INFORME DE BIOQUMICA

ESPECTOFOTOMETRA

Arajo Natalia
Solano Deinir
Pedraza Nicols

Facultad de Qumica y farmacia, Programa de Farmacia, Laboratorio de fsica,

Ciudadela Universitaria, Universidad del Atlntico, km 7 Va Puerto Colombia,
PBX: 3197010, Barranquilla, Colombia.

Presentado a:
Prof.: Carmia Luca Vargas Zapata

Estudiantes de facultad de qumica y farmacia

2016

INTRODUCCIN

La espectrofotometra es una de las tcnicas experimentales ms utilizadas para

la deteccin especfica de molculas. La espectrofotometra de absorcin
molecular se basa de la transmitancia o la absorbancia de disoluciones que se
encuentran en cubetas transparentes que tiene un camino ptico; esta se
caracteriza por su precisin, sensibilidad y su aplicabilidad a molculas de distinta
naturaleza ya sean contaminantes, biomolculas, etc., y estado de agregacin
slido, lquido o gas. Los fundamentos fsico-qumicos de la espectrofotometra
son relativamente sencillos, las molculas pueden absorber energa luminosa y
almacenarla en forma de energa interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales
de muchos organismos, entre ellos el de la fotosntesis en plantas y bacterias. La
mecnica cuntica nos dice que la luz est compuesta de fotones cada uno de los
cules tiene una energa. Un espectrofotmetro es empleado para medir la
cantidad de luz que absorbe una muestra, este instrumento opera por el paso de
un haz de luz a travs de la muestra y mide la atenuacin de su intensidad al
alcanzar el detector. Ese haz de luz est compuesto por dos fotones, cuando el
fotn se encuentra con el analito existe la posibilidad de que el fotn sea
absorbido por este. Esto indica una disminucin n el nmero de fotones en el haz
de luz, reduciendo as la intensidad de la radiacinelectromagntica inherente .
OBJETIVOS

La prctica de espectrofotometra tiene como objetivos adquirir y aprender el

manejo adecuado del espectrofotmetro y hallar la absorbancia y concentracin
de una muestra desconocida.

PROCEDIMIENTO

Para la prctica de espectrofotometra se utilizaron los siguientes materiales:

Espectrofotmetro
Una gradilla
Un litro de agua destilada
Dos beakers de 250 ml

En esta prctica colocamos 2 ml de la solucin diluida de rojo fenol de metileno y

medimos la absorbancia en distintas longitudes de onda habiendo calibrado
previamente con agua destilada. Lemos la absorbancia de cada tubo en la
longitud seleccionada utilizando el agua destilada habiendo calibrado previamente
el espectrofotmetro.
Ver gua.
RESULTADOS

Tabla 1. Espectro de Absorcin

GRUP
O
1

LONGUITUD ABSORBANCIA
DE ONDA
400nm
0,5
450nm
0,65
2
500nm
0,18
550nm
0,2
3
600nm
0,05
650nm
0,035
4
700nm
0,000
750nm
0,000
Tabla 2. Datos de La Curva Patrn (450nm)
GRUP
O
1

SOLUCIN
ROJO FENOL
1ml

AGUA
DESTILADA
4ml

ABSORBANCIA

[ ] C2

[ ] / ABS

0.13

0,0025

0,01923077

2ml

3ml

0.2

0,00666

0,0333

3ml

2ml

0.36

0,015

0,04166667

4ml

1ml

0.54

0,04

0,07407407

5ml

0ml

0,7

0,05

0,07142857

Clculos para hallar el factor de la curva

[C2]
||

n
Fc=
Fc=

0,23970008
5

Fc=0,04794002

Curva Patron
0.06

0.05

f(x) = 0.09x - 0.01

0.04

0.03

0.02

0.01

0
0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

GUA DEL SEMINARIO INVESTIGATIVO

Espectrofotometra: es definida como el mtodo de anlisis ptico ms usada en
las investigaciones biolgicas, por medio de un aparato llamado espectrofotmetro
el cual permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que
contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad
conocida de la misma sustancia.

0.8

Espectro electromagntico: es el rango de todas las radiaciones

electromagnticas posibles. El espectro de un objeto es la distribucin
caracterstica de la radiacin electromagntica de ese objeto.
Clases de espectrofotometra: existen diferentes tipos de espectrofotometra, en
resumen:
-

