Microrganismos resistentes em sedimentos da foz do rio Ocoy no lago de

Itaipu, municpio de So Miguel do Iguau, PR

Jefferson Luiz Sudbrack Junior [PIBIC/Fundao Araucria], Adelmo Lowe Pletsch [PQ],
Fernando Periottto [PQ], Carla Daniela Camara [PQ]
Secretaria de Bacharelados e Licenciaturas - SEBLIC
Campus Medianeira
Universidade Tecnolgica Federal do Paran - UTFPR
Avenida Sete de Setembro, 3165 - Curitiba/PR, Brasil - CEP 80230-901
junior_sudbrack@hotmail.com, adelmo@utfpr.edu.br, periotto@utfpr.edu.br, camara@utfpr.edu.br

Resumo - Este trabalho teve como objetivo inicial a identificao preliminar de microrganismos provenientes de
efluentes urbanos, presentes em sedimentos de dois pontos de coleta pr-determinados na foz do rio Ocoy,
tributrio do reservatrio de Itaipu, Paran. A partir de testes de laboratrio na busca de identificao de
coliformes totais termotolerantes, os quais foram positivos, tambm foram realizados, aps isolamento
microbiano, antibiogramas na busca de microrganismos resistentes depositados, possivelmente, nos sedimentos
onde se concentram. As provveis fontes de contaminao do ambiente so os efluentes domsticos e a
lixiviao de frmacos utilizados em diferentes ramos do setor agroindustrial, como suinocultura, avicultura e
pecuria. Os testes de deteco de coliformes totais foram positivos e, nas cepas isoladas de Escherichia coli foi
encontrada resistncia a agentes antimicrobianos, sendo que no ponto 2 de coleta resistncia foi para sulfazotrim
e cefoxitina e no ponto 3 para gentamicina, ciprofloxacina, ampicilina e cefoxitina.
Palavras-chave Microrganismos. Antimicrobianos. Antibiograma. Rio.
Abstract - This study aimed to start the preliminary identification of microorganisms from urban sewage,
sediment cores collected from two points of predetermined Ocoy at the mouth of the river, a tributary of the
Itaipu Reservoir, Paran. From laboratory tests in the search for identification of thermotolerant coliforms, which
were positive, were also carried out after isolating microbial sensitivity tests in the search for resistant
microorganisms deposited, possibly in the sediments where they are concentrated. The likely sources of
contamination of the environment are domestic sewage and the leaching of drugs used in different branches of
the agribusiness sector, such as swine, poultry and livestock. The detection tests were positive for total coliform,
and in isolated strains of Escherichia coli was found resistance to antimicrobial agents, and in the second
collection point for resistance was sulfazotrim and cefoxitin and point 3 to gentamicin, ciprofloxacin, ampicillin
and cefoxitin.
Key-words: Microorganisms, Antimicrobial. Antibiogram. River.

INTRODUO
O lago da Itaipu, regio estudada, tem como maior caracterstica a usina hidreltrica
de Itaipu, sendo fonte de renda, indiretamente e diretamente dos municpios lindeiros, tendo
fins secundrios como usos mltiplos do reservatrio, tais como navegao, recreao,
turismo, pesca e captao de gua para fins industriais, urbanos e rurais.[1]
A regio oeste do Paran, regio da pesquisa, uma das principais economias no setor
agrcola, tendo como uma das principais atividades a criao de aves e sunos. Atualmente, o
Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento autoriza o uso de cerca de 15 compostos
antimicrobianos como aditivos na alimentao animal e outros 50 para fins teraputicos,
muitos dos quais de uso comum entre as diversas espcies animais, como bovinos, sunos,
aves, ces, caprinos.[2]

Bactrias resistentes a antibiticos so encontradas em diferentes nichos ecolgicos.

