ARTICULO DE REVISION

EL LABORATORIO EN EL DIAGNOSTICO DE
INFECCION POR VIRUS ZIKA
David German Quispe Aranda

I.

INTRODUCCION

Licenciado en Tecnologa Medica

Especialista Laboratorio Clnico y Anatoma Patolgica
Mg (e) Ciencias Forenses y Criminalstica
Catedrtico Universitario
i CM
Tecnlogo Medico Internacional MT (ASCP )

La enfermedad por virus ZIKA (ZIKAV), es causada

un arbovirus del gnero flavivirus (familia
Flaviviridae), se transmite por la picadura de
mosquitos del gnero Aedes aegypti.
Virus RNA (+)

Periodo Incubacin 3-12

das
Es un virus envuelto, con
simetra de nucleocapside
Icosaedrica
2 linajes africano y asitico

El virus Zika se encontr por primera vez en 1947

en frica, en el bosque de Zika en Uganda, en una
poblacin de macacos rhesus, aislndose por
primera vez en humanos en 1952 tambin en
Uganda. La primera circulacin autctona de este
virus en las Amricas fue confirmada en febrero de
2014 en Isla de Pascua, Chile y hasta el 17 de
enero de 2016 son 18 los pases y territorios que
1
han confirmado circulacin autctona del virus.
El virus Zika ya llego al Per y, debido a la gran
cantidad de casos que se han presentado en pases
de la regin, hay que estar alertas pues
la
posibilidad de que se incrementen los casos
importados puede ocurrir pues ya se registran ms
casos en pases limtrofes como Venezuela,
Colombia, Brasil y Ecuador.
Cuando el mosquito portador del virus pica a una
persona, el virus en primer lugar infecta clulas (en
concreto, las dendrticas) cerca del sitio de la
inoculacin; luego se extiende a los ganglios
linfticos y a la sangre. El virus se replica dentro de
las clulas en el citoplasma, aunque tambin se han
encontrado componentes del virus dentro del ncleo
2
de las clulas.

Paciente sospechoso de estar infectado con

virus zika: presenta exantema o elevacin
de temperatura corporal axilar (>37,2 C) y
uno o ms de los siguientes sntomas (que
no se explican por otras condiciones
mdicas): Artralgias o mialgias, conjuntivitis
no purulenta o hiperemia conjuntival,
cefalea o malestar general.
Paciente
confirmado: sospechoso con
pruebas de laboratorio positivas para la
deteccin especfica de virus Zika.

Slo el 20-25% de las personas infectadas por el

virus presentan sntomas, que son leves (fiebre no
muy alta, dolores musculares y articulares, dolor de
cabeza, erupcin) y desaparecen por s solos. Se
trata con medidas generales, similares a las que se
emplean en el tratamiento de un catarro comn:
reposo, antipirticos y muchos lquidos.
Adems de la transmisin por la picadura de los
mosquitos en zonas tropicales con presencia del
virus, podra producirse la transmisin perinatal
transplacentaria o durante el parto, si la madre est
infectada y tiene presencia del virus en la sangre en
ese momento. La transmisin de la infeccin
por transfusiones de sangre podra ser tericamente
posible (En el brote de Zika que se produjo en la
Polinesa Francesa 2013 - 2014 se encontr virus
Zika en la sangre del 3% de los donantes
3
analizados, aun estando asintomticos).
El diagnstico de confirmacin de laboratorio se
basa en el aislamiento del virus o en su deteccin
por PCR en sangre o a travs de pruebas
serolgicas, pero se debe tener en cuenta la posible
reactividad cruzada con el dengue en estas, sobre
todo si ha habido infeccin previa. La deteccin
temprana permitir la identificacin de las cepas
virales circulantes, la caracterizacin adecuada del
brote y la implementacin de una respuesta
proporcionada.
NO SE HA DESCRITO HASTA LA FECHA
NINGN CASO MORTAL POR VIRUS ZIKA.

DAVID GERMAN QUISPE ARANDA M.T.

II.

EVIDENCIA
DE
COMPLICACIONES

Existen
hallazgos consistentes de una
asociacin entre el virus Zika y la aparicin
del SNDROME DE GUILLAIN-BARR.
Aunque todava no est claramente
establecida la etiopatogenia ni los factores
4
de riesgo.

En octubre de 2015, en Brasil se notific la

deteccin de un incremento inusual de
recin nacidos con MICROCEFALIA y
calcificaciones cerebrales en los que se
4
presume infeccin intrauterina ZIKAV.

III.