Espectrofotometra de llama. Las muestras de solucin lquidas son

aspiradas en un quemador o una combinacin de nebulizador/quemador,
desolvatadas, atomizadas, y a veces excitadas a un estado electrnico de
energa ms alta. El uso de una llama durante el anlisis requiere
combustible y oxidante, tpicamente en forma de gases. Los gases
combustibles comunes que se usan son el acetileno (etino) o el hidrgeno.
Los gases de oxidante suelen ser el oxgeno, el aire, o el xido nitroso.
Estos mtodos son a menudo capaces de analizar elementos metlicos en
partes por milln, billones, o posiblemente rangos ms bajos de
concentracin. Son necesarios detectores de luz para detectar la luz con
informacin que viene de la llama.
Espectrofotometra de chispa. Se usa para el anlisis de elementos
metlicos en muestras slidas. Para materiales no conductores, se usa
polvo de grafito para hacer conductora la muestra. En los mtodos de
espectroscopia de arco tradicionales se usa una muestra slida que es
destruida durante el anlisis. Un arco elctrico o chispa se pasan por la
muestra, calentndola a alta temperatura para excitar los tomos.
Espectrofotometra visible. Muchos tomos emiten o absorben la luz visible.
A fin de obtener un espectro lineal fino, los tomos deben estar en fase
gaseosa. Esto significa que la sustancia tiene que ser vaporizada. El
espectro se estudia en absorcin o emisin. La espectroscopia de
absorcin visible a menudo se combina con la de absorcin ultravioleta
(espectroscopia UV/Vis). Aunque esta forma pueda ser poco comn al ser
el ojo humano un indicador similar, todava se muestra til para distinguir
colores.
Espectrofotometra ultravioleta. Todos los tomos absorben en la regin
ultravioleta (UV) ya que estos fotones son bastante energticos para excitar
a los electrones externos. Si la frecuencia es lo bastante alta, se produce la
fotoionizacin. La espectrometra UV tambin se usa para la cuantificacin
de protenas y concentracin de ADN, as como para la proporcin de
protenas y ADN en una solucin. En las protenas se encuentran
generalmente varios aminocidos, como el triptfano, que absorben la luz
en el rango de 280nm.

Caractersticas de la luz
Debido a que la espectrofotometra comprende mediciones con detectores de la
radiacin electromagntica que se transmite, es fundamental conocer las
principales caractersticas de la radiacin electromagntica. La luz es una forma
visible de radiacin electromagntica; o sea que se comporta como si tuviera
campos elctricos y magnticos oscilando en planos perpendiculares entre s.

Caractersticas De La Longitud De Onda

La longitud de onda del espectro electromagntico es la distancia entre los
mximos de ondas sucesoras. Por segundo se denomina frecuencia. La longitud
se relaciona inmensamente con la energa y se mide en nanmetros.
Espectro Electromagntico
La radiacin electromagntica consta de rayos gamma, rayos y ultravioleta (uv),
visible, infrarrojo, microonda y ondas de radio. Los rayos gamma tienen mayor
energa y las ondas de radio tienen menor energa.
En espectroscopia el trmino luz describe la forma visible de radiacin
electromagntica y tambin las formas UV e IR de radiacin no son visibles. En
espectrofotometra de absorbancia se utilizan las regiones UV (195 a 380 nm),
VISIBLE (390 a 780 nm) e INFRARROJO mayor de 780 nm del espectro
electromagntico.
Espectro Ultravioleta
La regin UV como el rango de longitudes de ondas de 195 a 380 nm. Posee una
regin de energa muy alta, provoca daos al ojo humano. La regin UV es
importante para la determinacin cualitativa y cuantitativa de compuestos
orgnicos.
Espectro Visible
Se describe como el rango de longitudes de ondas visibles a simple vista. Esta
regin va de 380-700 nm; se obtiene un espectro continuo, con un color visible y
distinto q corresponde a determinada porcin de longitud de onda. El color visible
de una solucin corresponde a la longitud de onda que transmite, no que se
absorbe.
Radiacin Infrarroja
Se emplea sobre todo en anlisis toxicolgicos.
Ley de BEER:
La mayora de las medidas espectrofotomtricas se basan en la ley de BEER. La
concentracin de una sustancia es directamente proporcional a la cantidad de luz
absorbida, e inversamente proporcional al logaritmo de la luz transmitida y se
expresa matemticamente as:
A= a.b.c =log % T donde:
A= absorbancia
a=absortividad o coeficiente de absorcin
b= longitud del paso de la luz en centmetros
c= concentracin de la sustancia de inters

%T= porcentaje de transmitancia

Absorbancia
Este compuesto es sinnimo de densidad ptica, se define como la cantidad de
energa radiante que una sustancia absorbe a determinada longitud de onda.
Transmitancia
Es la cantidad de energa radiante que transmite o deja pasar una sustancia a una
determinada longitud de onda.
Fotometra
Es el procedimiento por el cual se efectan mediciones de energa radiante
utilizando filtros para aislar parte del espectro.
DISCUSIN
La principal emisin de radiacin de los cuerpos es la radiacin electromagntica en
forma de luz visible, de la misma manera cada elemento qumico absorbe y emite luz de
colores que componen su espectro.
La espectrofotometra se refiere a los mtodos, cuantitativos, de anlisis qumico
que utilizan la luz para medir la concentracin de las sustancias qumicas. Se conocen
como mtodos espectrofotomtricos y segn sea la radiacin utilizada como
espectrofotometra de absorcin visible (colorimetra), ultravioleta, infrarroja.
En este laboratorio pudimos observar todas las caractersticas de la espectrofotometra
cuya funcin es muy importante para nosotros como qumicos farmacuticos con la cual
pudimos observar muchas cosas a una sustancia mnima atravs del espectrofotmetro
que es uno de los instrumentos para utilizados en la fsica ptica, el cual sirve para medir
la longitud de onda as como la relacin entre valores de una misma magnitud fotomtrica.
El espectrofotmetro es regularmente utilizado para la cuantificacin de microorganismos
y sustancias en los laboratorios de qumica.

CONCLUSIN

Esta prctica sirvi no solo para ver cmo se utiliza el espectrofotmetro

sino tambin para saber utilizar los datos que ste arroja. Adems de conocer el
funcionamiento correcto del espectrofotmetro pues se tiene que ajustar siempre a
cero con la muestra "BLANCA" al trmino de cualquier anlisis de distintas
concentraciones.