Biologa Celular y Molecular

1 Unidad Acadmica Departamento de Histologia, Biologa Celular,

Embriologa y Gentica
Taller 4
1Los pacientes con xerodema pigmentoso sufren una incidencia altsima de cncer de
piel aunque no se ha encontrado la misma incidencia en cnceres de rganos internos
(por ej. cncer de colon). Qu sugiere esto acerca de los daos del ADN responsable de
la mayora de los cnceres internos?
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2- EL CILIO PRIMARIO: CENSOR DEL MEDIO EXTRACELULAR Y
CENTRO DE VAS DE SEALIZACIN
Introduccin:
Nuestra comprensin de la funcin del cilio primario ha cambiado sustancialmente en
la ltima dcada. De ser una estructura ignorada y considerada vestigial ha pasado a ser
una organela de importancia creciente por la informacin que brinda a la clula sobre
medio extracelular y como receptor de seales. Hoy contamos con evidencias firmes
sobre su papel en la organognesis y tambin en la homeostasis de rganos del adulto.
A diferencia de los cilios que se encuentran en el epitelio de la va respiratoria y en las
trompas de Falopio, el cilio primario es nico e inmvil y est presente en casi todas las
clulas de los vertebrados. Por sus mltiples funciones receptoras ha merecido el mote
de antena de la clula.
Hemos aprendido mucho de su funcin a partir de estudiar las patologas producidas
cuando est alterado o ausente. Entre otras, est involucrado en enfermedades como la
poliquistosis renal, la polidactilia que es presencia de dedos extras en manos y pies, en
algunos tipos de sordera y ceguera y en un grupo de las displasias esquelticas
conocidas como Costillas Cortas-Polidactilia. Otros sndromes genticos producidos por
el mal funcionamiento del cilio primario son el sndrome de Joubert, Oro-Facio-Digital
tipo I, Sensembrener, Meckel-Gruber y Bardet Biedl. A todas estas patologas se las ha
englobado bajo nombre de ciliopatas.
La estructura del cilio primario
La estructura central del cilio primario es un axonema de nueve pares de microtbulos
que estn anclados en un cuerpo basal formado por un centrolo y constituido por nueve
microtbulos triples. El cuerpo basal, mediante apndices laterales, se pone en contacto
con los microtbulos citoplsmicos.
A diferencia de los cilios mviles o secundarios, el cilio primario carece del par de
central de microtbulos por lo cual se dice que su estructura es 9+0. Tampoco posee
brazos de dinena. Mide desde pocas m hasta 100 m dependiendo del tipo celular y
protruye hacia el espacio extracelular cubierto por la membrana plasmtica. En cada
ciclo celular, el cilio primario aparece al comienzo de G1 y se desensambla antes de
cada mitosis.

El crecimiento del axonema se lleva a cabo mediante un proceso de transporte

intraflegelar (IFT) y este determina el largo final del cilio. Este transporte lleva una
carga diversa hacia el extremo del cilio y tambin en sentido retrgrado mediante
complejos IFT unido a las protenas motoras quinesina 2 y la dinena citoplasmtica 1B.
Circundante al cilio existe una zona de delimitada del citoplasma que funciona como
barrera selectiva para el trfico de protenas llamada zona de transicin. Un esquema
con la estructura del cilio primario se muestra en la figura 1.

Cilio primario
Axonema de
microtblos
Centrosoma
9+0

Membrana
plasmtica
Ncleo
Clula

Cuerpo
basal

Centrolo
Material
pericentriolar

Figura 1: Esquema de la estructura del cilio primario.

El axonema del cilio primario tiene 9 pares de microtbulos, cerece del par central, y est anclado en el cuerpo basal
y tiene relacin con el centrosoma. Los apndices laterales lo conectan con los microtbulos citoplsmicos. La
membrana que cubre al cilio es muy especializada y est en continuidad con la membrana plasmtica.

