, la
absortividad se llama absortividad molar, se designa como y tiene unidades de Lmol-1cm1
, entonces la absorbancia es:
A .b.c

La absortividad y la absortividad molar proporcionan, en efecto, la probabilidad de que el

analito absorba un fotn de una energa determinada. En consecuencia, los valores tanto de
a como de dependen de la longitud de onda de la radiacin electromagntica.
6. Limitaciones de la Ley de Beer
Segn la Ley de Beer, la curva de calibracin de la absorbancia frente a la concentracin de
analito en una serie de disoluciones patrn debe ser una lnea recta con una intercepcin de
0 y una pendiente de ab o b. Sin embargo, en muchos casos, las curvas de calibracin no
son lineales. Las desviaciones de la linealidad se dividen en tres categoras: fundamentales
o propias, qumicas e instrumentales.

Limitaciones fundamentales (Reales) de la Ley de Beer: La ley de Beer es exitosa en

describir el comportamiento de absorcin de soluciones diluidas solamente; a
concentraciones altas (generalmente mayores que 0,01 mol/L), la distancia promedio entre
las especies responsables de la absorcin est disminuida hasta el punto que cada una afecta
la distribucin de cargas de sus vecinas. Esta interaccin, a su vez, puede alterar la
habilidad de las especies para absorber en una longitud de onda de radiacin. Debido a que
la extensin de la interaccin depende de la concentracin, la ocurrencia de este fenmeno
provoca desviaciones de la relacin lineal entre absorbancia y concentracin. Un efecto
similar se encuentra a veces en soluciones que contienen altas concentraciones de otras
especies, particularmente electrolitos. La proximidad de iones a la especie absorbente altera
la absortividad molar de la ltima por atracciones electrostticas, este efecto se disminuye
por dilucin.
Se encuentran algunas excepciones entre ciertos iones o molculas orgnicas grandes, que
presentan interacciones significativas a concentraciones debajo de 0,01 mol/L.
Desviaciones de la ley de Beer tambin surgen porque es dependiente del ndice de
refraccin de la solucin; entonces, si cambios de concentracin provocan alteraciones en
el ndice de refraccin de la solucin, se observan desviaciones de la ley.
Limitaciones Qumicas a la Ley de Beer: Cuando las especies absorbentes participan en
una reaccin de equilibrio, la Ley de Beer puede sufrir desviaciones qumicas, es decir,
surgen cuando un analito se disocia, se asocia, o reacciona con el solvente para producir un
producto teniendo un espectro de absorcin diferente del analito. La magnitud de estas
desviaciones se puede predecir conociendo las absortividades molares de las especies
absorbentes y las constantes de equilibrio de las reacciones. Desafortunadamente, casi
nunca se percibe que estos procesos estn afectando al analito y, por tanto, es prcticamente
imposible compensarlos. Los equilibrios tpicos que dan origen a este efecto incluyen a los
equilibrios entre monmeros y dmeros, los que forman complejos metlicos con ms de un
tipo de complejo, los equilibrios cido-base y los que llevan a asociaciones del disolvente y
del analito. Por ejemplo CrO42- en funcin del pH va a absorber diferente, debido al
equilibrio:
H2O + Cr2O72- 2CrO42- + 2H+
Limitaciones Instrumentales a la Ley de Beer: Existen dos limitaciones instrumentales
principales a la Ley de Beer. La primera es que esta ley slo es estrictamente vlida para la
radiacin monocromtica pura; es decir para la radiacin formada por una sola longitud de
onda. Sin embargo, incluso por el mejor selector de longitud de onda pasa una radiacin
cuya amplitud de banda efectiva es pequea pero finita, es decir. el uso de radiacin que
est restringida a una longitud de onda simple es raro porque los elementos que aslan
porciones de la salida de una fuente continua producen una banda ms o menos simtrica
de longitudes de onda alrededor de la deseada. La utilizacin de radiacin policromtica
siempre produce una desviacin negativa de la ley de Beer, aunque puede minimizarse
haciendo que el valor de permanezca esencialmente constante a lo largo de la gama de
longitudes de onda que pasan a travs del selector. Por ello, y tal como se muestra en la
figura, es preferible medir la absorbancia en un mximo de absorcin amplio.

