ENZIMAS DE RESTRICCION

Las enzimas de restriccin o tambin llamadas endonucleasas, son enzimas que cortan los enlaces
fosfodister de la doble hebra de DNA a partir de una secuencia especifica que reconocen (sitio de
restriccin). Permiten cortar la doble hebra de DNA, donde reconocen secuencias palindrmicas y los
cortes se realizan en dos maneras distintas:

Cortes cohesivos

Cortes romos

Hay tres tipos de enzimas de restriccin diferentes las cuales se diferencian bsicamente en:
Los tipos de secuencias que reconocen

La forma en la que realizan el corte

La estructura de la enzima

Aplicaciones:

Hacer mapa de restriccin de un plsmido o bacterifago

Fragmentar DNA genmico para separacin de electroforesis y southern blot
Generacin de fragmentos para ser usados como sondas marcadas en southern y northern
blotting
Generacin de fragmentos para ser subclonados en los vectores apropiados, creacin de DNA
recombinante

NUCLEASAS
En las mismas condiciones, la vida media del ARN es de solamente 4 aos. Las nucleasas son
enzimas hidrolasa del tipo esterasa que degradan cidos nucleicos [2]. Las fosfodiesterasas o
nucleasas son enzimas hidrolasas que catalizan la ruptura de los enlaces fosfodister, como por
ejemplo los que se establecen en los cidos nucleicos entre la pentosa de un nucletido y el grupo
fosfato de otro. Su accin regula la concentracin dentro de las clulas del AMP cclico y del GMP
cclico. Estn descriptas 5 isoenzimas. En la actualidad hay frmacos usados como inhibidores de las
fosfodiesterasas (cafena, aminofilina, sildenafilo, etc.). Se clasifican segn el tipo de cido nucleico y
el tipo de enlace que hidrolizan.
Tipos
Secuencia de corte especfico de la enzima de restriccin EcoRI
Ribonucleasas. Son especficas del ARN, por lo que tambin se llaman ARNasas o RNasas.
Desoxirribonucleasas. Son especficas del ADN, por lo que tambin se llaman ADNasas o DNasa.
Exonucleasas. Escinden el ltimo nucletido del extremo 5' o 3' de un polinucletido. Pueden degradar
por completo un cido nucleico lineal.

Endonucleasas. Cortan los enlaces fosfodister situados en el interior de los polinucletidos. Estas
enzimas no requieren un extremo libre, por lo que pueden cortar cidos nucleicos circulares. Algunas
endonucleasas, como la ADNasa I y la ADNasa II, son poco especficas por lo que se refiere a la
secuencia de nucletidos que hidrolizan.
Endonucleasas de restriccin. Son endonucleasas que reconocen y cortan secuencias de nucletidos
muy especficas (secuencias palindrmicas en una cadena doble de ADN), este tipo de enzima se
utiliza mucho en las tcnicas de ADN recombinante.
Meganucleasas: son altamente especficas. Modifican las protenas y son capaces de arreglar la
mutacin que este perjudicndola y provocando una determinada enfermedad. No debemos
confundirlas con los llamados "dedos de zinc" nucleasas que cortan al material gentico.
LIGASAS
ADN ligasa es una enzima de tipo ligasa que forma enlaces covalentes entre el extremo 5 de una
cadena polinucleotdica y el extremo 3 de otra cadena polinucleotdica. Tambin se denomina enzima
de unin de polinucletidos. La reparacin por escisin puede ser realizada por 3 enzimas: la
correndonucleasa U.V., iniciadora del proceso, la ADN polimerasa I, que elimina y reconstruye el
fragmento de ADN, y la ADN ligasa, que realiza la unin de los fragmentos nuevos y antiguos. Para
conseguir una replicacin cuidadosa del ADN (cido desoxirribonucleico), cada cadena de la doble
hlice hace de molde para sintetizar la nueva cadena que tendr una secuencia complementaria a la
cadena molde. Por un lado, como las dos cadenas de la doble hlice tienen direcciones opuestas (una
es 5'-3 'mientras que el otro es 3'-5') este proceso que parece sencillo, se complica ya que necesita
mecanismos especficos para sintetizar las dos cadenas complementarias tambin en direcciones
opuestas.
LAS POLIMERASAS
la ADN polimerasa es una holoenzima que utilsa los dNTPs o los ddNTPs para alargar el terminal 3' de
un cebador (a primer) emparejado a una molcula de ssADNque utiliza como plantilla o molde Todas
las ADN pol conocidas sintetizan el ADN en la direccin 5' a 3'. Ninguna ADN pol conocida es capaz de
comenzar una nueva cadena. Ella slo puede aadir un nucletido en un grupo 3'-OH que ya existe.
Por esta razn la ADN pol necesita un cebador al grupo 3' -OH del cual puede aadir el primer
nucletido. Los cebadores son molculas de ADN o ARN. La longitud mnima de un cebador esta de
17 nt. Usted tiene que o sintetizarlos o comprarlos. Cualquier estudiante debera saber escoger y como
comprar un par de cebadores. La polimerasa es una enzima capaz de transcribir o replicar cidos
nucleicos. Resultan cruciales en la divisin celular y en la transcripcin del ADN (ARN polimerasa). La
ADN polimerasa es la enzima que lleva a cabo la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), una
tcnica que ha desempeado un papel esencial en el desarrollo de la gentica. Existen varios tipos de
polimerasas; las ADN polimerasas (I, II, y III en procariotas) (, , , y en eucariotas) tienen un
papel en la replicacin. Las RNA polimerasas I, II, y III que son enzimas encargadas de la transcripcin
en clulas eucariotas y procariotas. La Transcriptasa reversa una DNA polimerasa retroviral
dependiente de RNA, enzima que utiliza el RNA como plantilla para sintetizar una cadena y por ltimo
la Terminal transferasa que agrega nucletidos en el grupo OH 3 terminal de una cadena de DNA y Es
la nica DNA polimerasa que no requiere un molde.