Las funciones del cilio primario

Una de las principales funciones del cilio primario es censar el ambiente extracelular.
Como ejemplo de organela sensorial las clulas ciliadas de la retina y del bulbo olfatorio
reciben y transmiten el estmulo de la luz y de los olores, respectivamente. Mas
recientemente se comprob que permite censar qumicos, la osmolaridad, la temperatura
y la gravedad (Satir, Pedersen, y Christensen 2010). Tambin participa en la migracin y
colocacin de interneuronas corticales y en la formacin de algunos tipos de memoria
(Einstein et al. 2010).
La membrana que engloba al cilio primario es altamente especializada y posee
receptores para Shh (Sonic hedghog), Pdgf (Factor de Crecimiento Derivado de
Plaquetas), serotonina y somatostatina (SST3). Esto hace que el cilio primario acte
como un centro de sealizacin para molculas que se encuentran en el medio
extracelular. En el cuerpo basal del cilio se encuentran protenas especializadas que
median esa informacin como Smoothened (Smo), Patched (Pth), NEK1 y varios
complejos de protenas asociados a microtbulos que forman familias como Nphp

(nefronoptisis), Invs (inversina) y BBS (sndrome de Bardet Biedl). El complejo BBS,

por ejemplo, se encarga de asegurar la colocacin de receptores de somatostatina en los
complejos de trfico intraflagelar para ser subidos a la membrana del cilio.
En definitiva, y como resultado de todas las seales que permite transducir, el cilio
primario est involucrado en la regulacin de procesos como el ciclo celular, la
organizacin del citoesqueleto y el transporte intraflagelar.
Los procesos ciliares y las enfermedades humanas
Una propiedad bien conocida del cilio primario es la de ser un mecanoreceptor. En las
clulas epiteliales del rin censa el flujo urinario y mediante la inclinacin en el
sentido del flujo induce un proceso que controla del ciclo celular. En los tbulos de la
nefrona, la deflexin ciliar es captada por dos protenas de membrana, Pc1 (Policistina
1) y Pc2 (Policistina 2), que inducen el influjo de calcio hacia el interior de la clula lo
que favorece la regulacin de la proliferacin celular. En ausencia de flujo, o por la falta
del cilio mismo, se reduce este influjo produciendo la degradacin de Pc1 y la
liberacin de dos protenas con las que forma un complejo que son STAT6 y P100. Esta
protenas se translocan al ncleo y activan la transcripcin, Se estabiliza Invs, y la catenina activa la va de Wnt cannico que conduce a la desregulacin del ciclo celular
y la formacin de los quistes tubulares. En este proceso contribuye tambin Wnt nocannico afectando la polaridad celular y la orientacin del huso mittico. Esta va
tambin puede ser activada por la ausencia de Pc1 y Pc2. La Poliquistosis Renal
Autosmica Recesiva (ARPKD) es una enfermedad por formacin de quistes tubulares
que comprometen todo el rin en forma bilateral. Los riones se ven agrandados de
tamao y no son funcionantes por lo que resulta en una patologa letal del desarrollo
renal.
Otra propiedad del cilio primario es la de ser un rea especializada de la membrana
plasmtica que concentra receptores moleculares. Una va de sealizacin bien conocida
mediada por el cilio es la de la familia Hedgehog. Sonic es uno de los ligandos de esa
familia en los mamferos y la sealizacin se realiza por medio de la secrecin de
factores de crecimiento. Hoy sabemos que Sonic es crtico durante el desarrollo
embrionario y participa en la neurognesis, la formacin de los miembros y de los
dedos. En el adulto est asociado al cncer. El complejo receptor de Sonic hedghog
(Shh) est formado por dos protenas de membrana: Smoothened (Smo) y Patched (Pth).
En ausencia de Shh, Ptc reprime a Smo, pero cuando Sonic est presente se liga a Ptc y
Smo se libera de la inhibicin y activa la transcripcin de los genes blancos de esa va.
Lo que ocurre exactamente en el cilio est an siendo dilucidado. Hay evidencias de que
en ausencia de Shh, Pth ocupa la membrana del cilio desalojando a Smo de esa
estructura. Entonces, y en razn de que Pth funciona como receptor de Sonic, su
presencia hace que el cilio primario sea receptculo de cualquier secrecin de Shh en la
vecindad. Cuando Shh se une a Ptc, Ptc abandona la membrana y esto permite en
cambio que Smo se acumule all y ejerza su accin. Se presume que interacta con la
protenas Gli para promover activadores transcripcionales que van al ncleo. De esto se
puede deducir que cualquier mutacin que altere el trfico ciliar tambin va a producir
una disrupcin en la sealizacin de Sonic hedghog. Sabemos Sonic est involucrado en
mltiples malformaciones especialmente las del SNC, fisuras faciales, algunos defectos
cardacos y en la aparicin de la polidactilia.