Como puede verse en el espectro de absorcin (grafico de la izquierda), la absortividad del

analito es casi constante en la banda A de la fuente de radiacin, siguiendo una relacin
lineal (grafico de la derecha). Por el contrario, la banda B coincide con una regin del
espectro en la que cambia la absortividad del analito, con una marcada desviacin de la ley
de Beer.
La derivacin siguiente muestra el efecto de la radiacin policromtica de la ley de Beer.
Considere un haz que consiste de dos longitudes de onda y . Suponiendo que la ley de
Beer se aplica estrictamente para cada una de estas individuales, se puede escribir para

A' Lg

P' 0
' bc
P'

P' 0
10 'bc
P'

P' P'010 'bc

Igualmente para

A' ' Lg

P' ' 0
P' ' 0
10 ''bc
' ' bc o
P' '
P' '

P' ' P' '010 ''bc

Cuando una medida de absorbancia se realiza con una radiacin compuesta por ambas
longitudes de onda, la intensidad del haz emergente de la solucin viene dada por (P + P)
y la del haz procedente del solvente por (P0 + P0). Por lo tanto, la absorbancia medida Am
de la muestra es:

Am Lg

P' 0 P' ' 0

P' 0 P' ' 0
Lg
Lg ( P'0 P' '0 ) Lg ( P'0 10 'bc P' '0 10 ''bc )
'bc
''bc
P' P' '
P'0 10 P' '0 10

De manera que la absorbancia medida es un rango (error de medicin instrumental). Es

conveniente hacer las mediciones en un mximo del espectro, para tener mayor sensibilidad
y menor error.

La segunda contribucin a las desviaciones instrumentales de la ley de Beer es la radiacin

difusa o parsita, debida a las imperfecciones del selector de longitud de onda, que
permite que luces extraas se cuelen en el instrumento, proveniente a menudo de la
dispersin y reflexin de las superficies de las rejillas, lentes o espejos, filtros y ventanas.
La radiacin difusa supone una contribucin adicional, Pdif , a la potencia radiante que llega
al detector, as:
P0 Pdif
A Lg
PT Pdif
Con concentraciones pequeas de analito, Pdif es significativamente menor que P0 y PT, por
lo que la radiacin difusa no afecta a la absorbancia. Sin embargo, cuando las
concentraciones de analito son mayores, Pdif ya no es significativamente menor que PT y la
absorbancia es inferior a la prevista. El resultado es una desviacin negativa con respecto a
la Ley de Beer.
7. Aplicaciones de la Ley de Beer
La ley de Beer se puede utilizar de distintas maneras. Pueden calcularse las absortividades
molares de las especies si se conocen sus concentraciones. Tambin se puede utilizar el
valor de la absorbancia medida para conocer la concentracin si es que se conoce la
absortividad y la longitud de la trayectoria de la radiacin. Sin embargo, la absortividad es
una funcin de diversas variables, tales como el disolvente, la composicin de la solucin y
la temperatura, de ah que los valores de absortividad que se encuentran en la literatura
varen con las condiciones en las que se hace la medicin. Por esta razn, es aconsejable no
depender nunca de los valores dados en la literatura para hacer un anlisis cuantitativo. Para
conocer la absortividad en las condiciones del anlisis, se preparan varias soluciones patrn
del analito en el mismo disolvente y a una misma temperatura. Con las soluciones patrn se
construye una curva de calibracin de absorbancia frente a la concentracin, o tambin
puede obtenerse una ecuacin de regresin lineal.
La Ley de Beer tambin se aplica a una solucin que contiene ms de una clase de
sustancia absorbente. Es posible determinar la concentracin de cada uno de los
componentes de una mezcla aun si hubiera una marcada sobre posicin de sus espectros.
Siempre que no haya interaccin entre las varias especies, la absorbancia total para un
sistema multicomponente est dada por:
A A1 A2 A3 ..... An 1bc1 2 bc2 3bc3 .... n bcn

Indicando los subndices 1,2, .. n, las especies absorbentes.

Generalizando, la absorbancia de una mezcla de n componentes, Am, viene dada por:
n

i 1

i 1

Am Ai i bci

A la longitud de onda en donde dos o ms especies en equilibrio una con otra tienen el
mismo valor de se denomina Punto Isobstico, en la figura anterior puede apreciarse
donde convergen la curva de la especie I (azul) y de la especie II (roja).