Dentre esses nichos, o ambiente aqutico considerado como o mais eficiente para a seleo
de populaes bacterianas resistentes, bem como para a troca de genes de resistncia, por
meio de elementos genticos mveis.[3]
Uma srie de estudos recentes sobre o tema, conduzidos quase que integralmente no
exterior, tem detectado a presena de antimicrobianos, em baixas concentraes (ng L-1 ou kg1
a g L-1 ou kg-1), em diferentes matrizes ambientais, como excretos animais, lagoas de
tratamento de resduos de origem animal, solos e guas superficiais e subterrneas.[4]
MATERIAL E MTODOS
Os pontos de coleta das amostras, na foz do rio Ocoy se distanciam em 2 Km, sendo o
ponto 2 (25 22 601S 54 21 968W) o mais afastado da foz, localizado na entrada de um
crrego que passa pela cidade de So Miguel do Iguau o qual recebe despejo de esgoto
domstico tratado e no tratado. J o ponto 3 (25 23 085S 54 22 389W) se localiza
prximo ao balnerio Ipiranga, municpio de So Miguel do Iguau.
A coleta das amostras de sedimentos foi realizada no ms de maro de 2011, as
amostras foram coletadas com draga tipo Petersen, armazenadas em caixas de isopor e
encaminhadas imediatamente ao laboratrio e acondicionadas em geladeira.
Anlises fsico-qumicas como, oxignio dissolvido, pH, transparncia e temperatura
da gua, foram realizadas in situ utilizando-se de um medidor multiparmetro porttil modelo
HI 9146, marca Hanna instruments.
Em laboratrio, o primeiro procedimento para dar incio aos testes microbiolgicos foi
acondicion-las em tubos com gua peptonada tamponada buscando o enriquecimento deste
meio em relao aos microrganismos inoculados.
As anlises microbiolgicas foram realizadas no Laboratrio de Microbiologia e
Parasitologia da Universidade Federal de So Carlos.
Em seguida, essa amostra passou por sucessivas diluies, 10-1, 10-2, 10-3 e 10-4 sendo
inoculadas em tubos de ensaio contendo soluo salina tamponada fosfatada.
Os materiais utilizados na execuo das anlises foram: bico de Bunsen, frascos
contendo as amostras, tubos de ensaio, pipetador automtico, soluo salina tamponada
fosfatada, gua peptonada tamponada a 0,1% e pipetas. Ressalta-se que todo o equipamento
utilizado na execuo da anlise foi previamente esterilizado em autoclave, j as bancadas
onde as amostras foram trabalhadas foram desinfetadas com lcool etlico a 70%.
Para o teste confirmativo de coliformes totais utilizou-se o meio ChromoCult
Coliform Agar, o qual no necessita de autoclavagem para sua utilizao. As placas utilizadas
para as duas amostras, as quais j estavam inoculadas em quatro diluies distintas, tambm
foram previamente identificadas.
Aps 24 horas de incubao a 37 C, foi realizada a contagem de colnias em contador
de colnias manual e, encerradas as contagens, foram isoladas as colnias com colorao
arroxeada, identificadas como Escherichia coli. Em sequncia, trs colnias isoladas,
apresentando colorao roxa, foram selecionadas, sendo cada uma delas tocada com agulha
comum de nquel-cromo flambada e fria e, posteriormente, suas clulas foram transferidas
para quatro tubos contendo 2 mL cada do meio tripticase de soja (TSB) lquido, os quais
foram incubados a 37 C por 24 horas.
O teste de susceptibilidade antimicrobianos foi feito atravs da tcnica de difuso em
placas, o meio utilizado foi o Mueller Hinton no suplementado e a interpretao dos
resultados foi feita de acordo com os padres do NCCLS (2003).[5] Todo procedimento para o
preparo das amostras foi executado dentro da rea de segurana do bico de Bunsen ou ento
dentro da cmara de fluxo laminar.

Os antimicrobianos testados foram 11: Gentamicina 10 g; Tetraciclina 30 g;

Cefalotina 30 g; Ciprofloxacina 5 g; Amicacina 30 g; Cefazolina 30 g; Kanamicina 30
g; Sulfazotrim 25 g; Ampicilina 10 g; Cefoxitina 30 g e Cefotaxima 30 g, marca
Sensibiodisc - CECON.

RESULTADOS E DISCUSSO
As anlises fsico-qumicas de oxignio dissolvido, pH e temperatura realizadas in situ
esto expressas na Tabela 1.
Tabela 1. Concentrao de oxignio dissolvido na gua (p.p.m.), pH, transparncia (m) e
temperatura (oC) da gua encontrados nos dois pontos de coleta de sedimento.
Coleta
Maro de 2011