NUEVAS

Evidencia de TRANSMISIN VERTICAL

del virus Zika, en Brasil en enero de 2016,
se inform sobre la deteccin de genoma de
virus Zika, a travs de la tcnica RT-PCR en
4 casos de malformacin congnita,
correspondientes a dos abortos y a dos
recin nacidos a trmino que fallecieron en
las primeras 24 horas de vida. Las muestras
de tejido de ambos recin nacidos
5
resultaron positivas para virus Zika.

DIAGNOSTICO del VIRUS POR EL

LABORATORIO

El diagnostico de laboratorio de una

infeccin viral presenta dificultades como por
ejemplo; si se desea observar el virus
se
necesitara de un microscopio electrnico siendo su
uso muy limitado
por razones prcticas y
econmicas, otra dificultad es que los virus crecen

y se pueden aislar solo en sistemas vivos (lneas

celulares) una alternativa engorrosa y costosa.
Debido a esto el diagnstico de las
enfermedades virales se realiza de manera general
por procedimientos de deteccin de antgenos,
anticuerpos o segmentos genmicos virales.
Mtodos directos: determinan la presencia de
un virus o de alguno de sus componentes
(cidos nucleicos, etc.)
Mtodos indirectos: permiten detectar la
presencia del virus a travs de mtodos
serolgicos es decir se basa en la determinacin
de la respuesta inmune humoral del paciente
6
contra el virus.
En las fases tempranas de la infeccin cuando
existe mayor excrecin viral las pruebas ideales son:
aislamiento viral y pruebas de deteccin directa,
mientras que en etapas tardas es ms prctico
tomar muestras de suero para detectar la presencia
de anticuerpos.
DIAGNOSTICO ZIKAV

Dado que la enfermedad por virus Zika suele ser

leve, los sntomas iniciales pueden pasar
desapercibidos lo cual disminuye la oportunidad
para la toma de la muestra. Aunque el perodo de
viremia an no ha sido plenamente establecido, el
ARN viral ha sido detectado en suero hasta 10 das
despus de iniciados los sntomas.
Conservacin de la muestra:

I.

Refrigerada (28 C) si ser procesada (o enviada

al laboratorio de referencia) antes de 48 horas.
Congelada (-10 a -20 C) si ser procesada
despus de 48 horas o durante un periodo no mayor
de 7 das.
Congelada (-70 C) si ser procesada despus de
Deteccin de Componentes Virales (Test
una semana.7

molecular)

DAVID GERMAN QUISPE ARANDA M.T.

En los primeros 5 das tras el

establecimiento del cuadro clnico de una infeccin
por virus zika (fase aguda) se puede lograr la
deteccin del RNA viral a partir de SUERO y
mediante: Reaccin en Cadena de la Polimerasa
en tiempo Real o RTPCR

El RTPCR es un test molecular que a diferencia del

PCR convencional, los procesos de amplificacin y
deteccin se producen de manera simultnea y la
cantidad de ADN sintetizado se puede medir en
8
cualquier momento de la reaccin.
La PCR en Tiempo Real es la tecnologa ms actual,
precisa y rpida. Previene la contaminacin de la
muestra, prescinde de la posterior electroforesis,
habitual en una PCR convencional y los resultados van
apareciendo en un monitor a medida que se realiza la
reaccin.9

anticuerpos (con un ensayo cuantitativo). La

interpretacin de los ensayos serolgicos tiene una
relevancia especial para el diagnstico de ZIKAV.
En infecciones primarias (primera infeccin con un
flavivirus) se ha demostrado que las reacciones
cruzadas
con
otros
virus
genticamente
relacionados son mnimas. Sin embargo, se ha
demostrado que sueros de individuos con historia
previa
de
infeccin
por
otros
flavivirus
(especialmente dengue y fiebre amarilla) pueden
10
cruzar en estos ensayos.
Se recomienda la confirmacin de los
resultados positivos del test serolgico con el PRNT
(test de neutralizacin mediante reduccin en
placa), una tcnica sensible que se basa en la
reaccin de anticuerpos especficos con el virus. La
suspensin de virus se mezcla con un suero y se
incuba a 37C por una hora, si el suero contiene
anticuerpos especficos contra el virus, evita la
infeccin. La neutralizacin se puede determinar por
medio de la inhibicin del efecto citopatico,
determinando as el poder neutralizante de un
11
suero es decir determinar su ttulo de anticuerpos.

El componente genmico - RNA del ZIKV ha

sido detectado tambin en orina durante un periodo
de tiempo prolongado de la fase aguda, por lo que
podra considerarse como una muestra alternativa.
II.

Deteccin Mediante Respuesta Inmune

(test Serolgico)

En suero, la deteccin de anticuerpos IgM

especficos para ZIKAV es posible por ensayos de
ELISA o inmunofluorescencia a partir del da 5-6
das tras el establecimiento del cuadro clnico
(sintomatologa).