Ejemplo:
1. La

constante

de

equilibrio del par cido / base conjugado:

HIn H 2 O H 3 O In es 1.42E-5. A partir de la siguiente informacin:
Absortividad Molar Absortividad Molar
Especie
a 430 nm
a 570 nm
HIn (en 0.1 mol/L HCl)
6.30E+2
7.12E+3
In- (en 0.1 mol/L NaOH)
2.06E+4
9.60E+3
a. Calcular la absorbancia a 430 nm y 570 nm de las soluciones de indicador
con las siguientes concentraciones: 2.00E-5 mol/L

Se tiene que:

A430 HIn ( 430) bc HIn In ( 430) bc In

A570 HIn (570) bc HIn In (570) bc In

La expresin de la constante de equilibrio es:

H O In
K

HIn

El balance de masas necesita que

ctotal HIn In

Supngase que, para fines prcticos, el indicador est enteramente en su forma cida, en
una solucin 0.1 mol/L de HCl; es decir, ctotal=HIn. Asimismo, en una solucin 0.1mol/L
de NaOH, el indicador est completamente en forma de la base conjugada, y ctotal=In-.
Aunque cada especie por separado obedece a la ley de Beer, la absorbancia de una solucin
amortiguada del indicador frente a la concentracin exhibe una relacin no lineal. Este
comportamiento es debido a un cambio en la posicin de equilibrio del indicador cuando
vara su concentracin. Sin embargo, si se conocen las concentraciones de equilibrio de las
formas HIn e In-, se pueden calcular las absorbancias observadas. As para una solucin con
ctotal=2.00E-5 mol/L y celdas de 1.00 cm,

H O In Por lo tanto, HIn 2.00 *10

In

Sustituyendo en la constante de equilibrio:

K HIn

In

1.42 *10

2.00 *10 5 In

Despejando y resolviendo se obtiene que:

In 1.12 *10

Entonces HIn 2.00 *10 5 1.12 *10 5 0.88 *10 5

Sustituyendo los valores de 1.00 cm para las celdas y los valores de absortividades se
encuentra que
A430 (6.30 *10 2 )(1.00)(0.88 *10 5 ) (2.06 *10 4 )(1.00)(1.12 *10 5 ) 0.236
A570 (7.12 *103 )(1.00)(0.88 *10 5 ) (9.60 *10 2 )(1.00)(1.12 *10 5 ) 0.073

Propuesto:
2. La

constante

de

equilibrio del par cido / base conjugado:

HIn H 2 O H 3 O In es 8.00E-5. A partir de la siguiente informacin:
Absortividad Molar Absortividad Molar
Especie
a 430 nm
a 600 nm
HIn
8.04E+3
1.23E+3
In0.775E+3
6.96E+3

a. Calcular la absorbancia a 430 nm y 600 nm de las soluciones de indicador

con las siguientes concentraciones: 3.00E-4 mol/L, 2.00E-4 mol/L, 1.00E-4
mol/L, 0.50E-4 mol/L y 0.25E-4 mol/L
b. Representar grficamente la absorbancia como funcin del indicador.

8. Curva de Calibracin
Denominamos espectro de una sustancia a la representacin de absorbancia (A) en funcin
de longitud de onda (), este grfico presenta ondulaciones con mximos y mnimos.
Para hacer las determinaciones cuantitativas se elige, en general, la longitud de onda
correspondiente a un mximo, pues el error de medicin es mnimo y la sensibilidad
mxima. Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer, se debe realizar la curva de
calibracin; absorbancia (A) en funcin de concentracin (c), para lo cual se preparan
soluciones de la sustancia de concentraciones conocidas y se mide la absorbancia a la
longitud de onda elegida. Si es vlida la ley de Beer, para esa sustancia a esas
concentraciones, la relacin debe ser una recta, que pase por el origen de los ejes
cartesianos; a menudo se observan desviaciones debidas a diversos factores.

Bibliografa
Qumica Analtica Cuantitativa, Day and Underwood.
Qumica Analtica, Skoog and West.
Anlisis Instrumental, Douglas R. Skoog and Donald M. West.
Qumica Analtica Moderna, David Harvey
Biblioteca de Consulta Microsoft Encarta 2005.