Parmetros
[O2]
pH
Transparncia
Temperatura

P1
---------

PONTOS
P2
5,05
6,3
1,57
26,9

P3
5,87
6,2
2,5
27,5

Os pontos de coleta mostraram a ocorrncia de um processo de eutrofizao, onde

extensos bancos de macrfitas aquticas, especialmente no ponto 2 bloqueavam a entrada de
luz na coluna dgua. Este fato observado leva a concluir que os nveis de certos nutrientes
como fsforo e nitrognio, por exemplo, esto em concentraes elevadas neste corpo dgua.
Os resultados obtidos em meio ChromoCult Coliform Agar indicaram a presena de
coliformes totais em 100% das placas inoculadas com amostras de microrganismos
provenientes de sedimentos dos pontos 2 e 3 coletados na foz do rio Ocoy.
As provveis causas da presena destes a ocupao urbano-industrial onde esta bacia
est inserida, bem como a extensiva atividade agropecuria, como, suinocultura e avicultura
que produz efluentes ricos em microrganismos provenientes do trato digestivo.
Ghellere et al. (2008) apontam que de um modo geral os estados da qualidade
ambiental e de manuteno da vida aqutica do rio Ocoy e de dois de seus afluentes se
apresentam em boas condies, todavia, a presena das fontes difusas, ativadas
principalmente nos perodos de chuvas, ocasiona a queda desta qualidade, especialmente em
relao gua.
Com tais resultados, positivos para coliformes, iniciou-se a investigao em relao a
presena de resistncia a antibiticos por esses microrganismos, especialmente por cultura de
E. coli, a qual foi isolada e enriquecida em meio TSB lquido e posteriormente inoculada em
meio Mueller Hinton.
Conforme dados na Tabela 2, nos pontos 2 e 3 de coleta foram encontradas clulas de
E. coli resistentes a agentes antimicrobianos. No caso do ponto 2 a resistncia apresentada foi
para os antibiticos sulfazotrim e cefoxitina e no ponto 3 a resistncia foi apresentada para
gentamicina, ciprofloxacina, ampicilina e cefoxitina.
Os resultados obtidos remetem a um alerta em relao ao lanamento sem controle
desses agentes antimicrobianos no meio aqutico. Seus mecanismos de ao trazem
benefcios para a sade humana e animal, porm, podem continuar ativos no meio ambiente
proporcionando a seleo direcionada de microrganismos da biota natural.
Estudos mais criteriosos e aprofundados so necessrios no intuito de verificar qual o
grau de resistncia e sensibilidade tais organismos esto atingindo em funo da presena
desses frmacos nos corpos dgua, pois o uso deste ambiente aqutico pela populao
humana essencial e, problemas de sade pblica podem ser ocasionados.

Tabela 2 - Suscetibilidade aos antimicrobianos das cepas isoladas E. coli de amostras obtidas
no sedimento da Foz do rio Ocoy (pontos 2 e 3).
Antibitico
(g)

P2
Halo de
Inibio (mm)

Resistncia *

P3
Halo de
Inibio (mm)

Resistncia *

GEN 10
TET 30
CFL 30
CIP 5
AMI 30
CFZ 30
KAN 30
SUT 25
AMP 10
CFO 30
CTX 30

20
18
18
35
19
21
12
21
17
18
28

N
N
N
N
N
N
N
S
N
S
N

17
16
16
25
19
20
21
24
15
17
27

S
N
N
S
N
N
N
N
S
S
N

*Resistncia: S: Sim; N: No, conforme padro NCCLS, 2003. GEN Gentamicina; TET - Tetraciclina; CFL
- Cefalotina; CIP - Ciprofloxacina; AMI Amicacina; CFZ - Cefazolina; KAN Kanamicina; SUT
Sulfazotrim; AMP Ampicilina; CFO - Cefoxitina; CTX Cefotaxima.

CONCLUSES
A interferncia humana no rio Ocoy vem proporcionando diversas alteraes
ambientais, as quais podem ser observadas in situ. A presena de antimicrobianos e as
condies atpicas do meio aqutico interferem negativamente em vrios nveis trficos desse
ambiente. Por fim, o presente trabalho traz a descrio inicial de dados que podem servir de
base para estudos futuros mais aprofundados ou especficos, bem como para futuras aes de
remediao ambiental necessrias.
AGRADECIMENTOS
A Fundao Araucria e a UTFPR.
REFERNCIAS
[1] BEL, A., QUINIA, S.P., PLETSCH, A.L., 2010. Avaliao da contaminao de metais
em sedimentos superficiais das praias do lago de Itaip. Qumica Nova, n 3, p. 613-617.
[2] PALERMO-NETO, J. & ALMEIDA, R.T. Antimicrobianos como aditivos em animais de
produo. In: SPINOZA, H.S.; GRNIAK, S.L. & BERNARDI, M.M., eds.
Farmacologia aplicada medicina veterinria. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan, 2006.
p.641-658.
[3] WEGENER, H.C.; MOLLER, N.F. Reducing the use of antimicrobial agents in animals
and man. Journal of Medicine and Microbiology, v.49, p.111-113, 2000.
[4] MARTNEZ-CARBALLO, E.; BARREIRO-GONZLEZ, C.; SCHARF, S. & GANS, O.
Environmental monitoring study of selected veterinary antibiotics in animal manure and
soils in Austria. Environ. Pollution, 148:570-579, 2007.
[5] NCCLS. Clinical and Laboratory Standards Institute. 940 West Valley Road, Suite,1400,
Wayne, Pennsylvania 19087-1898 USA, 2003.