Otro aspecto del desarrollo en el que est involucrado el cilio primario es en la

esqueletognesis. Como sabemos, el esqueleto seo ejerce una fuerza antigravitacional
fundamental que permite la locomocin y proteje rganos nobles pero sus alteraciones
pueden causar discapacidad y a veces son incompatibles con la vida. Existe un grupo de
displasias esquelticas llamadas Costillas Cortas-Polidactilia que est causado por
mutaciones en la maquinaria ciliar principalmente del transporte intraflagelar. Otras son
producidas por protenas que se encuentran en el cuerpo basal y actan como segundos
mensajeros. El transporte intraflagelar depende de los complejos IFT A y B y de las
protenas motoras quinesina 2 y la dinena citoplsmica 1B que se encargan del
transporte antergrado y retrgrado de cargas como los receptores de membrana que son
subidos al cilio para ser expuestos a sus ligandos. Ya se han identificado alrededor de
10 mutaciones de protenas ciliares y las ms frecuentes son de la dinena citoplsmica
1B (DYNC1B) y las protenas del complejo IFT (IFT 80), as como tambin protenas
del cuerpo basal como NEK1, EVC1 y EVC 2. Este grupo de displasias comprende seis
entidades con un patrn de herencia autosmico recesivo de las cuales cuatro tienen
polidactilia y son invariablemente letales al nacimiento.

Pdfgr

IFT
SST3 r

Ptc
Pc1
Pc2

BBS
NEK1
EVC2

Regulacin del
ciclo celular

Shh

Smo
Gli

Nhpt
Invs
Smo
Dvl1
catenina

Va sealizacin
Wnt

Va sealizacin
Shh

Figura 2: Esquema simplificado del funcionamiento del cilio primario.

En la membrana se hallan protenas como Pc1, Pc2 y tambin otras que actan de receptores de seales: Pdfgr, SST 3r
Ptc y Smo. Los complejos IFT y las protenas motoras quinesina 2 y dinena citoplsmica 1B son los responsables del
transporte intraflagelar. Las protenas del cuerpo basal actan como molculas transmisoras que participan en las
diferentes vas de sealizacin (algunas participan en mas de una va).

Las ciliopatas y sus rasgos fenotpicos

En general se puede decir que las ciliopatas producen una constelacin de rasgos
fenotpicos por la multiplicidad de roles que cumple el cilio primario. La mayora de
estos los rasgos se superponen en las distintas entidades. Es decir, un mismo defecto
ciliar puede tener mltiples expresiones y una misma enfermedad puede estar causada

por diferentes defectos. Un ejemplo son las displasias esquelticas nombradas

anteriormente que se acompaan muy frecuentemente de poliquistosis renal, polidactilia
y defectos cardacos. En los sndromes genticos pasa lo mismo. Adems de los rasgos
cardinales que identifican a cada uno, se encontran asociaciones con obesidad, ceguera,
polidactilia, retardo mental, malformaciones cerebrales, anomalas de miembros y
poliquistosis renal.
Por ltimo, el campo del conocimiento de las ciliopatas est en plena expansin y nos
permite ir comprendiendo algunos mecanismos de respuesta de la clula y a adentrarnos
en la patogenia de ciertas enfermedades humanas que hasta hace poco no tenan en
apariencia nada en comn.
Nota: La palabra cilio proviene del latn cilium (plural: cilia) y es de gnero masculino. El uso muy frecuente del
plural en la literatura en ingls provoca confusin sobre su gnero en castellano.