Ya que un suero nico en fase aguda es presuntivo,

se recomienda la toma de una segunda muestra
entre una y dos semanas despus de la primera
muestra para demostrar seroconversin (negativo a
positivo) incremento hasta cuatro veces el ttulo de

En la confirmacin de los resultados positivos con el

PRNT, se debe evidenciar al menos un aumento de
cuatro veces del ttulo de anticuerpos neutralizantes
frente a virus Zika. Si bien esta tcnica, ofrece una
mayor especificidad para deteccin de anticuerpos
neutralizantes (IgG) , la reaccin cruzada tambin
ha sido documentada; de hecho, se han encontrado
pacientes con historia previa de infeccin por otros
flavivirus: sobre todo con el dengue, y en menor
proporcin con el virus del Nilo Occidental. que
ante infeccin por ZIKAV elevan hasta cuatro veces
los ttulos de anticuerpos neutralizantes.

DAVID GERMAN QUISPE ARANDA M.T.

Debido a esta reactividad cruzada entre

flavivirus los resultados de la serologa deben
interpretarse con cuidado.
Tambin se puede analizar la presencia del material
gentico del virus en saliva o en orina, donde s
puede permanecer durante ms das, incluso tras la
resolucin de los sntomas. En diagnstico del virus
Zika tiene ms inters epidemiolgico que para el
tratamiento de un paciente concreto, puesto que los
12
resultados tardan en obtenerse entre 4-14 das.
IV.

EXAMENES COMPLEMENTARIOS

Se han informado alteraciones tpicas de

laboratorio asociadas con la infeccin por ZIKV
como leucopenia, trombocitopenia y ligera elevacin
de enzimas como Gamma glutamil transferasa y de
parmetros inflamatorios (Protena C reactiva,
13
fibringeno y ferritina).

V.
1.

ACTUALIDAD del ZIKAV

La Universidad de Stanford (EEUU), desarrollo
un mtodo diagnostico que permite detectar los
virus del dengue, chikungunya y zika, en una
sola muestra. Es una tcnica muy interesante
porque permite diferenciar a pacientes que
pueden tener una enfermedad u otra. La
sensibilidad y la especificidad de este examen
son cercanas al 99%. Lo aconsejable es
realizar esta tcnica durante los primeros 10
das de presentar los sntomas. Los resultados
14
se obtienen en unas 48 horas.

2. La determinacin de IgM puede hacerse por

diferentes tcnicas (ELISA o IF). Sin embargo,
hasta el momento no se cuenta con estuches
comerciales validados para determinacin
serolgica de ZIKAV. En cualquier caso, la
mejor sensibilidad esta dada en aquellas
plataformas que utilizan como antgeno el virus
completo en comparacin con aquellas que
15
utilizan protenas (o pptidos) recombinantes.
3. Con respecto a la vacuna contra ZIKV. El
prospecto ms claro es el de un consorcio de la
farmacutica Inovio Pharmaceuticals Inc.
(EEUU), que podra tener lista una vacuna
para uso en caso de emergencia antes de fin
16
de ao, pensando en octubre como meta.
4.

Cientficos rusos tienen han previsto antes de

marzo desarrollar el primer mtodo prctico de
diagnstico rpido de la fiebre del Zika, Segn
el cientfico Malev del Instituto Central de
Epidemiologa del Servicio ruso, afirma que su
centro de investigaciones "ya desarroll el
diagnstico de zika, ahora estn en proceso de
17
su aprobacin".
CONCLUSIONES

El
mal
provocado
por
el
ZIKAV
generalmente transcurre sin complicaciones serias
ni desenlaces letales y no requiere ningn
tratamiento especfico, El infectado debe descansar
bastante tiempo, consumir mucho lquido y tomar
frmacos contra el dolor y la fiebre; de agudizarse
los sntomas se necesita consulta mdica. La
poblacin que corre el mayor riesgo son las mujeres
embarazadas, pues el virus puede afectar el normal
desarrollo del cerebro del feto y causar microcefalia
La mejor profilaxis contra el zika consiste en evitar
las picaduras de mosquitos.
Las pruebas diagnsticas incluyen RTPCR
en muestras de suero de fase aguda, que detectan
RNA viral y otras pruebas para detectar anticuerpos
especficos en el suero (ELISA para detectar la
inmunoglobulina IgM). Se ha descrito reactividad
cruzada con otras virosis por flavivirus como el
dengue. Las pruebas diagnsticas deberan incluir
una muestra de suero de fase aguda recogida tan
pronto como sea posible despus de la aparicin de
la enfermedad y una segunda muestra recogida de
2 a 3 semanas despus de la primera.
En su diagnstico diferencial debe incluirse el
dengue y virus Chikungunya

4
DAVID GERMAN QUISPE ARANDA M.T.