Tcnicas de coloracin (simple) de bacterias

Daniel Castillo, Linda Luz Florez, Dirols Lopez, Jorge Isaac Maldonado
Universidad del Atlntico
2016-1

RESUMEN
Se hizo una prueba con una muestra bacteriana la cual se quiso determinar la diferencia
entre una muestra simple y coloreada con tincin simple de gram, el reactivo utilizado fue
azul de metileno, el cual se not una gram diferencia entre el contraste de la muestra y por
tanto se pudo determinar de mejor manera la morfologa bacteriana de mejor manera.

OBJETIVOS.

INTRODUCCIN
Los microorganismos son no slo es muy
pequea, sino que tambin son
transparentes. Las manchas y colorantes
se utilizan para dar color a las clulas
bacterianas y aumentar su contraste para
que puedan ser vistos ms fcilmente con
un microscopio. Los colorantes son
compuestos orgnicos compuestos por un
grupo cromforo, que da el tinte de su
color, y un auxochrome, que se une a la
bacteria.
Muchos tintes bacterianas estn cargados
positivamente (catinicos) y se combinan
con componentes celulares cargados
negativamente, tales como cidos
nucleicos (ADN y ARN) y polisacridos
cidos. El azul de metileno, cristal
violeta, y safranina son colorantes
catinicos. Otros colorantes bacterianos
estn cargados negativamente (aninicos)
y se combinan con componentes celulares
cargados positivamente, tales como

protenas. Eosina y fucsina cida son los

colorantes aninicos.
La mayora de los procedimientos de
tincin se llevan a cabo en clulas fijadas.
La fijacin o el calentamiento de las
clulas secas en la diapositiva, mata las
bacterias y hace que se adhieren a la
diapositiva.

Tincin simple:
Una tincin simple consiste de una
solucin de un solo colorante. Algunos de
los colorantes ms utilizados son el azul
de metileno, fucsina bsica, y el cristal
violeta. Las tinciones simples permiten
distinguir la forma (morfologa) de las
bacterias. Por ejemplo, E. coli y Bacillus
subtillus son bacilos o bacterias en forma
de barra. Muchos bacilos producen
singularmente, pero tambin se pueden
observar las cadenas. Bacilos muy gran
medida en longitud y dimetro.
Staphylococcus aureus y Streptococcus
pneumoniae son cocos o bacterias
esfricas.
Cocci
puede
ocurrir
singularmente, de dos en dos (como en

Streptococcus pneumoniae), o en grupos

(como en Staphylococcus aureus). R.
rubrum es un spirillum o bacteria
curvada,
espirilla
siempre
ocurre
singularmente.
El colorante utilizado fue
Azul de
metileno, el cual es reconocido como un
tinte simple que se usa para determinar la
morfologa bacteriana. Se trata de un
colorante catinico que tie la clula un
color azul. La presencia de molculas de
carga negativa en la clula hace que el
fenmeno de la tincin, como el colorante
cargado
positivamente
es
atrado
partculas cargadas negativamente, tales
como polifosfatos como el ADN y el
ARN. Esta tcnica, ms que la tincin de
Gram, permite un mejor contraste entre
estos organismos gram negativos y el
fondo. (1)
METODOLOGA.
En la prctica realizada, seguimos unas
pautas para hacer correctamente la tincin
de Gram de forma sencilla.
Observamos ya los agar nutritivos
tenamos formadas los cultivos, usamos
solucin salina do gotas totalmente
separadas para en ellas poner la muestra
de bacterias, tomamos el asa y tomamos
una pequea parte del cultivo sin coger
agar, hicimos un frotis en las gotas de
solucin salina y a cada una colocamos
los cubre objetos, a uno le realizamos la
tincin con azul de metileno, y as
observamos cada uno de las bacterias que
all se encontraba con el microscopio en
40x con aceite de inmersin y al finalizar
nos dimos cuenta que la tincin si se dio.

Resultados y Anlisis de resultados.

Imagen 1. Muestra
coloreada 40x

bacteriana

no

En la muestra no coloreada se enfoc en

microscopio en 40x, se logr ver bacterias
vivas, se vieron colonias de coccos y
bacilos, no se logra ver bien
detalladamente la muestra, de muestra
muy opaca para hacer un anlisis
detallado.

Imagen 2. Muestra coloreada azul de

metileno 40x
En la muestra coloreada se logra ver de
forma ms contrastada la muestra
bacteriana, lo cual nos permite ver la
morfologa de la bacteria de una forma
ms adecuada, donde se logra apreciar de
mejor manera la formacin de colonias de

bacilos en la muestra a diferencia de la

muestra no coloreada.

CONCLUSIN
Se logra determinar la eficacia de los
tintes para determinar la morfologa
bacteriana de una mejor manera. El azul
de metileno el cual fue utilizado, permiti
un mejor contraste a la hora de analizar la
muestra y esto se debe a que el azul de
metileno Se trata de un colorante
catinico que tie la clula un color azul.
La presencia de molculas de carga
negativa en la clula hace que el
fenmeno de la tincin, como el colorante
cargado
positivamente
es
atrado
partculas cargadas negativamente, tales

como polifosfatos como el ADN y el

ARN.
Aunque en la muestra no coloreada tuvo
la ventaja de que se pudo notar la muestra
bacteriana viva, por tanto se not la
movilidad
bacteriana
de
algunos
microorganismos.

BIBLIOGRAFIA.
1.

2.

(2012, 05). Microbiology Staining

Techniques. Waksman-foundation.
Obtenido
04,
2016,
de
http://www.waksmanfoundation.org/labs/rochester/grmst
ain.htm
Brock, (2016). Biologia de los
microorganismos (12 ed., Vol., pp.
1-28). Mexico, mexico: Pearson
eduacation.