Ejercicios
1) De la siguiente lista, indique cuales corresponden a elementos presentes en la
estructura del cilio primario.
a) microtbulos
b) lmina
c) membrana plsmtica
d) mitocondrias
e) receptores de membrana
f) quinesina
g) filamentos de actina
2) Escriba 4 caractersticas que diferencian al cilio primario de los cilios secundarios del
epitelio respiratorio.
abcd3) La siguiente es una lista de protenas de membrana que se concentran en el cilio
primario Hay una sola excepcin, mrquela.
a) Pdgfr
b) BBS
d) Pc1
e) Pc2

f) serotonina
g) Ptc
h) somatostatina
j) Smo

5) Relaciones correctamente los siguientes conceptos

a) dinena citoplsmica 1B
b) Ptc
c) cuerpo basal
d) quinesina 2
e) Pc1
f) complejo IFT Ay B

1- receptor de Sonic hedghog

2- transporte retrgrado en trfico ciliar
3- centrolo
4- activa Wnt cuando se degrada
5- transporte antergrado en trfico ciliar
6- protenas de carga del trfico ciliar

6) Indique verdadero (V) o falso (F) sobre las siguientes afirmaciones.

a) El cilio primario es un compartimento especializado del citoplasma de la clula, que
protruye al exterior y funciona como censor mecnico, qumico y fsico y que en su
membrana concentra receptores de seales.
b) La inclinacin del cilio en el tbulo renal por el flujo urinario inhibe la captacin de
calcio y determina la activacin de la proliferacin celular.
c) En la va de sealizacin de Sonic hedghog, Ptc inhibe a Smo. Pero cuando Ptc se
une a su ligando abandona la membrana y Smo se libera y aumenta su concentracin en
la membrana.
d) La sealizacin de Sonic hegdhog puede alterarse si se afecta el trfico intraflagelar.
e) El axonema del cilio primario tiene una estructura de microtbulos 9+2
f) Las displasias seas Costillas Cortas-Polidactilia se producen ms frecuentemente por
mutaciones en protenas del complejo IFT (IFT 80) y de la dinena citoplasmtica 1B
(DYNC1B).
g) La poliquistosis renal se produce por la activacin ltima de la va de sealizacin de
Wnt
h) Las protenas motoras del trfico intraflagelar son la serotonina y la somatostatina
i) En las cicliopatas, una nica alteracin en la maquinaria ciliar puede tener
consecuencias fenotpicas diversas, y lo contrario, un mismo fenotipo puede deberse a
distintas alteraciones.
j) Las protenas de membrana Pc1 y Pc2 intervienen en la captacin de calcio en el
tbulo renal y sus alteraciones puede resultar en la aparicin de quistes renales.
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3- Fecundacin. Reacciones cortical y acrosmica. Procesos de
fusin de membranas. Regulacin del proceso de exocitosis.
Durante la fecundacin se producen las reaccin acrosmica en la
gameta masculina y la reaccin cortical en la femenina ya fecundada.
Ambos implican eventos de fusin de membranas regulados, similares
a la exocitosis.

Los procesos de exocitosis involucran las siguientes etapas:

(a) la fijacin de las vesculas de secrecin a la membrana plasmtica,
(b) el acoplamiento entre ambas membranas y
(c) la fusin entre ambas membranas.
Consignas.
-Revise el proceso de formacin de vesculas de secrecin en el
aparato de Golgi.
-Revise el proceso de direccionamiento de vesculas de transporte en
el citoplasma.
-Revise el rol del Ca+2 como segundo mensajero
Elabore una hiptesis acerca de cmo se podran producir los
fenmenos de exocitosis (secrecin constitucional y mediada por
seales). Incorpore en la misma mecanismos que expliquen:
1. Cmo se podra regular y ejecutar cada una de estas etapas (a,b y c) citadas ms
arriba.
2. El rol que juegan las protenas SNARE, Rab y complexinas en cada unoa de estas
etapas?
3. Qu rol regulatorio posee el rol de las variaciones en la concentracin de Ca+2 sobre
la actividad de estas protenas.