Enriquecimiento de bacterias DNRA en un cultivo continuo

La desnitrificacin y la reduccin de nitrato a amonio dissimilatory (DNRA)

estn compitiendo procesos de nitrato de reduccin microbiana. La ocurrencia
de DNRA se ha demostrado que efectuarse cualitativamente por varios
parmetros en el medio ambiente. Una comprensin ms cuantitativa se puede
obtener usando cultivos de enriquecimiento en un reactor de laboratorio, sin
embargo, no cultivo de enriquecimiento DNRA xito ha sido descrita. Hemos
demostrado que un cultivo de enriquecimiento DNRA dominada estable se
puede obtener en un sistema chemostat. El enriquecimiento se basaba en la
hiptesis de que la limitacin de nitrato es el factor dominante en la seleccin
para DNRA. En primer lugar, una cultura de desnitrificacin convencional se
enriqueci a partir de lodos activados, con el acetato y nitrato como sustratos.
A continuacin, la concentracin de acetato en el medio se aument a obtener
condiciones de nitrato limitativo. Como resultado, las conversiones cambiaron
de desnitrificacin a DNRA. En esta seleccin de una cultura DNRA, dos factores
importantes fueron la limitacin de nitrato y una tasa de dilucin relativamente
bajo (0.026 h - 1). El cultivo fue de una poblacin altamente enriquecida de
Deltaproteobacteria ms estrechamente relacionados con Geobacter lovleyi,
sobre la base de 16S rRNA secuenciacin de genes (97% de similitud).
Establecimos un mtodo de cultivo estable y reproducible para el
enriquecimiento de las bacterias DNRA en un sistema de reactor de
funcionamiento continuo. Este mtodo de enriquecimiento permite investigar
ms a fondo el proceso DNRA y abordar los factores de competencia entre
DNRA y desnitrificacin, u otras vas N-conversin
Introduccin

Dissimilatory reduccin de nitrato es un proceso microbiano bien estudiado,

que se materializa en tres vas principales en el ciclo del nitrgeno: (. Kraft et
al, 2011) desnitrificacin, oxidacin anaerobia de amonio y de reduccin de
nitrato a amonio dissimilatory (DNRA). Los tres procesos compiten por nitrato y
nitrito. En este estudio nos centraremos en la desnitrificacin
competitionbetween y DNRA. Durante desnitrificacin
nitrato de cationes se reduce a nitrgeno gaseoso, mientras que en DNRA de
amonio es el producto final. El proceso ficacin denitri- est muy bien
estudiada y comprendida en gran medida (Kraft et al, 2011;. Isobe y Ohte,
2014). Por otro lado, se sabe poco sobre el papel de DNRA en el ciclo del
nitrgeno y los factores que controlan su xito (Burgin y Hamilton, 2007; Kraft
et al., 2011).
Una serie de estudios de campo reportan la ocurrencia de DNRA en suelos,
sedimentos, las zonas anxicas en las aguas y otros sitios (Burgin y Hamilton,
2007; Kraft

et al., 2011; RUTTING et al., 2011). Estos estudios indican que las bacterias
DNRA se encuentran generalmente en zonas donantes ricos en anxica, con un
nitrato de electrones de baja
disponibilidad. Estudios en laboratorio a campo y generaron varias hiptesis
similares en la promocin de las condiciones para DNRA. El dominante sugiri
la seleccin de condicin es baja o limitar la disponibilidad de nitrato, que se
transmite principalmente como una relacin de masa alta de donante de
electrones disponible (demanda qumica de oxgeno (COD) equivalentes) a lo
largo de nitrato-nitrgeno (COD: N). (Tiedje et al, 1982 ; Rey y Nedwell, 1985;
Akunna et al., 1994;. RUTTING et al, 2011). Sin embargo, ninguna de las
condiciones selectivas han sido experimentalmente fundamentada y se sabe
poco sobre los mecanismos subyacentes.
Los estudios de laboratorio consisten principalmente en pruebas de lotes con
muestras ambientales (por ejemplo, Srensen (1978) y King y Nedwell (1985)),
en el que, como en los estudios de campo, el sistema y la comunidad
microbiana fue insuficientemente definidas. Tambin incluyen un par de
estudios de cultivos puros (por ejemplo, Rehr y Klemme (1989) y Strohm et al.
(2007)), pero en lo lejos que los representan poblaciones ambientales no est
claro. Estos cultivos bacterianos generalmente no han sido enriquecidas y
aislado en la base de su capacidad DNRA. No se han descrito experimentos
cultivo de enriquecimiento especficos para las bacterias DNRA. Sin embargo, la
realizacin de este tipo de experimentos es esencial para adquirir una mejor
comprensin del proceso de DNRA. Las bacterias que son competitivos en
funcin de su capacidad DNRA se enriquecen y las condiciones ambientales
pueden simular razonablemente bien, mientras que el sistema est
cuantitativamente define en trminos de carbono y el volumen de negocios de
nitrgeno. Nitrato de crecimiento limitado condiciones pueden, por ejemplo, no
pueden lograr en un cultivo discontinuo, pero se pueden conseguir fcilmente
en un reactor chemostat. Recientemente, Kraft et al. (2014) utilizaron este
enfoque para estudiar el papel de DNRA en las conversiones de nitrgeno de
un entorno de sedimentos marinos. Debido a la compleja sustrato utilizado, se
enriqueci una comunidad microbiana compleja de desnitrificacin
fermentativa y bacterias DNRA, por lo que es difcil de identificar y estudiar los
organismos DNRA como tal.
Este estudio tuvo como objetivo desarrollar un mtodo de cultivo para el
enriquecimiento de una poblacin altamente enriquecido de bacterias DNRA en
una cultura abierta mixto, el chemostat nutrientes limitados. Una cultura fying
denitri- convencional se enriqueci a partir de lodos activados, con el acetato y
nitrato como sustratos. A continuacin, sobre la base de las hiptesis
propuestas, la COD: relacin de N en el medio se aument gradualmente a
cambiar las conversiones de desnitrificacin a DNRA. El cultivo de
enriquecimiento es muy adecuado para estudiar sistemticamente el proceso
DNRA y su competencia con la desnitrificacin u otras vas N-conversin.