El plsmido pBR 322 es el ms ampliamente usado para clonar, es de

pequeas dimensiones y lleva los genes para la resistencia a los antibiticos

ampicilina (amp) y tetraciclina (tet). Contiene un solo sitio de restriccin [7]
para el PstI en el interior del gen amp y sitios nicos de restriccin para BamHI
y SalI [8] en el interior del gen tet. La introduccin de un gen en los sitios arriba
citados determina la prdida de la resistencia en los enfrentamientos de dichos
antibiticos permitiendo, a travs de la placa a reproducir [9], la seleccin de
los clones que han recibido el nuevo gen.
El vector pBR322 fue uno de los primeros plsmidos diseados que se utiliz en
DNA recombinante. Este plsmido tiene un origen de
replicacin (ori+), dos genes de seleccin (resistencia a los antibiticos
ampicilina y tetraciclina), y algunos sitios de restriccin nicos. Dentro del gen
de resistencia a tetraciclina hay sitios de restriccin nicos para las enzimas
BamHI, SphI, SalI, XmaIII y NruI, y dentro del
gen de resistencia a ampicilina hay sitios de restriccin nicos para las enzimas
RruI, PvuI y PstI. Si se introduce pBR322 en una clula
bacteriana sin plsmidos y sensible a antibiticos, la clula se convertir en
resistente a la tetraciclina y a la ampicilina. Si se inserta un
fragmento de DNA en los sitios de restriccin RruI, PvuI, o PstI, se inactivar el
gen de resistencia a ampicilina, pero el gen de resistencia a
tetraciclina seguir activo. Si este plsmido recombinante se transfiere a una
clula bacteriana que no contenga plsmidos, las clulas que
contengan el plsmido recombinante podrn identificarse, ya que sern
resistentes a tetraciclina y sensibles a ampicilina.
El plsmido bacteriano ms ampliamente usado es el pBR322 (plsmido de Bolvar y
Rodrguez), ste posee un origen de replicacin en E.coli multicopiativo o relajado, un
tamao pequeo y posee 20 sitios de corte nicos para enzimas de reestriccin de los
cuales 6 se encuentran dentro del gen de resistencia a la tetraciclina, otros dos dentro
de su promotor y tres dentro del gen de resistencia a la ampicilina. De modo que las
clulas de E.coli que porten este plsmido sern resistentes a ambos antibiticos
mientras que las que porten un plsmido recombinante sern sensibles a aquel
antibitico en cuyo gen se ha producido la insercin de DNA exgeno y resistentes al
otro. As resulta sencilla la seleccin de bacterias transformadas con el plsmido
recombinante.
Para esta seleccin por resistencia a antibiticos se han desarrollado plsmidos que
permiten la seleccin directa en un solo medio como los que tienen junto con un gen
de resistencia a un antibitico el fragmento lacZ' suficiente para completar la seleccin
del operon lac de E.coli que codifica para la galactosidasa. En el lacZ' se ha creado
un sitio de clonaje mltiple, pequea zona de DNA donde estn presentes sitios de

corte nicos de varias enzimas de restriccin en los cuales se introduce el DNA

exgeno.

DNA pBR322 es un plsmido de uso comn vector de clonacin en E. coli (1).La

molcula es una doble cadena crculo 4.361 pares de bases de longitud *
(2). pBR322 contiene los genes para la resistencia a la ampicilina y tetraciclina, y
se puede amplificar con cloranfenicol. El peso molecular es 2,83 x 10 6daltons.
* Los datos de secuenciacin de Watson (confirmada en el New England Biolabs,
Inc.) ha demostrado ser pBR322 4.361 pares de bases, y no 4.363 pares de bases
que se inform anteriormente.
DNASU y Addgene son depsitos centrales de clones de plsmidos y colecciones
que tambin pueden ser tiles.
Fuente producto
pBR322 se asla de E. coli ER2686 (dam dcm + + EcoK M -) mediante un
procedimiento de purificacin de plsmidos estndar.
https://translate.googleusercontent.com/translate_c?
depth=1&hl=es&prev=search&rurl=translate.google.com.mx&sl=en&u=https:
//www.neb.com/products/n3033-pbr322vector&usg=ALkJrhjsGzWYRHNFq960tbQEWXKszFA8_w